Ecotoxicología y seguridad ambiental 198 (2020) 110645

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Ecotoxicología y seguridad ambiental

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Biorremediación de hidrocarburos de petróleo mediante proceso de vermicompostaje

bioaumentado con consorcio bacteriano autóctono aislado de lodos aceitosos de petróleo

Ali Koolivand a , ∗ , Reza Saeedi B , C , Frederic Coulon D , Vinod Kumar D , José Villaseñor mi ,
Fatemeh Asghari a , Faezeh Hesampoor a
a Departamento de Ingeniería de Salud Ambiental, Facultad de Salud, Universidad de Ciencias Médicas de Arak, Arak, Irán
B Centro de Investigación para la Promoción de la Salud en el Lugar de Trabajo, Universidad de Ciencias Médicas Shahid Beheshti, Teherán, Irán

C Departamento de Salud, Seguridad y Medio Ambiente (HSE), Facultad de Salud y Seguridad Pública, Universidad de Ciencias Médicas Shahid Beheshti, Teherán, Irán
D Escuela de Agua, Energía y Medio Ambiente, Universidad de Cranfield, Cranfield, Reino Unido
mi Departamento de Ingeniería Química, Instituto de Tecnologías Químicas y Ambientales, Universidad de Castilla-La Mancha, Campus Universitario S / n, 13071, Ciudad Real, España

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Palabras clave: Encontrar un enfoque sólido basado en la ecología para la eliminación de hidrocarburos de petróleo (PHC) de los lodos oleosos de petróleo (POS) generados
Vermicompostaje en las plantas de refinería de petróleo sigue siendo un desafío. Este estudio investigó la remoción de hidrocarburos totales de petróleo (TPH) usando
Lodos aceitosos de petróleo compostaje bioaumentado (BC) por bacterias degradantes de hidrocarburos (HDB) y vermicompostaje (VC) por Eisenia fetida, individualmente y en
Compostaje bioaumentado
combinación (BCVC). Después de aislar dos cepas de bacterias nativas de POS preparadas en una planta de refinería de petróleo en Irán, la capacidad de
Lombrices de tierra
degradación de su consorcio se evaluó inicialmente en medio mineral Bushnell-Haas (MBHM). Luego, se determinaron las tasas de biodegradación de POS
en los tratamientos BC, VC y BCVC que contenían diferentes concentraciones de TPH (5, 10 y 20 g / kg) midiendo los TPH antes y después de la
biodegradación. Los resultados mostraron que el consorcio degradó entre el 20 y el 62% del contenido de TPH de queroseno (entre el 1 y el 5%) en el MBHM
después de 7 días. Después de 12 semanas, se encontró que los porcentajes de eliminación de TPH en los tratamientos BC, VC y BCVC eran
respectivamente 81-83, 31-49 y 85-91, lo que indica el efecto sinérgico de bacterias y gusanos en la biorremediación de POS. La biodegradación de los APS
en BC, VC, y los experimentos de BCVC se ajustaron a la cinética del modelo de primer orden. Los resultados de las pruebas de toxicidad.

indicó que los valores de la concentración letal no observada (NOLC) y la concentración letal media (LC 50)
de TPHs fueron de 2 a 5 y 14,64 g / kg, respectivamente, después de 28 días de exposición a las lombrices de tierra. Deterioro morfológico

Se observaron fenómenos como hinchazón, enrollamiento y rizado cuando la concentración de TPH era incluso más baja que la de NOLC. El estudio
verificó la efectividad del vermicompostaje bioaumentado con el consorcio bacteriano autóctono para la biorremediación de POS.

1. Introducción estrictamente controlado. A lo largo de los años, se han desarrollado una variedad de métodos de
tratamiento para remediar POS ( Kuppusamy et al., 2017 ; Robichaud et al., 2019 ). Entre ellos, los
Anualmente se generan enormes volúmenes de lodos aceitosos de petróleo (POS) a partir de la métodos de biorremediación como el proceso de compostaje han recibido gran atención debido a su
producción y procesamiento de petróleo crudo. POS es una mezcla compleja de agua, sedimentos, alta eficiencia y aplicabilidad, bajos costos y también porque son amigables con el medio ambiente ( Huang
hidrocarburos de petróleo (PHC) y pesados et al., 2019 ; Ren et al., 2018 ).
rieles. APS S son los componentes más perjudiciales en los POS, debido a sus posibles amenazas
para la salud humana y el medio ambiente. Por lo tanto, POS es La aplicación de vermiremediación y vermicompostaje en el que se utilizan lombrices de tierra
clasificado como contaminante prioritario y su liberación al medio ambiente para la eliminación de contaminantes ha sido con frecuencia

Abreviaturas: BC, compostaje bioaumentado; C org, carbón orgánico; HDB, bacterias degradantes de hidrocarburos; IC, abono inmaduro; LC 50, concentración letal media; MBHM, medio mineral Bushnell-Haas;
NOLC, sin concentración letal observada; OD, densidad óptica; APS, hidrocarburos de petróleo; POS, petróleo
lodo aceitoso; TPH, hidrocarburos de petróleo totales; VC, vermicompostaje
∗ Autor correspondiente.

