Clase Esterilización Parte 2.
• Este gas actúa, además, a nivel de los ácidos
Esterilización - Agentes Químicos
 Óxido de etileno
 Formaldehido (FH)
 Ozono
 Peróxido de hidrógeno (H2O2)
Esterilización Química
• Cuando el producto a esterilizar no puede
someterse a procesos de esterilización que
emplean altas temperaturas.
• Esta forma de esterilización se fundamenta en
que algunas sustancias químicas tienen la
capacidad de promover una o más reacciones
químicas capaces de producir la muerte de los
microorganismos.
• Al emplear este método se pueden usar agentes
químicos gaseosos o no gaseosos.
• Por su mecanismo de acción, actúan
modificando en forma irreversible grupos
funcionales de proteínas y/o ácidos nucleicos.
• Entre otros efectos, esto provoca inhibición
enzimática, lo que lleva a la muerte celular
(bacteria).
• Los agentes que predominan en este grupo son
los Alquilantes (Óxido de etileno, formaldehído,
glutaraldehído).
• Estos producen la alquilación de proteínas que
contengan hidrógenos lábiles, los que se
encuentran en los grupos: carboxilo, hidroxilo,
sulfhidrilo, amino y fenol de dichas proteínas)
Óxido de Etileno (EtO)
• Es el esterilizante gaseoso más ampliamente
usado para esterilizar dispositivos médicos y en la
Industria Farmacéutica.
• Químicamente se trata de un éter cíclico de
fórmula (CH2)2O
• En estado puro es altamente inflamable y cuando
se mezcla con aire explosivo, por lo que su manejo
debe ser cuidadoso.
nucleicos, produciendo mutaciones tanto en
bacterias como en tejidos humanos.
• El óxido de etileno ejerce su acción letal sobre los
microorganismos al producir la alquilación del
ADN y ARN de las células.
• Este gas posee una marcada acción antiviral y
bacteriana. Pero, las esporas bacterianas muestran
mayor resistencia a su acción letal. Los hongos y las
levaduras presentan una resistencia intermedia.
• Cuando se emplea este método se debe
determinar cuidadosamente el tiempo de
exposición a emplear, el que depende de factores
como la temperatura, humedad, concentración del
gas, la permeabilidad del material que recubre los
instrumentos a esterilizar y el tipo de
microorganismo a eliminar.
Usos:
• Se utiliza de manera extensa para la esterilización
de materiales plásticos y de acero inoxidable,
productos de goma o instrumental médico como
dispositivos de administración parenteral (agujas
hipodérmicas, jeringas de plástico, etc.)
• Material de cirugía re-utilizable
• Cierto equipo médico (dispositivos biomédicos) y
de diagnóstico
• Superficie de polvos
Características generales de aplicación:
• Productos sensibles a la Temperatura
• Más usado que FH (Formaldehído)
• Alternativa a rayos γ para plásticos descartables
• Menor seguridad de esterilidad que métodos con
calor
• El equipo de esterilización, si bien es similar a la
autoclave que funciona por gravedad, es más
complejo y de manejo dificultoso.
• Es necesario controlar ciertos parámetros para
asegurar un buen resultado:
a. Composición del gas: se debe usar mezclas con
freón o CO2 (12% óxido de etileno-88% freón o
CO2) ya que puro es altamente inflamable.
b. Grado de humedad (entre 40 y 80%).
c. Temperatura (de 52 a 58ºC).
d. Tiempo de exposición (entre 3 y 6 hras).
• Cada ciclo de esterilización debe ser sometido a
controles biológicos con esporos de B. subtilis.
 circulación del aire, humedad y la penetración del
óxido de etileno.
• El material a esterilizar no debe tocar las
Factores que afectan la velocidad de reacción: paredes internas de la cámara.

