UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA “SAN PABLO”

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA

SEMESTRE: 1-2019
MATERIA: INGENIERÍA BIOQUÍMICA
DOCENTE: CRISTHIAN CARRASCO VILLANUEVA

ANÁLISIS DE LA PRODUCCIÓN DE POLIHIDROXIBUTIRATO A

PARTIR DE ACEITE RESIDUAL DE FRITURAS

Celeste Aduviri, Camila Alzerreca, Princess Campos, Belen Franco, Kesyl Laura, Armando Oporto

Estudiantes de Ingeniería Química, Universidad Católica Boliviana “San Pablo”, La Paz, Bolivia

Resumen
El aceite residual proveniente de la fritura de alimentos es abundante en el país; ya que, todos los restaurantes de
comida rápida lo usan. La gran ventaja que tiene, es que puede utilizarse como una fuente de carbono económica.
Es una buena e innovadora alternativa para la producción de polihidroxialcanoatos (PHA), a partir del trabajo de
la bacteria Cupriavidus necator (anteriormente conocido como Ralstonia eutropha). El PHB es un plástico
biodegradable que puede reemplazar a otros derivados del petróleo. En este artículo se realiza una simulación de
datos del número de células (UFC) de PHB respecto al tiempo, obtenidos de otro artículo científico. De este
procedimiento, resultó un ajuste de datos al modelo de Gompertz, del cual se obtuvo sus constantes y se determinó
una gráfica que hace referencia al crecimiento de la bacteria. También se examina la influencia del nitrógeno en
la producción de PHB, se distinguen diferencias del aceite y; por último, se analiza la viabilidad del proyecto en
Bolivia. Además, se compara la bacteria con otra presente en el país.

Palabras Clave: Aceite residual, Cupriavidus necator, Gompertz, Polihidroxialcanoatos, Polihidroxibutirato.

Abstract
Residual oil from food frying is abundant in the country; since, all fast food restaurants use it. The great advantage
it has is that it can be used as an economical carbon source. It is a good and innovative alternative for the
production of polyhydroxyalkanoates (PHA), from the work of the bacteria Cupriavidus necator (previously
known as Ralstonia eutropha). PHB is a biodegradable plastic that can replace other petroleum derivatives. This
article performs a simulation of PHB cell number (CFU) data with respect to time, obtained from another scientific
article. From this procedure, a data fit to the Gompertz model resulted, from which its constants were obtained
and a graph was determined that refers to the growth of the bacteria. The influence of nitrogen on the production
of PHB is also examined, differences in oil are distinguished and; Finally, the viability of the project in Bolivia is
analyzed. In addition, the bacteria is compared with another one present in the country.

Key Words: Residual oil, Cupriavidus necator, Gompertz, Polyhydroxyalkanoates, Polyhydroxybutyrate.

I. Introducción
Los productos plásticos derivados
del petróleo tienen cualidades versátiles,
algunas principales son la durabilidad y
resistencia a la degradación. Durante el
paso del tiempo, surgió una gran
problemática debido al exceso de plásticos
en el mundo, por lo que se ha intentado

1
mitigar la acumulación de los mismos,
mediante procesos que resultan bastante
peligrosos. Por ejemplo, la incineración de
plásticos desprende, CO2, ácido
cianhídrico, ácido clorhídrico entre otros
que son tóxicos para la salud humana y
medio ambiente. Solo en Bolivia; por dia,
se usa 11.2 millones de bolsas plásticas
(Pagina siete, 2019). y las importaciones de
polipropileno para la industria boliviana fue
de 11.4 millones de kilogramos en el 2019.
(Bolivia, 2019).
La producción y el uso de plásticos
biodegradables; en lugar del uso
convencional de derivados del petróleo, se
presenta como una solución efectiva ante la
contaminación del medio ambiente. Los
polihidroxialcanoatos (PHAs), son
biopolímeros renovables, producidos
intracelularmente en bacterias. El más
común de los compuestos de PHA es el
polihidroxibutirato PHB; que en las últimas
décadas fue cobrando gran importancia en
el campo de la industria por sus
propiedades fisicoquímicas, es un
termoplástico duro y quebradizo con un alto
índice de cristalinidad, no soluble en agua y
con baja estabilidad térmica. Estas
propiedades asemejan al polietileno (PE),
de manera que es considerado para su
sustitución en bolsas plásticas, envases,
juguetes, etc. También, coincide con las
propiedades del polipropileno (PP); usado
en botellas, vasos, embalaje, productos
médicos, autopartes y demás.
El PHB es un material no tóxico que
al estar expuesto a ambientes
biológicamente activos (suelos, agua de
mar, agua dulce, compostaje y en medio
aerobio y anaerobio) puede degradarse; ya
que, son ambientes en que el material está
en contacto con otros microorganismos
degradantes (Santos et al., 2017). Por lo
tanto, es considerado como alternativa a los
plásticos petroquímicos tradicionales. Sin
embargo, una de las desventajas es su alto
costo de producción el cual se relaciona con
el costo del sustrato; es decir, la fuente de
carbono, que abarca hasta un 50% del costo
total de la producción de PHB (Obruca
et al., 2013).
Un enfoque para reducir este costo
elevado en la producción PHB; que además
sea amigable con el medio ambiente, es
utilizar fuentes de carbono de bajo costo,
como melazas, almidón, glicerol sobrante
de la producción de biodiesel, aceites
vegetales o sustratos de residuos baratos
(Ren et al., 2015). Es por ello que este
proyecto presta importante atención a la
producción de PHB a partir de los residuos
de aceite para freír (como fuente de
carbono) siendo un biomaterial útil y muy
popular en el sector alimenticio, ya que
estos son desechados en el medio ambiente
causando la contaminación del agua. El
artículo estudiado a continuación describe
la producción de PHB a partir del aceite
residual de frituras con Cupriavidus
necator H16, una especie de bacteria usado
ampliamente en procesos industriales para
la producción de PHB. Durante el proceso
de producción, se hace énfasis en las
condiciones de cultivo, temperatura, pH,
concentración de nitrógeno o influencia de
sustrato, esto para buscar la mejor
condición de fermentación y por lo tanto la
generación de PHB.
Es pertinente elaborar este trabajo
con el objetivo de simular y analizar los
datos del artículo científico “Production of
polyhydroxyalkanoates from waste frying
oil by Cupriavidus necator”; publicado
por, (Verlinden et al., 2011) para entender
2
el proceso de producción de PHA; y por cuantificando en unidades formadoras de
ende de PHB, para determinar una ecuación colonias (UFC)/ml, formación de toxinas,
que describa el crecimiento de la bacteria de metabolitos o en función de la
que produce este plástico biodegradable. absorbancia.

