BIOLOGIA-MOLECULAR.

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Biología

1º Grado en Veterinaria

Facultad de Veterinaria
Universidad Alfonso X El Sabio

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 BIOLOGÍA MOLECULAR
TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Sistema de edición genética CRISPR/ CAS9
Plásmidos como vectores genéticos
Enzimas de restricción
Secuenciación Singer

1. CRISPR/ Cas9:
Endonucleasa: enzima que corta parte del material genético de una célula procariota para introducir el
plásmido con la información de interés(diseñada): transformación

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- Knock out: lo quitamos
- Knock in: se nota más
- Knock down: se silencia

2. PLÁSMIDOS
Bacterias resistentes a x antibióticos con mucha mutación. Cierta secuencia de ADN interesante se inserta en
el corte para su cultivo en células procariotas
Se expone al antibiótico. Las células supervivientes levan el plásmido; la secuencia de n número diseñada

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Biología
Banco de apuntes de la
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3. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Para verificar que una colonia tiene el gen diseñado se usan endonucleasas específicas, que realizan cortes
en el material genético de la célula procariota(bacteria) donde se encuentra el plásmido resistente. Estos
cortes se miden por electroforesis.
Si el resultado es positivo se hace un cultivo de bacterias para la posterior extracción del gen y su
implantación en células eucariotas

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4. SANGER
Se realiza una verificación final de la existencia del gen en la célula procariota, Una GEP, una proteína que
da coloración verde a una célula si esta contiene el plásmido
Las que se tiñen de verde son sometidas a la secuenciación de sanger, donde se comparan las secuencias de
n número de estas eucariotas con las células/población de control
Puede ser:
- Knock out: lo quitamos
- Knock in: se nota más
- Knock down: se silencia
(la expresión del gen)

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