Mecanismos celulares de toxicidad 2

CONSECUENCIAS TOXICOLÓGICAS DEL ESTRÉS
OXIDATIVO
El estrés oxidativo ocurre cuando la célula ya no es capaz
de compensar el aumento de especies reactivas de
oxígeno, las consecuencias de este proceso están dadas
por las características de las ROS, que interactúan con
macromoléculas con alta densidad de electrones.
 El efecto más relevante es la oxidación de proteínas y
lípidos (peroxidación lipídica), que se encuentran en
mayor proporción en la célula. El daño en el DNA
ocurre cuando la concentración de ROS es muy alta.
 Las ROS se producen de forma fisiológica en
cantidades bajas, y su función es activar vías de
señalización protectoras, pero cuando aumentan de
forma excesiva (en presencia de algún tóxico), se
activan vías de señalización que regulan genes
relacionados a la muerte celular o apoptosis.
 La defensa antioxidante puede ser regulada o
inducida por activación transcripcional → los ROS
actúan como segundos mensajeros, ya que su
aumento también activa las vías de señalización para
la producción de moléculas antioxidantes.
se puede determinar en orina. Esta forma alterada
puede aparearse mediante 2 puentes de hidrógeno
con las adeninas, en lugar de formar 3 puentes con la
citosina → como consecuencia, la célula al replicarse
puede morir por apoptosis o continuar a formar un
tumor.
 El tipo de ADN más susceptible a daño oxidativo es el
ADN mitocondrial, ya que carece de cromatina, y la
mitocondria es una de las estructuras donde se
forman las ROS y la exposición a estas es mayor.
Además, la mitocondria tiene menor capacidad de
reparación del ADN que el núcleo.
 Otras clases de daño oxidativo en el DNA son:
oxidación de residuos de azúcares (causa la ruptura
de las hebras del DNA) y entrecruzamientos entre el
DNA y proteínas.
 Glutatión: molécula antioxidante que participa en los
procesos de detoxificación de ROS.

Daño oxidativo de proteínas

Modificaciones oxidativas reversibles: modulan las

Daño oxidativo en el DNA:
Importantes en procesos de mutagénesis y neoplasias. Si
la oxidación de bases nitrogenadas persiste en el tiempo
y no es reparada, al replicarse esta célula con errores en
el código genético puede inducir la formación de un
tumor. Uno de los mecanismos de protección de la célula
ante el daño oxidativo es la muerte celular por apoptosis,
pero también puede ocurrir mediante necrosis.
 La base nitrogenada más susceptible a oxidación es la
base de guanina, y se puede utilizar como marcador
de daño oxidativo: el radical hidroxilo oxida la base de
guanina a 8-hidroxi-desoxiguanosina, molécula que
funciones fisiológicas de las proteínas que actúan como
interruptores redox moleculares, y existe maquinaria
enzimática para recuperar las moléculas oxidadas.
Ejemplo: Glutatión.
 Acido sulfónico: se forma en proteínas que tienen
residuos de cisteína y metionina (contienen grupos
sulfhidrilos) o tirosina, tienen alta densidad
electrónica y pueden ceder los electrones a las
especies oxidantes (como H2O2). El ácido sulfónico
puede interactuar con otros grupos sulfhidrilos y
crear puentes disulfuro (en la misma proteína o con
otras), lo que altera la estructura y concluye en la
pérdida de la funcionalidad → Los aminoácidos son
blancos toxicológicos para las ROS.
Modificaciones oxidativas irreversibles: ocurren
típicamente en condiciones de estrés oxidativo y
conducen a cambios estructurales, inactivación de
proteínas, y requieren la degradación de las proteínas
oxidadas a través del proteosoma.

 Formación de proteínas con grupos carbonilo,

también pueden ser determinadas en sangre como
marcador de estrés oxidativo.