Correos electrónicos: alikoulivand@arakmu.ac.ir , alikulivand@gmail.com (A. Koolivand).

https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2020.110645
Recibido el 28 de septiembre de 2019; Recibido en forma revisada el 26 de febrero de 2020; Aceptado el 13 de abril de 2020 Disponible online el 25 de abril

de 2020

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informó ( Kuppusamy et al., 2017 ; Martinkosky et al., 2017 ; Rorat et al., 2017 ). Las actividades
normales de las lombrices de tierra pueden llevar a airear y mezclar los medios de compostaje y, por
lo tanto, hacer que los contaminantes estén disponibles para la comunidad microbiana. A medida
que los materiales de compostaje pasan por su intestino, las enzimas secretadas pueden aumentar
la tasa de degradación de los contaminantes objetivo. Las lombrices de tierra también aumentan la
biomasa y las actividades enzimáticas de la población microbiana, lo que aumenta la eficiencia de
degradación de los PHC ( Chachina et al., 2015 ; Martinkosky et al., 2017 ). A pesar de los trabajos
exitosos registrados hasta ahora para la biorremediación de POS, se ha continuado intentando
dilucidar modificaciones más adecuadas y efectivas ( Ekperusi y Aigbodion, 2015 ). Múltiples informes
han indicado que la combinación de dos o más tecnologías de biorremediación puede mejorar la
eliminación de APS ( Guarino et al., 2017 ; Rodríguez- Campos et al., 2019 ). En este sentido, la
adición de cepas bacterianas (bioaumentación) aumenta la supervivencia y las tasas de
reproducción de las lombrices de tierra ( Chachina et al., 2015 ). En consecuencia, la combinación de
7, 8 y 9 y se incubaron durante 7 días a 30 ° C. Las capacidades del HDB para la degradación de
múltiples concentraciones (1-5% vv −1) de queroseno se investigaron en MBHM a pH neutro antes de
inocularlo en los reactores de vermicompostaje. En todas las pruebas realizadas en MBHM, la
cantidad de eliminación de queroseno se calculó como la reducción de TPH frente a los
experimentos de control sin inoculación bacteriana. Las tasas de eliminación de TPH se calcularon
de la siguiente manera:
Tasa de eliminación de TPH = [(TPH iniciales TPH finales) / TPH iniciales] × 100
donde los TPH iniciales y los TPH finales son los niveles de TPH antes y después del tratamiento,
respectivamente.
2.3. Preparación de lombrices de tierra

vermicompostaje y bioaumentación puede ofrecer una valiosa mejora en la eficacia del proceso.
Dado que las bacterias alóctonas no son muy eficientes en un nuevo entorno debido a su baja
adaptabilidad, se prefiere la adición de cepas metabólicamente superiores aisladas del mismo
entorno que los agentes de bioaumentación ( Rabodonirina et al., 2019 ; Tao et al., 2017 ).
Aunque el potencial de la vermiremediación para mejorar la degradación de los APS ha sido
bien demostrado, quedan varias variables por probar para desarrollarlo como un proceso viable ( Kuppusamy
et al., 2017 ; Martinkosky et al., 2017 ). Parece claro que las lombrices de tierra aumentan las tasas de
degradación de niveles bajos a medios de hidrocarburos totales de petróleo (TPH); sin embargo, no
se han probado con frecuencia para concentraciones altas. Sólo unos pocos artículos han informado
de una combinación de vermicompostaje y bioaumentación con las cepas bacterianas autóctonas
aisladas de POS. Teniendo en cuenta lo anterior, el objetivo de este estudio fue evaluar la
eliminación de los TPH utilizando estas dos tecnologías de forma individual y combinada. La
toxicidad de POS en lombrices de tierra ( Eisenia fetida) también se investigó la supervivencia y el
crecimiento. En el presente trabajo, aislamos dos cepas bacterianas nativas de POS y usamos su
mezcla como un consorcio. Estas dos cepas como bacterias degradantes de hidrocarburos (HDB)
exhibieron un alto potencial de degradación de los PHC tanto en el medio mineral Bushnell-Haas
(MBHM) como en el proceso de vermicompostaje.
Una lombriz de tierra común para compostaje, Eisenia fetida, fue seleccionada porque esta especie de
fácil acceso es tolerante a las condiciones ambientales y se reproduce rápidamente. Esta especie es capaz
de moverse hacia los materiales de compostaje y, por lo tanto, se puede encontrar en todas las
profundidades de las pilas de compostaje ( Martinkosky et al., 2017 ). Las lombrices de tierra se recolectaron
manualmente de una instalación de vermicompostaje ubicada en Arak, Irán. Las lombrices de tierra que
pesaban entre 0,3 y 0,4 g se recolectaron y utilizaron para reactores biológicos. Todas las lombrices de
tierra se mantuvieron en el experimento con fines de aclimatación y se revisaron diariamente para
determinar su estado de salud.
2.4. Montaje experimental y mantenimiento de experimentos de vermicompostaje
Los contenedores de polipropileno translúcido resistente a productos químicos equipados con
tapa ventilada con clips en dos lados de los bordes se compraron en el mercado. Los contenedores
se llenaron con 3 kg de
compost inmaduro (IC) con el carbono orgánico (C org) nivel de 290 g / kg ( Koolivand y col., 2019a ). El
CI obtenido de una instalación de compostaje
se pasó a través de un tamiz de tamaño de poro de 1 cm para eliminar impurezas como plástico y
vidrio y mejorar la homogeneidad. Según los resultados de los experimentos de MBHM, así como las
pruebas de toxicidad, varias cantidades de POS con los TPH iniciales de 255 g / kg ( Parhamfar et al.,
2019 ) se mezclaron con IC para alcanzar los niveles iniciales de TPH de 5, 10 y 20 g / kg y se
agregaron a los tratamientos. Se realizaron diez tratamientos según tabla 1 . El IC y POS se
esterilizaron con tres ciclos de autoclave (121 ° C durante 30 min) con intervalos de 24 hy luego se
mantuvieron a 4 ° C durante menos de 48 h antes de comenzar los experimentos.

