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Internacional Biodeterioro y Biodegradación 85 (2013) 150mi155

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Biodeterioro y Biodegradación Internacional

página de inicio de la revista: www.elsevier.com/locate/ibiod

Biorremediación de suelos contaminados con petróleo mediante bioestimulación

enmendada con biocarbón

Pandilla Qinun,*, Dan Gongb, Mei Ying FanC

unFacultad de Ingeniería y Tecnología, Universidad de Yangtze, Xueyuan Road, Jingzhou 434020, Hubei, PR China
bEscuela de Geofísica y Recursos Petroleros, Universidad de Yangtze, Xueyuan Road, Jingzhou 434023, Hubei, PR China
CEscuela de Graduados, Universidad de Yangtze, Xueyuan Road, Jingzhou 434023, PR China

información del artículo resumen

Historial del artículo: En este estudio, los efectos del biocarbón de paja de arroz en la biodegradación de contaminantes del suelo y las
Recibido el 17 de junio de 2013 composiciones de la comunidad microbiana se investigaron en el laboratorio durante un período de 180 días. Los
Recibido en forma revisada el 3 de
resultados de los experimentos del microcosmos del suelo mostraron que la eficiencia de degradación de los
julio de 2013
contaminantes fue significativamente mayor en los suelos enmendados con biocarbón que en los suelos sin él. El
Aceptado el 11 de julio de 2013
tiempo de adición de biocarbón tuvo efectos aparentes en la eficiencia de degradación. Las eficiencias de remoción
Disponible en línea
de hidrocarburos totales de petróleo (TPH) fueron 61.2%, 77.8% y 84.8%, en los suelos sin biocarbón, enmendados
con biocarbón al inicio o al día 80 respectivamente. Al agregar biocarbón en el día 80, la concentración de TPH
Palabras clave:
disminuyó por debajo del nivel de umbral requerido para la calidad del suelo chino para TPH (3000 mg kg-1peso
Bioestimulación
Biorremediación seco) en 140 días. La adición de biocarbón no resultó en impactos negativos apreciables en la composición de la
Microtoxicidad-toxicidad comunidad microbiana del suelo. Se especuló que al agregar biocarbón en el día 80, se podría absorber una gran
metagenómica cantidad de metabolitos en el biocarbón, lo que conduciría a una reducción significativa de la toxicidad del suelo y
Secuenciación una mejora de la biodegradación.
- 2013 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción
Los derrames, fugas y otras liberaciones de hidrocarburos de petróleo pueden
causar grandes cantidades de contaminación del suelo, lo que representa una
gran preocupación ambiental con graves consecuencias que ha generado
preocupación pública en todo el mundo durante las últimas décadas (Lu et al.,
2010).
La biorremediación de suelos contaminados con petróleo es un área candente
en la investigación de restauración de suelos, debido a sus costos relativamente
bajos y su respeto por el medio ambiente en comparación con los procesos físicos
y químicos.Gracia Liu et al., 2011). Esta técnica ha demostrado ser efectiva para
suelos contaminados con petróleo tanto en pruebas de laboratorio como de
campo (Xu y Lu, 2010; Be-skoski et al., 2011; Mukherjee y Bordoloi, 2011). Sin
embargo, la práctica generalizada de la biorremediación en el campo está limitada
por su baja eficiencia y mantenimiento a largo plazo (Trindade et al., 2005). Esto es
especialmente cierto para sitios históricamente contaminados donde los
contaminantes consistían principalmente en compuestos complejos con
estructuras químicas recalcitrantes y baja biodisponibilidad (Huesemann et al.,
2004). el hidrófobo
* Autor correspondiente. Teléfono Fax:þ86 716 8067521. Dirección
de correo electrónico:pipilang@yeah.net (G.Qin).
La naturaleza del aceite retarda la transferencia de masa del aire, el agua y los
contaminantes de las partículas del suelo a los microorganismos, lo que limita la tasa de
absorción y el metabolismo de los contaminantes por parte de los degradadores de
hidrocarburos (Semple et al., 2003).
Algunas medidas auxiliares como el tratamiento de biols (Lu et al., 2009),
oxidación química (Lu et al., 2010; Gong, 2012), mejora del surfactante (Mata-
Sandoval et al., 2002; Urum et al., 2006), se incorporaron a los procesos biológicos
para mejorar la biodisponibilidad de los contaminantes y/o para reducir la
toxicidad del sustrato. El biocarbón producido a partir de biomasa puede
secuestrar el CO atmosférico2en los suelos durante mucho tiempo y, por lo tanto,
reduce la huella de carbono de la remediación del suelo basada en adsorbentes en
comparación con el uso de carbón activado derivado del carbón (Bushnaf et al.,
2011). Se han implementado enmiendas de carbón activado o biocarbón en ciertos
propósitos de remediación de suelos y sedimentos. El uso de biochar podría ser
más barato en un sentido de remediación en relación con AC porque los
materiales de origen de desechos son esencialmente gratuitos y la producción de
biochar requiere menos energía y costo (Hale et al., 2011). Los beneficios
agronómicos del biocarbón, además de secuestrar C en la remediación basada en
plantas, también pueden estar relacionados con un incremento de los efectos del
encalado, la capacidad de retención de agua, la estructura del suelo, la capacidad
de intercambio catiónico, las actividades microbianas del suelo y, finalmente, el
crecimiento de las plantas (Glaser et al., 2002; Beesley et al., 2010). Sin embargo, la
enmienda de biochar al suelo degradado ha

