UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER OCAÑA PROCEDIMIENTO 6

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL

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LABORATORIO DE BIOLOGIA

FOTOSINTESIS AÑO 2016

OBJETIVOS

 Describir la organización estructural y anatómica de la hoja

 Determinar la importancia de la hoja como órgano fotosintético
 Determinar y reconocer diversos pigmentos vegetales relacionados con el
proceso fotosintético
 Analizar el efecto de la intensidad luminica sobre el proceso fotosintético

MARCO TEORICO

En las plantas superiores, las hojas normales (normofilas) son los órganos
fotosintéticos por excelencia, razón por la cual presenta adaptaciones particulares
para la realización de tal actividad. Fundamentalmente la hoja esta formada por el
LIMBO, que es la porción laminar y delgada provista de la superficie, el haz y
envés; PECIOLO que la sostiene y la BASE FOLIAR.

El limbo foliar esta recubierto externamente por una envoltura protectora o

epidermis a través de la cual se realiza intercambio de gases con el medio. Casi
siempre esta formado por un solo estrato de células vivas, provistas de pared
celular de naturaleza cerea, razón por la cual resulta relativamente impermeable a
compuestos gaseoso como H20, C02 y 02.
La epidermis foliar se compone de varios tipos de células entre las que se pueden
destacar las células epidérmicas, ya mencionadas y las células oclusivas de los
estomas. Las células oclusivas interrumpen la continuidad de la epidermis dando
origen al estoma o aparato que de manera activa regula el intercambio de gases y
la transpiración.
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Comúnmente el estoma está formado por dos células oclusivas con formas similar
a un grano de frijol, que al unirse por sus extremos delimitan un espacio un
ostiolo, comunicado internamente con la cámara subestomatica, permitiendo así
la conexión directa entre los espacios intercelulares de los tejidos
subepidermicos y el aire exterior.
Las células oclusivas intervienen activamente en el proceso fotosintético ya que
están provistas de numerosos cloroplastos, a diferencia del resto de las células
epidérmicas que no lo poseen o en el mejor de los casos cloroplastos poco
diferenciados.
Bajo la epidermis se halla el tejido parenquimo o mesofilo de la hoja. Es un
tejido vivo y con cantidad de cloroplastos, que en razón de su arreglo histologico
permite que la hoja cumpla con sus dos funciones básicas: fotosíntesis y
captación y desprendimiento de gases.
El mesofilo en la mayoría de los casos esta formado por un parenquima
empalizado, constituido por células más largas que anchas y un parenquima
esponjoso con células grandes e irregulares. Los espacios intercelulares se
abren al exterior por los ostiolos de los estomas.

La fotosíntesis es la primera etapa del flujo de energía a través de la biosfera.

Durante el proceso de fotosíntesis se forma glucosa y oxigeno molecular a partir
de CO2 y H2O a expensas de la energía solar. La ecuación general se puede
escribir así.

6CO2 + 6H2O C6H12O6 + 6O2

La energía libre necesaria par esta reacción es proporcionada por fotones o

cuantos de luz. Durante la primera fase de la fotosíntesis la luz es utilizada
directamente y la energía luminosa convertida en energía química, este primer
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grupo recibe el nombre de reacciones de captación de energía (reacciones

luminosas). Las reacciones mediante las cuales se forma la glucosa a partir del
CO2 a expensas de la energía química se denomina reacciones de fijación del
carbono (reacciones oscuras).

En el laboratorio mediante esquemas experimentales sencillos observaremos la

estructura celular de las hojas de algunas plantas, separaremos pigmentos
vegetales comprometidos en la absorción de luz para el proceso fotosintético,
observaremos el desprendimiento de oxigeno y el efecto que sobre este proceso
ejerce la intensidad luminica.

MATERIALES

 NaOH 0.1N  Papel indicador de pH (tornasol)

 Acido acético al 0.2 N  Vaso precipitado de 250 ml
 Mortero  Goteros
 Tubos de ensayo  Papel filtro
 Solución de lugol  Caucho
 Bicarbonato de sodio al 2.5%  Papel aluminio
 Agua de acuario  Pipeta
 Tionina  Planta Elodea
 Glicerina al 50%  Hojas de Trandescantia sp,
 Lampara de bombilla 100W Ficus sp, Nerium sp
 Plantas de geranio
 Hojas de espinaca
 Remolacha

PROCEDIMIENTO

 Observación de los estomas

1. Para la observación de las células epidérmicas y estomaticas (oclusiva)

efectúe un corte longitudinal muy superficial sobre las hojas de Tradescantia sp
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(buquecito), en el envés. Si los cortes resulta demasiado gruesos levante la

epidermis inferior con una cuchilla de manera que obtenga una fina película de
tejido epidérmico.
2. Haga un montaje empleando una gota de lugol y otra en glicerina al 50% y
observe al microscopio con objetivo de 10x y 40x.
3. Identifique: las células epidérmicas propiamente dicha y describa la forma y
arreglo de las mismas, las células oclusivas y note en estas las
Características de la pared celular, presencia de cloroplastos, fíjese
finalmente en un cuerpo de 4 células epidérmicas adjunta a las oclusivas y que
forman partes del aparato estomatico. ¿Cuál es su función?

