PRÁCTICÁ 7.

TINCIÓ N DE WRIGHT

OBJETIVO
Observar cómo se ven las estructuras celulares con los distintos colorantes. Ya hemos visto el colorante
según Giemsa, en esta práctica vamos a ver como se observa la muestra teñida según Wright.

FUNDAMENTO
Este colorante se diferencia principalmente del anterior, en la presencia de metanol en su composición,
por lo que nos ahorraremos el paso previo de fijación antes de teñir la muestra.

El colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color azul las partes ácidas de las células) y
eosina (que tiñe las partes alcalinas), disueltos en metanol (que permite la fijación de las células).

MATERIAL NECESARIO
 Microscopio óptico
 Tubo de ensayo
 Pipeta pasteur con chupete
 Cristalizador
 Puente de tinción
 Frasco lavador
 Dos portas limpios
 Cubreobjetos
 Muestra de sangre

REACTIVOS
 Colorante Wright

Solución tampón pH 7,2

 Aceite de inmersión

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
  Realizamos un frotis sanguíneo que dejamos secar.
 Colocamos la extensión en el cristalizador, sobre el puente de tinción y añadimos el colorante de
Wright con ayuda de una pipeta pasteur.
 Dejamos actuar un minuto, escurrimos y enjuagamos con solución tampón.
 Lo colocamos en posición vertical hasta que escurra y se seque.
 En un tubo de ensayo preparamos 0,5ml de Wright, con 0,5ml de solución tampón.
 Mezclamos y aplicamos la dilución sobre la muestra, que dejaremos actuar sobre 3-5 minutos.
 Escurrimos el exceso de colorante y enjuagamos con agua destilada.
 Lavamos de nuevo con solución tampón.
 Dejamos escurrir y secar otra vez en posición vertical.
 Una vez seca la muestra, le colocamos un cubre encima y aceite de inmersión sobre este.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO
Los eritrocitos se ven teñidos un poco más intensos que en Giemsa.

OBSERVACIONES

EJERCICIOS
1. ¿Qué tipo de colorante utilizamos en la tinción?
2. ¿Qué sustancia empleamos como fijador?
3. ¿Cuánto tiempo debe estar en contacto el frotis con el colorante diluido?

Os dejo un protocolo comercial

Eosina-Azul de Metileno solución según Wright DC
para hematología, tinción de frotis sanguíneos

NC 3204 19 00

DATOS FISICOS: Líquido azul con matices rojizos • Miscible con alcohol • D 20/4 0,79 • P.E.:~ 65
°C • P. Inf.:~12 °C • T. Ign.:~455 °C • Lim. expl.5,5 %(v)31 %(v) •
APLICACIONES: Para Hematología y tinción de frotis sanguíneos.
Procedimiento:

Tener la precaución de que las extensiones sean muy finas.

Sobre la extensión colocada horizontalmente verter 1 ml de Eosina-Azul de Metileno solución según Wright
DC (Código 251768). Dejar actuar 3 minutos. Lavar la preparación con Solución tampón pH 7,2 DC (Código
252164). Dejar escurrir y secar en posición vertical.
Inmediatamente antes de su empleo y en tubo de ensayo, diluir 3 ml de Eosina-Azul de Metileno solución
según Wright DC (Código 251768) con 2 ml de Solución tampón pH 7,2 DC (Código 252164) y 15 ml de agua
destilada, mezclar bien y cubrir con esta dilución la preparación. Teñir durante 6 minutos y volver a lavar con
Solución tampón pH 7,2 DC (Código 252164).

Dejar escurrir y secar en posición vertical. Examinar con objetivo de inmersión

Otro protocolo similar:

TINCIÓN DE WRIGHT.
1. INTRODUCCIÓN: Es una tinción hematológica del tipo Romanowsky: azul de metileno y
sus productos de oxidación (colorantes básicos) y combinándolos con la eosina (colorante
ácido).
2. METÓDICA: extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa Panreac. El
colorante utilizado es una solución de eosina y una mezcla de metileno (50-75%) y azurB
(10-25%) junto con otros derivados del alcohol metílico.

Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario el paso previo

de fijación antes de la coloración. Sólo si se van a guardar las extensiones sin teñir de un día
para otro procederemos a su fijación para evitar su deterioro.

3. MATERIAL:
1. Microscopio óptico.
2. Cristalizador.
3. Puentes de tinción.
4. Pipetas Pasteur con chupete (de plástico o frasco cuentagotas).
5. Frasco lavador.
6. Guantes.
7. Tubos de ensayo.
4. REACTIVOS:
1. Solución de eosina-azul de metileno según Wright.
2. Solución tampón pH 7,2.
3. Aceite de inmersión.
5. MUESTRA: sangre capilar fresca o venosa anticoagulada (heparina o EDTA).
6. TÉCNICA:
1. Realizar frotis sanguíneo muy fino.
2. Dejar secar al aire.
3. Verter 1ml de eosina-azul de metileno sobre la extensión colocada en los puentes de
tinción.
4. Dejar actuar 1minuto.
5. Lavar con solución tampón 7,2.
6. Dejar escurrir y secar al aire en vertical.
7. Inmediatamente antes de su empleo y en un tubo de ensayo, diluir 0,5ml de eosina-
azul de metileno con 0,5ml de tampón 7,2. Mezclar bien y cubrir la extensión durante
3-5minutos.
8. Lavar al grifo.
9. Volver a lavar con solución tampón 7,2.
10. Dejar escurrir y secar en posición vertical.
7. LECTURA DE RESULTADOS: depositar una gota de aceite de inmersión y observar al
objetivo de 100x.
8. PREGUNTAS:
1. ¿Cómo observas las células?
2. ¿Qué coloración tienen los glóbulos rojos?
3. ¿Y los glóbulos blancos?
4. Dibuje cada tipo celular.