Síntesis, Identificación y Aplicación
del Xanteno Fluoresceína
Andrea Cristina Delgado Guerrero, Student 1, Nury Gabriela Mite Guzmán, Student 2, and Jonathan Mateo Narváez Salcedo ,
Student3, 1 ESPOL, Ecuador, andcrdel@espol.edu.ec, 2 ESPOL, Ecuador, nmite@espol.edu.ec , 3 ESPOL, Ecuador,
jomanarv@espol.edu.ec
Abstract– This project aims to perform the synthesis and
identification of fluorescein, a compound that is part of
Xanthene dyes and that has coloring and fluorescent
properties thanks to the three aromatic rings that it has in
its main chain and its double bonds conjugated by which is
capable of absorbing and emitting light at different
wavelengths in the UV range. In order to obtain it, phthalic
anhydride and resorcinol will be reacted in the presence of
sulfuric acid, by means of two successive Friedel-Crafts
acylation reactions. The identification of fluorescein will be
carried out with a spectroscopic study for the identification
of the functional groups present in the molecule and
through the analysis of its fluorescent properties in acidic
and basic solution, in addition a practical application will
be made in the laboratory. This compound has important
applications in several fields of study, for example, in
medicine it is used to detect corneal ulcers, because it stains
the intracellular spaces when the epithelium is damaged, in
hydrology it is useful for tracing underground currents and
measuring hydraulic flows, in microscopy it is used to mark
or stain proteins or to identify bacteria.
Resumen- Este proyecto tiene como objetivo realizar la
síntesis e identificación de fluoresceína, un compuesto que
forma parte de los colorantes de Xanteno y que tiene
propiedades colorantes y fluorescentes gracias a los tres
anillos aromáticos que tiene en su cadena principal y sus
dobles enlaces conjugados por los cuales es capaz de
absorber y emitir luz a diferentes longitudes de onda en el
rango UV. Para obtenerlo, el anhídrido ftálico y el
Resorcinol se harán reaccionar en presencia de ácido
sulfúrico, mediante dos sucesivas reacciones de acilación de
Friedel-Crafts. La identificación de fluoresceína se
realizará con un estudio espectroscópico para la
identificación de los grupos funcionales presentes en la
molécula y mediante el análisis de sus propiedades
fluorescentes en solución ácida y básica, además se
realizará una aplicación práctica en el laboratorio. Este
compuesto tiene importantes aplicaciones en varios campos
de estudio, por ejemplo, en medicina se usa para detectar
úlceras corneales, porque tiñe los espacios intracelulares
cuando se daña el epitelio, en hidrología es útil para
rastrear corrientes subterráneas y medir flujos hidráulicos,
en microscopía se usa para marcar o teñir proteínas o para
identificar bacterias.
Palabras clave- Fluorescencia, medio ácido, medio
básico, espectro UV, acilación de Friedel Crafts.
Escuela Superior Politécnica del Litoral: “Síntesis, Identificación y Aplicación del Xanteno Fluoresceína”, 20 agosto 2019,
Ecuador.
I. INTRODUCCIÓN
La fluoresceína es un compuesto orgánico de formula
molecular descubierto por Adolf von Baeyer en el
año 1871. Se lo encuentra en estado sólido de color rojizo,
posee un punto de fusión de 315°C y es insoluble en agua,
tiene propiedades colorantes y fluorescentes, cuando se
encuentra en soluciones con un pH mayor a 5 se puede
observar con una tonalidad verde y altamente fluorescente,
en soluciones más alcalinas, alcanza su mayor intensidad.
La fluoresceína se sintetiza haciendo reaccionar
anhídrido ftálico y Resorcinol en presencia de ácido
sulfúrico, mediante una reacción de Friedel-Crafts, que es un
tipo de sustitución electrofílica aromática que implica la
reacción de un anillo aromático con un electrófilo que lleva
un centro de carbono deficiente en electrones.[2] (Wei Chuan
SunChi Shing NgGlenn D. Prestwich, 1992)
Hay dos variaciones en este tipo de reacción, una
variante implica generar un carbocatión a partir de un cloruro
de alquilo y un catalizador ácido de Lewis (alquilación), el
otro implica un haluro o anhídrido de acilo y un ácido de
Lewis como catalizador para formar una cetona aromática
(acilación).
Se llevarán a cabo dos acilaciones sucesivas de Friedel-
Crafts para producir el tinte de Xanteno. En la primera
acilación, el catión de acilo se genera por protonación del
anhídrido ftálico, este catión formado reaccionará entonces
con el fenol sustituido, Resorcinol, produciendo una
benzofenona sustituida, sin embargo, la reacción no se
detiene en este punto, en las condiciones de reacción
utilizadas la benzofenona sustituida formada en la primera
reacción se protona para formar un intermediario catiónico
que puede participar en una reacción similar a la reacción de
alquilación de Friedel-Crafts para completar el ensamblaje
del esqueleto de carbono del triarilmetano y finalmente se
genera una reacción de esterificación catalizada por ácido,
lactonización, que produce luego fluoresceína.
