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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Escuela Nacional De Ciencias Biológicas


Departamento de Microbiología
Químico Bacteriólogo Parasitólogo

GENÉTICA MICROBIANA
Práctica No. 4 “Plásmidos”

Equipo 6:
Granados Muñoz Izmari Jaanai
Gutierrez Vazquez Pablo Profesoras:
¿Qué es un plásmido?

Los plásmidos son material


genético extracromosómico,
circular bicatenario que tienen la
capacidad de replicarse
independientemente del
cromosoma del huésped.
Figura 1.Dos moléculas de
ADN plasmídico
superenrolladas F”
Características
● Tiene un origen de replicación propio.
● Los plásmidos autoregulan su número de copias a través
de un represor (proteína o RNA) que impide que se
repliquen muchas copias del plásmido
Estructura

Circular Lineal

Fig. 2. Estructura de los plásmidos


Clasificación de plásmidos
Clasificación de plásmidos
Incompatibilidad
Transferencia
Fenotipo Plásmido Características

Resistencia RK2 Resistencia a ampicilina,


tetraciclina y kanamicina

Degradación Tol Degradación de tolueno y ácido


Oct benzoico
Naf Degrada octano
Degrada naftaleno

Virulencia pXO1 Genes para la toxina del ántrax.


pXO2 Genes para síntesis de
cápsula.

Tabla 2. Ejemplos de algunos fenotipos.


Mapa del plasmido F. Las posiciones se
muestran en kilobases. Las letras hacen
referencia a los correspondientes genes tra
Sistemas de reparto

Distribución de
copias del
cromosoma o un
plásmido entre
células hijas en la
división celular

Figura. Visión general de la partición plasmídica.


Incompatibilidad
Incapacidad de dos plásmidos para coexistir de manera
estable en la misma célula.

Formas de incompatibilidad:
● Un plásmido que comparte el mismo sistema de partición.
● Comparten las mismas funciones de partición.
Figura. Incompatibilidad de plásmidos debido a los sistemas de partición relacionados.
Figura. Cuatro posibles pares de células hijas que pueden surgir de la
división de una célula que contiene plásmidos incompatibles A,B.
Segregación espontánea e inducida

Fallo en la
partición

Figura. Segregación de plásmidos por fallo de partición.


Diferencia entre segregación y curación
Segregación: Pérdida de un plásmido de manera
espontánea por errores en el sistema de replicación y de
replicación.

Curación: eliminación de plásmidos por un agente curante.


Mecanismos para prevenir curación

1.- Resolución de plásmidos multiméricos

2.-Sistema toxina y antitoxina


Sistema toxina y antitoxina

Figura.-(A) La transferencia vertical de genes de un sistema de toxina-


antitoxina.
Sistema toxina y antitoxina

(B) Transferencia horizontal de genes de


un sistema de toxina-antitoxina. PSK
significa muerte posterior a la segregación
y TA representa un lugar que codifica una
toxina y una antitoxina.
Agentes curantes y su
mecanismo de acción
Sustancia o factor que interfiere con la replicación
del plásmido sin interferir con la replicación
cromosómica
Agente curante Modo de acción

Acriflavina Tintes intercalantes; inhibición preferencial de la replicación del plásmido.


Se intercalan entre las bases de DNA
Naranja de acridina Inhiben la replicación del plásmido sin inhibir la replicación del dna cromosomal
Bromuro de etidio

Quinacrina

Coumermicina Inhibe el superenrrollamiento del plásmido dependiente de ADN girasa.

Novobiocina

Mitomicina C Ataque nucleofílico en las bases de purina. Actúa como agente alquilante

Rifampisina Inhibe RNA polimerasa

Dodecil sulfato de sodio Elimina filamentos F pili esenciales para la formación del contacto inicial.

Perdida espontánea de plásmido Segregantes sin plásmidos surgen durante la replicación o partición a las células
hijas.

Temperatura de crecimiento elevada Deleciones completas o parciales. Incubación elevada 5-7 ° C por encima de la
temperatura de crecimiento normal u óptima

Inanicion de timina Se utiliza para curar los auxótrofos que requieren timina.