0964-8305/$miconsulte el material preliminar - 2013 Elsevier Ltd. Todos los derechos

reservados. http://dx.doi.org/10.1016/j.ibiod.2013.07.004
 G. Qin et al. / Internacional Biodeterioro y Biodegradación 85 (2013) 150mi155
También se ha demostrado que reduce la disponibilidad del contaminante para la
descomposición microbiana y aumenta la persistencia (Rodas et al., 2008).
En el presente trabajo se evaluó la factibilidad del uso de biocarbón en la
remediación de suelos contaminados con hidrocarburos de petróleo. Para
investigar el efecto de añadir tiempo, se modificó el biocarbón en dos
períodos diferentes respectivamente, es decir, al principio oa la mitad de la
etapa de los experimentos.
2. Materiales y métodos
2.1. Suelo contaminado
El suelo contaminado con petróleo se recolectó de un sitio de derrame de
petróleo cerca de un contenedor cisterna en el campo petrolífero de Shengli,
China. Para el muestreo se retiraron los desechos superficiales y se recogieron
muestras de suelo a una profundidad de 30 cm. El suelo se secó al aire y se tamizó
a través de un tamiz de malla de 2 mm, se homogeneizó a mano con una pala y
luego se almacenó a 4-C en la oscuridad hasta su uso. La textura del suelo
contaminado sin tratar se clasificó como franco arcilloso, que contenía (sobre la
base del peso seco, peso seco): arena, 23,5 %; limo, 51,2%; arcilla, 25,3%. El suelo
tenía las siguientes características: pH (1:2.5, relación suelo/agua), 6.5;
conductividad (1:10, relación suelo/agua), 535metroScm-1; capacidad de
retención de agua, 38,6% en peso; humedad, 15,2% en peso; carbono orgánico
total (COT), 5,42 % en peso; nitrógeno total 85 mg kg-1; fósforo total 16 mg kg-1;
bacterias heterótrofas totales, 7,50 106unidades formadoras de colonias (UFC) g-1;
bacterias que degradan el gasóleo, 3,60 104UFC g-1; hidrocarburos totales de
petróleo (TPH), 16.300 mg kg-1(hidrocarburos saturados, 8260 mg kg-1;
hidrocarburos aromáticos, 5130 mg kg-1; componentes polares, 2910 mg kg-1).
El suelo contenía una cantidad y proporción significativas de una
población degradante de fracción de alcano (saturada) (0,48 %), lo que
sugiere que la estrategia de bioestimulación era factible para esta matriz de
suelo. Además, el aceite contenía un porcentaje relativamente alto de
fracciones aromáticas (31,5%).
2.2. Biocarbón
El biocarbón se produjo a partir de paja de arroz a 500-C usando una pirólisis
lenta bajo oxígeno limitado de acuerdo con (Lou et al., 2013). tabla 1enumera las
características del pienso de paja de arroz. Después de la carbonización, el
biocarbón se trituró ligeramente y se tamizó para obtener una fina (<fracción de
tamaño 0,16 mm), que luego se enjuagó con agua destilada para eliminar el
contenido de cenizas y se secó a 60-C durante 5 días. La muestra tenía una
superficie total de 1053 m2gramo-1, contenido de TOC del 83,5 % en peso, relación
en peso C:N:S de 325:3,9:1 y un pH de 8,9 (1:2,5, relación biocarbón/agua).
tabla 1
Las principales características de la alimentación de paja de arroz.
Composición Análisis aproximado
Componente Contenido (% en peso) Componente
Celulosa 57.2 Agua
hemicelulosa 29.6 Materia volátil
Lignina 13.2 Carbono fijo
Ceniza
Análisis elemental concentración de metales alcalinos
Elemento Contenido (% en peso) Metal alcalino
C 38.5 N/A
H 4.9 magnesio
norte 1.8 California
S 0.76 k 23,875
O 54.0
151
2.3. Experimentos del microcosmos del suelo
El suelo se sometió a diferentes tratamientos durante 180 días adicionales.
Para cada tratamiento, se prepararon tres réplicas independientes (recipientes de
