PRACTICA 1

SÍNTESIS DE FLUORESCEÍNA

HETEROCÍCLICA

QUÍMICA ÁREA TECNOLOGÍA

FARMACÉUTICA

DE LA VEGA ROMO GLENDA EDIE

ESTRADA MUÑOZ OSCAR ALBERTO
GONZALEZ DOMÍNGUEZ JUAN DANIEL
PÉREZ RANGEL XIMENA
ROSILLO SOSA ANA VICTORIA
 Obtención de fluoresceína
Objetivos

● Sintetizar fluoresceína a partir del resorcinol y ácido ftálico.

● Observar la fluorescencia en distintos medios con ayuda de la luz UV, cuál es la
reacción que ésta tiene con cada uno de los medios y también cuáles son sus
funcionamientos.

Introducción

La fluoresceína es una sustancia colorante orgánica hidrosoluble de color amarillo

perteneciente al grupo de las xantinas que produce un color fluorescente verde intenso en
soluciones alcalinas (con pH mayor a 7). Es un compuesto orgánico cuyo esqueleto
principal se conforma de 5 anillos aromáticos consecutivos. (Espinoza, 2016)
Las moléculas fluorescentes son aquellas que emiten luz visible en diferente longitud de
onda a la empleada para excitarlas y que, al cesar la radiación incidente esta deja de emitir.
Este fenómeno ocurre en 3 etapas instantáneas, las cuales consisten en absorción de luz o
radiación electromagnética incidente, disipación no radiativa y la emisión, cada una
ocurriendo en periodos muy cortos. (Morales, 2017)
Durante años, la fluoresceína 1 se ha utilizado como material de partida para crear nuevas
sondas fluorescentes que revelan actividades biológicas específicas, como la escisión
enzimática, (Guern, F., et al, -2020)
Los compuestos con fluorescencia son empleados en diferentes industrias, como aditivos
para mejorar la apariencia de colores textiles y papel, causando un efecto que es percibido
como un blanqueamiento.
Otro de sus principales usos de la fluoresceína es su uso para la detección de tumores en
pacientes con un diagnóstico médico, (Moore ,G.E, et al, 1948). Una de sus formas para
detectar la presencia de tumores en 46 pacientes con diagnóstico de un posible tumor
cerebral, se les suministro fluoresceína por vía intravenosa, y se extrajo una muestra por
medio de una biopsia, y se sometieron a luz UV, arrojando un 5% de los pacientes positivos
a cáncer cerebral, (Moore ,G.E, et al, 1948).
Materiales:

● Vasos de precipitados (50 y 100ml) ● Pipetas Pasteur

● Varilla de vidrio ● Termómetro
● Vidrio de reloj ● Embudo
● Espátula ● Perilla
● Mortero con pistilo ● Papel filtro
● Pipetas graduadas

Equipo:

● Parrilla de calentamiento
● Campana de extracción

Reactivos:

Resorcinol ● Cloruro de zinc

● Anhídrido ftálico ● Ácido clorhídrico
● Ácido sulfúrico ● Hidróxido de sodio
● Agua destilada
Procedimiento
Mecanismo de acción

● En el primer paso el par de electrones ataca al carbono de carbonilo, deslocalizando

los electrones, generando así la unión entre el resorcinol y el ácido ftálico.
● Posteriormente protonamos al hidróxido para formar una molécula de agua que es
un buen grupo saliente.
● Nuevamente una molécula de resorcinol, que previamente perdió un hidrógeno alfa,
ataca al carbono de carbonilo de la molécula del ácido ftálico, generando la salida
de la molécula de agua.
Resultados

Observación de fluorescencia en diferentes medios

Tipo de medio Observación/Fotografía

H₂SO₄

Agua destilada

NaOH
Aplicaciones de la fluoresceína:
Tiene un amplio uso en la Medicina, principalmente en la oftalmología la cual se emplea
para:
● detección de defectos epiteliales (erosiones, úlceras …) corneales desde finales del
siglo XIX.
● Tiempo de rotura lagrimal (break-up time, BUT) test para valorar el ojo seco.
● Aclaramiento lagrimal.
● Angiografías de fondo del ojo, medición de permeabilidad endotelial y epitelial,
medición de la producción de humor acuoso.
● Adaptación de lentes de contacto fijos permeables a los gases.
En investigación bioquímica
El derivado isotiocianato de fluoresceína se usa para marcar o rastrear células en
aplicaciones de microscopio de fluorescencia
Ciencias de las plantas:
Monitorear el movimiento del agua, en el agua subterránea para estudiar el flujo del agua y
observar áreas de contaminación u obstrucción en los sistemas.
Campo petrolero:
Ayuda con la detección de fugas durante las pruebas hidrostáticas de oleoductos y
gasoductos submarinos y otra infraestructura submarina.
Cosméticos:
Aditivo de color amarillo. (//www.instijlmedia.nl/, s. f.)