Este modelo describe el crecimiento de la

II. Materiales y Métodos bacteria más lento al comienzo y al final de
un tiempo dado (Dni, s. f.).
Este trabajo se realizó a partir de
métodos de investigación para entender y Ecuación de Gompertz
conocer la bacteria productora de PHB.
También se empleó una investigación de 𝐿𝑜𝑔 𝑁 = 𝐴 + 𝐶 ∗ exp{− exp[−𝐵(𝑡 −
artículos o papers; de los cuales, solo se 𝑀)]} (1)
tomó uno para recopilar datos de la
producción de PHB con la bacteria Donde:
Cupriavidus necator H16, con una fuente
de carbono específica del aceite residual de N: Logaritmo natural de los
la fritura de alimentos. Analizando toda la recuentos microbianos [log [UFC/ml]].
información, se planteó la posible A: Logaritmo decimal del nivel
producción de PHB en Bolivia y las inicial de bacterias.
aplicaciones como producto que podría C: Logaritmo de los recuentos
beneficiar al país en la industria de los cuando el tiempo se incrementa
plásticos. indefinidamente.
M: Tiempo requerido para alcanzar
Los estudios previos consultados no la máxima velocidad de crecimiento [h].
desarrollaron un modelo cinético explícito, B: Velocidad de crecimiento
sólo presenta gráficas. Por ello, se propone relativa al tiempo M [h]-1
extraer los datos numéricos de la gráfica de
número de células (UFC) de PHB respecto De estos parámetros se deriva:
al tiempo en el medio de crecimiento de
triptona de soja y en el medio de sales Velocidad específica de
basales. Una vez obtenidos los datos, se los crecimiento (µ).
introdujo a MATLAB, utilizando la
herramienta de Curve Fitting, y se ajustó los µ = 𝐵 ∗ 𝐶/exp(1) (2)
datos al modelo de Gompertz, el cual,
posibilita el cálculo de las constantes. Duración de la fase de latencia
(LPD).
El modelo de Gompertz se puede definir 1
𝐿𝑃𝐷 = 𝑀 − (𝐵) (3)
como modelo cinético y primario. Los
modelos cinéticos se basan en la respuesta
Máxima densidad de población
del agente, crecimiento o supervivencia
(MPD).
bajo determinadas condiciones, los
modelos primarios describen el número de
𝑀𝑃𝐷 = 𝐴 + 𝐶 (4)
microorganismos en función del tiempo,

3
Medios de Crecimiento Tabla 1. Cupriavidus necator H16

En el estudio examinado se usaron Dominio Bacterias

dos medios de crecimiento. El caldo de
triptona de soja (TSB por sus siglas en Filo Proteobacteria
inglés) que contiene agua destilada,
Clase Betaproteobacteria
triptona, peptona de soja, NaCl, K2HPO4 y
D-glucosa. También se usó el medio de Orden Burkholderiales
sales basales (BSM por sus siglas en ingles)
Familia Burkholderiaceae
que tiene una composición de agua
destilada, K2HPO4, KH2PO4, KNO3, Género Cupriavidus
(NH4)2SO4, MgSO4.7H2O, NaCl y Agar
No.2. Una variación importante en los Especies Cupriavidus necator
medios, es la concentración de nitrógeno, la
cual es mayor en TSB. En la Tabla 1 se muestra la taxonomía de la
bacteria Cupriavidus necator H16, (Reimer
et al., 2019).
Aceite Vegetal Residual
III. Resultados
La investigación de referencia
experimenta con el aceite residual de la Los resultados obtenidos pueden
observarse en las siguientes gráficas:
fritura de alimentos como papas fritas y
pollo frito. El aceite fue esterilizado en una
autoclave de vapor. Posteriormente, citan
que se agregan directamente a las Figura 1. Modelo con TSB
fermentaciones (medio de crecimiento y la
bacteria en un matraz).

