UNIVERSIDAD DE LA SALLE

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

MEDICINA VETERINARIA

ALEJANDRA SOFÍA SALINAS PEÑA 14191040

BRAYAN ESTIVEN MELO MELO 14181725

KAREN DANIELA RONCANCIO PASCAGAZA 14191042

MARIA FERNANDA BALLESTEROS DIAZ 14182038

PAULA ANDREA GARZON GOMEZ 14191112

DOCENTE:

Dr. GERMÁN RODRÍGUEZ MARTÍNEZ

                     CÉSAR AUGUSTO DÍAZ ROJAS

TRABAJO:

 PRE-LABORATORIO 2

14/10/20

BOGOTÁ
1. ¿Qué son las enterobacterias y cuál es su importancia clínica en Medicina
veterinaria?

La familia Enterobacteriaceae, pertenece al orden XIII enterobacteriales, es un grupo

heterogéneo y extenso de bacilos gramnegativos cuyo hábitat natural es el intestino y
muchos de estos microorganismos provocan enfermedades tanto en los animales
productores de alimentos ( diarrea de los recién nacidos y salmonelosis), como en los
animales de compañía ( infecciones y abscesos del tracto urinario) y en  el ser humano.
Está conformada por 41 géneros y más de 100 especies, aunque menos de la mitad
tienen interés desde el punto de vista veterinario.La familia comprende muchos géneros
como son Escherichia, Shigella, Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus y
otros más (Brooks et al, 2014).  En la Medicina veterinaria tiene una  gran importancia ya
que esta familia de enterobacterias presenta la causa más común de infecciones de vías
urinarias (UTI) y un número limitado de especies también son agentes causales de
diarrea. La diseminación al torrente sanguíneo causa choque endotóxico por bacterias
gramnegativas, complicación temible y a menudo letal ( Sherris et al, 2004).

2. Diga cuales son las características más importantes de la familia

Enterobacteriaceae

La familia Enterobacteriaceae son bacilos gramnegativos entéricos, pero estas bacterias

también se denominan coliformes, ya sea móviles con flagelos perítricos o no móviles; se
multiplican en medios con peptona o extracto de carne sin que se añade cloruro de sodio
u otros complementos; se multiplican bien en agar de MacConkey; proliferan en medios
aerobios y anaerobios (son anaerobios facultativos); fermentan una amplia gama de
hidratos de carbono y fermentan en vez de oxidar glucosa, a menudo produciendo gas,
poseen una estructura antigénica compleja y producen diversas toxinas y otros factores
de virulencia; son catalasa positiva, oxidasa negativa (excepto Plesiomonas) y reducen
nitrato a nitrito; y tienen un contenido de DNA de G + C de 39 a 59% (Brooks et al, 2014).
Las enterobacterias pueden comportarse como apatógenas y patógenas oportunistas y
patógenas importantes. Las primeras, pueden encontrarse como contaminantes de
muestras clínicas, siendo aisladas del ambiente y/o materia fecal; las enterobacterias
patógenas oportunistas ocasionalmente producen enfermedad a nivel del tracto digestivo,
mientras que las patógenas importantes pueden causar daños entéricos y sistémicos, por
poseer una estructura antigénica y compleja y producir varias toxinas y otros factores de
virulencia (BAÜMLER, A.J; TSOLIS, R.M; FITCH. T.A Y ADAMS, L.G. 1998).

3. ¿Cómo se puede identificar el género bacteriano de la familia Enterobacteriaceae

en el laboratorio de bacteriología? 

Morfológicamente los microorganismos pertenecientes a este género son cocobacilos o

bacilos de bordes redondeados cuyas dimensiones varían desde 0,3 a 1 µm de ancho y 3
a 6 µm de largo, son aerobios o anaerobios facultativos y en la coloración de Gram se
comportan como gram negativos. 

Solo Klebsiella spp. y Raoultella spp. poseen cápsula.

No tienen exigencias nutricionales. La mayoría crece en los medios empleados para la
siembra primaria de muestras clínicas: agar CLDE, agar eosina azul de metileno (Levine o
EMB), medios cromogénicos, agar sangre, 107 etc., entre 25ºC y 37ºC, excepto algunas
cepas de Serratia plymuthica que no lo hacen a 37ºC.

Las características culturales de la colonia variarán de acuerdo al medio empleado.

Los medios cromogénicos contienen sustratos para la detección de ßglucosidasa, enzima
presente en los microorganismos del grupo KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia y
Citrobacter), que permite diferenciarlos de Escherichia coli. 