vidrio de 2 L cubiertos con parafilm perforado) como microcosmos, cada uno con
1000 g de suelo. En todos los tratamientos se ajustó el contenido de agua al 60%
de la capacidad de retención de agua. Una vez por semana, se mezclaron los
contenidos del microcosmos y se restauró el contenido de agua del suelo
controlando el peso. Cada dos semanas, (NH4)2ASI QUE4y k2HPO4se agregaron
para producir una relación C:N:P final de 100:10:5 (Gong, 2012). Se aplicaron
cuatro ensayos diferentes por triplicado: el suelo se complementó con 2 % (p/p) de
HgCl2para tener en cuenta la pérdida abiótica de contaminantes (A); el suelo no
recibió biocarbón (B); el suelo se modificó con 2% (p/p) de biocarbón al principio
(C), y el día 80 (D) del experimento.
2.4. métodos analíticos
El aceite del suelo se extrajo con soxhlet con diclorometano durante
16 h. El extracto se condensó a 1 mL en un rotavapor y se fraccionó por
cromatografía en columna de gel de sílice para separar las fracciones
saturada, aromática y polar, siguiendo los métodos de Bastow et al.
(2007). El eluido diferente se evaporó a sequedad bajo N2, y calculado
gravimétricamente.
las medidas denorte-alcanos e hidrocarburos aromáticos policíclicos
(HAP) se realizaron por cromatografía de gasesmiespectrometría de masas
(GCmiMS), utilizando un GC Thermo-Finnigan SSQ710miMS (Thermo
Finnigan, San José, CA, EE. UU.) con columnas capilares de sílice elástica
HP-5MS (60 m 0,25 mm 0,25metrometro). El gas portador fue helio a 37 kPa.
La velocidad de flujo fue de 1 mL min-1. Las condiciones analíticas fueron:
temperatura inicial de 50-C, con funcionamiento isotérmico durante 1 min;
calefacción a 120-C a una tasa constante de 20-C min-1; y calentando a una
temperatura final de 310-C a una tasa constante de 4-C min-1, con una
isoterma de 30 min. Las condiciones del espectrómetro de masas fueron:
impacto de electrones, energía de electrones 70 eV; corriente de filamento
100metroUN; tensión multiplicadora, 1200 V; análisis completo.
concentraciones de cadanorte-el alcano se calcularon en base a la curva
de calibración estándar de cada compuesto estándar correspondiente (Accu
Standards Inc., New Haven, CT, EE. UU.). Los HAP individuales se
cuantificaron en función del tiempo de retención ym/zproporción de un
estándar mixto PAH auténtico (SigmamiAldrich, St. Louis, MO, EE. UU.), y las
concentraciones de cada PAH se calibraron en función de la curva de
calibración estándar.
2.5. Recuento microbiológico
0.1
Las bacterias heterótrofas se contaron en agar nutritivo después de la
incubación a 30-C durante 2 días y los resultados se expresaron como UFC
por gramo de suelo seco.
2.6. Microtoxicidad-ensayo de toxicidad
La toxicidad del elutriado del suelo se determinó utilizando el Microtox-
Contenido (% en peso)
bioensayo segúnXu y Lu (2010). Los valores de toxicidad fueron el promedio
5.3 de cinco repeticiones de cada muestra de filtrado, expresados como EC50
65.4 (15 minutos, 15-C), que se definió como la concentración efectiva de
16.6
contaminante para una reducción del 50% de la luminiscencia de la bacteria
12.7
Photobacterium fosforeum.
Contenido (mg kg-1) 2.7. Extracción de ADN, amplificación por PCR y secuenciación 454
273
1942 El ADN de alto peso molecular del suelo se extrajo con un kit
3105 comercialmente disponible (Beijing Dingguo Biotechnology Ltd.,
Porcelana). Los genes 16S rDNA fueron amplificados por reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) en un termociclador Techgene (FTGENE 5D, 112757-4,
152 G. Qin et al. / Internacional Biodeterioro y Biodegradación 85 (2013) 150mi155