Cupriavidus Necator H16

Este tipo de cepa es estudiado en la

producción microbiana de
polihidroxialcanoatos. Principalmente se
produce el compuesto polihidroxibutirato
(PHB), que tiene la capacidad de crecer en
entornos, tanto anaerobios como aerobios,
es de tipo mesófilo cuya temperatura de La figura 1 muestra el modelo de Gompertz con
crecimiento óptima oscila entre 30 y 40°C. TSB, en el eje x se tiene el tiempo, en el eje y los
recuentos microbianos (Fuente: Propia)
Su medio de cultivo es mediante agar
nutriente a una temperatura de 30°C Con los resultados de:
(Reimer et al., 2019).

4
 Tabla 2. Resultados TSB Tabla 3. Resultados BSM

Variable Valor Unidades Variable Valor Unidades

B 0.0441 [h]-1 B 0.3021 [h]-1

C 1.834 [log(UFC/ml)] C 1.818 [log(UFC/ml)]

M 1.35 [h] M 6.838 [h]

A 7.9183 [log(UFC/ml)] A 7.7918 [log(UFC/ml)]

µ 0.0277 [h]-1 µ 0.20205 [h]-1

LPD -21.3257 [h] LPD 3.5278 [h]

MPD 9.7013 [log(UFC/ml)] MPD 9.6098 [log(UFC/ml)]

R-square 0.6815 adimensional R-square 0.9381 adimensional

En la Tabla 2 se muestra los resultados obtenidos
en el modelo con TSB. En la columna 1 se tiene la
variable, en la columna 2 se tiene el valor
encontrado, en la columna 3 se tiene las unidades.
(Fuente: Propia)
En la Tabla 3 se muestra los resultados obtenidos
en el modelo con BSM. En la columna 1 se tiene
las variables, en la columna 2 se tiene el valor
encontrado, en la columna 3 se tiene las unidades.
(Fuente: Elaboración propia)

Figura 2. Modelo con BSM Es posible denotar; en la Figura 2

principalmente, una tendencia
característica del crecimiento microbiano
con su respectiva fase de crecimiento, fase
estacionaria y fase de muerte.

El modelo de Gompertz describe el

La figura 2 muestra el modelo de Gompertz con
BSM, en el eje x se tiene el tiempo, en el eje y los
recuentos microbianos. (Fuente: Propia)
Con los resultados de:
crecimiento microbiano en función del
tiempo bajo condiciones determinadas. El
crecimiento presenta tres etapas
fundamentales: Fase de latencia, fase de
crecimiento y fase estacionaria. Es por eso
que se optó por la utilización de este, ya que
los datos extraídos del artículo de
referencia; respecto al conteo microbiano
en función del tiempo, presentaron una
tendencia similar a la predicción de dicho
modelo. La derivación de este modelo se da
para el crecimiento microbiano en el ámbito
alimenticio.

