FUNDAMENTO, TECNICA, RESULTADOS (FOTOS), UTILIDAD

WRIGHT-GIEMSA:

Son mezclas de 2 colorantes primarios, el Azul de metileno y la eosina, el azul de

metileno (color azul), es un colorante básico, en las células se une a sustancias ácidas
que se tiñen de color azul.
TÉNICAS: Se hace un frotis sanguíneo, después en la caja de coplin se coloca con
metanol durante 5 minutos, colocas el frotis en el puente de tinción y se coloca Wright
durante 2 minutos, se coloca agua destilada sin derramar el colorante durante 2
minutos, se lava a chorro de agua eliminando el exceso del colorante, se deja secar y
se coloca en el colorante de Giemsa durante 1 minuto, después del minuto se lava a
chorro de agua, se introduce en una caja de coplin con ácido acético algunas veces y
se deja en el aire, después se va observar a 100x en el microscopio para identificar
celular.
RESULTADOS: Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado, El citoplasma
de los monocitos presentarán una tonalidad azul grisácea con gránulo rojizos bastante
finos y sus vacuolas características. El citoplasma de los linfocitos presentará varias
tonalidades azules, los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color
púrpura oscuro. Los núcleos de los monocitos de color púrpura algo más claros (lila),
los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso, las plaquetas
toman coloración violeta o púrpura.
UTILIDAD: Los tiempos varían de acuerdo a cada lote o tiempo de maduración del
colorante, de ahí que si los frotis recién teñidos resultan demasiado pálidos se corrige,
si en la aparición se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias
causas, durante la tinción el tampón fosfato controla el pH del colorante, si el
colorante es demasiado ácido la extensión resultará demasiado rojiza y si por el
contrario es demasiado alcalina la precipitación presentará un aspecto azulado.
 LEISHMAN
FUNDAMENTO

Los colorantes puestos habitualmente en técnica hematológica, hacen parte del grupo de los
colorantes sintéticos, derivados del carbón, las anilinas, solubilizadas en estado de sal. El
colorante Leishman es un derivado del colorante Ramanowsky y forma una mezcla de eosinato
de azul de metileno y eosinato de violeta y azul de metileno, disuelto en alcohol metílico.

PROCEDIMIENTO TÉCNICO:

 Hacer el frotis y secarlas en temperatura ambiente;

 Cubrir las láminas con 20 gotas del colorante;
 Dejar hacer efecto por 3 minutos;
 Poner 20 gotas de agua destilada en la lámina y mezclarlo con el colorante.
 Colorir por 12 a 15 minutos.
 Escurrir y lavar en agua corriente. Secar las láminas en posición vertical.

RESULTADOS ESPERADOS:

Características de una buena coloración:

1. Macroscópicamente: El frotis satisfactorio tiene que presentar un color rosa mate

uniforme. Los frotis de color rojo vivo han tenido actuación del colorante por poco
tiempo, los frotis de color gris o gris azulado han tenido actuación del colorante por
mucho tiempo;
2. Microscópicamente: Se hace la apreciación de la coloración por el aspecto de las
plaquetas. Coloración correcta: las plaquetas se presentan azuladas con pequeñas
granulaciones azurófilas. Cuando se hizo poca coloración, se van a presentar coloridas
de azul pálido. Si la coloración fue excesiva, irá presentarse de color purpura escura.

Una tinción de Leishman que

Escasos histiocitos con leishmanias
muestra la etapa de esquizontes
UTILIDAD intracelulares rodeados de abundantes
del parásito de la malaria
linfocitos.
Plasmodium vivax
Tinción de Leishman, también conocido como Mancha de Leishman, se usa en microscopía por
tinción frotis de sangre. Generalmente se usa para diferenciar e identificar células blancas de la
sangre, malaria parásitos, y tripanosomas.

Fundamentos: Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de

técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes celulares de la
sangre. Estos componentes conforman la fracción forme de la sangre, y gracias a las
tinciones se pueden diferenciar en un microscopio óptico. Las técnicas en que se
basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los
componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos.
Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad
química. Un colorante tipo Romaowsky está basado en el uso de una mezcla formada
por un colorante ácido (eosina) y uno o varios colorantes básicos (azul de metileno,
azur A, azur B y azur C). Las tinciones que se realizan con este tipo de colorante se
denominan tinciones panópticas o tinciones tipo Romanowsky.

Tinción de May-Grünwald
La tinción de May-Grünwald, al igual que la tinción de Giemsa o la Tinción de Wright,
está catalogada como tinción tipo Romanowsky. Del mismo modo que su colorante,
que da nombre a la tinción, está catalogado también como colorante tipo
Romanowsky. El colorante de May-Grünwald es una solución en metanol de un
colorante ácido (eosina) y un colorante básico (azul de metileno). Estos colorantes
teñirán las estructuras celulares dependiendo de su carácter ácido o básico.