2. Materiales y métodos
2.1. Aislamiento e identificación del HDB
POS, obtenido de una planta de refinería de petróleo (situada en Shazand, Irán), se utilizó como
fuente de HDB. Después de transportar POS al laboratorio, las HDB se aislaron incubando una
mezcla de MBHM (100 ml) y POS (5 g) a 30 ° C en un agitador orbital durante 7 días. Luego, se
inocularon 5 ml del cultivo incubado en MBHM reciente. Después de repetir la etapa de
enriquecimiento antes mencionada, se cultivaron 100 µl del medio en la superficie del agar nutriente
y se identificaron las colonias generadas. Se realizó la caracterización fenotípica de los dos
aislamientos
Se separaron diez lombrices de tierra, se lavaron con agua limpia, se limpiaron manteniéndolas
en papel de filtro húmedo y se limpió suavemente su capa superficial. Luego, se pesaron y se
agregaron a cada tratamiento. Antes de los experimentos de degradación, las lombrices de tierra se
aclimataron al IC y a las condiciones de laboratorio durante al menos una semana para disminuir la
mortalidad causada por cambios ambientales repentinos. Las lombrices de tierra se alimentaron justo
al comienzo del proceso, ya que la adición del alimento durante el proceso puede diluir los niveles de
TPH. Se eligió la mezcla de pulpa de zanahoria y papa (1: 1 p / p) como alimento para las lombrices,
ya que era económica y accesible y las lombrices pueden sobrevivir bien en ella. Se colocó un
material de red y la tapa de la tapa en la parte superior de cada contenedor para evitar

incluyendo tinción de Gram, catalasa, oxidasa, ureasa, citrato, H 2 Producción de S, producción de tabla 1
indol, reducción de nitratos y hierro triple azúcar Las características de los tratamientos de biorremediación utilizados en el presente estudio.

fueron realizados. La identificación molecular se realizó mediante la amplificación y secuenciación del

Biorremediación Concentración de TPH Bacteriano Gusano
gen ARNr 16S según el procedimiento estándar descrito en los artículos publicados ( Farzadkia et al.,
tratos (g / kg) inoculación adición
2019 ; Koolivand y col., 2019b , 2019c ).
antes de Cristo 5 sí No
antes de Cristo 1 10 sí No
antes de Cristo 2 20 sí No
2.2. Medición del crecimiento bacteriano y eliminación de queroseno en MBHM
VC 3 5 No sí
VC 1 10 No sí
La capacidad de crecimiento del HDB en presencia de aceite crudo al 1% se determinó VC 23 C 20 No sí
BCV 5 sí sí
midiendo la densidad óptica (DO) a 600 nm en MBHM después de 2, 4, 7, 10 y 12 días. Para
BCVC 1 10 sí sí
examinar el efecto del pH sobre el crecimiento bacteriano y la eliminación del queroseno, se inoculó
BCVC 23 l 20 sí sí
el HDB (0,5 McFarland) en MBHM que contenía queroseno (1%) a valores de pH de 4, 5, 6, Contro 10 No No