Techne Combridge Ltd., Duxford, Cambridge, Reino Unido), utilizando el El conjunto de secuencias de la muestra fue alineado por Infernal (Nawrocki y
cebador directo 563F (50-AYTGGGYDTAAAGNG-30) en el extremo 50 (E. coli Eddy, 2007) utilizando el modelo de alineación de bacterias en el módulo Align del
posiciones 563mi578) de la región V4 (239 nucleótidos) y un cóctel de cuatro RDP.
cebadores inversos igualmente mezclados, es decir, R1 (50-
TACCRGGGTHTCTAATCC-30), R2 (50-TACCAGAGTATCTAATTC-30), R3 (50 2.9. análisis estadístico
-CTACDSRGGTMTCTTAATC-30) y R4 (50-TACNVGGGTATCTTAATC-30), en el
extremo 30 de la región V4 (E. coliposiciones 785mi802) (Murphy et al., 2010 Todos los experimentos en este estudio se realizaron por triplicado para
). Luego, las muestras de ADN con diferentes códigos de barras se obtener datos confiables, y los resultados presentados aquí representan los
mezclaron en igual concentración y se secuenciaron con un secuenciador valores promedio de tres desviaciones estándar de mediciones independientes. La
Roche 454 FLX Titanium (Roche, Nutley, NJ, EE. UU.) en el Instituto de varianza y las diferencias significativas entre varios tratamientos se analizaron
Genómica de Beijing (Shenzhen, China). La metodología de mediante el método de Student.t-prueba. Se consideró que los datos eran
pirosecuenciación utilizada fue idéntica a la reportada porDavis et al. (2011). significativamente diferentes entre los valores sipag <0.05. Todo el análisis
estadístico se realizó con SPSS 13.0 para Windows.

2.8. Análisis posterior a la ejecución

3. Resultados y discusión
Las lecturas sin procesar se trataron con el Proceso inicial de tubería de
pirosecuenciación (Cole et al., 2009) del Ribosomal Database Project (RDP), (1) para 3.1. Biodegradación de TPH en suelos
clasificar aquellos que coinciden exactamente con los códigos de barras específicos en
diferentes muestras, (2) para recortar los adaptadores, códigos de barras y cebadores En general, la biodegradación de hidrocarburos de petróleo en los suelos se
usando los parámetros predeterminados, y (3) para eliminar secuencias que contienen caracteriza por una eliminación rápida durante la etapa inicial, seguida de una fase de
'N' ambiguo o más corto que 150 bps (Claesson et al., 2009). Las lecturas seleccionadas meseta más lenta y uniforme (Alejandro, 1995). En condiciones abióticas, el ensayo A
anteriormente se definieron como "lecturas sin procesar" para cada muestra de suelo. mostró una disminución insignificante en la concentración de TPH en el suelo (Figura 1a),
lo que puede deberse a que la mayoría de los hidrocarburos volátiles habían
La clasificación taxonómica de las secuencias bacterianas de la muestra desaparecido durante la atenuación natural a largo plazo.
se llevó a cabo utilizando el clasificador Ribosomal Database Project (RDP). La bioestimulación mediante modificación de nutrientes (ensayo B) provocó
Se aplicó un corte de arranque del 50% sugerido por el RDP para asignar las una rápida reducción de TPH en la etapa inicial (dentro de los 60 días), seguida de
secuencias a diferentes niveles de taxonomía. el normalizado una aparente ralentización de la biodegradación hasta el día 180. En el

Prueba A Prueba B

(un)18000 Prueba C Prueba D

(b)10000
Prueba B Prueba C Prueba D
)
-1

15000
8000
Concentración de saturados (mg kg
Concentración de TPH (mg kg )
-1

12000
6000

9000

4000
6000

2000
3000

0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

Tiempo (días) Tiempo (días)

(C) 6000
(d) 5000
Prueba B Prueba C Prueba D Prueba B Prueba C Prueba D
)
-1
-1
Concentración de aromáticos (mg kg )

4000
Concentración de fracción polar (mg kg

4000
3000

2000
2000

1000

0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

Tiempo (días) Tiempo (días)

