UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

BIOLOGÍA

LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN FORMATIVA II

UNIDAD II GENÉTICA

PRÁCTICA 4
OBSERVACIÓN DE CROMATINA SEXUAL

ALUMNA: Ross Rodríguez Isis

PROFESOR: Bautista Reyes Carlos
GRUPO: 1201
INTRODUCCIÓN
La cromatina sexual se conoce también como cuerpo o corpúsculo de Barr debido
a su descubridor Murray Barr. Se empieza a formar cuando comienza el desarrollo
embrionario, en donde un cromosomas X de las células de las hembras empiezan
a generar grandes cantidades de Xista, molécula de ARN reguladora, la cual
recubre la mayor parte del cromosoma, este cromosoma se condensa muy
apretadamente y evita la transcripción dando como resultado que alrededor del
85% de los genes del cromosoma X inactivado no se transcriban, este cromosoma
X condensado es el denominado cuerpo de Barr.
Cuando se les pone colorantes y se tiñen, se observa intensamente el color en los
núcleos de las células somáticas de las hembras de los mamíferos,
correspondientes al cromosoma X.
La solución colorante de Giemsa está en metanol que tiene un colorante ácido, la
eosina y dos colorantes básicos, el azur y el azul de metileno, como son
colorantes ácidos y básicos, teñirán dependiendo del carácter de las estructuras
celulares.
La solución colorante de Wright fue creada en 1902 por Homer Wright, contiene
alcohol metílico con el colorante ácido eosina Y, y otro básico, el azul de metileno,
con este colorante, a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos nuetrofílicos les
da un color púrpura, a los glóbulos rojos le da un color rosado.
La solución buffer de fosfatos con pH 7 contiene fosfato monosódico y fosfato de
disodio, se le agrega ácido fosfórico si se requiere de un pH más ácido e hidróxido
de sodio cuando se requiere que sea alacalino.

OBJETIVOS GENERALES
 Determinar citológicamente el sexo de un individuo mediante la observación
de las laminillas histológicas.
 Analizar sangre y epitelio bucal para identificar la cromatina sexual.
 Aplicar diferentes métodos para elaborar laminillas en las que identifique la
cromatina sexual.

DIAGRAMA DE FLUJO DE LA METODOLOGÍA

MATERIAL ACCIÓN REACTIVOS
Métodos de tinción de células epiteliales con Giemsa

Enjuagar la boca varias veces

Abatelenguas Raspar la mucosa interna de
la mejilla con un abatelenguas
 y desecharlo
Abatelenguas Volver a raspar y colocar la
Portaobjetos muestra en el portaobjetos
Dejar secar al aire
Caja Petri Agregar el alcohol metílico en Alcohol metílico
un caja Petri
Colocar el portaobjetos con la
muestra en caja Petri con
alcohol durante 5 minutos
Escurrir el exceso de alcohol
metílico
Dejar secar al aire
Cámara de tinción Preparar una cámara de Giemsa diluida 1:10 v/v
tinción con Giemsa
Pasar el portaobjetos a la
cámara de tinción y dejar de
15 a 20 minutos
Lavar la preparación con
goteo de agua
Dejar secar al aire
Microscopio óptico Observar las preparaciones al Aceite de inmersión
microscopio en 10X, 40X y
100X, en este último se le
coloca una gota de aceite
Localizar las células
epiteliales, poniendo especial
interés en la cromatina
Ver la “Nota”
Método de tinción para frotis sanguíneo con Wright

Calentar la yema de los dedos

por medio de fricción ligera
Limpiar con alcohol Alcohol al 70%
Dejar secar la yema del dedo
Lanceta estéril Picar una vez el dedo rápida y
firmemente con la lanceta, NO
presionar el dedo para que
salga la sangre
Eliminar las dos primeras
gotas de sangre
Portaobjetos Depositar la tercer gota en el
extremo del portaobjetos
Para realizar el frotis
Portaobjetos Se coloca el portaobjetos
esmerilado perpendicularmente al otro
que tiene la gota de sangre
 Se inclina a un ángulo de 30º
a 40º con la gota de sangre
dentro del ángulo hecho
Acercar el portaobjetos a la
gota y detenerse cuando se
toque
Mover el portaobjetos
esmerilado de izquierda a
derecha para que la sangre se
distribuya en el canto del
portaobjetos
Ir alejando con velocidad
constante y con suavidad el
portaobjetos del inicio de la
gota hasta el otro extremo
Antes de llegar al final del
extremo levantar el
portaobjetos esmerilado
Dejar secar al aire la
preparación
Añadir 3 a 5 gotas de Solución colorante de
colorante Wright dejando Wright
reposar por 3 minutos sin
dejarlo secar
Añadir sobre el colorante la Solución buffer de
misma proporción de solución fosfatos pH. 7
buffer durante 7 min más sin
dejar secar
Lavar la preparación con Agua
goteo de agua
Secar al aire
Microscopio óptico Observar las preparaciones al
microscopio a 10X y 40X
Observarlo en 100X, colocarle Aceite de inmersión
una gota de aceite
Localizar los neutrófilos
(polimorfonucleares) poniendo
especial interés en los palillos
de tambor (Drumstick).
Ver la “Nota”