2
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escape de las lombrices de tierra y permitir el flujo libre de oxígeno en los tratamientos. Con respecto 2.7. Modelado de la degradación de los TPH

a la utilización del consorcio bacteriano, se mezclaron y cultivaron mezclas iguales de los dos
aislamientos hasta la fase de crecimiento logarítmico. Luego se inoculó en los reactores a la La degradación de los TPH se modeló asumiendo una cinética de primer orden ( Nwankwegu et
concentración de al., 2020 ) tal que:
1,5 × 10 8 UFC / mL al 5% v / v del volumen de trabajo. El tratamiento de control se preparó sin
dC / dt = kC
adición de lombrices y cepas bacterianas para analizar el cambio de TPH debido a procesos
t 1/2 = ln2 / k = 0,693 / k
abióticos como la evaporación natural de hidrocarburos ligeros.
donde dC / dt es la tasa de degradación (g / kg.d), k es la degradación
La configuración experimental se colocó dentro del laboratorio, se protegió de la luz y se verificó constante de velocidad (d −1), C es la concentración de TPH (g / kg) y t 1/2 es el tiempo (d) necesario
diariamente durante 12 semanas. Los tratamientos se humedecieron agregando agua destilada dos para descomponer la mitad de los TPH iniciales.
veces por semana. La relación C / N / P
se ajustó a 100/5/1 agregando NH 4 Cl y KH 2 correos 4 ( Koolivand et al., 2014 , 2018 ). 2.8. análisis estadístico

Para obtener datos fiables, todas las pruebas se realizaron por triplicado. Los resultados

2.5. Métodos de muestreo y cuantificación obtenidos se indicaron como medias ± desviaciones estándar. La significación estadística de los
datos (p ≤ 0,05) se evaluó mediante el análisis de varianza unidireccional (ANOVA) del paquete

Las muestras para TPH y C org Los análisis en los materiales de compostaje se recolectaron SPSS (versión 11.0). Se aplicó el análisis de regresión lineal de Microsoft Excel (2013) a

siete veces los días 0, 14, 28, 42, 56, 70 y 84. En el

Al finalizar el experimento, también se midió el contenido de TPH de las lombrices de tierra para mostrar la relación entre las variables. LC 50 Los valores se calcularon a partir del porcentaje de

estimar las cantidades de bioacumulación de TPH en los cuerpos de las lombrices de tierra. Después mortalidad en relación con los de los controles por Probit.

de mezclar el contenido de cada tratamiento, se tomaron tres submuestras de varias profundidades, análisis. Las secuencias se analizaron con Chromas y se alinearon con CLUSTAL. Se aplicó BLAST

se mezclaron y homogeneizaron en una muestra compuesta. Las muestras homogeneizadas se para realizar búsquedas de similitud de las secuencias en comparación con la base de datos NCBI.

transfirieron a un frasco de vidrio y se analizaron inmediatamente. Las lecturas de humedad se

realizaron gravimétricamente mediante secado a 105 ° C durante 24 h. los
3. Resultados y discusión

C org se determinó por pérdida por ignición a 600 ° C ( TMECC, 2002 ). Los TPH se extrajeron con
n-pentano y luego se cuantificaron mediante un gas 3.1. Características de la HDB

detector de ionización de llama por cromatógrafo (GC-FID) (Shimadzu, Japón) basado en TNRCC
(2001) . Las condiciones de funcionamiento del GC son accesibles en los artículos anteriores La búsqueda de similitud de la base de datos del NCBI Genbank basada en el análisis de la

mediante Koolivand y col. (2013a , 2013b) . secuencia del gen del ARNr 16S indicó que las dos cepas aisladas eran
Acinetobacter radioresistens cepa KA2 y Enterobacter hormaechei
cepa KA3. Las secuencias de nucleótidos se depositaron en NCBI GenBank con los números de
2.6. Ensayos de toxicidad
acceso MK127544 y MK127545, respectivamente para las cepas KA2 y KA3. Tabla 2 proporciona las
características bioquímicas del consorcio bacteriano. Los valores de DO, como indicación de la
Eisenia fetida se ha utilizado ampliamente como una de las especies modelo recomendadas
producción de biomasa por parte del consorcio, en MB 6 H 00 M con
para evaluar la toxicidad de los productos químicos ( OCDE, 1984 ). La toxicidad se controló mediante
las siguientes pruebas: (i) la supervivencia y pérdida de peso de lombrices de tierra adultas maduras;
que contienen queroseno (concentración del 1%) se encontraron 0,33, 0,93, 1,55,
y (ii) el número y la incubabilidad de los capullos y la supervivencia de los juveniles. Los tratamientos
1,60 y 1,31, respectivamente, después de 2, 4, 7, 10 y 12 días. Estos valores indicaron que el
de toxicidad se realizaron por duplicado.
consorcio puede crecer bien en presencia de queroseno como única fuente de carbono. También se
observó un período de retraso en el crecimiento durante los primeros 2 días y luego, una rápida
generación de biomasa durante el día 7-10. Así, el tiempo de incubación para todas las pruebas de
2.6.1. La supervivencia y la pérdida de peso de las lombrices de tierra adultas
degradación realizadas en MBHM fue de 7 días cuando el consorcio alcanzó la fase de crecimiento
Las lombrices se retiraron de los tratamientos a mano, se enjuagaron para eliminar partículas,
logarítmico.
se secaron con palmaditas y luego se determinó la mortalidad a los 28 días, con base en los
protocolos previamente establecidos ( OCDE, 1984 ). Las concentraciones de TPH de 0 (como
control), 2, 5, 10, 20, 30, 40 y 50 g / kg se utilizaron para encontrar la concentración que causa la
3.2. Biodegradación de queroseno en MBHM
mortalidad en los gusanos. La concentración letal mediana (LC