Como se puede apreciar en la Figura

2, los datos tomados para el BSM se ajustan

5
adecuadamente al modelo empleado,
teniendo una tasa de crecimiento de
0.20205 [h]-1, una fase de latencia de
aproximadamente 3.5 horas para adaptarse
al medio, una fase de crecimiento entre las
3.5 y 20 horas; aproximadamente, llegando
así a la fase estacionaria a las 48 horas. Esto
se debe a que la bacteria almacena el PHB
como inclusiones solubles en el citoplasma
para aprovecharlo como reserva energética
o fuente de carbono, de forma que deja de
producir PHB en ese intervalo de tiempo y
toma el PHB producido como fuente de
carbono. Consecuentemente,
concentración de PHB comienza a
disminuir.
Por otro lado, como se puede
observar en la Figura 1, los datos
presentados por el TSB no se ajustan al
modelo de Gompertz como se tenía
esperado, teniendo una correlación de datos
de aproximadamente un 68% (es por eso
que los parámetros obtenidos no se toman
en cuenta, ya que estos pueden ser muy
alejados de la realidad). Tras efectuar un
análisis, se concluyó que esto se debe a que
en TSB; a diferencia del BSM, la bacteria
no toma al PHB producido como una nueva
fuente de carbono, por lo cual la fase
estacionaria se da en un tiempo mayor a las
72 horas. Desafortunadamente, el artículo
citado no presenta datos mayores a este
tiempo, por lo que no se pudo apreciar el
comportamiento de una manera más
apropiada.
Por este motivo, se reafirma que en
TSB la producción de PHB, aunque en un
tiempo mayor al BSM, llega a una mayor
concentración y densidad de población.
IV. Discusión
En esta sección se discuten los
siguientes puntos importantes respecto al
trabajo.
Influencia del Nitrógeno en los Medios de
Crecimiento
La gran diferencia que tienen los
medios de crecimiento con los que se
experimentaron, radica en la concentración
de nitrógeno. El medio TSB contenía 4.4 g/l
de nitrógeno como aminoácidos, mientras
que el medio BSM solo 0.35 g/l como
la nitratos y amonio. Esto tiene un importante
efecto en la producción de PHB, de modo
que el medio TSB tuvo mayor rendimiento
del polímero.
Los aminoácidos libres presentes
como fuente compleja nitrogenada
contribuyen en gran medida al crecimiento
microbiano. Se conoce que estos
compuestos pueden ser transportados a la
célula sin el requerimiento de ser
metabolizados, dando un ahorro energético
y tiempo para la reproducción celular
(Fernández Izquierdo et al., 2006).
Comparativamente y volviendo a
los resultados del estudio analizado;
podemos notar que el rendimiento en el
medio TSB es de 1.2 g/l de PHB producido
en un rango de 72 horas. En BSM, se
obtuvo 0.95 g/l en 48 horas, disminuyendo
la concentración a 0.65 g/l para las 72 horas
en el reactor Batch de fermentación. Esto
hace referencia a mayor proporción de
nutrientes en el primer medio de
crecimiento mencionado, incluyendo la
concentración de nitrógeno. Lo que ocurre
en el medio de crecimiento BSM después
de 48 horas, es que la bacteria inicia su fase
de muerte, y al no tener más nutrientes,
comienza a utilizar su producto; que es el
6
PHB, como fuente carbono y reserva
energética para seguir metabolizando.
Sin embargo, se debe prestar
atención a la cantidad de nitrógeno que se
usa, debido que un exceso de este, puede
provocar menor producción de PHB. Esto
sucede porque la composición de nitrógeno
en los ácidos grasos puede perjudicar el
metabolismo de la bacteria.
En el estudio de “Fuentes de
Carbono y Nitrógeno en el Crecimiento
Bacteriano y síntesis de
Polihidroxialcanoato de una Cepa de
Bacillus Micoides FLB2” se compararon
diversas fuentes de nitrógeno para
determinar cual tenía un mayor rendimiento
en la producción de PHA. En base a los
resultados del estudio, se usa levadura
como fuente de nitrógeno, que da mejores
resultados en el rendimiento de PHB, que
con peptona (en el medio del estudio con
Cupriavidus se usa como fuente de
nitrógeno triptona, que es peptona de
caseína).
Aceites Vegetales
Es importante conocer sobre los
aceites como fuente de carbono, debido a la
afinidad que tienen estos con la bacteria. El
aceite vegetal se compone de lípidos
triacilglicéridos (TG), que son una
combinación de 3 grupos alcohólicos del
glicerol y 3 ácidos grasos iguales o distintos
(Clickmica, s. f.).
La investigación asesorada analizó
tres aceites distintos para la producción de
PHB: aceite residual, aceite puro y aceite
puro calentado. Los resultados de
producción de PHB de los tres aceites son
distintos; sin poner atención a los medios,
debemos analizar la composición o los
aspectos que caracterizan cada aceite. Las
diferencias de composición pueden deberse
a la interacción con los alimentos y la
humedad que el aceite residual para freír
tuvo previamente, lo cual no ocurre en el
aceite calentado ni el aceite puro. En el
aceite calentado o residual puede haber más
nitrógeno presente que en el aceite puro no
tratado, ya que los productos de
degradación térmica pueden contener
nitrógeno fácilmente disponible.
El aceite residual y el calentado,
fueron sometidos a temperaturas altas; a
180°C, que es la temperatura común de
fritura. Además, esto fue en presencia de
oxígeno e influencia de humedad, de lo cual
pueden surgir reacciones de hidrólisis,
oxidación y polimerización de los TG. La
más común de estas reacciones, es la
oxidación por el contacto que existe con el
aire. Entre los compuestos del aceite; las
bacterias productoras de PHB, tienen
preferencia por aquellos ácidos grasos de
cadenas impares. Esta preferencia se debe a
la biosíntesis por la ruta metabólica que la
bacteria realiza por las enzimas como β-
cetotiolasa y PHA sintasas.
Por el método de Sherlock, el
estudio determina que los ácidos grasos
saturados conducen una mayor producción
de PHB. Sin embargo, los tres aceites
presentan ácidos grasos insaturados. Al
calentar el aceite vegetal, se reducen las
insaturaciones, pero no en gran medida. La
síntesis de PHB se da cuando los ácidos
grasos se transforman por ciclos en acetil-
CoA (acetil coenzima A, es una molécula
clave en el metabolismo que interviene en