Plasmidos de formación y regeneración de Puede causar perdida de ciertos plásmidos. Se debe a una interrupción del mecanismo
protoplastos de partición del plásmido cuando se eliminó la pared celular.
Tintes intercalantes

Figura. Curado de una celula F- Lac+ por crecimiento en un medio con


Concentración mínima inhibitoria

La Concentración Mínima
Inhibitoria (CMI) se define
como la mínima
concentración de
antimicrobiano (en μg/mL)
que inhibe el crecimiento
visible de un microorganismo
después de 24 horas de
incubación a 37°C.
Artículo

“Demostración de factores R en Bordetella


bronchiseptica aislada de cerdos”
Bordetella bronchiseptica
Bacilo Gram (-)
Cepa resistentes a:
Sulfadimetoxina (SA, más de 1.600 ug / ml)
Estreptomicina (SM, más de 800 ug / ml)
Aminobencil penicilina (APC, 200 ug / ml).

Causa rinitis atrófica en cerdos jóvenes


Cepas
Cepa control
Cepas donadoras
Bordetella bronchiseptica ATCC4617
Bordetella bronchiseptica O-16
Cepas receptoras
Bordetella bronchiseptica NA-28
Escherichi coli ML1410 (F-, met-, nal+)
Bordetella bronchiseptica NA-29
Escherichi coli ML1410-RFP (F-, met-,
Bordetella bronchiseptica I-53
nal+, rfp+)
Bordetella bronchiseptica I-56
Escherichi coli W3630 (F-, nal-)
Bordetella bronchiseptica A-59
Cepa Mutante
Bordetella bronchiseptica A-60
Bordetella bronchiseptica ATCC 114
Medios de cultivo
● Caldo Penassay
● Agar infusion de corazon
● Mueller-Hinton
● Agar nutritivo
● Agar AL
● Agar DHL

Figura. Medio de cultivo


Prueba de sensibilidad a los medicamentos
Resultados
Sensibilidad a fármacos de las cepas usadas
Transferibilidad de la resistencia a fármacos en B.
bronchiseptica
Transferencia de resistencia al fármaco
Tabla. Transferencia de la resistencia a fármacos de B. bronchiseptica a E.coli ML1410 por cultivo
mixto
Tabla. Transferencia de la resistencia a fármacos de B. bronchiseptica a B. bronchiseptica 114 por cultivo mixto
Tabla. Eliminación de la resistencia a los medicamentos mediante el tratamiento con
acriflavina
METODOLOGÍA
Objetivos
● Demostrar la pérdida espontánea de DNA
plasmídico en cepas de E.coli
● Demostrar la pérdida inducida de plásmidos en
las cepas de E.coli
● Comparar el comportamiento de un plásmido
grande unicopia con el de un plásmido pequeño
multicopia en relación a su curación.
● Comparar el efecto curante de dos agentes
químicos de diferente naturaleza
Medios de cultivo:

Agar luria (L)


Caldo luria (L)
Agar luria con ampicilina (L-Ap)
Medio mínimo (MM)
Medio mínimo con histidina (MMH)

Cepas:
Escherichia coli JC4046 (F' His+/His-)
Escherichia coli DH5α pBS (AmpS/AmpR)
Tratamiento con ácido ascórbico

El ácido ascórbico causa daño conformacional al plásmido circular


no protegido covalentemente circular (CCC).

Genera peróxido de hidrógeno radicales hidroxilo por la


autooxidación y la peroxidación lipídica de los componentes de la
membrana en presencia de oxígeno.
Estas especies reactivas generan daño al DNA
Tratamiento con temperatura elevada de
crecimiento

Modo de acción
Mediante una elevada temperatura de incubación
(5-7°C) por encima de la temperatura óptima de
crecimiento
Ocurren deleciones completas o parciales de la
cadena plasmídica de DNA.
Tratamiento con ácido ascórbico
3er dia
4to dia
Tratamiento con anaranjado de acridina
Bibliografía
Mathews. C. (2002) “Bioquímica” Ed. PEARSON EDUCACION. 3ra edición. pp
1111,1110,1114,1115

https://www.pharmacologicalsciences.us/how-drugs-act/i-rxs.html mitomicina c

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1018-
130X2005000100007 CMI

https://www.iasj.net/iasj?func=fulltext&aId=35745 acido ascorbico

https://www.researchgate.net/publication/229700427_Isolation_of_antibiotic-
sensitive_mutants_of_Azotobacter_chroococcum_by_treatment_with_ascorbic_ac
id
https://cienciatoday.com/que-es-un-plasmido-tipos/