El uso de estos medios orienta hacia las pruebas a seleccionar para la identificación final.
Varias especies producen pigmento rojo: algunas cepas de Serratia marcescens,
S.rubidaea y S. plymuthica producen prodigiosina, pigmento que puede observarse en el
centro, en los bordes o en toda la colonia. Un pigmento amarillo es producido por
especies ambientales E. pulveris y E. turicensis, la mayoría de las cepas de Cronobacter
sakazakii y P. agglomerans139,140 . 

Serratia odorifera produce un olor acre, por la producción de alquilmethoxypyrazinas55 . 

Fermentan la glucosa, producen gas, son oxidasa negativas y catalasa positivas, reducen
nitratos y nitritos. Son generalmente móviles, excepto el género Klebsiella. La
identificación inicial se basa en las características fenotípicas con el empleo de métodos
convencionales y de costos más accesibles. La complejidad taxonómica de estos
microorganismos y el hecho de que varias especies compartan un mismo perfil bioquímico
hace que en determinados aislamientos se deba recurrir a los métodos moleculares para
arribar a una identificación final. 

4. Mencione cómo se realizan las pruebas bioquímicas de Indol, Citrato de Simonds,

Sulfuro, Gelatina, Fermentación, Citrulina y Acetoína.

PRUEBA DE INDOL: 
El indol es uno de los productos del metabolismo del aminoácido triptófano. Con un medio
rico en triptófano, el indol puede ser detectado por su habilidad para combinarse con
ciertos aldehídos para formar un compuesto coloreado. 
Materiales:
-Microorganismo procedente de cultivo
-Medio de cultivo de agua de peptona en tubo/ caldo de triptofano
-Asa
-Mechero bunsen
-Papel filtro
-Pipeta Pasteur
-Reactivo de Kovacs/ Ehrlich 
-Estufa para cultivo
Procedimiento:
1.Sembrar el microorganismo en el agua de peptona o en el caso del triptófano,este caldo
se inocula en la colonia aislada
2.Incubar: Agua de peptona entre 24 a 48 horas y caldo de triptofano entre 18 a 24 horas.
3.Añadir 5 gotas del reactivo ya sea Kovacs para el agua de peptona o Ehrlich para
triptófano
4.Agitar y dejar reposar
Resultados:
-Ensayo positivo:
Agua de peptona:Se observa un anillo color rojo en la superficie del medio
(Rodriguez,2018)
Caldo de triptofano:Segundos después se observa un color rojo en la interfase
-Ensayo negativo:No hay cambio en el color o se observa un color amarillo en la
interfase. (Lopardo,Predari y Vay,s.f) 

PRUEBA CITRATO DE SIMONDS: 

Las bacterias capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, utilizan también
las sales de amonio como fuente de nitrógeno, desdoblándose para dar amoníaco
generando como resultado un ambiente alcalino.
Materiales: Se utiliza el Agar citrato de Simmons disolviendo en la cantidad necesaria de
agua purificada esterilizandola en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos,luego se deja
enfriar y solidificar.
Procedimiento:
1.Se inocula material de una colonia estriando la superficie del medio de cultivo.
2.Incubación de 35-37ºC durante 24 a 48 horas o más en algunos microorganismos.
(Lopardo,Predari y Vay,s.f) 
Resultados:
-Ensayo positivo:Crecimiento bacteriano con un intenso color azul 
-Ensayo negativo:Ausencia del crecimiento y permanencia del color verde del medio de
cultivo. (Britania,s.f)

PRUEBA DE SULFURO: 
Se utiliza el Agar SIM para determinar la formación de sulfuro,producción de indol y a su
vez la movilidad (debe ser semisólido) dentro de la identificación de enterobacterias.
Materiales: Disolver en agua purificada calentando poco a poco para luego hacer
autoclave a 121ºC durante 15 minutos,luego se deja enfriar y se guarda para solidificar
Procedimiento:
1.Tomar el material de una colonia sembrando por punción utilizando una aguja de
inoculación recta
2.Se deja en incubacion a 35-37ºC de 18-24 Horas.
Resultados
-Generación de Sulfuro:
Ensayo positivo:Ennegrecimiento del medio de cultivo
Ensayo negativo:No hay cambios de color 
-Movilidad:
Ensayo positivo:Se observa turbio el medio 
Ensayo negativo:Hay crecimiento a lo largo de la punción 
-Producción de indol
Ensayo positivo:Aparece un color rojo al agregar 5 gotas de reactivo
Ensayo negativo:El color no tiene cambios (Lopardo,Predari y Vay,s.f)
PRUEBA DE GELATINA:
La prueba de la gelatina  se utiliza para la diferenciación de microorganismos sobre la
base de la producción de gelatinasa en un entorno de laboratorio. Donde este agente se
usa  para solidificar los medios de cultivo; con la finalidad de que sea más sencillo el
aislamiento de cultivos puros y la capacidad de realizar recuentos en placa. 