Se ha demostrado que la fluoresceína tiene al menos 3
tautómeros neutros razonablemente estables, cada uno de los
cuales tiene características físicas diferentes. Esto ha sido
demostrado por el hecho de que de 3 formas cristalinas
distintas de fluoresceína se pueden formar diferentes colores
(rojo, amarillo e incoloro) dependiendo de cómo se formaron
los cristales, del mismo modo, las soluciones de muchos de
los tintes cambian o incluso pierden su color en diferentes
1
disolventes, por ejemplo, la fluoresceína es naranja en
acetona y casi incolora en éter. Esto se debe a la diferente
estabilidad del tautómero en cada uno de estos solventes. En
la forma incolora de fluoresceína, el carbono central se
hibrida sp3 por lo que los sistemas de los anillos
aromáticos son todos aislados el uno del otro. De esta forma,
la molécula no tiene una extensión suficientemente grande ni
una gran conjugación para absorber en la región visible del
espectro, por lo que es incoloro. En él las formas amarillas y
rojo ladrillo tienen un carbono central que se hibrida a sp2.
El aumento en la conjugación provoca un cambio de
absorbancia en la región visible, dando como resultado los
colores observados.
Figura N°1: Tautomeros de la fluoresceína
Fuente: (J.V. McCullagh, K.A. Daggett, 2007) [1]
El fenómeno de la fluorescencia ocurre cuando una
molécula reemite una porción de energía absorbida como luz.
La luz emitida es siempre de menor energía que la luz que
fue absorbida. Para muchos compuestos fluorescentes, la luz
absorbida está en la región ultravioleta y la luz emitida está
en la región visible. La fluoresceína absorbe la luz en la
región UV y azul del espectro visible.
Cabe recalcar que la fluoresceína tiene diversos usos de
mucha importancia, por ejemplo, en la medicina,
específicamente en la oftalmología, con ayuda de este
compuesto se pueden detectar lesiones en la córnea y
anormalidades en la retina e iris debido a que al ser aplicada
Escuela Superior Politécnica del Litoral: “Síntesis, Identificación y Aplicación del Xanteno Fluoresceína”, 20 agosto 2019,
Ecuador.
sobre la superficie del ojo y proyectar luz ultravioleta, esta se
estimulará y se podrá observar cualquier lesión que exista.
Otro uso de la fluoresceína es en la geología, pues es útil para
identificar aguas subterráneas o también se la utiliza como
trazador hidrológico. Como un dato histórico se conoce que
la fluoresceína fue ampliamente utilizada por tripulaciones
alemanas durante la guerra, la llevaban en sus embarcaciones
en pequeños recipientes y en caso de que quedaran a la
deriva en el mar, esparcían la sustancia, la cual formaba una
marca notoria que se podía observar a grandes distancias, lo
que ayudaba al rescate de la tripulación. En química puede
ser un gran indicador ácido-base, pues el color en diferentes
disoluciones depende del pH; en medio ácido es de color
amarillo con fluorescencia baja, en medio neutro es amarillo
verdoso con fluorescencia media, y en medio básico es de
color verde con fluorescencia intensa. [3] (Ziarini, G. M.,
Moradi, R., Lashgari, N., & Kruger, H. G., 2018)
II. OBJETIVOS
A. Objetivo General:
Realizar la síntesis de la fluoresceína a partir de una
reacción de Friedel-Crafts entre Resorcinol y anhídrido
ftálico utilizando como catalizador ácido sulfúrico para la
caracterización de dicho producto.
B. Objetivos Específicos
Determinar la eficiencia del proceso de síntesis de la
fluoresceína calculando el porcentaje de rendimiento y error
de la reacción.
Analizar el espectro infrarrojo identificando los grupos
funcionales en sus respectivas regiones y describiendo las
características presentadas.
Comparar el fenómeno de fluorescencia en medio ácido
y básico con el fin de observar la variación de color e
intensidad del producto sintetizado en ambos medios.
III. EXPERIMENTACIÓN
Para el proceso de síntesis de la fluoresceína, se pesó en
un vidrio reloj 2.70 g de anhídrido ftálico 99%
m/m y 3.70 g de resorcinol 99% m/m en la
balanza electrónica (Marca Scout Pro) y se colocaron en un
balón de destilación de 250 0.05 mL, el cual dicho balón
debe ser pesado para cuantificar al final el producto obtenido,
seguido se procedió a calentar la glicerina 99.5%
m/m en la plancha de calentamiento (Marca Hot & Stirrer)
durante 30 minutos en un cristalizador de 150 0.05 mL y a
preparar una solución 2M de en un matraz aforado
de 10 0.5mL dentro de la Sorbona (Marca Biobase).
A continuación, se añadió la solución de ácido sulfúrico al
balón antes mencionado y el agitador magnético (Marca Hot
& Stirrer) para colocarlo en el baño precalentado de
glicerina, se agito y controlo la temperatura con el
2
termómetro de mercurio entre un rango de 180-200 por A. Reacciones involucradas:
30minutos. Transcurrido este tiempo se observó al enfriarse HO O OH
una masa solida dura color café rojizo oscuro y se añadió O
HO OH
20mL de acetona 97% m/m para agitar hasta O
H 2 SO 4
O
(s)
+ 2
(s) Δ (s)
disolver completamente la fluoresceína.
O O

