Higiene y Microbiología

Alimentaria
Preparación y Reconocimiento de Medios de Cultivo

Docente : Jenny Jimenez Garay

Email : jimenezgaray_jm@hotmail.com
Resumen de la sesión anterior

➢ Para Salmonella mas que su cuantificación se realiza su detección en el alimento ya que

su sola presencia es significativo de peligro alimenticio, mientras que para Salmonella y V cholerae , se detecta
y también se puede cuantificar.

➢ Los métodos de recuento utilizado para Salmonella y V cholerae es recuento en placa y NMP

Preparación y Reconocimiento de Medios de Cultivo

 Logro de la sesión:

• Al finalizar la sesión el alumno debe reconocer los diferentes tipos de medios de

cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio.
• Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.
• Identificar los principales medios de cultivo según su composición y consistencia, así
como reconocer la utilidad de estos en el trabajo microbiológico

Preparación y Reconocimiento de Medios de Cultivo

 Preparación de medios de cultivo -Video

Observa este video

https://www.youtube.com/watch?v=miga09gVMyY

Preparación y Reconocimiento de Medios de Cultivo

 Medio de Cultivo .

➢ Definicion
un medio de cultivo es un sustrato natural o artificial o una solución que
contiene ciertos nutrientes necesarios que permiten cultivo y desarrollo de
microorganismos de una manera más eficiente para su posterior uso en el
laboratorio, debiendo ser parecidos o mejores, en lo posible, al medio
natural en los que viven y se reproducen. Sus componentes básicos deben
satisfacer las mínimas exigencias nutricionales para el crecimiento
microbiano y varían según el tipo de bacteria.

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 ➢ Condiciones generales de un medio de cultivo:

• Disponibilidad de nutrientes adecuados.

• pH adecuado.
• Consistencia adecuada del medio
• Presencia o ausencia de oxigeno
• Condiciones adecuadas de humedad
• Temperatura
• Esterilidad del medio.

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 ➢ Componentes de los medios de cultivo

• Agar-Agar , agente solidificante

• Extractos
• Peptonas
• Agua (destilada o deionizada).
• Fluidos corporales.
• Sistemas amortiguadores
• Sales minerales.
• Agentes selectivos: colorantes, sales biliares, , NaCl,
• Suplementos o factores de crecimiento: aminoácidos, vitaminas.

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 ➢ CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

❖ Por su consistencia o estado físico:

▪ Medio Solido
▪ Medio Liquido
▪ Medio semi solido

❖ Según las sustancias primarias los medios de cultivo:

• Medios Naturales
• Medios sintéticos
• Medios Semi Sintéticos
• Medios Vivos

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❖ De acuerdo a los nutrientes en:
• Medios Simples
• Medios Enriquecidos
• Medios Selectivos
• Medios Diferenciales

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 ➢ Clasificación de los Medios de Cultivo .Observa este video

https://www.youtube.com/watch?v=HnRbriYrHHw&t=190s

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 ❖ Por su consistencia o estado físico:

Medios líquidos: (Caldos de Cultivo)

Carecen de un polisacárido denominado agar-agar extraído de algas marinas del
género Gellidium sp. un medio típico es el caldo nutritivo o el caldo BHI.
Al crecer en un medio líquido un microorganismo utiliza los compuestos del mismo,
así como excreta los productos metabólicos en él y puesto que en el medio
originalmente no contenía estos productos sirven como una ayuda para la
identificación del microorganismo en cuestión. Así ciertos microorganismos originan
un producto denominado indol formado a partir de triptófano presente en la
peptona por lo que cultivando estos microorganismos en un medio rico en nitrógeno
(peptona) y exento de indol pueden efectuarse pruebas con objeto de comprobar si
el microorganismo cultivado es o no productor de indol. Ejm.: Caldo nutritivo, caldo
selenito, caldo peptonado.

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• Medios sólidos:
Usados frecuentemente para aislar microorganismos,
Los microorganismos se multiplican localmente en el punto de la inoculación y forman
colonias cuya apariencia frecuentemente es típica de cada especie determinada.
Para conseguir medios sólidos se agrega a un medio líquido agar en una proporción del
1.5% al 2%.
Hoy en día se presenta en forma de polvo que incluye el agar,
La gelatina también puede emplearse como agente solidificante, forma un gel de buenas
características a concentraciones de 12-15% en caldo nutritivo.
Muchas bacterias producen fermentos proteolíticos y su capacidad de licuar la gelatina se
utiliza para clasificar los microorganismos con facultad de producir la licuefacción cuando
crecen a 37ºC o a temperaturas de laboratorio.
.

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Medio semisólidos:
Son medios que usualmente contienen una pequeña cantidad
de agar, esta cantidad promedio es de 0.5%, estos medios son
muy usados para determinar la movilidad de un
microorganismo gracias a su escaso poder retenedor, es decir,
que no impiden que el microorganismo móvil se desplace por
el medio. Ejm.: Agar SIM, agar MIO.

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 ❖ Según las sustancias primarias los medios de cultivo :

Medios naturales: son aquellos empleados tal como se encuentran en la naturaleza para cultivar
microorganismos, como ejemplo la leche, los extractos vegetales o la sangre diluida.
Medios sintéticos: como su nombre lo indica son medios que han sido creados por el hombre y por lo tanto
se conoce su formulación completamente, son utilizados para el cultivo de microorganismos coincidiendo
de antemano los requerimientos nutricionales que estos organismos necesitan. Como ejemplo todos los
medios deshidratados que distribuyen las casas comerciales

Medios semisintéticos: son medios de cultivo que llevan una mezcla de medio naturales y medios artificiales, ya que
algunos de los componentes pueden ser susceptibles a los tratamientos empleados durante la elaboración de estos
medios o tratamientos posteriores. Como ejemplo: el agar Baird Parker o el agar sangre.