La prueba consiste en poner en contacto el microorganismo problema con un medio de

cultivo (gelatina). Si el microorganismo posee la enzima proteolítica gelatinasa, al
cultivarlo en el medio, la gelatina se desnaturaliza, donde la gelatina pierde su estructura
inicial semisólida y se convierte en líquida cuando disminuye la temperatura a 6ºC
aproximadamente.
Materiales: 
 Medio de cultivo (12,8 gramos de gelatina en 100 ml de agua destilada)
 Microorganismo problema
 Estufa de incubación
 Mechero Bunsen
 Asa de siembra de platino
 Papel de filtro

Procedimiento: se prepara el medio de cultivo, donde se llenan dos tubos con la gelatina
nutritiva, posteriormente se coloca en el primer tubo el microorganismo a identificar y el
segundo tubo se deja solo con la gelatina (tubo control) , seguidamente se incuban los
tubos de 1-14 días a una Tº entre 20-25ºc.
Resultados: 
 Gelatinasa negativa: cuando no hay hidrólisis. Donde el medio de cultivo a una
temperatura baja está totalmente sólido 
 Gelatinasa positivo: cuando se incuba a temperatura ambiente o a baja
temperatura y se empieza a observar  que el medio de cultivo se convierte en (Hay
hidrólisis).  ( Rodriguez, F. 2018) 

PRUEBA DE FERMENTACIÒN: 
La fermentación es un proceso de oxidación que llevan a cabo microorganismos que
efectúan reacciones sobre algunos compuestos orgánicos, transformando moléculas
complejas a más simples, donde se da una liberación de energía (Universidad Nacional,
2000). 
Esta prueba consiste en la identificaciòn  de bacterias utilizan los carbohidratos por la vía
oxidativa o fermentativa , donde se utiliza el agar OF (contiene  agar, peptona y azul de
bromotimol como indicador de pH) . Inicialmente el medio es de color verde (pH 7,1) y vira
a amarillo cuando el medio se acidifica (pH de 6 a 7,6) producto de la fermentación del
carbohidrato.

Procedimiento:  se inoculan 2 tubos y a uno se le coloca un tapón de parafina y se rotula

con la letra F y al otro no se le añade parafina y se le coloca la letra O. El tubo que tiene la
letra F  mide la fermentación  y el tubo con la letra O mide la oxidación, no se coloca
parafina.
Resultados: 

 Si el tubo de oxidación "O" se torna amarillo, pero el de fermentación "F" queda

verde la bacteria es una oxidadora, donde no fermenta el carbohidrato.
 Si el tubo "O" permanece verde y el tubo "F" se torna amarillo: la bacteria fermenta
pero no oxida, es una fermentadora, una anaerobia estricta, no oxida.
 Si ambos tubos quedan amarillos la bacteria es anaerobia facultativa, oxida y
fermenta el carbohidrato.
 Si ambos tubos quedan verdes es una bacteria inerte que no utiliza el carbohidrato
por ninguna vía metabólica. (Rodriguez, E. 2012) 

PRUEBA DE ACETOINA :  

La prueba de Voges Proskauer (VP) consiste en determinar la capacidad que tiene un
microorganismo para producir el metabolito acetil metil carbinol (acetoína) como producto
intermediario derivado del metabolismo de la glucosa  en presencia del oxígeno  y de
álcali. (Microkit, 2014) 
Materiales: 
-Microorganismo problema procedente de un cultivo
-Medio de cultivo Clark y Lubs
-Asa de siembra de platino
-Mechero bunsen
-Papel de filtro
-Micropipetas automáticas
-Puntas de micropipeta
-Estufa de cultivo
-Reactivo de α-naftol

Procedimiento:
1.Coger un inóculo del microorganismo problema procedente de un cultivo con un asa de
siembra de platino.
2.Sembrar el microorganismo problema en un medio Clark y Lubs. 
3.Incubar a 37ºC durante 48 horas.
4.Añadir 0,5 ml de α-naftol y 0,5 ml de KOH al 40%.
5.Agitar y poner en posición horizontal para que la superficie de contacto con el oxígeno
aumente.
5.Esperar 15 minutos.
6.Poner el tubo en posición vertical y comprobar el resultado.
Resultados:
  VP (+): Coloración rojo-rosada en la superficie antes de 1 hora
 VP(-):Coloración amarilla o cobriza en la superficie durante la primera hora
(Microkit, 2014) 