Luego se armó un sistema de destilación para la mezcla Fig. 1 Reacción de síntesis de fluoresceína.
descrita con el fin de evaporar la acetona cuyo punto de Fuente: ChemShetch.

ebullición es 56 ; utilizando 3pinzas, 1soporte universal,

manguera, nuez, refrigerante, termómetro, alargadera, la B. Mecanismo de acilación de Friedel-Craft:
O +
plancha de calentamiento con el baño de glicerina y otro O H

balón de 100 0.05mL como recipiente recolector para la O

H+ O SO 3H O
acetona evaporada, se retiró el agitador magnético y se dejó O
enfriar nuevamente. O

Posteriormente se retiró del sistema de destilación el balón O

con la masa sólida y se agregó 20 mL de éter dietílico +
C OH OH
HO OH
99% m/m y 2mL de agua destilada, agitando O + O O

manualmente, moviendo en círculos el balón para disolver la OH

H
+
C
fluoresceína, así sucesivamente hasta completar 100mL de +
O O
éter, es decir este proceso de agregar las soluciones y agitar
se hicieron 5 veces.
O -SO 3 H HO H O
Después se colocó la muestra en una ampolla de decantación O OH
O
+
OH
y se agregó 50 mL de agua destilada y se decantó la fase
acuosa, seguido de esto se agregó a la ampolla 20 mL de una O
solución saturada de Cloruro de sodio (NaCl (ac)) para separar OH
HO
OH
HO
la fases, se retiró la fase orgánica de la ampolla colocándola
en el balón de 250 0.05mL otra vez y se la sometió
OH
nuevamente al proceso de destilado para evaporar el éter que
tiene un punto de ebullición de 34.6 , en el cual también se OH
OH OH
agitaba la mezcla, a medida que la masa se vuelva mucho HO
SO 4-2
más densa se retira el agitador magnético y se procede a HO C
+
O
+
destilar al vacío para que no quede nada de éter. El proceso O
C
O H O + O
HO H OH

de destilado se hizo con el baño de glicerina antes preparado H OH

-H 2O
H OH

OH
para evitar que la mezcla no se queme, una vez terminado OH HO
OH
dicho proceso se dejó enfriar la fluoresceína para proceder a HO HO
pesar el balón con la muestra y cuantificar la cantidad de
fluoresceína obtenida. Como último paso con la ayuda de una HO O OH
espátula se retiró el producto del balón y se almacenó en un
cristalizador para las pruebas de identificación.
La prueba de fluorescencia en solución ácida y básica se O