Discusión de resultados

La fluorescencia es descrita como el proceso de la emisión de radiación, suele verse como

una luz que viene de una sustancia, esto se debe a la reacción de los atómicos ya que recibe
un exceso de energía, en este caso, de acuerdo a Home science, hay dos compuestos
aromáticos que pueden causar este efecto, el resorcinol y el anhídrido ftálico.

Para el H2SO4, hay que saber que esta solución se usa para la determinación de
fluoresceína, por lo que debe existir una reacción que de un color como café, y de ahí se
empieza a percibir la florescencia, como se puede observar en la imagen, ya que no es un
verde ni amarillo intenso.
Los compuestos estrella anteriormente mencionados tienen una reacción directa con el agua
y se disuelve de manera rápida, esto se debe a sus grupos aromáticos y la reacción con el
H2O, con el agua destilada se pudo percibir esta reacción al instante, dándonos un color
amarillo opaco, esto debe a la reacción en los compuestos aromáticos, ya que se lleva a
cabo una sustitución electrofilica.

En el caso del NaOH, se genera un aumento en la temperatura, ocasionando que el

resorcinol y el anhídrido ftálico reaccionen entre si, en el mecanismo se genera un proceso
de condensacion lo que nos da ese color amarillo en la oscuridad.

Conclusión

En conclusión, la síntesis de fluoresceína a partir del resorcinol y ácido ftálmico fue

exitosa, obteniendo un producto de color verde brillante. Durante el experimento, se
observó que la fluoresceína presentó diferentes reacciones en diferentes medios.
En presencia de ácido clorhídrico, la fluoresceína mostró una reacción más débil, con una
menor intensidad de fluorescencia bajo la lámpara de UV. Esto puede deberse a que el
medio ácido inhibe la formación del producto final o afecta la estabilidad de la
fluoresceína.
Por otro lado, cuando la fluoresceína se expuso al hidróxido de sodio (NaOH), se observó
una reacción más intensa, con una fluorescencia más brillante y visible. Esto se debe a que
el medio alcalino favorece la formación y estabilidad de la fluoresceína, lo que resulta en
una mayor intensidad de fluorescencia.
La reacción de la fluoresceína en agua destilada puede variar dependiendo de las
condiciones del experimento. Sin embargo, en general, la fluoresceína tiende a disolverse
en agua destilada y mostrar una fluorescencia moderada bajo una lámpara de UV. La
intensidad de la fluorescencia puede ser menor en comparación con el medio alcalino
(NaOH) debido a que el agua destilada no proporciona las condiciones óptimas para la
formación y estabilidad de la fluoresceína.
En cuanto a las aplicaciones de la fluoresceína, se destaca su uso en la industria de tintes y
colorantes, así como en la investigación científica y médica. Debido a su propiedad de
fluorescencia, la fluoresceína se utiliza en técnicas de marcado y seguimiento de células,
tejidos y moléculas. También se utiliza en pruebas de diagnóstico, como la detección de
lesiones oculares y la evaluación de la función renal.
Bibliografía

1. Estévez, P (s.f) Síntesis de fluorescencia por medio de sustitución electrofílica

aromáticos. COURSEHERO. URL:
https://www.coursehero.com/file/66400560/S%C3%ADntesis-de-fluoresce%C3%A
Dnapdf/
2. Welcome Oelen (s.f) Strong green fluorescence. Home Science. URL:
https://woelen.homescience.net/science/chem/exps/fluorescence/index.html
3. Espinoza, J. (2016). OBTENCIÓN DE FLUORESCEÍNA. www.academia.edu.
https://www.academia.edu/22237831/OBTENCI%C3%93N_DE_FLUORESCE%C
3%8DNA
4. (S/f).http://file:///C:/Users/HP/Downloads/Tesis%20S%C3%ADntesis%20de%20pa
rt%C3%ADculas%20fluorescentes%20tipo%20n%C3 %BAcleo-coraza.pdf
5. Moore, G. E., Peyton, W. T., French, L. A., & Walker, W. W. (1948). The Clinical
Use of Fluorescein in Neurosurgery: The localization of brain tumors. Journal of
neurosurgery, 5(4), 392–398. https://doi.org/10.3171/jns.1948.5.4.0392
6. Lane, Brandon C, and Aaron A Cohen-Gadol. 2013. “Fluorescein Fluorescence Use
in the Management of Intracranial Neoplastic and Vascular Lesions: a Review and
Report of a New Technique.” Current Drug Discovery Technologies 10 (2) (June 1):
160–169.
7. //www.instijlmedia.nl/. (s. f.). Sal de fluoresceína sódica (C.I. 45350). Laboratorium
Discounter.
https://www.laboratoriumdiscounter.nl/es/quimicos/a-z/f/sal-de-fluoresceina-sodica-
ci-45350/
8. Le Guern, F., Mussard, V., Gaucher, A., Rottman, M., & Prim, D. (2020).
Fluorescein derivatives as fluorescent probes for pH monitoring along recent
biological applications. International Journal of Molecular Sciences, 21(23), 9217.
https://doi.org/10.3390/ijms21239217