El radical peróxido lipídico puede abstraer hidrógenos de

otros lípidos cercanos, formando hidroperóxidos → en
presencia de metales de transición forma radicales alcoxi
(reacción de Fenton) → estos radicales se pueden
fragmentar y formar aldehídos, moléculas electrofílicas
altamente reactivas → forman aductos en el ADN y
enlaces covalentes con proteínas.

 4-OH-Nonenal (4HNE) y malondialdehido (MDA)

sirven como marcadores de peroxidación lipídica en
Daño oxidativo de lípidos o Peroxidación Lipídica:
plasma, o in vitro.
Ocurre principalmente en lípidos de membrana, este tipo
Esquema general de los efectos de ROS en una célula:
de daño altera la permeabilidad de estas y en
consecuencia el equilibrio de electrolitos. El daño en
lípidos producido por radicales de oxígeno se amplifica y
propaga fácilmente, y sus productos (radicales alcoxi- o
aldehídos) son tóxicos.

Pasos de la peroxidación lipídica: abstracción de un

hidrógeno por un ROS → genera un radical dieno capaz
de formar un conjugado dieno → en presencia de oxígeno
forma un radical peróxido lipídico → reacción en cadena
que se propaga por la membrana.
UNIÓN COVALENTE DE METABOLITOS REACTIVOS A
MACROMOLÉCULAS CELULARES

Las moléculas tóxicas tienden a ser sustancias

electrofílicas, capaces de generar uniones covalentes con
macromoléculas y generar un efecto tóxico. Pueden ser
electrofílicas no iónicas y electrofílicas con carga positiva,
principalmente metales (cationes).

Sustancias electrofílicas no iónicas:

 Aldehídos: pueden generar uniones covalentes con

proteínas y ADN, se puede formar como producto del
metabolismo del etanol, causante de la fibrosis y
cirrosis hepática y cáncer esofágico, responsable de
la resaca y del efecto vasodilatador de la ingesta de
 etanol. La enzima más importante para su formación endógeno, que aporta grupos sulfhidrilos, formando
es la alcohol-deshidrogenasa, el acetaldehído es una complejos inactivos que pueden ser eliminados vía renal.
molécula oxidante que puede generar estrés Al interactuar con otras proteínas, los aductos que se
oxidativo. forman en el proteínas disminuyen su funcionalidad, y
 Aldehídos α-β-Insaturados: Algunos ejemplos son el suele ser irreversible.
MDA e hidroxilonenal, productos de la peroxidación
 La quinoneimina del paracetamol se puede medir en
lipídica. Forman aductos en el ADN (mutagénicos) y
sangre como un marcador de intoxicación por
pueden unirse a proteínas, alterando su
paracetamol.
funcionalidad. La acroleína es un metabolito de la
 Los niveles de glutatión se pueden ver afectados por
ciclofosfamida (por CYP450), causa cistitis
la dieta, los ayunos prolongados, el estrés oxidativo,
hemorrágica ya que se acumula a nivel renal. Pueden
el lugar del organismo en el cual haya toxicidad (se
ser moléculas altamente electrofílicas, y reaccionan
encuentra en mayor cantidad en el hígado), por lo
con macromoléculas cercanas (no se distribuyen a
que hay órganos que pueden presentar mayor
otras zonas), su blanco toxicológico puede ser incluso
toxicidad que otros a menor dosis, como el SNC o el
la isoforma CYP450 que metabolizó la ciclofosfamida.
corazón.
Pueden interactuar con los residuos de cisteína o
 Cuando la NAPQI interactúa con proteínas
metionina de proteínas.
mitocondriales de la cadena transportadora de
 Quinonas y quinoneiminas: Quinonas entran en ciclos
electrones, además de aumentar el estrés oxidativo,
redox y pueden formar ROS, quininas son moléculas
disminuye la eficiencia de la respiración celular, lo
electrofílicas y pueden interactuar con
cual disminuye el ATP disponible en la célula, y lleva a
macromoléculas. El metabolismo por fase 1 del
la célula a la muerte por necrosis → este proceso
paracetamol forma quinoneiminas, y produce
puede darse con otras sustancias electrofílicas, no
necrosis de los hepatocitos.
solo con el paracetamol.
 Epóxidos: se forman por reacciones del metabolismo
de químicos por enzimas CYP450, forman aductos
con el DNA (enlaces con bases nitrogenadas),
ejemplos son aflatoxina y benzopireno. Pueden
interactuar con grupos tioles.

