Guía

interpretativa
La Placa de recuento rápido de coliformes/
E. coli 3M™ Petrifilm™ es un sistema
selectivo y diferencial de medio de muestra
ya preparada de cultivos, que contiene
nutrientes patentados, un activo gelificante
soluble en agua fría, 5 bromo- 4 chloro-
3-indolyl-D- glucuronide (BCIG, por su
sigla en inglés) y un indicador de actividad
glucuronidasa, además de un indicador de
tetrazolio que facilita la enumeración de
colonias. Las Placas de recuento rápido de
coliformes/E. coli 3M Petrifilm se usan para la
enumeración de la Escherichia coli (E. coli) y
coliformes en las industrias de alimentos
y bebidas.

REC
Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 1
La mayoría de E. coli (alrededor del 97 %) produce beta-glucuronidasa, que produce un precipitado asociado
con la colonia de la Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 3M Petrifilm. La película superior de la Placa
de recuento rápido de coliformes/E. coli atrapa gases de dióxido de carbono producidos por los coliformes de
fermentación láctica y E. coli. Un pequeño porcentaje de E. coli no produce gases de dióxido de carbono como
resultado de la fermentación láctica; se conoce como E. coli anaerógena. En la Placa de recuento rápido de
coliformes/E. coli 3M Petrifilm, las colonias azules a azules-verdes asociadas con los gases atrapados o sin ellos
(dentro del diámetro de una colonia, aproximadamente) son contadas como E. coli.

La mayoría de las cepas de E. coli O157 son inusuales, por ejemplo, son glucuronidasa negativas; no producen un
color azul y no son detectadas por las Placas de recuento rápido de coliformes/E. coli 3M Petrifilm.

En el Manual de análisis bacteriológico (BAM, por su sigla en inglés) de la Administración de Alimentos y

Medicamentos de los Estados Unidos (FDA, por su sigla en inglés), se definen a los coliformes como bacilos Gram
negativos, que producen ácidos y gases a partir de lactosa durante la fermentación metabólica. Las colonias
coliformes no E. coli que crecen en la Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 3M Petrifilm producen
ácidos y gases, lo que genera que el indicador de pH profundice el color del gel amarillo claro, y que los gases
queden atrapados alrededor de las colonias rojas. En esta guía interpretativa, el número de coliformes conforme
a la definición del BAM de la FDA representa la cantidad de colonias rojas con producción de gases y las colonias
azules con producción de gases o sin ellos.

La ISO define los coliformes por su capacidad de crecimiento en medios selectivos y específicos por método. En
el método ISO 4832, se enumeran las colonias coliformes típicas en agar biliar de lactosa rojo violeta (VRBL, por
su sigla en inglés), con la confirmación de las colonias atípicas. En la Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli
3M Petrifilm, los coliformes aparecen indicados por las colonias rojas con producción de gases o sin ellos, y las
colonias azules con producción de gases o sin ellos.

Consultar las instrucciones del producto para obtener más información.

Figura 1 Figura 2

Recuento de E. coli = 0 Recuento de E. coli = 2

Recuento total de coliformes = 0 (colonias azules con gases o sin ellos)
Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 3M Petrifilm sin Recuento total de coliformes = 8
colonias. (colonias rojas con gases y colonias azules)
Recuento total de coliformes = 8
(colonias rojas y colonias azules)
E. coli son colonias azules a azules-verdes con burbujas de gases
asociadas y sin ellas. La definición de coliformes puede variar por país.
Consultar la sección anterior y las instrucciones del producto para ver
las definiciones.
No contar las colonias que aparezcan en la barrera de espuma porque
son eliminadas del influjo selectivo del medio.

Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 2

 1

Figura 3 Figura 4

Recuento de E. coli = 25 (colonias azules con gases o sin ellos)
Total coliform count = 71 (colonias rojas con gases y colonias azules)
Total coliform count = 75 (colonias rojas y colonias azules)
En el Círculo 1, pueden verse dos colonias diferenciadas aunque el
precipitado azul de ambas colonias se haya fusionado. Las burbujas
de gases formadas por cada colonia ha perturbado la colonia, de
modo que esta ‘destaca’ la burbuja.
Las burbujas artefacto pueden resultar de la siembra inadecuada o
del aire atrapado dentro de la muestra. Son de forma irregular y no
se relacionan con una colonia (Círculo 2).
Las partículas de alimentos son de forma irregular y no están
asociadas con las burbujas de gases (Círculo 3).
Recuento de E. coli = 3 (colonias azules con gases o sin ellos)
Estimated total coliform count = 145
El área de crecimiento circular es de, aproximadamente, 30 cm.
Los cálculos pueden hacerse en las Placas de recuento rápido
de coliformes/E. coli 3M Petrifilm que contengan más de 100
colonias. Contar la cantidad de colonias en uno o más de los
recuadros representativos y determinar la cantidad promedio por
recuadro. Multiplicar la cantidad promedio por 30 para determinar
el recuento estimado. En esta foto, pueden verse tres tipos de
colonias: Colonias rojas con gases (Círculo 1), colonias azules
con gases (Círculo 2) y colonias ultradiminutas de color rosado
pálido, sin gases. Dichas colonias ultradiminutas sin gases no son
coliformes y no deben ser contadas (Círculo 3).
Para obtener un recuento más preciso, es posible que se requiera
de una mayor dilución de la muestra.