Humedad Temperatura [EtO]

30-70 % 45 – 63 ºC 400-1200 mg/L
Preacondiciona + 10ºC  +2,5 > 1200 mg/L no
r carga Veces justifica
(HR > 50 %) velocidad de económicamente
reacción

• Eficacia: Buena, si no hay RESISTENCIA A difusión

del gas
• Disposición adecuada de la carga
• Envases permeables al aire, eto y gases de
dilución Bar (abs) vs Pasos 11 en total:
• No aplicable en: soluciones, emulsiones, polvos  1 línea punteada es temperatura (oscila por todo el
(excepto superficie) gráfico.
 2,3,4,5 no dicen nada (son la bajada de la línea negra
Problemas de uso gruesa.
 Del 6 al 8 Línea punteada a rayas que sale de la línea
• Absorción en materiales: ETAPA DE DESORCION
gruesa y sube hasta el nivel 4 de Bar y dice:
- Natural= varios días o En la parte superior: “fase de esterilización 150’ /
- Forzada= cabinas de aire forzado con flujo 180’ EtO = 550 mg/l. La mezcla es de 10% de EtO y
de aire caliente (2-24hs) 90% CO2.
• Proceso muy largo: No aplicable para materiales o En la parte inferior: “Fase de esterilización 90’ /
de alta recirculación: 120’ EtO = 1000 mg/l. La mezcla es de 85% EtO y
- Eliminación de residuos tóxicos 15%CO2.
- Lenta recuperación sobrevivientes  En 9, 10, 11 nada: línea gruesa que sube y baja, pero
se mantiene dentro de la presión atmosférica
- Cuarentena muy larga
• Riesgo personal:
Pasos del esquema de esterilización:
- Mutagénico y carcinogénico potencial
1) Carga y/o calentamiento carga
- Toxicidad aguda: irrita piel, mucosa nasal y
2) Vacio (se elimina el aire del sistema)
conjuntiva
3) Prueba de escape (mantiene vacío)
• No se detecta por olfato (FH si)
4) Inyección vapor (humidificación)
Resistencia de microorganismos > deshidratación >
5) Humectación de carga
resistencia a EtO
6) Esterilización
7) Evacuación mezcla EtO
Precauciones:
8) Pulsos aire/aspiración con vacío.
• Todos los trabajadores deben protegerse de la
9) Mantenimiento vacío
exposición al óxido de etileno ya que es muy tóxico
10) Interrupción de aspiración vacío.
para la piel, ojos y mucosas. Por otra parte, este gas
es inflamable, explosivo y carcinogénico.
Se tiene que sacar todo el gas que hay en la cámara
• Colocar el material a esterilizar en cestas para
antes de poder sacar los utensilios esterilizados, de
facilitar la carga y descarga del equipo y además
no ser así uno se expone a inhalar el remanente de
minimizar la exposición del operador al óxido de
los gases e intoxicarse.
etileno.
• Dentro de las cestas los materiales se deben
colocar de manera que se permita la libre
 Formaldehido (FH) Se divide en etapas:
- Usa vapor a presión SUBatmosférica
• El formaldehido gaseoso combinado con vapor a - Evacuación de aire – Entrada de vapor (calienta
baja presión se emplea para esterilizar equipos la carga)
sensibles al calor. (se usa menos que el EtO) - Esterilización:
• La temperatura, concentración, distribución y o COMIENZA liberación de FH (vaporización
presión del formaldehido afectan la eficacia del con camisa de vapor) y
proceso de esterilización. o CONTINÚA:
• Se utilizan pastillas de para formaldehido o  a) Mantención de condiciones
formalina, las cuales se calientan levemente y  b) Serie de ciclos evaluación/admisión de
empiezan a desprender gases. Esta acción FH + vapor.
esterilizante se alcanza en unas 36 hrs. - Camisa de agua mantiene la Tº es igual a:
• En estado líquido (formalina), se obtiene o vapor+ condensado  canal de drenaje
comercialmente en solución al 37%, y se utiliza para - Eliminación del vapor de FH con vapor limpio
conservar tejidos frescos y, para inactivar virus en la - Secado carga Evaluación/Admisión de aire
preparación de vacunas, ya que interfiere poco en filtrado estéril.
la actividad antigénica microbiana.
Comparación entre esterilización con óxido
de etileno y formaldehido/vapor