Las interacciones entre sustancias electrofílicas y

nucleofílicas son muy selectivas, puede haber
interacciones fuertes y débiles.

Unión covalente a proteínas

Ejemplo: Paracetamol – genera especies reactivas de

oxígeno, forma aductos con proteínas, forma alteraciones
en el ADN, activa enzimas que son importantes en los
procesos de toxicidad. Un 2-5% del paracetamol se
metaboliza mediante CYP450 en una quinoneimina
(NAPQI), capaz de interactuar con grupos tioles o
sulfhidrilos de proteínas y generar aductos. Una proteína
con la que puede interactuar es el glutatión, antioxidante
Consecuencias toxicológicas de la unión a proteínas:
 Alteración en las funciones críticas de la proteína
 Señalizaciones de estrés → median muerte celular.
 Depleción del sistema antioxidante.
 Modificación de proteína a neoantígeno.
 Degradación acelerada de proteínas.
Unión covalente al ADN
Las 4 bases nitrogenadas pueden reaccionar con
metabolitos electrofílicos, la guanina es la más
susceptible a la formación de aductos y uniones
covalentes. Los blancos toxicológicos en el ADN son zonas
densas en electrones, como átomos de nitrógeno y
oxígeno de los ácidos nucleicos.
 Aflatoxina adquiere un epóxido al ser metabolizada
por CYP450, estructura muy electrofílica, y puede
unirse covalentemente al N7 de la guanosina; el
benzopireno se puede unir al N2 y aminas aromáticos
al C8 de la guanosina. Si esta unión no es reparada
(por escisión de bases) puede generar apareamientos
incorrectos entre las bases nitrogenadas, como
guanosina con adenina, y este apareamiento, de
mantenerse en la replicación, puede ser una
mutación carcinogénica.
 Mutaciones importantes para la carcinogénesis:
mutaciones en proteína p53 o en RAS, que regulan la
proliferación celular. Marcadores bioquímicos en
ciertos tipos de cáncer.
Metabolismo y toxicidad del benzopireno
El benzopireno es una molécula abundantemente
presente en el humo de cigarrillo, causante de la
aparición de cáncer pulmonar en pacientes con
tabaquismo crónico. En su estructura hay una región
bahía, donde, entre los carbonos C7 y C8, al ser
metabolizados por CYP450 adquieren un grupo epóxido,
este metabolito es electrofílico. Algunas enzimas como la
epóxido hidrolasa pueden inactivarlo (formando
dihidrodiol), para que sea conjugado por fase 2 y
eliminado, pero este metabolito también es sustrato de
CYP450, que genera el metabolito tóxico final, con un
impedimento estérico que lo hace no accesible para la
epóxido hidrolasa. Dependiendo de la cantidad de
metabolito tóxico, pueden formar aductos con el N2 de la
guanosina, generando mutaciones.
 Mecanismo específico: genera una mutación
específica en el codón 12 del oncogen RAS, que trae
como consecuencia el cáncer pulmonar tras
exposición a benzopirenos.
 Benzopirenos también son capaces de generar estrés
oxidativo por formación de ROS.
Mecanismos antioxidantes
Funciones de los antioxidantes: Proporcionar scavengers
para ROS y RNS, es decir, ser atrapadores o
neutralizadores de las especies reactivas de oxígeno y
nitrógeno. Mantener el estado redox del tiol celular en
forma reducida. Prevenir y/o reparar la oxidación de
lípidos. Secuestrar metales con actividad redox y prevenir
reacciones de tipo Fenton (agentes quelantes).
Mecanismo de acción del Glutatión:
Tripéptido de glutamato, cisteína y glicina, el residuo CIS
aporta el grupo sulfhidrilo necesario para unirse a las
moléculas oxidantes, y así disminuir el efecto tóxico de los
radicales libres o de sustancias electrofílicas. Existe un
pool o cantidad disponible de glutatión citosólico,
glutatión mitocondrial y nuclear.
 Una vez que interactúa con moléculas oxidantes, se
forma glutatión oxidado, y forma puentes disulfuros
con otra molécula de glutatión, y deben ser
restauradas para continuar con su función.
 El glutatión interactúa con radicales libres o
moléculas producto de peroxidación lipídica,
generando moléculas que pueden ser eliminadas vía
renal y no son tóxicas.
 La síntesis de novo de glutatión es catalizada por la γ-
glutamilcisteína sintetasa y la glutatión sintetasa, que
también sirven como marcadores de estrés oxidativo.
o El glutatión oxidado (GSSG) se regenera
fácilmente a glutatión (GSH) por la glutatión
reductasa, un proceso que es impulsado por
NADPH, por lo tanto, cualquier alteración que
lleve a una disminución en la formación de estos
cofactores reductores va a traer como
consecuencia la alteración en los procesos de
restauración del glutatión oxidado.
La homeostasis del calcio se puede ver interrumpida por:
 Las bombas y transportadores son proteínas, los
tóxicos pueden unirse y alterar su función.
 Alteraciones en la permeabilidad de membrana
Ejemplo: Butilestaño (TBT, pesticida) – tiene efecto sobre
las proteínas del retículo endoplásmico (grupos tioles),
oxidándolas, lo que causa que se formen puentes
disulfuro con otras proteínas oxidadas. Como
consecuencia, se altera la funcionalidad de estas, que
pueden ser bombas o transportadores de calcio, y
permitir la salida del calcio desde el RE al citosol y así
aumentar su concentración intracelular
permanentemente.