Figura 1.Evolución temporal de las concentraciones de TPH (a), saturados (b), aromáticos (c) y fracción polar (d) en suelos durante la biorremediación de 180 días. Ensayo A: control abiótico; prueba B: el
suelo no recibió biocarbón; prueba C: el suelo se modificó con biocarbón al 2 % (p/p) al principio; ensayo D: el suelo se modificó con biocarbón al 2 % (p/p) en el día 80. Las barras de errores indican SD
de muestras por triplicado. La línea indica el límite legal de TPH para uso comercial-industrial (3000 mg kg-1peso seco) en China.
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final del proceso, la eficiencia de eliminación total de TPH para el ensayo B Prueba B Prueba C Prueba D

fue del 61,2% (de 16.300 mg kg-1ent¼0 día a 6420 mg kg-1ent¼180 días). En 100
realidad, la eliminación de TPH alcanzó una meseta en la última etapa del
experimento y no se observaron cambios aparentes en las concentraciones
de TPH desde el día 120 (Figura 1un). Se sabe que los hidrocarburos del 80

Porcentaje de eliminación (%)

petróleo no pueden ser completamente metabolizados por
microorganismos a CO2y H2O, y siempre deja residuos más o menos
60
complejos (principalmente compuestos recalcitrantes y metabolitos) (Atlas,
1995). Estos compuestos a menudo se vuelven cada vez menos
biodisponibles con el paso del tiempo debido a su baja solubilidad en agua y 40
su secuestro por los suelos (Alejandro, 1995). Además, las altas
concentraciones de ácidos grasos generados por la biooxidación del
petróleo podrían ejercer ecotoxicidad en la microflora del suelo y, por lo 20
tanto, afectar los procesos de biodegradación (Lu et al., 2010).
La adición de biocarbón al 2 % al comienzo del experimento no resultó
0
en una reducción significativamente mayor en la concentración de TPH
n-alk1anes Pensilvania2hs

hasta el día 60 en relación con el suelo sin biocarbón (Figura 1un).