Se probó el efecto del pH como factor importante que influye en las actividades del consorcio
exponer
relación con las concentraciones iniciales de TPH después de 50) fue expresado en gusanos para
bacteriano y la solubilidad de los PHC para determinar los mejores valores de pH para los
28 días ( OCDE, 1984 ; Ramadass et al., 2017 ). Para determinar el cambio de peso, las lombrices se
tratamientos de compostaje. Como se indica en Tabla 3 , la mayor eficiencia de biodegradación
depuraron y se registró su peso. Los efectos de la contaminación sobre la morfología también se
(51-62%) y DO a los valores de pH
examinaron visualmente. La toxicidad se determinó como porcentaje de supervivencia y pérdida de
peso en comparación con los controles.
Tabla 2
Las identificaciones bioquímicas de las cepas bacterianas aisladas de lodos aceitosos de petróleo.

2.6.2. El número y la incubabilidad de los capullos y la supervivencia de los juveniles.

Pruebas Acinetobacter radioresistens Enterobacter hormaechei
Los números de capullos y juveniles, como una medida de la producción reproductiva, se cepa KA2 cepa KA3
midieron mediante un tamizado húmedo durante la duración de la prueba. Brevemente, se colocó un
Reducción de nitratos - +
tamiz de 1 mm encima de un tamiz de 0,15 mm y el material de compostaje se lavó con agua del
Oxidasa - -
grifo. Los capullos y el juvenil atrapados en el tamiz superior e inferior, respectivamente. Después de
Catalasa + +
recoger capullos y juveniles, se trasladaron a un vaso de precipitados que contenía un poco de agua. Tinción de Gram Gram negativo Gram negativo
Los gusanos juveniles se extrajeron del agua con una aguja y se contaron. Contando el número de Citrato - -
Ureasa - -
juveniles nacidos de los capullos recolectados, se midió el porcentaje de incubabilidad ( Ramadass et
Hierro triple azúcar Alcalino / alcalino Alcalino / alcalino
al., 2016 ).
H 2 S producción - -
Producción de indol - -

3
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Tabla 3 antes de Cristo 2, y BC 3 demostró la efectividad del consorcio aislado para la biorremediación de POS.
Biodegradación de queroseno por el consorcio aislado en medio mineral Bushnell-Haas.

Los resultados de los tratamientos de CV revelaron que las lombrices de tierra pudieron

Variables Valores sobredosis 600
pH 5 0,97
6 1,34
7 1,55
8 1,26
9 0,86
Concentraciones de queroseno (%) 1 1,55
2 1,69
3 1,51
4 0,93
5 0,50
Degradación del queroseno (%) sobrevivir y adaptar la concentración de TPH de 5 a 20 g / kg. En el
experimentos que contienen concentraciones de TPH de 5 y 10 g / kg (BC 1,
33,33
antes de Cristo 2, VC 1, VC 2, BCVC 1, y BCVC 2), la biodegradación procedió de forma más activa. Varios
51,40
estudios informaron que las lombrices de tierra tienen la capacidad
62.02
52.18 para la adaptación en presencia de ciertas cantidades de TPH. En un estudio realizado por Chachina
40,70 y col. (2015) , se logró una cantidad de 97 a 99% de eliminación de TPH (concentración de 20 g / kg)
62.02 en muestras de suelo con 10 gusanos después de 4 meses. Martinkosky y col. (2017) informó una
66,35
disminución de
60.08
80% de los TPH (C dieciséis -C 35) con Eisenia fetida en suelo contaminado con 30 g / kg de crudo. La
35,78
20.21 menor tasa de reducción de TPH en el tratamiento de CV
Los datos comparados con los de la Columbia Británica indicaron que el consorcio bacteriano era más

