UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

TALLER DE LABORATORIO : PURIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DEL ADN

Parte 1: ACERCA DE LA PURIFICACIÓN DEL ADN

a.Cuáles son las consecuencias de utilizar en el laboratorio un ADN con poca pureza?
b. Explica brevemente acerca de métodos para purificar al ADN
Parte 2: ACERCA DE LA CUANTIFICACIÓN DEL ADN:
Se puede tomar como un paso previo al desarrollo de la técnica de Reacción en cadena de
la polimerasa (PCR), con el fín de revisar la calidad del ADN que se pretende analizar y
amplificar. Sobre este procedimiento responde lo siguiente:
a. Qué es absorbancia o densidad óptica (DO)?

La absorbancia, también conocida como densidad óptica (DO), es una medida de la

cantidad de luz que absorbe una sustancia en función de la longitud de onda. Se
expresa como un valor sin unidades en una escala logarítmica. La absorbancia se
calcula utilizando la siguiente fórmula:

A=−log 10 (T)

donde:
A es la absorbancia,
T es la transmitancia, que es la fracción de luz que pasa a través de la muestra.

La absorbancia se utiliza comúnmente en espectrofotometría para cuantificar la

concentración de una sustancia en una muestra. En el caso de ácidos nucleicos,
como el ADN, la absorbancia a 260 nm se utiliza para medir su concentración, ya
que absorben la luz con mayor intensidad a esa longitud de onda. La absorbancia
es una herramienta importante en bioquímica y ciencias biológicas para realizar
análisis cuantitativos de moléculas específicas en una muestra.

file:///C:/Users/Maria%20L%20Maldonado%20Ch/Downloads/Dialnet-
MedicionDeLaAbsorbanciaOpticaDeSolucionesAcuosasMe-4693922.pdf

b. ¿Cuál es la absorbancia en la que los ácidos nucleícos absorben en mayor cantidad

la luz?
Los ácidos nucleicos, como el ADN y el ARN, absorben la luz ultravioleta con mayor
intensidad alrededor de 260 nm. Por lo tanto, la absorbancia máxima para la
mayoría de los ácidos nucleicos se encuentra en esa longitud de onda. Es común
 utilizar la absorbancia a 260 nm para cuantificar la concentración de ácidos
nucleicos en una muestra mediante espectrofotometría.

https://repositorio.cinvestav.mx/bitstream/handle/cinvestav/2118/
SSIT0015553.pdf?sequence=

c. ¿Cuál es la relación de absorbancia para analizar la pureza del ADN a partir de

espectrofotometría?
La relación de absorbancia para analizar la pureza del ADN mediante
espectrofotometría se refiere a la proporción de la absorbancia de la luz a diferentes
longitudes de onda. En general, para la pureza del ADN, se compara la absorbancia a
260 nm con la absorbancia a 280 nm. La absorbancia a 260 nm se asocia
principalmente con la presencia de ácidos nucleicos, mientras que la absorbancia a
280 nm se relaciona con la presencia de contaminantes como proteínas.
La fórmula común para calcular la relación de absorbancia (A260/A280) es dividir la
absorbancia a 260 nm entre la absorbancia a 280 nm. Un valor ideal para ADN puro
suele ser alrededor de 1.8, indicando una baja contaminación de proteínas. Valores
fuera de este rango pueden sugerir impurezas en la muestra, lo que podría afectar las
mediciones y experimentos posteriores.

https://www.bancoadn.org/docs/formulario-control-calidad-muestras.pdf

d. Cuáles con los valores a partir de la relación de absorbancia que indican un ADN de
gran calidad?
e. Cuáles son los métodos y equipos para cuantificar ADN
f. A que se debe el hecho de que el ADN pueda absorber la UV a 260nm?
g. Indica la fórmula para calcular la concentración del ADN. Explica.