Material
 Frotis sanguíneo seco y rotulado
 Cubeta de tinción
 Varillas paralelas
 Frasco lavador
 Pipetas pasteur
 Cronómetro
 Reactivos
 Agua destilada
 Colorante de May-Grünwald
Técnica
 1. Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
2. Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
3. Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
4. Cubrir la extensión con un volumen conocido de solución extemporánea
de May-Grünwald y dejar actuar durante 3 minutos. En este paso se
produce la fijación de la extensión gracias al metanol que contiene el
colorante.
5. Añadir el mismo volumen conocido de agua destilada y soplar
ligeramente con la pipeta para lograr una mezcla homogénea. Dejar
actuar la mezcla de colorante y agua destilada durante 8-10 minutos.
6. Lavar la extensión sanguínea con agua destilada hasta eliminar todos
los restos de colorante.
7. Secar las extensiones al aire, colocadas en vertical.
8. Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico.
Resultado
El resultado fue similar al obtenido en la tinción de Giemsa, donde los
citoplasmas de los leucocitos no se tiñeron y la coloración salió más acidófila
de lo normal. Al igual que en el resto de tinciones, los colorantes fueron
filtrados previamente y se cumplieron los tiempos a rajatabla. Una posible
explicación a los resultados mediocres es el mal estado de los colorantes
debido a una posible variación en el pH de los mismos.

Tinción de May-Grünwald vista al microscopio óptico a una resolución de 400X

(objetivo de 40X).
Observaciones
Esta práctica se realizó paralelamente a otras tinciones tipo Romanowsky.
Otros grupos se encargaron de hacer las tinciones de Giemsa, May-Grünwald-
Giemsa y Wright. El mejor resultado se obtuvo con la tinción de Wright.

Los núcleos de los neutrófilos se mostraron picnóticos en las tinciones de los

grupos que optaron por el uso de una sangre con cierta vejez. Esta sangre
había sido extraída días antes de la práctica y fue conservada a 4ºC.
La tinción de May Grünwald-Giemsa

es una de las tinciones policromas más utilizadas en hematología. Se basa en

la combinación de dos colorantes que en solución acuosa se ionizan y se
combinan con los distintos componentes celulares, según sus respectivas
afinidades, generando sales insolubles con diferentes matices de coloración.

May Grünwald: es una solución de eosina y azul de metileno en metanol, que

actúa como fijador. El azul de metileno es un colorante básico (catiónico) con
afinidad por los componentes celulares ácidos, como los ácidos nucleicos, a los
que tiñe de azul. Las estructuras celulares que fijan colorantes básicos se
denominan basófilas.

Giemsa: es una mezcla de eosina y derivados del azul de metileno. como el

azur I y el azur II. La eosina es un colorante ácido (aniónico) que tiñe de
matices de rojo los componentes celulares básicos, como la hemoglobina y
otras proteínas básicas y los gránulos citoplasmáticos de los leucocitos
eosinófilos. Las estructuras celulares que fijan los colorantes ácidos se
denominan acidófilas, y cuando el colorante que fijan es la eosina, se
denominan eosinófilas.

Materiales y reactivos
1. Pipetas pasteur
2. Frotis sanguíneos
3. Barras paralelas y cristalizador
4. Agua destilada
5. Colorantes proporcionados por el kit
Procedimiento: Normalmente los kits comerciales contienen una solución
concentrada de May Grünwald en metanol y una solución acuosa (tamponada
o no) de Giemsa. Para realizar la tinción hay que diluir ambos colorantes,
según cada fabricante.
a) Colocamos la extensión sobre el cristalizador.
b) Cubrimos la extensión con solución May Grünwald durante dos minutos
(para fijarlo).
c) Volcamos la extensión para eliminar el colorante y escurrimos.
d) Cubrimos la extensión con solución diluida de May Grünwald durante un
minuto.
e) Volcamos la extensión para eliminar el colorante, lavamos con agua
destilada y escurrimos.
f) Cubrimos la extensión con solución diluida de Giemsa durante 20
minutos.
g) Volcamos la extensión para eliminar el colorante, lavamos, escurrimos y
dejamos secar al aire.

Se puede
observar en el
centro un
neutrófilo.
 La tinción de Field

La tinción de Romanowsky es unas técnicas de tinción prototípica que fue predecesora

de varios métodos distintos, pero basados en principios similares entre los que se
incluyen las tinciones de Giemsa, Jenner, Wright, Field, y Leishman, las cuales son
utilizadas para diferenciar diferentes tipos de células en especímenes patológicos.

Es un método histológico para la tinción de frotis de sangre. Se utiliza para la tinción de

películas gruesas de sangre gruesa para la observación de parásitos de la malaria. La
tinción de Field es una versión de la tinción de Romanowsky, utilizada para el
procesamiento rápido de los especímenes.
La tinción de Fiel consta de dos partes - la tinción de Field A es azul de metileno y
Azure A disuelto en una solución tampón de fosfato; la tinción de Field B es Eosina Y
en una solución tampón. Se la conoce como tinción de Field debido al médico John
William Field, quién la desarrolló en 1941.

Coloración: Es el proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia

colorante sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la
solución colorante.
TÉCNICA GOTA GRUESA
La preparación de gota es un tipo de técnica que se utiliza para el estudio de
parasitosis en sangre, como las distintas especies de Plasmodium responsables de la
Malaria o Paludismo y para la identificación de distintas especies de Trypanosoma.
TÉCNICAS: Llenado del formato (entrevista al paciente), limpieza de laminillas (dos
laminillas, deben ser limpiadas con un algodón seco tomándose por los costados para
eliminar residuos de polvo y grasa), asepsia (algodón con alcohol en tres movimientos
de adentro hacia afuera y rotando el algodón), la lanceta se descubre en el momento
de la punción, punción (debe realizarse entre el pulpejo y la uña, a la altura de la
cutícula del dedo anular o en el lóbulo de la oreja), primer gota (se debe eliminar con
algodón seco) y segunda gota (será depositada en todos tercios de la laminilla para
formar el extendido).
UTILIDAD: Son muy útiles para detectar la presencia y observar la morfología de los
parásitos, ya que son más abundante que la extensión y más compactos.