INTRODUCCION

Los métodos de separación de sustancias químicas son numerosos. La sencillez o

dificultad de los mismos viene dada por la semejanza que exista entre las
sustancias a separar. Cuanto más diferentes sean éstas, más sencilla será la
técnica empleada. Así, si se quiere separar una mezcla de limaduras de hierro y
azufre, bastará un imán que atraiga selectivamente las limaduras dejando sin
afectar el azufre. Ahora bien, si se trata de separar una mezcla de aminoácidos,
por ejemplo, la separación por los métodos tradicionales (destilación fraccionada,
cristalización fraccionada, etc.) resulta prácticamente imposible, dada la similitud
de las propiedades físicas y químicas de los componentes de la mezcla.

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

A1. Saturar con la fase móvil la lámina de papel mínimo 8 horas antes del
corrimiento de la muestra.

A2. Antes del corrimiento sacar las láminas y adicionar la fase móvil por las
paredes de la cámara de corrimiento hasta cubrir medio cm de solvente.

A3. Tomar con una micropipeta una muestra de la mezcla de colorantes y colocar
una aplicación en la parte media. Del papel a una altura de un cm. Dejar secar.

A4. Repetir la operación anterior tres veces con el fin de concentrar la muestra

A5. Colocar las láminas en forma inclinada y efectuar el corrimiento hasta que la
fase móvil haya cubierto la totalidad de la fase estacionaria.

A6. Calcular el factor de retención de cada colorante Rf = distancia recorrida por el

analito /distancia recorrida por la fase móvil.

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

En Química, la cromatografía en columna es un método cromatográfico usado

para aislar un único compuesto químico de una mezcla. La cromatografía en
columna puede llevarse a cabo usando la gravedad para mover el solvente, o
usando gas comprimido para empujar el solvente a través de la columna.
EJEMPLOS

1. Derramar vino sobre un mantel blanco. Al secarse el vino en contacto

con el aire, las diversas sustancias que lo componen teñirán de distinto
color el blanco de la tela.
2. En los análisis de sangre. A menudo se realiza la cromatografía de
muestras de sangre para poder separar e identificar sustancias
contenidas en ella, imperceptibles normalmente, a partir del color que
reflejan en un soporte o sometidas a una luz específica. Tal es el caso
de algún fármaco o alguna sustancia específica, como el alcohol.
3. En un examen de orina. La orina, incluso más que la sangre, es una
mezcla de diversos compuestos, cuya presencia o ausencia revela el
funcionamiento del organismo. Por ende, se puede realizar una
separación cromatográfica para buscar residuos inusuales, como
sangre, sales, glucosa o drogas.
4. Para revisar escenas del crimen. Como en las películas, se toman telas,
fibras, tejidos u otros soportes para observar la separación por
adherencia de distintas sustancias, como el semen o la sangre, que a
simple vista podrían pasar desapercibidas.
5. Para hacer comprobaciones sanitarias de alimentos. Dado que se
conoce la reacción de los alimentos al ser sometidos a un espectro
cromatográfico, puede observarse si hay en ellos algún tipo de sustancia
indebida o producto de agentes microbianos a partir de una pequeña
muestra.
6. Para verificar niveles de contaminación. Ya sea en el aire o el agua,
puede medirse a partir de una muestra pequeña la reacción de las
sustancias disueltas e imperceptibles, empleando un soporte específico
que permita distinguir entre los compuestos, dejando secar el agua, por
ejemplo.
CUESTIONARIO

1. Explique la diferencia de separación de los componentes de una muestra

en una cromatografía de intercambio iónico, exclusión molecular, adsorción
y partición o reparto.

Cromatografía de adsorción

La separación se basa fundamentalmente en las distintas afinidades

de adsorción de los componentes de la muestra hacia la superficie de
un sólido activo.

Cromatografía de reparto

La separación se basa fundamentalmente en las diferencias de

solubilidad de los componentes de la muestra en la fase estacionaria
(cromatografía de gases) o en las diferencias de solubilidad de los
componentes en la fase móvil y en la fase estacionaria (cromatografía
de líquidos).

Cromatografía de intercambio iónico

La separación se basa fundamentalmente en la distinta susceptibilidad

para el intercambio de iones de los componentes de la muestra. la
cromatografía de intercambio iónico sobre partículas pequeñas con
columnas de alta eficacia, en la que se utilizan normalmente
detectores conductimétricos o espectroscópicos, se suele denominar
cromatografía iónica (IC).
Cromatografía de exclusión

La separación se basa fundamentalmente en efectos de, tales como

diferencias en el tamaño de las moléculas y /o en su forma o en su
carga. El término cromatografía de exclusión por tamaño, se puede
utilizar cuando la separación se basa en el tamaño molecular. Los
términos cromatografía de filtración sobre gel o permutación sobre gel
(GPC), se han utilizado con anterioridad para describir este proceso
cuando la fase estacionaria es un gel hinchado. El término
cromatografía de exclusión de iones es específico para la separación
de iones en una fase acuosa.

2. ¿Cómo se lleva a cabo la adición de la muestra en una cromatografía de

frente móvil (análisis frontal), de elución y de desplazamiento?
Fase móvil: arrastra la muestra por la fase estacionaria desde abajo hacia arriba.

Elución: Aquí es necesario que los analítos separados dentro de la columna

lleguen a salir de la columna para detectarlos.

Desplazamiento: a medida que el solvente se desplaza sobre el papel, se produce

un reparto o distribución de los analitos de la muestra entre el solvente orgánico.

3. En la cromatografía laminar ¿qué significado se le da al Factor de

Retención Rf?

Relación de frentes, Rf, y representa la distancia que recorre un analito sobre la

fase estacionaria respecto a la distancia que recorre la fase móvil en la
cromatografía.

4. ¿Cuál es la función de la saturación de la fase estacionaria en una

cromatografía laminar?

Material que pertenece dentro de la columna comatografia y que retiene algún

componente de la maestra, posee una gran área superficial y puede ser un sólido
o un líquido dispuesto sobre un sólido lo que actúa como soporte.

5. Defina los siguientes términos, fase estacionaria, soporte, fase móvil, y

eluído

Fase estacionaria: componente que estará contenido en un soporte adecuado y

como su nombre lo indica permanecerá fija en un espacio determinado.

Soporte: Cosa que recibe el peso de otra e impide que esta se tambalee o caiga.

Fase móvil: compuesto químico, o una mezcla sencilla de compuestos químicos y

como su nombre lo indica debe fluir (moverse) a través de la fase estacionaria.

Eluído: es el material analito que emerge del cromatógrafo. Incluye

específicamente tanto los analitos como los solutos que pasan a través de la
columna