varias reacciones químicas). Es posible que
los ácidos grasos saturados se convierten
más fácilmente en acetil-CoA que ácidos
grasos insaturados. Esto nos demuestra que
7
la composición del aceite podría no ser un
factor por el cual la producción de PHB se
vea implicada.
Es difícil encontrar información
sobre la composición de los aceites
calentados y residuales porque no se los
puede detectar con el método de
identificación de Sherlock. El método solo
detecta cadenas de carbono largas, y en el
proceso de calentamiento por degradación
térmica, se forman compuestos de cadenas
de carbono más cortas y compuestos
polares; como por ejemplo, peróxidos.
Estos pueden tener influencia en la elevada
concentración de PHB de los aceites
calentados y residuales con respecto al
aceite puro sin tratar.
A pesar de no precisar una
comparación entre los aceites, debido a una
composición, con este sustrato se pueden
considerar otros factores: los carbohidratos,
proteínas, grasas de alimentos, compuestos
de nitrógeno, productos de descomposición
térmica, entre otros, que podrían ser
metabolizados y asi, determinantes para la
producción de PHB. La facilidad de
obtención de nitrógeno en forma de
aminoácidos por descomposición térmica
de los alimentos; se ha visto en varios
estudios que, en presencia de este elemento,
se tiene mayor producción de PHB, incluso
en medios de crecimiento distintos, siendo
este un factor influyente.
La producción de PHB se
caracteriza por ser un proceso de costo
elevado por la utilización de ácidos grasos
volátiles como propionato; que en el
mercado, tiene un alto precio. De esta
forma demostramos que el aceite residual
es una muy buena opción para producción
del biopolímero.
Por otro lado, el tema
medioambiental también es de relevancia.
Cuando los aceites utilizados en la cocina
se vierten a fregaderos, son una fuente de
contaminación de ríos, lagos, etc. Un litro
de aceite usado contiene aproximadamente
5000 veces más carga contaminante que el
agua residual que circula por las
alcantarillas, y puede llegar a contaminar
40 000 litros de agua, que es equivalente al
consumo de agua anual de una persona. No
tratar estos aceites residuales provoca que
se mezclan con detergentes y forman las
llamadas “bolas de grasa”, que generan
atascos en los alcantarillados (Iñigo).
Sustitución de Polipropileno y Polietileno
por PHB en Bolivia
El PHB puede ser utilizado para
empaques de comida y bebidas, empaques
de mayonesa, margarina, productos lácteos,
agua mineral sin gas o para la producción
de bolsas plásticas. El material de empaque
debe mantenerse estable y sin cambios, por
lo que las condiciones de biodegradación
deben ser evitadas mientras se almacene
alimentos en estos empaques. Una
condición de biodegradación del PHB es a
una humedad de 80%.
Una ventaja del PHB es que no
presenta degradación a temperaturas de
entre -30ºC y 120ºC en ausencia de
bacterias. Otra ventaja de utilizar
bioplásticos es que se producen a partir de
fuentes renovables, en este caso, aceite de
freír. Adicionalmente el proceso de
producción del PHB emite una menor
cantidad de dióxido de carbono que en la
producción de polietileno y polipropileno.
Este biopolímero resulta una
alternativa al polietileno de baja densidad y
al polipropileno, ya que presenta muchas
8
ventajas sobre los plásticos sintéticos. Los
bioplásticos son necesarios porque se En la Tabla 4 se observa la comparación de las
propiedades de polipropileno, polietileno de alta
estima que el 30% de los materiales de densidad, polietileno de baja densidad y
empaque pueden nunca ser elegibles para polihidroxibutirato (Ponce & González, 2013).
reciclaje o reutilización. A nivel mundial la
producción de polipropileno es de 65 Un problema del PHB es que la
millones de toneladas año, mientras que la resina de PHB, no modificada, tiene un
producción de PHB es de 30 000 toneladas punto de fusión relativamente alto, de
año, es decir el 0,05% de la producción de aproximadamente 160 a 180°C. Esto
polietileno (Altaee et al., 2016). Algunas dificulta su procesamiento, ya que requiere
desventajas del polietileno y el altas temperaturas. Para mejorar su
polipropileno es que son derivados del procesabilidad y propiedades mecánicas, el
petróleo, y hay limitadas reservas de PHB a menudo se mezcla con plastificantes
petróleo a nivel mundial. Otra desventaja es y otros polímeros como el acetato de
que estos polímeros tienen una lenta polivinilo, el alcohol de polivinilo y el
degradación, que puede tardar cientos de ácido poliláctico (Proveedores de PHB,
años y esto lleva a la acumulación en el s. f.). Las diferencias analizadas entre el
medio ambiente. polipropileno y el PHB, son que este último
presenta mayor resistencia y menor
Tabla 4. Comparación de propiedades flexibilidad que el polipropileno.
entre polímeros sintéticos y
polihidroxibutirato. Los beneficios de la producción de
bioplásticos para Bolivia se basan en la
gran demanda de plásticos, por la cual la
Propiedad Polipropi Polietilen Polietilen PHB
contaminación de los ríos cada vez es un
leno o de alta o de baja
densidad densidad problema mayor. En la actualidad menos
del 5% de todos los municipios cuentan con
un sistema general de botaderos. Por esta
Punto de 176 105-115 120-136 160-180
razón, las personas acostumbran a botar
fusión todos sus deshechos a los ríos (Bolivia,
(°C)
2019). Algunos ejemplos de esta gran
problemática son el río Queca de Achacachi
Cristaliza 50-70 80-95 50-75 60
y el Desaguadero, en la bahía Cohana del
ción (%)
Lago Titicaca. El PHA es muy beneficioso
en este sentido, porque se degrada mejor en
Fuerza de 38 21 38 43
tensión
medios acuáticos que en el suelo. En el
(Mpa) ámbito económico, la inversión inicial
puede ser más grande que para la
Extensión 400 130 800 5 producción de polietileno y polipropileno,
hasta pero la producción de bioplásticos requiere
quiebre
(%)
menos energía, lo que implica menores
costos de operación.
Biodegrad Prácticam Prácticam Prácticam Buena
ación ente nula ente nula ente nula