Ventajas EtO sobre Ventajas FH/vapor a

FH/vapor a baja Tº baja Tº
Mayor aceptación Menor peligro, no es
regulatoria internacional inflamable.
Mejor penetración en Ciclos de menor tiempo
gomas y plásticos
Formación polímeros Manipulación soluciones
sólidos  lenta acuosas  gas.
No cilindros con gas
LARGOS tiempos de ---
exposición  Esteriliza a
Tº ambiente.
Deterioro de productos ---
MUY BAJA.

Gráfico de Presión Subatmosférica vs tiempo (min).
La presión es 100 la base y 0 la más alta.
Desventajas
• Produce vapores altamente irritantes, tóxicos y
carcinogénicos, además de tener escaso poder de
penetración.
• Por todo esto no se utiliza en el laboratorio como
un desinfectante común.
• Utilizado en concentraciones elevadas (37%)
tiene acción esporicida; para la preparación de
vacunas se utiliza formalina al 0.2 o 0.4%.

Hay que preocuparse de la desorción de gas desde OZONO (O3)

el material esterilizado, no se retira
inmediatamente después del proceso.
• Debido a la poderosa acción oxidante del ozono,
su principal uso es en la desinfección de sustancias
sólidas, líquidas y gaseosas.
• Así mismo posee acción antimicrobiana con
poder bactericida, viricida y esporicida penetrando
la pared celular de los microorganismos para
finalmente destruirlos.
• En concentraciones muy elevadas puede
emplearse para esterilización de instrumental
médico.
• En concentraciones muy bajas se usa para
desinfección de agua.
• El ozono debido a su rapidez, fácil aplicación y
economía presenta notables ventajas frente a los
sistemas tradicionalmente utilizados.
• Por lo general se emplea para potabilizar el agua,
saneamiento de ambiente hospitalario,
conservación de alimentos y medicina termal.
• Existen dos formas de obtener el ozono en la
industria, el método más generalizado consiste en
hacer pasar aire a través de unos tubos de vidrio
con
superficie metalizada dispuestos de forma
concéntrica llamados ozonizadores otra forma
consiste en irradiar aire con luz ultravioleta o como
subproducto de la destilación de agua.
• El esterilizador de ozono está conectado a una
fuente de oxígeno, fluye a la cámara en una
concentración del 6 al 12%. Penetra en la cámara
del esterilizador por sistema de vacío.
• La duración del ciclo se va de 15 a 60 minutos,
dependiendo del material a esterilizar y la carga.
• Su funcionamiento es sencillo y económico,
utilizando oxígeno, agua y red eléctrica.
• La esterilización con ozono es una alternativa para
la esterilización con EtO, para la mayoría de los
artículos sensibles al calor y la humedad. No afecta
al titanio, cromo, silicona, neopreno y al teflón.
• La esterilización con ozono NO requiere de
aireación, no deja residuos y se convierte en
oxígeno en poco tiempo.
• El ozono puede resultar corrosivo al acero, hierro,
cobre, latón y aluminio, y destruir artículos de
goma, látex y plásticos.
Peróxido de Hidrógeno (H2O2)
• Agente oxidante
Mecanismo de acción: oxidan los grupos sulfhidrilo
(SH) a disulfuro (SS), lo que inactiva las enzimas que
los poseen.
• Además, produce la formación de radicales libres
hidroxilos, que contribuyen a desestabilizar las
moléculas celulares.
• Utilizado en solución al 3% es de escasa y breve
actividad como antiséptico, ya que es rápidamente
inactivado por las enzimas catalasa, tanto de los
microorganismos como las tisulares.
• En soluciones estabilizadas al 10% actúa como
desinfectante de alto nivel. Se utiliza sobre
dispositivos médico-quirúrgicos, lentes de contacto
de plástico blando, etc.
• Otra forma de utilización es en combinación con
ácido peracético para esterilizar maquinarias (por
Ej.: equipos de pasteurización). El peróxido de
hidrógeno en solución al 30% y luego vaporizado,
se utiliza para esterilizar superficies (por Ej.: cabinas
de seguridad).
• Es un proceso de esterilización química a baja
temperatura.
• Condiciones que deben concurrir: tiempo,
presión y temperatura.
- La esterilización se lleva a cabo en cámaras
específicas.
- El agente esterilizante es el peróxido de
hidrógeno y actúa mediante el mecanismo de
oxidación de las proteínas celulares
produciendo la muerte de los organismos.
- El fundamento es la difusión de peróxido de
hidrógeno en fase plasma (estado entre líquido
y gas).
- Se utiliza para material termosensible.
 Controles de Esterilización
Los controles de esterilización se pueden clasificar
en tres grupos:
• Monitores Físicos
• Indicadores químicos
• Indicadores biológicos
Controles de Controles Monitorean el
Esterilización fisicoquímicos proceso de
Controles Esterilización
biológicos
Controles de Transferencia a Monitorean el
Esterilidad medios de material
cultivo esterilizado
Test de
promoción del
crecimiento
Teste de
Bacteriostasis
Filtración por
membranas

