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Método de Lowenthal
El método de Lowenthal es volumétrico y está basado en la oxidación del tanino por acción de
permanganato de potasio (KMnO4) en presencia del añil sulfonado (índigo de carmín),
sirviendo este como indicador y como regulador de la reacción. Debido a la naturaleza del
ácido gálico y otros compuestos que estén presentes, se oxidan del mismo modo que el tanino,
por ello es necesario realizar una segunda valoración después de separar el tanino, calculando
éste por diferencia. Para realizar esta operación puede emplearse caolín o una solución recién
preparada de gelatina.3
El método se basa en la propiedad de los taninos de precipitar las proteínas. El ensayo consta
de tres etapas, en la primera se realiza la determinación de los fenoles totales por el
procedimiento de Folin-Ciocalteu.
En la segunda etapa se remueven los taninos mediante su precipitación con una so-lución de
seroalbúmina bovina (BSA) (bufferacetato 0,2 M, pH 5,0; cloruro de sodio 0,17 M y 1,0 mg/ml
de la fracción V de BSA). Para lograrlo, a 1 ml del extracto sele adiciona 1 ml de solución de
BSA. Luego de 15 min a temperatura ambiente, se centrifuga a 5.000 rpm. Finalmente el tercer
paso es determinar sobre una alícuota del sobrenadante (50 -100 µL) la concentración de
fenoles por el procedimiento de Folin-Ciocalteu. Al valor obtenido de fenoles totales se le resta
el valor de fenoles obtenidos posterior-mente a la precipitación con BSA, de esta manera se
obtiene el valor de fenoles que se comportan como taninos (taninos totales).El contenido de
taninos totales se expresa como equivalentes de ácido tánico (ATE, mg ácido tánico / g
material seco) o equivalentes de ácido gálico (GAE, mg ácido gálico /g material seco). Se
emplea la misma curva que se utiliza en la determinación de fenoles totales.
Ensayo:
Se colocan 10 µl de los extractos en los huecos. Para elaborar la curva de calibración se utilizan
soluciones estándares de ácido tánico (10 mg / ml hasta 50 mg / ml).Se sellan las cajas de Petri
con Parafilm® y se incuban a 30 ºC durante 96-120 h.
Una vez que se generaron los anillos de precipitación se miden, para cada muestra, dos
diámetros perpendiculares entre sí y luego se utiliza el cuadrado del diámetro pro-medio y se
intercala en la curva de calibración para determinar la concentración de los taninos presentes.
Extracción
Pulverizar (10g) de corteza desecada de la planta a analizar y mezclarlo con 100ml. De una
mezcla hidroalcoholica, colocar la mezcla en un equipo de digestión a reflujo y someter a B.M
durante 15 minutos de ebullición continua, filtrar el extracto y someter a evaporación hasta un
tercio de su volumen.
Fundamento.- En la fijación del iodometálico en medio alcalino (HCNaCO3)por parte del ácido
tánico y acido gálico.
En un matraz de 100 ml se coloca 10mlde solución tipo de tanino (B) que contiene 0.01 de
tanino. Se agregan 2ml de sol. De CO3HNa y desde una bureta se deja caer la solución(A) de
iodo hasta que una gota extraída con una varilla de vidrio tiña en azul un papel almidonado. Se
agrega agua hasta completar 50ml, se agita y se vuelve a probar con el papel almidonado;
agregando más solución (A) sino hubiese iodo en pequeño exceso. Se anota el número de ml
gastados. Como el CO3HNa fija también alfo de iodo, se hace una prueba en blanco; se mide
2ml de solución (c) y se completa a50 ml. Con agua, se agrega solución (A) hasta coloración
azul del papel almidonado se lee en la bureta el número de ml gastados y se resta este del
anterior. Así tenemos el dato exacto de iodo correspondiente a 0.01 de tanino. Se hace una
solución de la sustancia tánica problema de modo que tenga una concentración de 1x1000 y
con 10ml de esta solución se repite la operación de la solución (B). se nota el número de ml
gastados y se hacen los cálculos.
El método de Jean consiste en la valoración para taninos totales, el yodo se reduce a ion
ioduro al interactuar con el ácido tánico en medio básico otorgado por el bicarbonato de
sodio, al ya no haber ácido tánico, el exceso de yodo se introduce en las hélices de almidón
dando una coloración morado oscuro. Se hizo la valoración para el bicarbonato de sodio dado
que este último tiende a capturar al yodo4.
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
2.- Forkner, R., Hunter, M., Hagerman, A. 2002. Determination of hydrolysable tannins
(Gallotaninns and Ellagitannins) after reaction with Potassium iodate. Journal of Agricultural
and Food Chemistry 50: 1785-1790.
3.- GIRÓN MORALES, JUAN JACOB. “Reutilización de la Salmuera en la etapa de salado del
beneficio artesanal del maní (Arachis Hipogae L.) y cuantificación del contenido tánico en la
testa- episgerma- de la semilla”, Universidad de San Carlos de Gautemala, Facultad de
Ingeniería, Escuela de Ingeniería Química, 2012.
4.- Jean Bruneton, Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales 2ª Ed. Acribia, I.J.R.,
Zaragoza, España, 2001 Pág. 380-382