Figura 5 Figura 6

Recuento de E. coli = 0 Recuento de E. coli = No puede determinarse el recuento total de

Recuento estimado de coliformes = coliformes = TNTC
Demasiados como para contarlos (TNTC)
El rango de recuento de los coliformes totales es de menos de 100 colonias totales o equivalente. Las placas con recuentos TNTC de colonias
pueden tener una o más de las siguientes características: aligeramiento del color del gel a amarillo, muchas colonias pequeñas rojas o azules
indistintas y muchas burbujas de gases. Las altas concentraciones de E. coli o coliformes pueden hacer que el borde exterior del área de
crecimiento se vuelva de rosado a rosado naranja.
Para obtener un recuento más preciso, es posible que se requiera de una mayor dilución de la muestra.
3
 Figura 7 Figura 8

Recuento de E. coli = TNTC (colonias azules con gases y sin ellos)

Recuento total de coliformes = TNTC
El rango de recuento de E. coli es de menos de 100 colonias azules a azules-verdes o cantidad equivalente. Las placas con recuentos TNTC
de colonias pueden tener una o más de las siguientes características: aligeramiento del color del gel a amarillo, muchas colonias pequeñas
rojas o azules indistintas y muchas burbujas de gases. Las altas concentraciones de E. coli o coliformes pueden hacer que el borde exterior
del área de crecimiento se vuelva de rosado a rosado naranja.
Para obtener un recuento más preciso, es posible que se requiera de una mayor dilución de la muestra.

Figura 9 Figura 10

Recuento de E. coli = 41 (colonias azules con gases o sin ellos)
Total coliform count = TNTC
(colonias rojas con gases y colonias azules)
Total coliform count = TNTC (colonias rojas y colonias azules)
El rango de recuento de E. coli en la Placa de recuento rápido de
coliformes/E. coli 3M Petrifilm es de menos de 100 colonias azules a
azules-verdes o cantidad equivalente, indistintamente de la cantidad
de colonias totales. El rango contable de coliformes totales puede
producirse en una dilución aparte.
Para obtener un recuento más preciso, es posible que se requiera de
una mayor dilución de la muestra.
Recuento de E. coli = 2 (colonias azules con gases o sin ellos)
Total coliform count =36 (colonias rojas con gases y colonias azules)
Total coliform count = 58 (colonias rojas y colonias azules)
En esta figura, se muestra la siguiente dilución en serie de la muestra
en placa de la Figura 9. El rango de recuento de coliformes totales
en la Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 3M Petrifilm
es de menos de 100 colonias o cantidad equivalente. No contar las
colonias diminutas, rosadas pálido sin gases (ver el círculo). Estas
colonias no son coliformes y no deben ser contadas.

4
 2
1

Figura 11 Figura 12

Recuento de E. coli = 42 (colonias azules con gases o sin ellos)
Total coliform count = TNTC
(colonias rojas con gases y colonias azules)
Total coliform count = TNTC (colonias rojas y colonias azules)
El rango de recuento de E. coli en la Placa de recuento rápido de
coliformes/E. coli 3M Petrifilm es de menos de 100 colonias azules a
azules-verdes o cantidad equivalente, indistintamente de la cantidad
de colonias totales. El rango contable de coliformes totales puede
producirse en una dilución aparte.
Para obtener un recuento más preciso, es posible que se requiera de
una mayor dilución de la muestra.
Recuento de E. coli = 21 (colonias azules con gases o sin ellos)
Total coliform count = 60 (colonias rojas con gases y colonias azules)
Total coliform count = 60 (colonias rojas y colonias azules)
Una dilución 1:10 de algunas matrices alimentarias, por ejemplo las que
contienen frutas, tales como cerezas y arándanos, pueden afectar la
producción de ß-glucuronidasa de E. coli y representarlas en color azul-
verde leve. Una incubación adicional y una dilución 1:20 devolverán la
apariencia del color azul-verde.
En esta figura, las colonias de E. coli pueden ser identificadas por su
color oscurecido de la colonia, rodeado de un color azul-verde leve
(Círculo 1). Comparar esta colonia con una colonia coliforme no E. coli,
que es roja brillante (Círculo 2).