9
Cupriavidus necator H16 vs. Halomonas
boliviensis LC1
Se conocen por lo menos 75
especies de bacterias que pueden sintetizar
PHB. Algunas bacterias pueden acumular
60 a 80% de su peso en PHB (Bucci, Doris,
2005). Teniendo información sobre la
bacteria con la que se experimentó en el
artículo referenciado, se investigó a cerca
de la Halomonas boliviensis LC1. Es un
halófilo aislado obtenido de una muestra de
suelo salino boliviano que tiene la
capacidad de acumular PHB. Bacteria
aeróbica, que debe ser cultivada en
condiciones de limitación de nutrientes y
exceso de carbono, de manera que la
producción de PHB mejora cuando se
trabaja en condiciones controladas de pH y
concentración de oxígeno en el
fermentador. Asimismo, esta bacteria
cuenta con características taxonómicas y de
crecimiento similares al Cupriavidus
necator H16. (Quillaguamán et al., 2006).
Tabla 5. Halomonas boliviensis LC1
Dominio Bacterias
Filo Proteobacteria
Clase Gammaproteobacteria
Orden Oceanospirillales
Familia Halomonadaceae
Género Halomonas
Especies Halomonas boliviensis
En la Tabla 5 se muestra la taxonomía de la
bacteria Halomonas boliviensis LC1,
(Quillaguamán et al., 2004).
La diferencia es que para la H.
boliviensis se utilizaron diferentes fuentes
de carbono, como, por ejemplo, residuos
agrícolas, residuos de panadería y agua de
mar (Rada, 2016). Sin embargo, aún no se
tienen estudios sólidos con una fuente de
carbono como aceite residual o sustratos
similares, por lo que hacer una
comparación de eficiencia y productividad
no es posible. Pero si analizamos
objetivamente sobre las dos bacterias, la C.
necator tiene la ventaja de ser estudiada con
diferentes fuentes de carbón y además ya se
tienen parámetros de trabajo establecidos a
escala industrial, que lo convierten en una
gran opción para la producción masiva.
Las bacterias controlan con
precisión sus tamaños y formas para
importar nutrientes de manera más
eficiente, cumplir con los requisitos
impuestos por la división celular, moverse
a propósito para buscar nutrientes o evitar
inhibidores y evitar la depredación por
otros organismos. Como no hay mucha
información sobre la acumulación de PHA
en diámetros y morfología de células
bacterianas, se decidió realizar el estudio
sobre C. necator, ya que es la que presenta
un desarrollo más amplio (Tr@de, s. f.).
Sobre la producción de
biopolímeros con H. boliviensis se conoce
muy poco, pero a lo largo de su estudio se
pudo comprobar su capacidad.
Quillaguaman menciona que esta bacteria
tiene la capacidad de producir plástico
biodegradable, que incluso tendrían un uso
en la medicina, en el campo de los
implantes óseos y soporte de piel artificial.
En lo que respecta a los productos
comerciales; es decir, PHB, aún se tienen
investigaciones para poder desarrollar una
industria sustentable a nivel nacional, pues
la Universidad Mayor de San Simón aún
10
realiza estudios para conseguir este
objetivo.
Las condiciones óptimas para esta
bacteria, es que el medio este a
concentraciones de NaCl del 7,5% (p/v),
asimismo el porcentaje de peso volumen de
la sal en el medio no debe llegar a 18%, ya
que la biomasa decrece. (Biotechnology,
2010). Al medio de crecimiento de estas
bacterias, se le debe agregar NH4Cl,
K2HPO4 y glutamato de sodio para permitir
el crecimiento celular. La supervivencia de
la mayoría de las bacterias halófilas en
condiciones de estrés causadas por la alta
concentración de sal en sus hábitats, es
manejada por la acumulación intracelular
de osmolitos, donde se combina la
acumulación de PHB y osmolitos. Como se
mencionó anteriormente, el acetil CoA
conduce a altas productividades de PHA, y
este es un metabolito presente en la síntesis
osmolitos, por lo que estos benefician la
síntesis de PHA.
Tabla 6. Comparación entre H. boliviensis
LC1 y C. necator H16
Bacteria Fuente de carbon Cantidad (g/L)
Hidrolizado de salvado de
Halomonas trigo 0.72
boliviensis
LC1
Cupriavidus Aceite residual 1.2
necator H16
En la Tabla 6 se observa la cantidad de PHB con
diferentes bacterias y diferentes fuentes de carbón
(Hashmi & Choudhury, 2020), (Nikodinovic-Runic
et al., 2013).
Por último en la tabla 6 se observa
la comparación entre ambas bacterias con
diferentes fuentes de carbono. Como se
mencionó anteriormente, se tiene un
estudio más limitado de H. boliviensis por
lo que en la tabla se muestra una fuente de
carbono como es salvado hidrolizado de
trigo, que es un residuo agrícola que
presenta una producción de 0.72 g/L de
PHB que se obtuvo de una concentración de
3.2 g/L de salvado hidrolizado de trigo. Por
otro lado también se muestra el PHB
obtenido en el paper estudiado que es 1.2
g/L de 20 g/L de aceite residual.
Proceso de Producción PHB
Para la producción de PHB,
primero, se aísla la bacteria. Después se
inocula la bacteria en una cantidad del
medio. Posteriormente se llevará la
inoculación y sustrato al reactor. Una
ventaja de la obtención de PHB con sustrato
de aceites es que no se necesita filtrar el
aceite. Se trabajará con fermentadores
batch. Después de la fermentación se
cosecharán las células usando una unidad
de separación. Luego las células se lavan
una vez con agua corriente y se vuelven a
cosechar. No se necesita concentrar la
biomasa, y de esta forma se reducen costos
(Koller, 2018).
En el proceso de recuperación de
PHB, el primer paso es la extracción, donde
la suspensión de células es tratada con un
solvente de PHB, como cloruro de
metileno. Después de un corto tiempo el
solvente, que ya contiene el PHB, se separa
de los desechos celulares mediante un
decantador comercial. El PHB se precipita
luego mediante la adición de agua. El
solvente puede reciclarse fácilmente debido
a su bajo punto de ebullición y reutilizarse
varias veces hasta que necesite ser refinado.
Los copos de PHB precipitados se pueden
11
recuperar y secar. Este proceso puede
obtener PHB con una pureza de 99%.
Figura 3. Proceso de Fermentación y
Recuperación del PHB
La figura 3 muestra el proceso
previamente descrito de la fermentación y
recuperación del PHB.
Fuente: (Hrabak, 1992)
El PHB en sí es un material
relativamente frágil con malas propiedades
mecánicas, especialmente después de ser
procesado por tecnologías de moldeo por
inyección o soplado (para las bolsas
plásticas). (Hrabak, 1992). Para lo que se
utilizará acetato de polivinilo, como aditivo
para mejorar las propiedades mecánicas,
esto se agrega después de la unidad de
lavado.
Producción de PHB en Bolivia
Debido a que los aceites de frituras,
lo depositan por las alcantarillas y estos
llegan principalmente al río choqueyapu, la
alcaldía de la ciudad de la paz puso en
ejecución un plan para la recolección de
estos aceites llamado “recicla con gusto”
(AMH, 2018). Este plan actualmente es
implementado por la empresa Greenside,
que realiza la recolección del aceite residual
del mercado Camacho y el de Achumani en
la zona sur, para luego ser exportado a
Europa donde posteriormente se convierte
en biocombustible, así dejando de ser
solamente un residuo contaminante.
Sin embargo para el siguiente
proyecto el aceite residual de fritura, se
propone recoger directamente de los
hoteles y restaurantes existentes en la
ciudad de La Paz y El alto; que hasta el
2011, se cuenta con un total de 515
registrados en Fundempresa,
(febrero_462.pdf, s. f.), previamente se
deberá realizar un acuerdo con los mismos,
esto no implica que sea una fuente
totalmente económica, ya que con lleva a
realizar un debido análisis en los costos de
transporte, según la distancia de recorrido
para la recolección del aceite residual y
luego ser transportado hasta la planta de
producción.
La fábrica de producción de PHB
estará ubicada en El Alto. Conocida como
“la ciudad industrial”, El Alto recauda las
características óptimas para implementar la
planta de producción de PHB en esta zona
del departamento de La Paz.
Específicamente, la ubicación será en el
parque industrial; ya que, dispone de los
requerimientos básicos (agua, gas, luz,)
para una fábrica. Además, debemos
mencionar que el alcance que se tiene con
otras plantas; de manera que la
comercialización de nuestro producto como
materia prima para otros, es beneficioso por
costos reducidos en transporte. Añadiendo
una posible opción, la cervecería artesanal
“Niebla”, se encuentra en esta zona. Con
los debidos acuerdos, esta podría ser
nuestra proveedora de levadura. Los
residuos de levadura en las cervecerías, por
lo general no son tratados ni reutilizados, de
manera que es conveniente para la planta de
producción de PHB. Factores económicos,
la cercanía, el espacio y disponibilidad de
terreno son convenientes para la planta de
producción de PHB.
12

