PRÁCTICA 6.

TINCIÓN DE GIEMSA
OBJETIVO
Diferenciar los distintos componentes celulares de una extensión sanguínea.

FUNDAMENTO
La tinción de Giemsa es un método diferencial de tinción, que se utiliza para distinguir los
distintos componentes celulares, atendiendo a la distinta afinidad hacia unos colorantes u otros. Esta
tinción es de tipo Romanowsky, es decir, que utiliza azul de metileno y sus productos de oxidación
(azur A, B y C) como colorante básico y se combina con eosina, como colorante ácido.
Dependiendo de la proporción en la que aparezcan los dos componentes en el colorante,
tendremos Giemsa, Wright, Leishman y panóptico de Pappenheim, algunas tinciones de las cuales
veremos en las prácticas siguientes.

MATERIAL NECESARIO
Para la extensión:
 2 portas limpios
 Pipeta pasteur y chupete
 Tubo de ensayo
 Gradilla
 Muestra de sangre

Para el tratamiento de la muestra:

 Tubo de ensayo
 Cristalizador
 Puente de tinción
 Frasco lavador
 Pipetas pasteur con chupete
 Cubreobjetos (OPCIONAL)
 Microscopio

REACTIVOS
 Colorante Giemsa
 Solución tampón pH 7,2 (OPCIONAL)
 Metanol
 Aceite de inmersión

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
 Preparamos la muestra de sangre en el tubo de ensayo y lo colocamos en la gradilla.
 Con ayuda de una pipeta pasteur, colocamos una gota de sangre en un extremo del porta y
realizamos la extensión, con el procedimiento que hemos visto en prácticas anteriores.
 Colocamos el frotis sobre el puente de tinción y lo cubrimos con metanol durante tres
minutos, para deshidratar la muestra y que se fije bien al porta.
 En un tubo de ensayo limpio preparamos la mezcla de tinción, que consiste en 0,2ml de
Giemsa (azur-eosina-azul de metileno), con 2ml de solución tampón pH 7,2 (proporción
1:10).
  Con ayuda de una pipeta limpia, cubrimos la extensión con la tinción y la dejamos actuar
durante 25 minutos.

 Transcurrido el tiempo estimado, escurrimos el exceso de tinción y enjuagamos la muestra

hasta que deje de salir tinte de ella. Hay que tener especial cuidado en no verter el chorro de
agua directamente sobre la muestra, pues puede desprenderse.
 Lavamos con solución tampón a continuación.
 Dejamos escurrir en posición vertical hasta que se seque.
 Para la observación al microscopio, depositamos un cubreobjetos sobre la muestra.
 Ponemos una gota de aceite de inmersión y ya podemos observarlo con el objetivo 100x.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO
Los eritrocitos aparecen teñidos en color rosa-salmón y las plaquetas se ven muy pequeñitas
de color violeta.

OBSERVACIONES

EJERCICIOS
1. ¿Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica?
2. ¿Con qué reactivo fijamos el frotis?
3. ¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
Aquí os dejo un protocolo comercial.