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Practica 15. Tincion de Giemsa

Practica 15. Tincion de Giemsa

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Hematología. Prácticas de laboratorio.

15 de noviembre de 2010

PRÁCTICA 15: TINCIÓN DE GIEMSA
• Introducción. La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos. Es una tinción diferencial que es capaz de distinguir distintas estructuras celulares según su afinidad por colorantes básicos, ácidos o mezcla de ellos. Con esta tinción los eritrocitos aparecen de color naranja rosado, los núcleos de los leucocitos de azul púrpura, el citoplasma marfil o azul claro, las granulaciones neutrófilas pardo claro o violeta claro, las granulaciones eosinófilas rojo naranja, las granulaciones basófilas azul oscuro a púrpura y las plaquetas lila oscuro. • Material. o Microscopio. o Portas. o Puente de tinción. o Cubeta para la tinción. o Cristalizador. o Pipetas Pasteur. o Frasco lavador. o Tubos de ensayo. • Reactivos y muestras. o Sangre anticoagulada con EDTA o heparina (muestra nº). o Colorante GIEMSA, que es una mezcla de azul de metileno + eosina. o Tampón 7,2, compuesto por: Fosfato monopotásico = 0,431 gr. Fosfato disódico + 12 H2O = 1,15 gr. Agua destilada o suero fisiológico (NaCL 0,9 %) hasta completar 1 litro. o Metanol. o Aceite de inmersión. • Ejercicios y/o técnica. 1- Preparación del frotis. 2- Fijación. 3- Tinción. 4- Observar en el microscopio usando el objetivo de 100x. • Desarrollo y resultados. Ejercicio 1. Para la preparación del frotis usaremos un porta de canto liso y otro de canto biselado para realizar la extensión sobre el primero. Se coge una pequeña gota de la muestra con una pipeta Pasteur y se pone en un parte del porta, con el otro porta y en una inclinación aproximada de 45º se coloca en contacto con la gota de sangre y se extiende hacia el otro lado del portaobjetos, tal y como muestra la figura 1.

José Luis Nieto Ferrando. jonife@gmail.com

1º Lab. Diag. Clínico. 1

Prepararemos el colorante realizando una dilución 1/10 de colorante con solución Tampón 7. Para teñir usaremos una pipeta Pasteur.2 y lo dejamos secar en posición vertical. y lo dejaremos actuar durante 25 minutos. Una vez fijada la muestra se puede teñir al cabo de unos días. Para fijar el frotis hemos de colocarlo sobre el puente de tinción y con una cubeta debajo. Hemos de tener especial cuidado con el filtrado del colorante para que no nos queden grumos que nos puedan confundir a la hora de ver la muestra al microscopio. jonife@gmail. Ejercicio 3. Ejercicio 2. Cuando haya pasado este tiempo decantaremos el sobrante de tinte y lavaremos cuidadosamente la extensión con Tampón 7.Hematología. y cubrirla con metanol durante 3 minutos. Prácticas de laboratorio. decantaremos el metanol y dejaremos secar la fijación poniéndola en posición vertical. Después. • Conclusiones. Realización de un frotis. aproximada mente se gasta 1 mL por porta. ya se puede observar cuando queramos. 2 . Clínico. aunque conviene hacer de sobra. a la que añadiremos un poco de agua.2 y mezclaremos suavemente (para 2 mL = 200 µ de colorante y 1800 µ de Tampón 7. Diag. Observamos la extensión al microscopio y se pueden distinguir con bastante claridad los distintos tipos de células sanguíneas. José Luis Nieto Ferrando. 15 de noviembre de 2010 Fig. Ejercicio 4. 1. Hemos de tener cuidado de hacer suficiente colorante para todas las extensiones que queramos teñir. y con esta cubriremos el frotis en su totalidad.2). y si la hemos teñido.com 1º Lab.

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