Por lo tanto, recalcar que se utilizara
el aceite residual de frituras por su
contenido en exceso de carbono, pues el
aceite que se recolecta habría estado en
contacto con carbohidratos. Esta aclaración
es importante para la bacteria H.
boliviensis, debido a que esta tiene un
mejor desempeño en la producción de PHB;
es decir que, se garantiza una riqueza en
carbohidratos en el aceite residual con el
que se trabajará. (Quillaguamán et al.,
2006). Para el proyecto, se escoge la
bacteria Halomonas boliviensis, porque los
halófilos alcanzan rendimientos de PHB
reportados como los más altos hasta ahora.
En Bolivia se pueden obtener estas
bacterias del Salar de Uyuni. Las sales
utilizadas en el medio de estas bacterias,
pueden ser reutilizadas para reducir los
costos. Para el proyecto se utilizará
levadura como fuente de nitrógeno.
El proceso del PHB por moldeo por
inyección requiere equipos costosos, lo que
se plantea es vender el PHB en pellets a
industrias de plástico; como industrias que
fabrican empaques de plástico como Pack
Plast, Grinplas, Zepol y Matriplast.
También se podría vender PHB a industrias
de bolsas plásticas como Plastic Z Inbolsa,
Solplast, qp Bolsas Plásticas, qp Envases
Flexibles e Innovaplast. Todas estas
industrias están ubicadas en El Alto. Las
industrias previamente mencionadas,
cuentan con los equipos de moldeo por
inyección, esta propuesta puede ser
atractiva; ya que, al no tener que sintetizar
el PHB, los costos de producción de los
productos finales bajan considerablemente,
y las industrias podrán reducir la
producción de plásticos sintéticos. Esto
último implica un ahorro en costos de
energía.
Otro aporte que podría
complementar este trabajo y el
conocimiento de microorganismos en
Bolivia, es una rigurosa investigación
acerca de la gran variedad de bacterias
presentes en el Salar de Uyuni.
Investigadores de la Universidad
Politécnica de Cataluña realizaron
investigaciones al respecto en el Salar de
Uyuni, pudiendo identificar a la Bacillus
megaterium Uyuni S29 en los “ojos”de
agua (pequeñas erupciones que brotan
debajo de la superficie con un alto
contenido de ácidos), como una bacteria
productora de PHB (SINC, 2013). Esto nos
da a preguntarnos cuántos
microorganismos más podrían tener como
medio este gran desierto de sal. Concentrar
nuestra atención en la investigación y
descubrimiento de otras bacterias; no solo
para la producción de PHB, es un avance
para Bolivia en la ciencia, la química y la
bioquímica. Contamos con una amplia
diversidad de ecosistemas y riqueza natural
que aún no es explotada. Probablemente sea
el poco apoyo económico y académico un
limitante, pero la curiosidad y el superarse,
es siempre suficiente para la ciencia.
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11
VI. Anexos
14
 Figura 4. Modelo con TSB
“aceite calentado”

