Práctica

BACILOS GRAM NEGATIVOS

MSc Carmen Diana Rado Covarrubias

MSc. Erika Sofía Pérez Vélez
 OBJETIVO

• Identificar, a nivel de género y especie,

bacilos gram negativos aerobios de
importancia clínica a partir de la utilización de
medios de diferenciación bioquímica.
RECORDANDO…
ESTRUCTURA DE LA PARED CELULAR DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Preparación y fijación del frotis

OBSERVACIÓN
MICROSCÓPICA
• Si el cultivo es de medio sólido, previamente se colocará en el centro del portaobjetos
una gota de agua destilada
 Tinción Gram
CRISTAL VIOLETA LUGOL ALCOHOL SAFRANINA
1 min. 1 min. ACETONA

OBSERVACIÓN
MICROSCÓPICA
 FERMENTACIÓN DE LA LACTOSA

Agar MacConkey

▪ Aislamiento de bacilos gram

negativos
▪ Sales biliares y cristal violeta Colonias rosadas o Colonias incoloras:
inhiben el crecimiento de prueba negativa.
rojizas: prueba positiva.
bacterias gram positivas Salmonella, Shigella,
E. coli, Klebsiella,
Enterobacter Pseudomona, Proteus
 • Permiten determinar las características metabólicas de las
bacterias objeto de identificación.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
• Identificación de género y especie
• Pruebas convencionales, semiautomatizadas y automatizadas
 Medio Triple sugar iron (TSI)

• Fermentación de carbohidratos (glucosa,

lactosa, sacarosa)
• Producción de H2S (sulfuro de hidrogeno)
• Producción de gas
• Indicador de pH rojo de fenol
 Medio Agar Lisina hierro (LIA)

• Descarboxilación (descarboxilasa): Lisina a

cadaverina (alcalinización del medio)
• Desaminación de la lisina (desaminasa): Lisina
a ácido alfa – ceto-carbónico)
• Producción de H2S (sulfuro de hidrogeno)
• Producción de gas
• Indicador de pH purpura de bromocresol
 Agar Citrato de Simmons

• Utilización del citrato (metabolito del ciclo de

Krebs) como única fuente de carbono.
• Indicador de pH: azul de bromotimol
• Presencia de ureasa (hidrolisis de la
urea en amoniaco y CO2)
• Indicador de pH: rojo de fenol

Caldo Urea
Medio SIM o MIO

• Producción de indol por

presencia de triptofanasa
(Reactivo de Erlich o Kovac’s)
• Movilidad
• SIM (H2S)
• MIO (Ornitina descarboxilasa)
PROCEDIMIENTO

Demostración…
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
 Ácidez (A) - color amarillo
Alcalinidad (K) - color rojo

➢ Fermentación de la glucosa (K/A).

➢ Fermentación de glucosa, lactosa y/o sacarosa
(A/A)
➢ Sin fermentación de carbohidratos (K/K), aminas
que alcalinizan el medio.

• Producción de H2S: ennegrecimiento del medio

TSI • Producción de gas: ruptura del medio.
 Ácidez (A) - color amarillo
Alcalinidad (K) - color purpura

- Descarboxilación de la lisina:
• Resultado positivo: superficie y
profundidad alcalina, color purpura del
medio, K/K.
• Resultado negativo: superficie alcalina
(purpura), profundidad ácida (amarilla),
K/A.
- Desaminación de la lisina:
• Resultado positivo: Superficie rojiza y
profundidad ácida (amarillo) R/A

• Producción de H2S: ennegrecimiento del medio

LIA • Producción de gas: ruptura del medio.
• Todo el medio amarillo (A/A), fermentación de glucosa.
 Citrato de Simmons

Prueba positiva: color azul en

24 a 48 horas y crecimiento
en la superficie del medio
inclinado.

Prueba negativa: no hay

cambio de color ni
crecimiento.
 Caldo urea

- Prueba positiva: color rojo

en el medio por
alcalinización de este.

- Prueba negativa: no hay cambio

de color.
SIM MIO
 TSI

A/A K/A K/K GAS + H2S +

LIA

K/K K/A R/A

CITRATO
UREA
INDOL
 TSI LIA Citrato Urea SIM
Escherichia coli A/A Gas ++ H2S - K/A - - Indol positivo

Salmonella K/A Gas ++ H2S K/K + (tardia) - Indol negativo

++++
Shigella K/A Gas - H2S - K/A - - Indol +(-)

Pseudomona K/K Gas - H2S - + Indol –

Movilidad +
Proteus K/A Gas ++ H2S R/A + Indol +(-)
A/A ++++