El gráfico es de [H2O2] mg/L vs tiempo del ciclo. La
letra vertical derecha es Humedad relativa (%) 50 y
100.
El pequeño cuadro del gráfico dice:
- Punto de condensación (línea punteada
recta)
- Concentración del gas (línea gruesa)
- Humedad Relativa (línea delgada)
La fase del ciclo (pequeño cuadro bajo el gráfico):
- (izquierda) Deshumidificación
- Condición
- Esterilización
- aireación
Indicadores Físicos, Químicos y Biológicos para
esterilización
• Son controles que se realizan sobre el método de
esterilización.
• Monitorean o controlan si el proceso de
esterilización funciona correctamente.
• En la actualidad no es suficiente someter los
materiales al proceso de esterilización, sino que
además se requiere cierto grado de seguridad en
la eficiencia del procedimiento.
Monitores Físicos:
- Son elementos incorporados al esterilizador
como termómetros, manómetros de presión,
sensores de carga, válvulas y sistemas de
registro.
- Estos monitores físicos son de gran utilidad,
pero no son suficientes como indicadores de
esterilización.
- Deben ser calibrados periódicamente.
Indicadores Químicos:
- Los indicadores químicos son productos
comerciales consistentes en sustancias
químicas que cambian de color si se cumple
un elemento clave del proceso de esterilización
como por ejemplo la temperatura necesaria.
- Un indicador es una sustancia natural o
sintética que añadida a la muestra sobre la
que se desea realizar el análisis produce un
cambio físico que es apreciable por los
sentidos (generalmente, un viraje de color).
- Algunos indicadores requieren más de un
parámetro como cierto tiempo de exposición
y humedad para cambiar de color.
- Pueden ser fabricados de papel especial, cintas
autoadhesivas o consistir en tubos de vidrio
con líquidos especiales.
- Todos estos indicadores tienen la desventaja
que pueden reaccionar cambiando de color
aun cuando no se han dado los parámetros
necesarios para obtener la esterilización.
- Los indicadores químicos son diferentes de
acuerdo con el proceso utilizado (calor seco,
húmedo o gas).
Indicadores Biológicos:
- Preparación caracterizada de un
microorganismo específico resistente a un
proceso de esterilización en particular.
- Los indicadores biológicos se utilizan como
auxiliares en:
o La operación de la calificación física de
aparatos de esterilización.
o En el desarrollo y establecimiento de un
proceso de esterilización para un producto.
o En la verificación periódica de esterilización
validada de un equipo, materiales y
componentes de empaque que se empleen en
procedimientos asépticos
o En programas de verificación periódica de
ciclos de esterilización previamente
establecidos y documentados.
- Los indicadores biológicos pueden presentarse
principalmente en dos formas en las cuales se
utiliza un cultivo de un microorganismo de una
especie conocida.
o En una de las presentaciones, las esporas de
adicionan a un soporte (disco o tira de papel
filtro, vidrio o plástico) y se empaca tanto para
mantener la integridad del soporte inoculado,
como para permitir que el agente esterilizante
ejerza su efecto sobre el empaque individual.
o Otra presentación es cuando las esporas se
adicionan a unidades de lote por esterilizar
(producto sin inocular) o a unidades similares;
el producto inoculado no afecta
negativamente las características de