Sistemas enzimáticos acoplados a GHS

 Glutatión S-peroxidasa (GS-peroxidasa): glutatión se

acopla a esta enzima para favorecer la formación de
agua a partir de H2O2.

Proteínas dependientes de calcio: las calpaínas son

 Tioltransferasa: en presencia de glutatión, puede
proteasas que regulan la función de otras proteínas,
restaurar una proteína oxidad con puentes de
dependen del calcio para ser activadas, un aumento del
disulfuro. Si no hay suficiente glutatión en el medio,
calcio intracelular sostenido las activa, llevando a la
la proteína no se restaura y pasa a ser degradada.
hidrolisis excesiva de proteínas del citoesqueleto
Interrupción de la homeostasis del calcio intracelular. (vimentina, queratina, espectrina), alterando
completamente su integridad. Además, un sustrato de la
Los aumentos de calcio intracelular transitorios son calpaína son las caspasas, que señalizan muerte celular
necesarios para funciones fisiológicas de la célula, sin por apoptosis.
embargo, cuando hay un aumento del calcio intracelular
sostenido en el tiempo, es una señal de toxicidad. El
equilibrio de concentraciones de calcio intra/extracelular
es mantenido por transportadores dependientes del
gradiente de concentración y bombas que requieren ATP.
Activación de endonucleasas: el aumento del calcio
señaliza la activación de endonucleasas, provocando la
fragmentación del ADN y consecuente muerte por
necrosis.
Activación de fosfolipasas: causan disrupción de
membranas, daño mitocondrial.
Resumen efectos del ↑Ca2+ intracelular:
 Disminución de síntesis y aumento de consumo de
ATP.
 Disociación de microfilamentos por activación de
calpaínas.
 Activación de enzimas proteasas y nucleasas.
 Activación de caspasas y muerte celular por
apoptosis.
 Necrosis y muerte celular.