Recordatorios de uso
Storage Inoculation

1 mL

-20 to 8°C

ardar las bolsas de Placas de
1 recuento rápido de coliformes/E.
coli a temperatura de refrigeración o
congelamiento equivalentes a -20 °C
a 8 °C (-4 °C a 46 °F). Usarlas antes de
la fecha de vencimiento del paquete.
Justo antes de usarlas, todas las bolsas
sin abrir deberán alcanzar la temperatura
ambiente antes de ser abiertas.
Sellarla doblando el extremo de la
2 bolsa por encima y aplicando cinta
adhesiva. A fin de evitar la exposición
a la humedad, no deben refrigerarse
las bolsas abiertas. Guardar las bolsas
reselladas en un lugar seco y fresco
durante no más de cuatro semanas.
Colocar la Placa de recuento rápido de
3 coliformes/E. coli 3M Petrifilm en una
superficie pareja. Levantar la película
superior con la pipeta en perpendicular
al área de inoculación, dispensar 1 mL de
la suspensión de la muestra en el centro
de la película base.

Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli 5


Girar la película superior hacia abajo de la
4 muestra con cuidado, para evitar atrapar
burbujas de aire. No dejar que se caiga la
película superior.
Incubation
Incubar las placas con el lateral
6 transparente hacia arriba, en pilas de no
más de 20. Puede ser necesario humidificar
la incubadora para minimizar la pérdida de
humedad. Consultar las instrucciones del
producto para ver los métodos validados
por terceros.
Burbujas
En las ilustraciones siguientes, se muestran ejemplos de distintos patrones de burbujas asociadas con colonias
productoras de gases. Todas deben ser enumeradas.
3M Seguridad Alimentaria ofrece
una línea completa de productos
para satisfacer una variedad de sus
necesidades de pruebas microbianas.
Para más información sobre el producto,
visítenos en 3M.com/foodsafety/
Petrifilm o llame al 1-800-328-6553.
3M España S.L.
Juan Ignacio Luca de Tena, 19–25
28027 Madrid
Tel: 900 210 584
www.3M.com.es
Placa de recuento rápido de coliformes/E. coli
Usar los diluyentes
estériles correspondientes
Agua de dilución de base fosfatada de
Butterfield, 0,1 % de agua peptonada,
diluyente en sal peptona (diluyente de
recuperación máxima), agua de base
peptonada, 0,85 % 0,9 % de salina,
salina base fosfatada (PBS), agua
destilada o caldo letheen sin bisulfito.
Colocar el Dispersante plano 3M™ Para un óptimo crecimiento y la
5 Petrifilm™ en el centro de la Placa de
recuperación de los microorganismos
recuento rápido de coliformes/E. coli 3M
Petrifilm. Presionar con firmeza en el centro
en productos ácidos (< pH 5), ajustar el
del dispersante para distribuir la muestra pH de la suspensión de muestra a más
de manera pareja. No girar ni deslizar el de pH 5.
dispersante.
No usar diluyentes que contengan
Interpretation citrato, bisulfato o tiosulfato con
las Placas de recuento rápido de
coliformes/E. coli 3M Petrifilm, ya
que pueden inhibir el crecimiento.
Si la base de citrato está indicada en el
procedimiento estándar, sustituirla con
agua de dilución de base fosfatada de
Butterfield, templada a 40 °C a 45 °C.
Las Placas de recuento rápido de
7 coliformes/E. coli 3M Petrifilm pueden
ser contadas con un contador de colonias
estándar u otra lente de aumento iluminada.
Las colonias pueden ser aisladas para una
identificación pormenorizada. Levantar la
película superior y seleccionar la colonia
del gel.
Responsabilidades del usuario: El rendimiento de la placa 3M Petrifilm no ha sido evaluado con
todas las combinaciones de flora microbiana, condiciones de incubación y matrices de alimento.
Es responsabilidades del usuario determinar que los métodos y resultados en cuestión cumplan con
los requisitos del usuario. Si fuera necesario volver a imprimir esta guía de interpretación, los ajustes
de impresión del usuario pueden influir en la calidad de la imagen y el color.
Para obtener información detallada sobre PRECAUCIONES, DESCARGO DE
GARANTÍAS/REMEDIO LIMITADO y LIMITACIÓN DE RESPONSABILIDAD
DE 3M, ALMACENAMIENTO Y DESECHO e INSTRUCCIONES DE USO,
consulte el inserto del envase del producto.
3M y Petrifilm son marcas comerciales de 3M. Utilizada con licencia
en Canadá. Por favor, recicle. Impreso en EEUU. © 3M 2019.
Todos los derechos reservados. J451005.
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