La Figura 5 muestra el modelo de gompertz con

BSM en aceite calentado, en el eje x se tiene el
tiempo, en el eje y los recuentos microbianos

Tabla 8. Resultados BSM

“aceite calentado”
La Figura 4 muestra el modelo de gompertz con
TSB en aceite calentado, en el eje x se tiene el Variable Valor Unidades
tiempo, en el eje y los recuentos microbianos
B 0.05856 [h]-1

Tabla 7. Resultados TSB C 2.4559 [log(UFC/ml)]

“aceite calentado” M 23.15 [h]

Variable Valor Unidades 7.5857 [log(UFC/ml)]
A
B 0.411 [h]-1 0.05297 [h]-1
µ
C 1.053 [log(UFC/ml)]
LPD 6.0735 [h]
M 12.06 [h] 10.045 [log(UFC/ml)]
MPD
A 7.77 [log(UFC/ml)]
R-square 0.9958 adimensional
µ 0.05462 [h]-1 En la Tabla 8 se muestra los resultados obtenidos
en el modelo con BSM en aceite calentado. En la
LPD 4.9678 [h] columna 1 se tiene las variables, en la columna 2 se
tiene el valor encontrado, en la columna 3 se tiene
MPD 8.823 [log(UFC/ml)]
las unidades. (Fuente: Elaboración propia)
R-square 0.9168 adimensional
Figura 6. Modelo con TSB
En la Tabla 7 se muestra los resultados obtenidos “aceite puro”
en el modelo con TSB de aceite calentado. En la
columna 1 se tiene las variables, en la columna 2 se
tiene el valor encontrado, en la columna 3 se tiene
las unidades. (Fuente: Elaboración propia)

La Figura 6 se muestra el modelo de gompertz con

TSB en aceite puro, en el eje x se tiene el tiempo,
en el eje y los recuentos microbianos

Tabla 9. Resultados TSB

Figura 5. Modelo con BSM “aceite puro”
“aceite calentado”

15
 Variable Valor Unidades Variable Valor Unidades

B 0.0446 [h]-1 B 0.1385 [h]-1

C 1.818 [log(UFC/ml)] C 29.41 [log(UFC/ml)]

M 1.326 [h] M 13.45 [h]

A -0.1144 [log(UFC/ml)] A 7.4357 [log(UFC/ml)]

µ 0.2179 [h]-1 µ 1.4985 [h]-1

LPD -22.501 [h] LPD 6.2298 [h]

MPD 8.946 [log(UFC/ml)] MPD 36.846 [log(UFC/ml)]

R-square 0.5997 adimensional R-square 0.5454 adimensional

En la Tabla 9 se muestra los resultados obtenidos
en el modelo con TSB en aceite puro. En la
columna 1 se tiene las variables, en la columna 2 se
tiene el valor encontrado, en la columna 3 se tiene
las unidades. (Fuente: Elaboración propia)
En la Tabla 10 se muestra los resultados obtenidos
en el modelo con BSM en aceite puro. En la
columna 1 se tiene las variables, en la columna 2 se
tiene el valor encontrado, en la columna 3 se tiene
las unidades. (Fuente: Elaboración propia)

Figura 7. Modelo con BSM

“aceite puro”

La Figura 7 se muestra el modelo de gompertz con

BSM en aceite puro, en el eje x se tiene el tiempo,
en el eje y los recuentos microbianos

Tabla 10. Resultados BSM

“aceite puro”

16