6-8, verificó la preferencia del consorcio por las condiciones neutrales. El crecimiento y la reducción
de TPH disminuyeron notablemente a los pH de 5 y 9. Estos hallazgos están en línea con otros
estudios que informan que las HDB prefieren el pH neutro para su crecimiento y degradación de TPH
( Muangchinda et al., 2018 ; Wang et al., 2016 ).
Tabla 3 también mostró la mineralización de múltiples concentraciones (1-5%) de queroseno por
parte del consorcio. Se indicó que el HDB de manera eficiente (60-66%) degradaba el queroseno en
concentraciones de 1 a 3% y no se encontró degradación efectiva para los niveles de 4 a 5%. En
términos cinéticos, las bacterias tienen diferentes reacciones a las concentraciones de contaminantes
presentes en los ambientes contaminados. Una concentración muy baja de PHC limitaría la tasa de
degradación, ya que existe un nivel de umbral por debajo del cual HDB no detecta eficazmente los
PHC. Por otro lado, una alta concentración de APS puede bloquear el crecimiento y las actividades
del consorcio ( Ekperusi y Aigbodion, 2015 ; Zhang y col., 2017 ).
3.3. Eliminación de POS en los tratamientos BC, VC y BCVC
En el presente estudio, las capacidades de HDB para la degradación del queroseno ( Tabla 3 ) así
como los resultados de las pruebas de toxicidad fueron la base para seleccionar las proporciones de
mezcla de POS a IC en los reactores de compostaje.
Figura 1 mostró que las tasas de eliminación de TPH eran 83,00, 85,90, 81,15,
49,20, 42,10, 30,80, 91,20, 90,90, 85,35 y 6,60%, respectivamente para
los reactores BC 1, antes de Cristo 2, antes de Cristo 3, VC 1, VC 2, VC 3, BCVC 1, BCVC 2, BCVC 3, y control. Las altas
cantidades de degradación de TPH en los experimentos BC 1,
potente que las lombrices de tierra para la degradación de los TPH. Además, las lombrices de tierra eran
más sensibles que las HDB a la alta concentración.
centraciones de TPH desde la tasa de eliminación en el tratamiento VC 3 fueron
significativamente más bajo que el de BC 3.
La inoculación del consorcio bacteriano en los tratamientos con
Las lombrices de tierra mostraron los mejores rendimientos de los tratamientos BCVC. Esto indica que
la aplicación simultánea de HDB aislado y lombrices de tierra exhibe un efecto sinérgico para la
eliminación de TPH. Los resultados del análisis de regresión ( Cuadro 4 ) verificó que la tasa de pérdida
de TPH en los experimentos puede explicarse mediante modelos de degradación de primer orden. Cuadro
4 también proporciona los valores calculados de las constantes de la tasa de biodegradación para los
tratamientos BC, VC y BCVC. Los valores más altos de las constantes de biodegradación en los
experimentos BCVC demuestran la interacción sinérgica del E. fetida y el consorcio bacteriano aislado. Rodríguez-Cam
y col. (2019) encontraron que la interacción de bacterias y lombrices de tierra resultó en la eliminación
más alta de TPH (77,2%) para el nivel inicial de 309 mg / kg después de 112 días. También se informó
que en suelos contaminados con petróleo con 20-60 g / kg de petróleo, la cantidad de hidrocarburos
disminuyó en un 99% después de 22 semanas en el caso de la aplicación simultánea de
bioaumentación y lombrices ( Chachina et al., 2016 ). Por otro lado, Chachina y col. (2015) informó que la
introducción de cepas bacterianas en muestras con una concentración de aceite de 20 g / kg no tuvo
ningún efecto en el proceso de biorremediación del suelo por E. fetida. Por lo tanto, se deben realizar
más estudios para determinar los mecanismos responsables de los efectos sinérgicos o antagonistas
de las lombrices de tierra y las bacterias para la remediación de los APS.
Como puede verse, en todos los tratamientos se observó una tendencia descendente similar
para la degradación de los TPH. La degradación se inició rápidamente y luego la velocidad de
eliminación disminuyó. Esto puede deberse al hecho de que en los procesos de biorremediación, los
PHC fácilmente biodegradables se descomponen primero y los PHC restantes o metabolitos
intermedios, que son persistentes a la biodegradación, se degradan lentamente ( Abtahi et al., 2020 ;

Poorsoleiman et al., 2020 ). Rodríguez-Campos y col. (2019) también encontró que la mayoría de los
PHC se retiraban en 28 días, mientras que otro estudio ( Ekperusi y Aigbodion, 2015 ) informó que la
biorremediación fue más eficaz después de 60 a 90 días del estudio, lo que indica que los gusanos
necesitaban tiempo suficiente para adaptarse al ambiente contaminado. La razón de estos resultados
diferentes debe investigarse mediante la realización de estudios adicionales.