Posteriormente, se aceleró el proceso de biodegradación y el nivel de TPH Figura 2.Porcentajes totales de remoción denorte-alcanos y 16 HAP prioritarios tras 180
en el ensayo C disminuyó a 3625 mg kg-1después de 180 días de días de tratamiento. Prueba B: el suelo no recibió biocarbón; prueba C: el suelo se
tratamiento, lo que corresponde a una eficiencia de eliminación total del enmendó con biocarbón al 2 % (p/p) al principio; ensayo D: el suelo se modificó con
77,8%, que fue significativamente mayor que la del ensayo B (pag <0,05). En biocarbón al 2 % (p/p) en el día 80. Los 16 HAP prioritarios son: naftaleno, acenafteno,
acenaftileno, fluoreno, fenantreno, antraceno, pireno, fluorantreno, benzo[ghi]perileno,
realidad, en el día 160, la concentración de TPH en el ensayo C había
benzo[a]antraceno, criseno, benzo[a]pireno, benzo[b]fluoranteno, benzo[ k]fluoranteno,
disminuido a 3870 mg kg-1, y la tasa de biodegradación también se había indeno[1,2,3-cd]pireno y dibenz[ah]antraceno.
ralentizado durante el período tardío.
Curiosamente, al agregar biocarbón en el día 80, la biorremediación se
Se observó biodegradación de saturados en el suelo enmendado con
promovió significativamente (Figura 1un). Desde el día 140, la concentración
biocarbón. Las concentraciones de saturados disminuyeron de 8260 mg kg-1
de TPH fue significativamente más baja en el ensayo D que en el ensayo C,
ent¼0 día a 1200, 553 y 612 mg kg-1ent¼180 días, en los ensayos B, C y D
alcanzando una concentración por debajo del nivel de umbral requerido
respectivamente, correspondientes a eficiencias de remoción de 85,5%,
para la calidad del suelo chino para TPH (3000 mg kg-1dw). Al final del
93,2% y 92,6%, respectivamente. Se puede encontrar que la adición de
experimento, la concentración de TPH en el ensayo D disminuyó a 2480 mg
biocarbón mejoró ligeramente la biodegradación de los saturados, y el
kg-1, correspondiente a una eficiencia de eliminación total del 84,8%. Estos
tiempo de adición de biocarbón no tuvo un impacto aparente en la eficiencia
resultados indicaron que el tiempo de adición de biocarbón tuvo una
de degradación de las fracciones saturadas.Bushnaf et al. (2011)encontraron
influencia aparente en la biodegradación.
que la biodegradación de alcanos lineales, cíclicos y ramificados fue más
Algunas investigaciones han demostrado que el carbón negro (incluido el
rápida en el suelo enmendado con biocarbón que sin él.
carbón activado y el biocarbón) podría reducir la biodisponibilidad de los
Como se muestra enFigura 2c, la adición de biocarbón aumentó significativamente la
contaminantes y la biodegradación en el suelo (Zhang et al., 2005; Rodas et al.,
eficiencia de degradación de los compuestos aromáticos. Las concentraciones de
2008). En estos estudios, las concentraciones de contaminantes en el suelo fueron
aromáticos disminuyeron de 5130 mg kg-1ent¼0 día a 1810, 881 y 1025 mg kg-1ent¼180
generalmente más bajas (<500 mg kg-1), y pueden ocurrir efectos secuestrantes
días, en los ensayos B, C y D respectivamente, correspondientes a eficiencias de
aparentes, lo que lleva a una reducción en la movilidad y biodisponibilidad de los
remoción de 64,7%, 82,8% y 80,0%, respectivamente. Se puede observar que el tiempo de
contaminantes. Por el contrario,Vasilieva et al. (2010)descubrió que agregar
adición de biocarbón no tuvo un efecto aparente sobre la eficiencia de degradación de
carbón activado ayudó a superar la toxicidad de los bifenilos policlorados para los
las fracciones aromáticas.
microorganismos, yHal et al. (2011)también informó que la enmienda de
Figura 2d muestra un aumento real de las concentraciones de fracciones
biocarbón tenía un efecto estimulador en la biodegradación de PAH en el suelo. En
polares en los suelos después del inicio de la incubación, que se atribuyó a la
el presente estudio, la reducción en la movilidad y bioaccesibilidad de los
acumulación de intermediarios metabólicos. Agregar biocarbón aumentó
contaminantes del suelo causada por la adición de biocarbón puede ser menor, ya
significativamente la eficiencia de degradación de las fracciones polares,
que la concentración de TPH fue relativamente alta.Xiao et al. (2010)sostuvo que el
especialmente cuando se modificó el biocarbón en el día 80. Las concentraciones
biocarbón generado a temperaturas más bajas puede absorber contaminantes a
de fracciones polares disminuyeron de 2910 mg kg-1ent¼0 día a 2192 y 843 mg kg
través de un mecanismo de partición que es relativamente más accesible para los
-1ent¼180 días en el ensayo C y D respectivamente, correspondientes a eficiencias
microbios que los procesos dominantes de adsorción, que aparecen en el
de remoción de 24,7% y 71,0%, respectivamente. Se ha demostrado que las
biocarbón producido a temperaturas más altas. Curiosamente, se encontró que el
fracciones polares en el petróleo crudo son parcial o completamente resistentes a
fenantreno adsorbido en carbón negro era más biodisponible de lo previsto por la
la degradación microbiana (Pollard et al., 1999). No obstante, también se ha
extracción química (Rodas et al., 2008). Se planteó la hipótesis de que los
informado que en cultivos óptimos puede aparecer una biodegradación máxima
microorganismos se adhirieron a las partículas de carbón negro y degradaron el
del 30% de los compuestos polares. Chaillan et al., 2006). En este estudio, la
fenantreno absorbido en la superficie.
adición de biocarbón en el día 80 puede mejorar en gran medida la
biodegradación de las fracciones polares.
Los estudios existentes demuestran los efectos complejos de la adición de carbono
Con base en los resultados anteriores, se puede concluir que la biodegradación de
negro en la biorremediación del suelo de contaminantes orgánicos, que podrían estar
fracciones polares es crucial para el éxito de la práctica de biorremediación de suelos
relacionados con ciertos factores, incluido el origen y el método de producción del
contaminados con petróleo. En este estudio, la menor eliminación de TPH en el ensayo B
carbono negro, las características del suelo, los tipos de contaminantes y las propiedades
se debió principalmente a la acumulación de metabolitos.
microbianas, etc.