efectuó de la siguiente manera: se colocó en dos vasos de

O
precipitación de 40 0.5ml, (utilizando dos pipetas de 10 Fig2. Mecanismo de reacción de Fluoresceína.
0.05ml y pera de succión) 5ml de NaOH (ac) 5% m/m en uno y Fuente: ChemShetch.
en el otro 5ml de HCl(ac) 5% m/m, después se añadió una C. Datos Iniciales:
TABLA I
pequeña cantidad de la fluoresceína obtenida y se mezcló con DATOS INICIALES DE REACTIVOS
la ayuda de un agitador. Finalmente se colocó los vasos de
precipitación bajo la luz ultravioleta y se observó el Ácido Anhídro
Resorcinol
fenómeno de fluorescencia; constatando que en el medio Ftálico
básico era fluorescente color verde mientras que en el medio
ácido era color amarillo y presentaba muy baja fluorescencia, Peso Molecular 148.1 g/mol 110.1 g/mol
casi no notable. Masa 2.7 g 3.7 g
IV. RESULTADOS Elaboración: Delgado, Mite, Narváez

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D. Resultados del cálculo de reactivo limitante:
TABLA II
RESULTADOS DEL REACTIVO LIMITANTE
Elaboración: Delgado, Mite, Narváez
E. Resultados experimentales obtenidos:
TABLA III
RESULTADOS OBTENIDOS
Cantidad Cantidad
teórica Experimental Rendimiento
72.3 % 27.71%
Elaboración: Delgado, Mite, Narváez
F. Resultados en pruebas de identificación:
TABLA IV
RESULTADOS OBTENIDOS
Prueba de Observación
reconocimiento
Fluoresceína con ácido Solución color amarilla y al
clorhídrico exponer a la luz UV, incolora
Solución color verde y al
Fluoresceína con exponer a la luz UV, color
hidróxido de sodio verde-fluorescente.
Elaboración: Delgado, Mite, Narváez
G. Espectro FTIR de la Fluoresceína obtenida:
Fig3. Espectrofotometría IR de la Fluoresceína.
Fuente: Espectrofotómetro
V. DISCUSIÓN
En la obtención de fluoresceína se obtuvo una cantidad
experimental de 3,99 gramos con una reacción de acilación
de Friedel-Craft en medio acido en el cual se usó ácido
sulfúrico como catalizador, logrando una sustitución
aromática electrofílica de resorcinol sobre anhidrido ftálico
este proceso se da por medio de dos alquilaciones de Friedel-
Crafts por lo cual se dará dos reacciones sucesivas donde el
catalizador reacciona con el anhidrido ftálico con lo cual se
logró obtener dos estructuras de resonancia, dando paso a que
el carbocatión reaccione con un mol de resorcinol y el
oxicatión desprendido por el catalizador reaccioné con la
segunda mol de resorcinol por lo cual el oxígeno dará la
formación de una estructura cerrada desprendiendo
moléculas de H2O así como concluyendo la formación de
fluoresceína en otras palabras se podría decir que un átomo
de hidrogeno es sustituido por un grupo alquilo; el método de
obtención tuvo un rendimiento de 72,3% como se puede
observar en la tabla de resultados 3 esto pudo deber al tiempo
que tiene los reactivos puesto que el anhidrido ftálico tenía
varias impurezas de igual manera que al momento de añadir
Masa de 5.99 g 5.52 g
Reactivo Exceso Limitante
Error el éter dietílico con el agua no se disolvió toda la cantidad de
fluoresceína una cantidad alta de producto se quedó en el
balón por lo cual hubo una pérdida de producto final, aunque
se puede afirmar que al tener un rendimiento mayor al 60 %
la reacción se pudo dar de manera eficiente a pesar de las
perdidas dadas en todo el proceso.
El análisis de propiedades físicas se dio en base a color
obtenido que fue rojo y al estado de agregación final que se
obtuvo que fue sólido, esto se debió a que el tautómero más
estable de la fluoresceína es el quinoide el cual posee las
características antes mencionadas; hay que recalcar que no se
pudo realizar punto de fusión del producto final puesto que la
fluoresceína tiene un valor de 315 °C y los únicos reactivos
para hallar esto es la glicerina que tiene un punto de
ebullición de 290 °C.
Al realizar las pruebas de reconocimiento en medio
ácido y básico se usó 5 mL de una solución de hidróxido de
sodio y ácido clorhídrico al 5% m/m; en las cuales se obtuvo
los resultados mostrados en la tabla 4; con lo que podemos
analizar que las dos soluciones expuestas a la luz UV nos
dieron resultados contrarios en el caso del hidróxido de sodio
un color verde fluorescente de gran notoriedad esto se debe a
que la fluoresceína al estar en contacto con soluciones
alcalinas tiene una fluorescencia alta; lo contrario se pudo
observar con ácido clorhídrico que fue incolora ya que en
soluciones acidas tiene una fluorescencia bastante baja, por
lo que podemos concluir que la fluorescencia de la
fluoresceína dependerá del pH de la solución.
En la prueba de reconocimiento mediante el espectro
infrarrojo se puede apreciar dos sobre tonó notorios que se
encuentran alrededor de 1500 -1600 esto se debe a
los compuestos aromáticos que tiene la molécula de
fluoresceína que resulta de los dobles enlaces carbono-
carbono. Los picos de intensidad media que tiene en 1100
- 1200 hace referencia al alcohol secundario y la
característica de ácido carboxílico se puede dar cuenta en la
parábola que se observa desde 3000 - 3500 ya
que cubre aproximadamente la mitad lo cual indica la
presencia del grupo hidroxilo.
VI. CONCLUSIONES
El porcentaje de rendimiento obtenido fue de 72.35%,
lográndose sintetizar 3.99 g de fluoresceína, resultando un
proceso eficiente ya que permitió la obtención de dicho
colorante satisfactoriamente.
Analizando el espectro IR se identificaron lo grupos
característicos de la fluoresceína por medio de señales
además de observar detalles como la intensidad y tamaños de
dichas señales que aparecían en las regiones del espectro y

