5.3.

Determinación de propiedades bioactivas

5.3.1. Preparación del extracto de las harinas obtenidas
Del polvo molido (1.0 g) se extraerá con 25 mL de etanol al 80% a 30 ° C durante
4 h. La mezcla se centrifugará a 3000 rpm durante 20 min. Después de la
centrifugación, se recogerá el sobrenadante para los contenidos fenólicos totales
(Xuelian et al., 2018).

5.3.2. Determinación del contenido de polifenoles totales.

El contenido de polifenoles totales se determinará de acuerdo al método de Norajit
et al., 2011. En un tubo de ensayo de 10 mL, se agregarán y se mezclarán 2 mL
de Na2CO3 al 2%, 0.1 mL de extracto diluido con etanol al 80% y 0.1 mL de
reactivo de fenol de Folin-Ciocalteu con folina al 50% (Sigma-Aldrich, St. Louis,
MO, EE. UU.). Después de exactamente 30 minutos, se leerá la absorbancia a
750 nm y se calculará el contenido fenólico a partir de una curva de calibración,
que se obtendrá utilizando ácido gálico como estándar (20-200 µg / mL).

5.3.3. Determinación de la actividad antioxidante DPPH

La actividad antioxidante, se determinará de acuerdo a lo descrito por Hwang et
al., 2014. Se utilizará el extracto de etanol al 80% de la muestra. Se mezclarán
alícuotas de 0.8 mL de solución metanólica de DPPH (Sigma-Aldrich) de 0.2 mM
con 0.2 mL del extracto. La mezcla se agitará vigorosamente y luego se dejará
reposar durante 30 minutos con poca luz. La absorbancia se medirá a 520 nm. El
porcentaje de inhibición de la actividad se calculará con:

A0- A1 / A0 X 100

Donde A0 es la absorbancia sin la muestra y A1 es la absorbancia con la muestra.

5.3.4. Determinación del contenido de β-caroteno

El contenido de β-caroteno se determinará en un espectrofotómetro (Cary 60 UV –
VIS MY11510011, Agilent Technologies, Inc., EE. UU.) Según el procedimiento
descrito por Ying et al. (2015) en materias primas y productos extruidos. Se
agregarán cuatro mililitros de dimetilsulfóxido (DMSO) a 80 mg de muestra en un
baño de agua a 75ºC, y la mezcla se agitará a 150 rpm durante 50 minutos.
Posteriormente, la mezcla se enfriará a 25ºC y se agregará 4 mL de butil-hidroxi-
tolueno (BHT) al 0,1% (p / v) en hexano (C6H14), y la mezcla se agitará en vórtex
durante 10 segundos y se dejó reposar. durante 30 min. Se agregarán dos o tres
gotas de etanol puro para precipitar cualquier proteína presente en la fase de
hexano. La capa de hexano será recuperada y se colocará en un vaso de
precipitados de 10 mL; Se agregarán 0.5 g de sulfato de sodio anhidro (anhídrido
de Na2SO4); y finalmente, se analizará la absorbancia del hexano recuperado a
una longitud de onda de 450 nm (Pensamiento-Niño et al., 2018).

5.3.5. Determinación del contenido de antocianinas totales

El contenido de antocianinas se determinará siguiendo los procedimientos de
Ming-Chih et al., 2009. La muestra (0.5 g) se diluirá con 20 ml de metanol
acidificado (HCl al 1%), se centrifugará a 200 rpm durante 30 minutos en la
oscuridad. Después de centrifugar, pasando 15 min, 450 g a 4ºC de sobrenadante
se diluirá a una concentración apropiada. Se leerá a una absorbancia de 657 nm y
530 nm. El contenido de antocianinas se calculará con la siguiente ecuación:

Contenido de antocianina (µg/g. materia seca)

= (A530 - 0:33 X A567 ) X V X DF/W

Donde V = volumen de muestra, DF = factor de dilución, W = peso de la muestra

(g).