3.2. Degradación de fracciones saturadas, aromáticas y polares 3.3. Degradación de n-alcanos y PAH

Las concentraciones de fracciones saturadas, aromáticas y polares con el CGmiEl análisis MS se realizó en las muestras de aceite extraídas antes y
tiempo se presentan enFigura 2bmid, respectivamente. una mas rapida después de 180 días de incubación, respectivamente. Eliminación total
154 G. Qin et al. / Internacional Biodeterioro y Biodegradación 85 (2013) 150mi155

porcentajes denorte-alcanos (C8miC40) y 16 HAP prioritarios se calcularon y se 3.5. Microtoxicidad-toxicidad

muestran enFigura 2. Después de 180 días de tratamiento, los n-alcanos y los PAH
en el ensayo B mostraron una disminución de la concentración del 88,6 % y el 45,3 Microtoxicidad-Se realizó un análisis en el transcurso del estudio para
%, respectivamente. Las eficiencias de remoción de n-alcanos en los ensayos C y D monitorear los cambios de toxicidad en los suelos incubados y los resultados se
fueron 95,3% y 94,1%, respectivamente. Aproximadamente el 61,4 % y el 59,5 % de muestran enFig. 3b. En las pruebas B y D, el Microtox-la toxicidad aumentó
los PAH se eliminaron en los ensayos C y D, respectivamente. La adición de primero durante la fase inicial de biodegradación, pero comenzó a disminuir
biocarbón mejoró la eliminación de n-alcanos y PAH. En general, las eficiencias de después de 40 días de incubación. En el ensayo C, la toxicidad disminuyó durante
eliminación de los PAH fueron más bajas que las de las fracciones aromáticas, lo los primeros 20 días. CE superior50los valores en el día 180 en los ensayos C y D
que indica que los 16 PAH prioritarios eran más recalcitrantes dentro de los sugirieron una reducción general en la toxicidad del suelo. Significativamente
compuestos aromáticos de los aceites. menor toxicidad en el suelo (pag <0.05) se observó en el ensayo D con respecto al
ensayo B y C. Se puede observar que las tendencias de cambio de la toxicidad del
suelo generalmente coincidieron con las de las concentraciones de compuestos
3.4. Recuento bacteriano total
polares. Por lo tanto, se puede especular que se produjeron algunos metabolitos
tóxicos durante la biodegradación de los compuestos del petróleo.
Se observó una diferencia estadísticamente significativa para los conteos
totales de bacterias heterótrofas del suelo 180 días después de la incubación, con
En el presente trabajo, los compuestos polares podrían biodegradarse
el ensayo D con el conteo de células más alto de 1.31 109UFC por gramo de peso
más eficientemente en el suelo enmendado con biocarbón en el día 80 que
de suelo seco, 5,1 veces mayor que el ensayo B, que tuvo el conteo de células más
al principio (Figura 1). Especulamos que, al agregar biochar al principio, los
bajo (2,56 108UFC g-1) (Fig. 3un). Este resultado mostró que la enmienda de
sitios de absorción en las superficies de biochar estarían ocupados
biochar en general no fue perjudicial para la actividad microbiana aeróbica. Se
principalmente por hidrocarburos de petróleo. A medida que avanzaba la
sabe que el biocarbón reduce la bioaccesibilidad, la actividad química y la
biodegradación, la capacidad de absorción de metabolitos del biocarbón se
ecotoxicidad de los compuestos orgánicos para los microorganismos del suelo (
vio limitada. Sin embargo, al agregar biocarbón en el día 80, se pudo
Ogbonnaya y Semple, 2013). Además, las propiedades de los nutrientes del
absorber una gran cantidad de metabolitos en el biocarbón, porque en este
biocarbón pueden mejorar el crecimiento de las plantas y la actividad microbiana y
punto las concentraciones de hidrocarburos de petróleo habían disminuido
se ha demostrado que mejoran la biodegradación de los contaminantes
notablemente y se había acumulado una gran cantidad de metabolitos. Por
bioaccesibles (Ogbonnaya y Semple, 2013).
lo tanto, la adición de biocarbón en el día 80 podría resultar en una
reducción significativa de la toxicidad del suelo y, por lo tanto, promover la
biodegradación. Sin embargo, no pudimos verificar esta especulación por
(un) parte de Microtox.-ensayo de toxicidad, porque el diminuto tamaño de las
1.40E+009 partículas de biocarbón hacía imposible separar el biocarbón del suelo
después de mezclarlo e incubarlo.
1.20E+009

1.00E+009
UFC por g de peso seco

8.00E+008 (un)100
Otros
Deltaproteobacteria
6.00E+008 80 planctomicetos
Burkholderiales
cianobacterias
% fragmentos anotados

4.00E+008
60 cloroflexi
clorobi
2.00E+008 Bacteroidetes
acidobacterias
40
Alfaproteobacteria
0.00E+000 esfingomonadales
Actinobacteria
Prueba B Prueba C Prueba D 20 gammaproteobacteria