Cuadro 4

Los valores de la cinética de primer orden en los tratamientos de biorremediación.

Tratamientos de biorremediación k (d −1) t 1/2 ( D) R2

antes de Cristo 0,161 4.30 0,974

antes de Cristo 1 0,176 3,94 0,985
antes de Cristo 2 0,152 4.56 0,984
VC 3 0.061 11.36 0,989
VC 1 0,050 13,86 0,976
VC 23 C 0.032 21,66 0,987
BCV 0,209 3.32 0,995
BCVC 1 0,203 3,41 0,996
Figura 1. La tendencia de los TPH cambia en los tratamientos de biorremediación durante la duración del proceso.
BCVC 23 0,173 4.01 0,989

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Cuadro 5

Varias pruebas de toxicidad realizadas para Eisenia fetida en las diferentes concentraciones de TPH.

Concentraciones de TPH Supervivencia de los gusanos adultos (%) Pérdida de peso de los gusanos adultos (%) No. de capullos Eclosión de capullos (%) Supervivencia de los jóvenes (%)

0 100 (0) 5,5 (4,2) 18 (1,7) 83,2 (1,7) 63,3 (3,3)

2 100 (0) 8,3 (3,2) 17 (1,7) 83,2 (1,7) 52,2 (5,1)
5 97 (5,8) 14,1 (7,1) 14 (1) 80,8 (6,9) 41,5 (2,1)
10 57 (5,8) 26,2 (4,3) 5 (0) 59,6 (2,2) 36 (6)
20 30 (10,0) 31,7 (5,9) 2 (1) 46,7 (11,6) 0
30 3 (5,8) 30,4 (7,0) 0 (0) DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

40 0 (0) DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

50 0 (0) DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

Los datos son la media de tres repeticiones (± DE). ND = no

determinado.

3.4. La supervivencia de los gusanos adultos
La prueba de toxicidad aguda para cuantificar el impacto de los TPH en la supervivencia de las
lombrices de tierra es adecuada para evaluar el aspecto ecotoxicológico del POS. E. fetida ha sido sugerida
por la OCDE como la especie ideal para evaluar el efecto de la contaminación por POS ( Ramadass et al.,
2017 ). La supervivencia de E. fetida después de que se haya proporcionado una exposición de 28 días a
POS en
Cuadro 5 . Los datos del presente estudio mostraron que el POS es tóxico para las lombrices de tierra en
algunas concentraciones de TPH. La supervivencia de las lombrices de tierra fue naturalmente del 100% en
la muestra de control que no contenía POS. Además, se observó una supervivencia del 100 y el 97% de los
gusanos, respectivamente, para los niveles de TPH de 2 y 5 g / kg durante 28 días. Por lo tanto, la
concentración letal no observada (NOLC) para los TPH fue de 2 a 5 g / kg. Las concentraciones de 10, 20 y
30 g / kg dieron como resultado una supervivencia del 57, 30 y 3%, respectivamente. Todos los gusanos
murieron a 40 y 50 g / kg después de un período de 28 días. La variación en la mortalidad observada se
debe a las diferentes concentraciones de TPH aplicadas en la investigación. En el presente estudio, el 90%
de supervivencia de E. fetida calculado por análisis probit fue 6.24 g TPHs / kg después de 28 días, mientras
que Åslund y col. (2013) lo observó a una concentración de petróleo de 20 g / kg. La CL obtenida en el
presente estudio (14,64 g TPHs / kg) también se comparó 5 a 0-
producción, incubabilidad del capullo y número de juveniles ( Cuadro 5 ). La producción de capullos
promedio (± SD) en el control fue 18 (± 1,7). Cuando las concentraciones de TPH alcanzaron 2, 5, 10
y 20 g / kg, el número de capullos disminuyó a 17, 14, 5 y 2, respectivamente. No
El capullo se produjo a un nivel de TPH de 30 g / kg y CE 50 para la producción de capullos se calculó
en 9,71 g / kg. Nuestras observaciones indicaron
que la producción de cápsulas de huevo se inició después de 4-6 y 6-8 semanas en los experimentos
de control y contaminados, respectivamente.
Las tasas de eclosión fueron casi del 83% en el control y en el tratamiento con 2 g de TPH / kg.
Las tasas calculadas para los TPH de 5, 10 y 20 g / kg fueron casi del 81, 60 y 47%,
respectivamente. La producción juvenil parecía sensible a la contaminación por puntos de venta
debido a la mortalidad total de
Los veniles se observaron a una concentración de 20 g / kg. La CE 50 valor de supervivencia juvenil
fue de 3,46 g / kg ya que este valor redujo la mitad de la
juveniles en comparación con los del tratamiento de control. Nuestros hallazgos sobre la producción
de capullos y la incubabilidad y el número de juveniles están en línea con otros estudios similares ( Ramadass
et al., 2016 ; Wang et al., 2010 ).