METODOLOGÍA FUNDAMENTADA
Métodos de tinción de células epiteliales con Giemsa
Enjuagar la boca repetidas veces con agua y raspar la mucosa interna de la mejilla
con un abatelenguas, desechar este primer raspado por el alto contenido de
bacterias.
Repetir la operación y extender la muestra sobre un portaobjetos.
Dejar secar al aire.
Colocar el porta objetos en una caja Petri que contenga alcohol metílico para su
fijación durante 5 min.
Escurrir el exceso de alcohol metílico.
Dejar secar al aire.
Pasar el portaobjetos a una cámara de tinción que contenga Giemsa diluida 1:10
(V/V) para su tinción por 15 a 20 min.
Lavar la preparación con goteo de agua y dejar secar al aire.
Observar las preparaciones al microscopio a 10X, 40X y para observarlo en 100X
colocarle una gota de aceite de inmersión para poder verlo con claridad; localizar
las células epiteliales, poniendo especial interés en la cromatina. En mujeres
normales el número promedio de células de frotis bucales con corpúsculos de Barr
es de 18-60 %.
Nota: Una buena preparación se observa libre de bacterias y en ella las células
deben verse en monocapa y la cromatina sexual aparece como una estructura
más teñida pegada a la cara interna de la membrana nuclear y que no desaparece
al mover el tornillo micrométrico del microscopio (Figura 3).
Método de tinción para frotis sanguíneo con Wright
Calentar la yema de los dedos con fricción ligera y limpiar con alcohol al 70%, para
obtener una muestra adecuada de sangre capilar.
Dejar secar la yema del dedo y con una lanceta estéril, picar una sola vez firme y
rápidamente. No presionar el dedo para sacar la sangre, ésta debe fluir
libremente.
Eliminar las 2 primeras gotas de sangre y depositar la tercera en el extremo de un
portaobjetos.
Realizar el frotis. Consultar con su asesor.
A partir de la gota de sangre colocada en el portaobjetos, se debe de realizar con
un portaobjetos esmerilado, primero se pone el portaobjetos de forma
perpendicular al que contiene la sangre, luego se inclina a un ángulo de 30 º a 40º
con la gota de sangre dentro del ángulo hecho, acercar el portaobjetos a la gota y
detenerse cuando se toque, mover el portaobjetos esmerilado de izquierda a
derecha para que la sangre se distribuya en el canto del portaobjetos, a partir de
ahí, ir alejando ni muy rápido ni muy lento y con suavidad el portaobjetos del inicio
de la gota hasta el otro extremo, de esta forma se irá creando una capa delgada
de sangre y antes de llegar al final del extremo levantar el portaobjetos
esmerilado.
Dejar secar al aire la preparación.
Añadir 3 a 5 gotas de colorante Wright, teñir durante 3 min sin dejar secar el
colorante, y añadir sobre el colorante la misma proporción de solución buffer
durante 7 min más. Sin dejar secar la muestra durante el tiempo de tinción.
Lavar la preparación al chorro de agua, en realidad es con goteo de agua para que
no se eliminen las sustancias y secar al aire.
Observar las preparaciones al microscopio a 10X, 40X y 100X localizar los
neutrófilos (polimorfonucleares) poniendo especial interés en los palillos de tambor
(Drumstick).
Nota: La cromatina sexual se observa como una prolongación del núcleo del
neutrófilo (Figura 4). En mujeres normales el promedio calculado de
polimorfonucleares con palillo de tambor es de 3 de cada 100 células.