germinación de las esporas viables.
- Cuando el producto por esterilizar es un líquido, en
el cual no es práctico adicionar el indicador
biológico a las unidades seleccionadas, las esporas
viables pueden agregarse a un producto simulado
cuya resistencia al proceso de esterilización no
difiere a la presentada por el producto por
esterilizar.
- La selección del indicador biológico es crítica y
requiere del conocimiento de su resistencia al
proceso específico de esterilización.
- Cuando es utilizado bajo características de
operación representa un desafío al proceso de
esterilización que excede al reto de la carga
microbiana natural presente en el producto.
- Las características de un indicador biológico se
definen utilizando aparatos especiales y
perfectamente calibrados, bajo condiciones
estrictamente establecidas.
Indicadores biológicos en tiras de papel para
esterilización por calor seco.
Son Preparaciones de esporas viables obtenidas a
partir de un cultivo derivado de una cepa específica
de Bacillus subtillis subespecie niger (ATCC 9372).
Indicadores biológicos en tiras de papel para
esterilización por vapor
Son preparaciones de esporas viables obtenidas a
partir de un cultivo derivado de una cepa especifica
de Bacillus stearothermophilus.
Selección de indicadores para procesos de
esterilización específicos
• La selección de un indicador biológico requiere el
conocimiento de la resistencia del sistema
indicador biológico con respecto al proceso de
esterilización específico.
• Se debe establecer que el sistema indicador
biológico ofrece mayor resistencia al proceso de
esterilización que la correspondiente a la carga
microbiana natural presente en el producto.
• El uso eficaz de indicadores biológicos en el ciclo
de desarrollo, proceso y validación del producto y
en el control de la producción de rutina de un
proceso de esterilización requiere un profundo
conocimiento del producto que se va a esterilizar y
de sus componentes.
• En el desarrollo o la validación de un proceso de
esterilización solo se deben usar los indicadores
biológicos ampliamente reconocidos en la
monografía del indicador biológico específico.
Indicadores Biológicos por proceso
• Calor húmedo: con frecuencia se utilizan esporas
de cepas adecuadas de Bacillus
stearothermophilus, Clostridium sporogenes,
Bacillus subtilis y Bacillus coagulans.
• Calor seco: Algunas veces se emplean esporas de
Bacillus subtillis.
• Radiación ionizante: las esporas de Bacillus
pumilus se han usado para controlar los procesos
de esterilización que emplean radiación ionizante;
sin embargo, esta práctica se está abandonando.
• Óxido de etileno: habitualmente se emplean
esporas de una subespecie de Bacillus subtilis.
• Peróxido de hidrógeno en fase de vapor: Bacillus
sterothermophilus es el indicador biológico más
utilizado para validar el proceso.

El profe dijo que el verde es amarillo, el tubo tiene

bacterias, se hace el proceso de esterilización y
después se deja a cultivar (dentro del tubo), si el
tubo cambia de color es porque hubo crecimiento
bacteriano y el proceso de esterilización queda
rechazado (carita triste), se pone morado (el tubo
de al lado con tapa café).

Los controles físicos son para verificar cómo

funcionan los equipos, como la autoclave y otros,
para que sean correctamente monitorizados.