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Medio vivos:
Contienen células u organismos vivos Ejemplos :las células de riñón de mono, huevos embrionados o
células de intestino de cobayos y conejos.
Muchos microorganismos tienen la capacidad de crecer o utilizar material inorgánico en su metabolismo
como el CO2, (microorganismos autótrofos),
otros requieren para crecer de la presencia de sustancias orgánicas, es decir no son capaces de utilizar el
CO2
. Algunos de estos son heterótrofos se pueden desarrollar sobre medio sencillos sin demasiados
nutrientes, algunos por el contrario requieren de una cantidad suficiente o aún mucho más para poderse
desarrollar.
En otros casos se requieren de medio muy elaborados con una capacidad de diferenciar e identificar al
mismo tiempo alguna clase o clases de organismos, para ellos se han desarrollos medios que gracias a la
presencia de sustancias especiales los hacen únicos ya que el crecimiento de ciertos grupos de
microorganismos provoca una reacción específica como el cambio del color del medio o el crecimiento
diferencial de estos microorganismos en cuanto al color de la colonia.

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 ❖ De acuerdo a los nutrientes en:

Medios simples: son medios que poseen los nutrientes mínimos para permitir el desarrollo de microorganismos menos exigentes, por
ejemplo :el caldo nutritivo o el agar nutritivo.
Medio enriquecidos: son aquellos medios a los cuales se les han incorporado sustancias que proporcionan características
complementarias nutritivas para que el medio pueda servir como sustrato para los microorganismos más exigentes. Estos medios,
tales como agar sangre, suero o chocolate en caldo o en agar, se emplean para conseguir el crecimiento de aquellos microorganismos
sensibles que no crecen en medios corrientes.
Medios selectivos: son aquellos medios a los que se les incorporan sustancias para inhibir al crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos con excepción de aquellos para los que fueron ideados, por ejemplo, el medio telurito para el bacilo productor de la
difteria y el agar citrato-dexosicolato para los grupos de Salmonella sp y Shigella sp.
Medios diferenciales: son medios que contienen sustancias o indicadores que permiten la diferenciación de un microorganismo a
otro. Por ejemplo, el agar MacConkey permite distinguir los microorganismos fermentadores de la lactosa de los no fermentadores
por la coloración que toman. Otro ejemplo claro de estos medios es el agar sangre que permite distinguir los microorganismos que
lisan o producen hemólisis de los eritrocitos de aquellos que no son, es decir, que al mismo tiempo se pueden distinguir
microorganismos productores de hemólisis alfa, beta o gamma.

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 Preparación de Medios de cultivo

• la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados; normalmente

bajo la forma de liofilizados
• Los medios de cultivo deben ser mezclados o hidratados .El agua que se utiliza
para su mezclado o reconstitución debe ser destilada o desmineralizada. Para ello
debe:
• pesarse la cantidad deseada del medio de cultivo, mezclar con la cantidad de agua
requerida y agitar vigorosamente hasta obtener un dilución homogénea,
• Los medios de cultivo que no contienen agar ni gelatinas, (líquidos) pueden ser
disueltos en agua fría o ligeramente caliente. Pero si contienen alguna de las dos
sustancias deben ser calentados hasta ebullición para solubilizar el agar..
• Normalmente si se trabaja con agua neutra el pH debe coincidir con el rótulo del
medio comercial, pero si no es así debe corregirse para lograr el pH adecuado.
• Antes de distribuirlo en los recipientes definitivos, enfriar a 50ºC-60ºC, ya que el
agar hirviendo es peligroso de manejar, puede rajar el vidrio frío y dar lugar a
condensaciones excesivas.
• Se esteriliza por autoclave o por ebullición de acuerdo a las instrucciones para
cada preparación
• Una vez estéril los medios de cultivo debe ser enfriados a temperatura
promedio de 45º - 55ºC para ser adicionados en los recipientes finales
teniendo en cuenta nuevamente las técnicas asépticas.
Preparación y Reconocimiento de Medios de Cultivo
Verifiquemos lo aprendido

1.-¿Que es un medio de cultivo?

2.-¿Cuál es la función de un medio de cultivo?

3.-¿Qué es el agar y de donde se obtiene?
4.-¿Cómo se clasifican los medios de cultivo según su consistencia?
5.-.-¿Cómo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a sus nutrientes?
6.-Que pasos se debe tener en cuenta para preparar un medio de cultivo?

Preparación y Reconocimiento de Medios de Cultivo

 Conclusiones

• Los medios de cultivo es un sustrato natural o artificial o una solución que contiene ciertos nutrientes necesarios que
permiten cultivo y desarrollo de microorganismos
• Las condiciones generales de un medio de cultivo son: disponibilidad de nutrientes , pH ,Consistencia
adecuada del medio, Presencia o ausencia de oxigeno,Condiciones adecuadas de humedad,adecuada
Temperatura , Esterilidad del medio.
• Los componentes de los medios de cultivo son : Agua ,Extractos,Peptonas.,Fluidos corporales.,Azúcares.,
Sistemas amortiguadores,Sales minerales,Indicadores de pH., entre otros
• Los medios de cultivo se clasifican según su consistencia,las, sustancias primarias que lo componen, y de
acuerdo a los nutrientes que contienen

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