MATERIAL, EQUIPO Y CÁLCULOS

MATERIAL BIOLÓGICO
Raspado de la mucosa bucal (células de descamación)
Gotas de sangre obtenidas por punción capilar
MATERIALES DIVERSOS
Portaobjetos
Cajas Petri
Probeta de 25 mL
Pipeta de 10 mL
Abatelenguas
Varilla de vidrio
Papel seda
Lancetas estériles
Cámara de tinción
REACTIVOS
Etanol (C2H5OH) al 70%
Solución colorante Giemsa (C14H14ClN3S) diluido 1:10 (V/V)
Solución colorante de Wright
Alcohol metílico (CH3OH)
Solución buffer de fosfatos pH. 7
Aceite de Inmersión
 EQUIPOS
Microscopio óptico
SERVICIOS
Agua
Vacío
Gas
Energía eléctrica
Campanas de extracción
Extractores de ventilación
Tarjas de lavado
Extintores
Regaderas de seguridad
Gavetas
Mesas de trabajo
Ventanas para la ventilación
Botiquín de emergencia

1mL de C 14 H 14 Cl N 3 S
Solución colorante Giemsa 1:10 v/v = 9 mL H 2 O

CUESTIONARIO DEL MANUAL

1. Explique si el cromosoma “X” se condensa totalmente o no.
Cuando comienza el desarrollo embrionario, un cromosomas X de las células
de las hembras empiezan a generar grandes cantidades de Xista, molécula de
ARN reguladora, la cual recubre la mayor parte del cromosoma, este
cromosoma se condensa muy apretadamente y evita la transcripción dando
como resultado que alrededor del 85% de los genes del cromosoma X
inactivado no se transcriban. Este cromosoma X condensado se le llama
cuerpo de Barr debido a su descubridor Murray Barr.

2. Defina el término “compensación de dosis” mencionado en el texto.

Se refiere a que cuando el cromosomas activo tiene fallas, el ADN del cuerpo
de Barr puede transformarse a eurocromático o activo para compensar fallas y
a partir de él se puede disponer de los genes que contiene, los cuales estaban
previamente condensados.

3. Describa brevemente los síndromes de Turner, Superhembra y Klinefelter

Síndrome de Turner: es cuando sólo se tiene un cromosoma X, se da en
aproximadamente 1 de cada 3,000 bebes fenotípicamente mujeres, la
deficiencia de hormonas provoca que cuando la niñas llegan a la pubertad no
presenten menstruación, tampoco se desarrollan las características sexuales
secundarias, como el ensanchamiento de caderas o el crecimiento de las
mamas, también tienen una estatura baja, tienen pliegues cutáneos alrededor
del cuello, tienen un mayor riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares,
defectos renales y pérdida del oído.
Superhembra: también llamada trisomía X, es cuando las mujeres que tienen
este síndrome presentan tres cromosomas X, una de cada 1,000 mujeres tiene
esta trisomía, estas mujeres tienen una tendencia a tener problemas de
aprendizaje y ser más altas, casi todas las mujeres son fértiles.
Síndrome de Klinefelter: se le denomina así cuando los hombres tienen dos
cromosomas X y uno Y, nacen aproximadamente 1 de cada 1,000 hombres
con este síndrome, la mayoría tiene una vida normal y no saben que tienen un
cromosoma X extra, otros presentan en la pubertad características sexuales
secundarias mixtas como un desarrollo parcial de mamas, un ensanchamiento
de caderas y testículos pequeños, regularmente son hombre estériles ya que
tienen un bajo recuento de espermatozoides, pero no son impotentes.
BIBLIOGRAFÍA
 Audesirk T., Audesirk G. y Byers B. (2013) (9a ed.) Biología: La vida en la
Tierra con Fisiología. México: Pearson Educación de México.
 Carr J. y Rodak B. (2014) (4a ed.) Atlas de Hematología Clínica. México:
Editorial Panamericana.
 Gil M. () Tinción de Wright: fundamento, materiales, técnica y usos. Lifeder.
Recuperado de: https://www.lifeder.com/tincion-de-wright/
 González M. (2020) Corpúsculo de Barr: características, estructura,
diagnóstico, enfermedades. Lifeder. Recuperado de:
https://www.lifeder.com/corpusculo-de-barr/
 Greenlane (2018) Cómo hacer una solución tampón de fosfato. Ciencia,
tecnología, matemáticas. Recuperado de:
https://www.greelane.com/es/ciencia-tecnolog%C3%ADa-matem
%C3%A1ticas/ciencia/make-a-phosphate-buffer-solution-603665/
 Rodríguez F. (2017) Frotis sanguíneo. Blog de Laboratorio Clínico y
Biomédico. Recuperado de: https://www.franrzmn.com/frotis-sanguineo/
 Rodríguez F. (2017) Tinción de Giemsa. Blog de Laboratorio Clínico y
Biomédico. Recuperado de: https://www.franrzmn.com/tincion-de-giemsa/
 Lawrence E. (editora) (2003) (12ª ed.) Diccionario Akal de términos
biológicos. España: Pearson Education Limited.