3.7. Bioacumulación de TPH en tejidos de gusanos

tivamente diferente del valor informado por Ramadass y col. (2017)
(1,43 mg de TPH / kg de suelo) ya que varía mucho dependiendo de múltiples factores como el tipo y
las características de los gusanos y los compuestos del petróleo utilizados.
3.5. Pérdida de peso de los gusanos adultos
Los pesos corporales de los gusanos adultos medidos antes y después de la exposición a
concentraciones variables de POS, indicaron pérdida de peso en todos los gusanos ( Cuadro 5 ). La
pérdida de biomasa en los tratamientos control (sin POS) no superó el valor de referencia del 20% de
pérdida de peso ( ISO, 1993 ). Sin embargo, los gusanos expuestos a POS exhibieron una pérdida de
peso significativa (P <0.05) en comparación con los del control. Los gusanos perdieron 8, 14, 26, 32 y
30% de su peso corporal, respectivamente, a las concentraciones de TPH de 2, 5, 10, 20 y 30 g / kg.
La pérdida de peso observada en la biomasa de gusanos puede deberse a la incapacidad de los
gusanos para alimentarse durante su exposición al POS. Otros investigadores también informaron de
la disminución del peso corporal de los adultos con el aumento de las concentraciones de
contaminantes ( Ramadass et al., 2017 ; Wang et al., 2010 ). La pérdida de peso observada para el nivel
de TPH de 2 g / kg que no tenía mortalidades de gusanos mostró los efectos subletales de los TPH. Se
notaron algunos cambios de comportamiento y morfológicos en los gusanos durante el período de
estudio. Las lombrices de tierra se inquietaron inmediatamente después de la exposición a POS,
incluso a concentraciones de TPH de 2 y 5 g / kg. También se observaron otras deficiencias como
enrollamiento e hinchazón durante el proceso. Otros estudios también informaron que las lombrices de
tierra exhiben anormalidades cuando las concentraciones de contaminantes exceden los límites
tolerables ( Ramadass et al., 2017 ; Wang et al., 2010 ).
3.6. Producción y eclosión de capullos y supervivencia de juveniles
La exposición de los gusanos a POS resultó en la reducción del capullo
En los estudios de biorremediación, es de gran importancia notar el destino de los TPH para
llegar a una comprensión clara de la vía de biorremediación. Aunque del 31 al 49% de los TPH se
eliminaron en los tratamientos de CV, se bioacumularon aproximadamente 120 (± 6) μg / g dentro de
los cuerpos de los gusanos después de 12 semanas. La cantidad de acumulaciones de TPH en los
tejidos de los gusanos ( E. fetida) reportado por Ramadass y col. (2017) fueron de 80 a 85 μg / g para
la aplicación de TPH de 0,25 a 2 g / kg en el suelo. Ekperusi y Aigbodion (2015) informó que del
84,99% de la eliminación de TPH,
El 57,35% fue bioacumulado en Earthworm ( E. eugeniae) tejido después de 12 semanas. Existe la
posibilidad de que algunos componentes de los PHC sean recalcitrantes a la transformación por los
gusanos y necesiten más tiempo (más de 12 semanas) para degradar todos los TPH en sus tejidos.
También es probable que los contaminantes sean hasta cierto punto bioacumulados e inmovilizados
primero en los tejidos de las lombrices de tierra y luego se inicie la biodegradación cuando las
cantidades de los contaminantes pueden amenazar la supervivencia de las lombrices de tierra ( Ekperusi
y Aigbodion, 2015 ). Hasta qué punto los gusanos pueden bioacumular los TPH y cuándo se inicia la
descomposición no se reveló en esta investigación y será un tema para estudios adicionales.
4. Conclusiones
La remoción de TPHs mediante compostaje bioaumentado con el consorcio bacteriano indígena
y vermicompostaje por Eisenia fetida
individualmente y en combinación se investigó en el presente estudio. Los resultados mostraron que
el consorcio bacteriano aislado era efectivamente capaz de degradar los TPH en MBHM y en el
proceso de compostaje. Se observó un efecto sinérgico de HDB y lombrices de tierra en la
eliminación de TPH del POS. La biodegradación de los TPH procedió de acuerdo con la cinética del
modelo de primer orden. Los resultados de las pruebas de ecotoxicidad indicaron

5
A. Koolivand y col. Ecotoxicología y seguridad ambiental 198 (2020) 110645

varios efectos tóxicos del POS en lombrices de tierra juveniles y adultas, dependiendo de las Yaghmaeian, K., Alimohammadi, M., 2014. Aplicación de peróxido de hidrógeno y fenton como pasos previos y posteriores al
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