PROTEÓMICA

Objetivos
• Sistemático: estudio global de la expresión
proteica, es decir, identificación de todas las
proteínas en referencia a un estado fisiológico
determinado.
• Pragmático: propone comparar la
expresión proteica de dos situaciones
fisiológicas y establecer mapas
bidimensionales.
¿Cómo se caracteriza una mezcla
proteica?
1. SEPARAR LAS PROTEÍNAS
• Preparar la muestra.
• Técnicas de separación:
 Electroforesis 1D 2D.
 Cromatografía
2. MEDIR ALGUNA PROPIEDAD INTRINSECA:
• Masa, espectrometría de masas.
3. COMPARACIÓN CON BASES DE DATOS.
• PMF = Peptide Mass Fingerprinting.
Geles bidimensionales
Anticuerpo
Primario

Anticuerpo
Secundario
Purificación de proteínas
Métodos
Propiedad Método

Carga Intercambio Ionico -Ion exchange (IEX)

Reconocimiento de Cromatografía de afinidad - Affinity

ligando chromatography (AC)

Tamaño Filtración en gel - Gel filtration (GF)

Hidrofobicidad Interacción hidrofóbica - Hydrophobic

interaction (HIC),
Fase reversa - Reversed phase (RPC)

Punto Isoelectrico Cromatoenfoque -Chromatofocusing

Intercambio iónico
• Separa proteínas de acuerdo a la carga de la superficie
• Basado en la interacción entre la carga de la proteína y la
carga opuesta en la columna
• Catiónicas
• Aniónicas
Gel filtration
chromatography (GF)
• Separación de proteínas de diferentes tamaños
• GF no es un método de unión
Cromatografía de afinidad
• Basado en la interacción reversible específica entre
una proteína y su ligando
• Anticuerpos, proteínas de unión
• IMAC (Inmobilized Metal Affinity chromatography)