(b) Prueba B Prueba C Prueba D 0

t=0
50 Prueba B Prueba C Prueba D

(b)20
40
(% suelo elutriado, v/v)

OtroPseudomonas
P. solanacearum
% fragmentos anotados

30
P. piocianea
P. putida
10 P. mendocina
20 P. fluorescens
P. aeruginosa
50

10
CE

0
0 t=0 Prueba B Prueba C Prueba D

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

Tiempo (días)
Fig. 3. (a) Conteo total de células microbianas para las muestras de suelo tomadas después de 180 días. (b)
Evolución temporal de EC50valor de las muestras de suelo durante el período de 180 días. Prueba B: el
suelo no recibió biocarbón; prueba C: el suelo se modificó con biocarbón al 2 % (p/p) al principio; ensayo D:
el suelo se modificó con biocarbón al 2 % (p/p) en el día 80.
Figura 4.Composición taxonómica de la comunidad bacteriana antes y después de 180 días de
incubación basada en secuenciación metagenómica. (a) Composición de la comunidad a nivel de
phylum/clase basada en todos los fragmentos anotados. (b)Pseudomonasabundancia relativa
basada en todos los fragmentos anotados. Prueba B: el suelo no recibió biocarbón; prueba C: el
suelo se modificó con biocarbón al 2 % (p/p) al principio; ensayo D: el suelo se modificó con
biocarbón al 2 % (p/p) en el día 80.
 G. Qin et al. / Internacional Biodeterioro y Biodegradación 85 (2013) 150mi155
3.6. Secuenciación metagenómica
El tratamiento de bioestimulación resultó en el incremento de la
abundancia de varios filos/clases bacterianos, comoGammaproteobacteria,
Actinobacteria, SphingomonadalesyAlfaproteobacteria (Figura 4un). En
contraste, el proceso de biorremediación resultó en una reducción en la
abundancia deAcidobacterias, Bacteroidetes, Chlorobi, Chloroflexi,
Cianobacterias, Burkholderiales, PlanctomycetesyDeltaproteobacteria.La
adición de biocarbón produjo perfiles taxonómicos relativamente similares a
nivel de phylum/clase, pero con algunas variaciones interesantes.
Gammaproteobacteria, Acidobacteria, Chlorobiy cloroflexiaumentó a lo
largo del tiempo mientrasActinobacteria yAlfaproteobacteriadisminuido (
Figura 4un). En elt¼muestras de 180 días,gammaproteobacteriacomprendía
hasta el 38% del total de la comunidad. A nivel de phylum/clase, las
muestras después del biotratamiento mostraron un perfil taxonómico
diversificado, con una clara dominancia de cualquiera de
Gammaproteobacteria.La gran abundancia de gammaproteobacteriaen elt¼
Las muestras de 180 días se debieron principalmente aPseudomonas
especies (Figura 4b). La abundancia relativa dePseudomonasaumentó
después de la incubación.
En general,Figura 4muestra que la enmienda de biochar no alteró
significativamente las composiciones de la comunidad bacteriana. Esto indica que
el biocarbón en el presente estudio no tuvo un efecto negativo aparente en las
poblaciones de microorganismos del suelo.Pseudomonas, Rhodococcus,
Caulobacteryesfingomonasson degradadores de hidrocarburos bien conocidos,
que tienden a enriquecerse en suelos bien aireados con mayores cantidades de
nutrientes nitrogenados y aceite.PseudomonasSe planteó la hipótesis de que la
especie es uno de los principales degradadores de alcanos e hidrocarburos
aromáticos en suelos contaminados con petróleo (Haines et al., 2002).
4. Conclusiones
Este trabajo demostró la viabilidad de un proceso de biorremediación usando
bioestimulación con biocarbón para suelos contaminados con petróleo. Los
resultados de los experimentos del microcosmos del suelo mostraron que el suelo
enmendado con biocarbón de paja de arroz dio como resultado una mejor mejora
en la eliminación de contaminantes, en comparación con la bioestimulación sola.
Al agregar biocarbón en el día 80, la concentración de TPH disminuyó por debajo
del nivel de umbral requerido para la calidad del suelo chino para TPH (3000 mg
kg-1peso seco) en 140 días. Los resultados mostraron la aplicabilidad en el uso de
biocarbón para la remediación de suelos contaminados con petróleo. La adición
de biochar no causó influencias negativas apreciables en la microflora del suelo.
Por lo tanto, el biocarbón de paja de arroz puede actuar como un aditivo eficaz
para la remediación del suelo.
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