 Anatomía de la hoja

1. Para la observación del parenquima fotosintético elabore finos cortes

transversales de hojas de Nerium oleander (azucena de la habana)
2. Coloree los montajes con Tionina y observe con objetivos de 10x y 40x
Identifique los siguientes tejidos:
 Epidermis superior de carácter pluriestratificado y con células de paredes
engrosadas
 Parenquima empalizado formado por células columnares y densamente
agrupados, presenta abundante cloroplastos.
 Parenquima esponjoso integrado por células irregulares laxamente agrupadas
en razón por la cual se crean amplio espacios intercelulares.
 Epidermis inferior también formada por varios estratos celulares. Note en este
tejido la formación de invaginaciones llamadas criptas estomaticas con tricoma
que protegen a los estomas localizados en el fondo.
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 Separación de pigmentos

En las plantas verdes existen diversos tipos de pigmentos vegetales capaces de

absorber radiaciones luminosas para el proceso fotosintético. Los más
importantes en los vegetales superiores son: clorofila a (color verde azulado),
clorofila b (color verdeamarillento), carotenos de colores variados y xantofila de
color amarillo. Químicamente la clorofila a y b son muy parecidas; difieren en
que la clorofila a tiene un radical metilo CH3 que en la clorofila b esta sustituido por
un radical formilico COOH, por lo que la clorofila b tiene un átomo mas de oxigeno
y dos átomos menos de hidrogeno que la clorofila a.

Los carotenos en los que predomina los colores amarillo, anaranjado y rojos. Entre
los carotenos es de singular importancia el caroteno b el cual en el hígado de los
animales es desdoblado por acción de la carotenasa en dos moléculas de vitamina
A. Su fórmula empírica es C40H56.
Las xantofilas tiene la formula empírica C40H56O2 y son derivados hidroxilados de
los carotenos.
En el laboratorio utilizaremos la cromatografia de papel para separar los diversos
tipos de pigmentos. La separación de pigmentos mediante la cromatografia
permite reconocer pequeñas diferencias entre estos compuestos como la
solubilidad y tamaño molecular entre otras.

1. Tomen dos hojas de espinaca o geranio quite las venas mayores a las hojas
y macérela en un mortero humedeciéndola con un poco de etanol.
2. Observe el color del extracto
3. Obtenga una tira de papel de filtro con extremos rectos que pueda
fácilmente entrar en un tubo de ensayo. Haga un montaje como el de la
figura.
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4. En el tubo de ensayo coloque 2 ml de la mezcla disolvente

5. A 2cm del extremo de la tira de papel coloque una fina gota de extracto de
espinaca y espere a que se seque
6. Retire los residuos sólidos e introduzca la tira de papel en el tubo de ensayo
que contiene la mezcla éter de petróleo – acetona y arréglela de tal modo que
esta mezcla cubra solo 0.5 cm del ‘papel filtro.
7. Asegura el extremo superior de la tira en la boca del tubo de ensayo use un
corcho con clip o cinta pegante.
La mezcla disolvente formada por el éter de petróleo – acetona y benceno
migrara a lo largo del papel filtro dirigiéndose hacia la parte superior por la
mancha de la mezcla de pigmentos. Los diversos pigmentos son solubilidad
diferente migran a diferentes alturas. En el solvente que utilizamos los carotenos
se mueven mas rápidamente le siguen las xantofilas y después las clorofilas a y b.

Cuando termina la cromatografia hecho que indicara cuando los carotenos

alcancen el extremo superior, saque el papel filtro y localice en el extremo
opuesto en el que coloco la muestra las manchas pertenecientes a los pigmentos.
¿Cuántos pudo encontrar? ¿Por qué no pudo ver estos últimos en la hoja antes de
macerarla?. En la zona correspondiente a lo que ubico la muestra se quedan las
antocianinas.

 Determinación de pigmentos Antocianinicos

1. Hervir por algunos minutos 20 – 30 gramos de remolacha en 100 ml de agua

destilada.
2. Dejar enfriar y filtrar la solución
3. Tome 5 ml del extracto en un tubo de ensayo y determine su pH por medio
de un papel indicador
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4. Agregue gota a gota una disolución de acido acético al 0.2 N

5. Observe el cambio de color y determine nuevamente su pH
6. Continúe agregando gotas de la disolución y observe si hay cambios en caso
de que ocurra determine nuevamente el pH
7. En otro tubo de ensayo repita el procedimiento pero cambiando la disolución
por NaOH al 0.1N.
8. Anote los resultados los cambios de color y los pH que se produjeron.

 Producción de oxigeno

Él oxigeno molecular formado durante la fotosíntesis de las plantas procede

exclusivamente de los átomos de oxigeno del H 2O y no del CO2. Experimentos
con O18 confirman esta afirmación. El H2O en presencia de la luz sufre un proceso
de fotolisis cuyo resultado es la formación de oxigeno molecular que se
desprende al exterior.
El desprendimiento de burbujas de oxigeno se puede tomar como evidencia del
proceso de fotosíntesis y la acción de la luz en este proceso se puede demostrar
con un experimento sencillo.
1. Agregue en un vaso precipitado una solución que contenga 3 partes de
bicarbonato de sodio al 2.5% y una parte de agua de acuario
2. Introduzca una rama fresca de la planta Elodea sp.
3. Coloque la preparación frente a una bombilla de 100W que proveerá la
energía luminica. La preparación debe estar a unos 20 cm del a bombilla,
espere unos 5 a 10 minutos y empiece a contar el numero de burbujas de
oxigeno que se produce por minuto.
4. Repita el experimento colocándolo la fuente luminosa a 40 y 60 cm de
distancia; determine el número de burbujas producidas e intérprete los
resultados.
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5. Coloque el montaje en una zona oscura y observe si hay producción de

burbujas e interprete los resultados.

Esquema del montaje para la realización del experimento con la bombilla.

CUESTIONARIO

1. ¿Realice una comparación entre los procesos de fotosíntesis y respiración?

2. ¿Determine las propiedades fisicoquimicas de alguno de los pigmentos
propios de los siguientes grupos: clorofila, carotenos, xantofilas, ficobillinas?
3. ¿Que es una cromatografia y explique en que consiste su principio de uso?