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que permitían identificar grupos funcionales como los
carbono doble enlace carbono cuando pertenecen a
compuestos aromáticos, grupos hidroxilo y éter.
Para la prueba del fenómeno de fluorescencia en donde se
absorbe energía y se la almacena para emitirla en forma de
luz que fue visible al exponerse la soluciones de fluoresceína
preparadas con NaOH y HCl a la cámara de luz ultravioleta y B. Imágenes
donde se comprobó que en medio básico se favorece la
fluorescencia que fue de color verde fosforescente debido a
la presencia donadora de grupo de electrones y mientras que
en medio acido la fluorescencia fue muy baja de color
amarillo ya que los grupo aceptores de electrones disminuyen
inhibiendo dicho fenómeno, concluyendo que el pH es un
factor que afecta el fenómeno de fluorescencia.
REFERENCIAS
[1] J.V. McCullagh, K.A. Daggett. (2007). J. Chem. Educ. 84.
[2] Wei Chuan SunChi Shing NgGlenn D. Prestwich. (1992). ACS
Publications . Obtenido de https://doi.org/10.1021/jo9706178
[3] Ziarini, G. M., Moradi, R., Lashgari, N., & Kruger, H. G. (2018).
Fluorescein Dyes. Metal-Free Synthetic Organic Dyes,165-172. Obtenido
de https://doi.org/10.1016/B978-0-12-815647-6.00010-8
ANEXOS Fotografía 1. Fluoresceína obtenida
Fuente: Delgado, Mite, Narváez
A. Cálculos
Cálculo del reactivo limitante para determinar la cantidad
teórica de la fluoresceína.

Cálculo de la fluoresceína experimental

Fotografía 2. Solución de fluoresceína y NaOH

Fuente: Delgado, Mite, Narváez

Cálculo de porcentaje de rendimiento

Fotografía 3. Solución de fluoresceína y HCl

Fuente: Delgado, Mite, Narváez
Cálculo del error

Fotografía 4. Observando la fluorescencia bajo luz ultravioleta

Fuente: Delgado, Mite, Narváez

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 Fotografía 5. Ejecutando la aplicación de la fluoresceína
Fuente: Delgado, Mite, Narváez

Fotografía 6. Solución hidroalcohólica con fluoresceína

Fuente: Delgado, Mite, Narváez

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