PRUEBA DE CITRULINA: 
La prueba de la citrulina consiste en que las descarboxilasas  atacan el extremo carboxilo
de los aminoácidos, formando la correspondiente amina. Los tres aminoácidos que se
ensayan en la identificación de enterobacterias son arginina, lisina y ornitina. La
descarboxilaciòn de lisina y ornitina da cadaverina y putrescina (diaminas), mientras que
la descarboxilaciòn  de arginina da citrulina por acción de una dehidrolasa.
Procedimiento : 

Esta prueba se debe realizar con un tubo control que contiene el medio base sin
aminoácido. Como la descarboxilación es una reacción anaeróbica, se debe cubrir el
medio con una capa de aceite mineral estèril. El proceso se produce en dos etapas: por
fermentaciòn de la glucosa  que produce una acidificaciòn del medio (pH < 6,0),
apareciendo color amarillo. La acidificación es necesaria para que ocurra la
descarboxilación. Este último proceso da lugar a la formación de las aminas que elevan el
pH con el consiguiente viraje del indicador a color violeta. Esta prueba se utiliza tanto en
la identificación de bacilos gramnegativos como de bacilos y cocos grampositivos.

Resultado: 

 Positivo: apariciòn de color pùrpura turbio a pùrpura apagado 

 Negativo: Apariciòn de color amarillo claro y brillante  (Olmos, A;Garcìa,C; et al.
2010)

MATERIALES Y MÉTODOS

4 AGARES SELECTIVOS: 

 Agar verde brillante: Identifica bacterias por ciertos azúcares

 Agar Macconkey: Diferencial
 Agar endo C: Utiliza un compuesto derivado de sulfito, identifica colibacilosis.
 Agar xld:Identifica la presencia de bacterias y tiene 3 tipos de azúcares.

1 BATERÍA BIOQUÍMICA: Consta de 3 caldos

 Caldo lactosa
 Caldo glucosa
 Caldo sacarosa
 Un agar semisólido : Para identificar sulfuro a partir del hierro, triptófano y tambien
da formación de un aro
 Prueba de Ureasa
 Agar citrato
 Agar lisina
 Colorante púrpura
 Agar Tsi
 urea
 Lia
 Citrato de Simons

MUESTRAS A,B Y C

 Lámina de portaobjetos
 Alcohol
 Agua destilada
 Asas microbiológicas redondas, curvas y rectas
 4 COLORANTES DE GRAM:

 Cristal violeta

 Lugol
 Solución alcohol cetona
 Fucsina

EQUIPOS
 Quemador de asas
 Cabina de flujo laminar vertical de bioseguridad dos
 Incubadora
 Microscopio electrónico
 Filtro de material absorbente
Principalmente se marcaron los medios como A, B y C; luego, colocamos las asas en el
quemador para esterilizarlas. Para comenzar destapamos la muestra A y con un asa
hacemos siembras de cultivo por estría y así sucesivamente con los otros dos medios,
luego cogemos un asa curva y la introducimos en el caldo lactosa y así con cada medio.
Ahora con un asa recta la introducimos en cada agar bioquímico, realizando un
movimiento rápido y firme al fondo, de tal manera que cuando el asa vaya saliendo se va
haciendo una estría, y este proceso se realiza con los demás medios. Cuando ya
terminamos de sembrar los  3 medios, estos se llevan a la incubadora durante 24 horas a
36°C para que se realice el crecimiento de las bacterias.
Después de este lapso de tiempo se hace la lectura de las muestras, posteriormente se
procedió a identificar el tipo de bacteria por medio de la tinción Gram. Se tomó con el asa
esterilizada una muestra de una colonia bacteriana, que posteriormente se esparció hasta
formar una capa delgada de forma delicada en una lámina portaobjeto. Este
procedimiento, se realizó con otras dos colonias bacterianas y se colocaron en la misma
lámina portaobjetos donde se encontraba la primera muestra. A continuación, se llevó la
lámina portaobjetos a realizar la tinción Gram y se colocó sobre un filtro para que los
colorantes no contaminaran; se agregó una gota de colorante cristal violeta sobre la
muestra en la lámina y se dejó actuar durante un minuto. Luego, se agregó lugol a la
lámina y se dejó actuar por otro minuto y de inmediato, se aplicó unas gotas de alcohol-
acetona que se dejaron durante 30 segundos. Consecutivamente, se agregó el colorante
fucsina en la muestra y se dejó actuar por otros 30 segundos. Cabe aclarar que, después
de agregar cada sustancia y que pasara el tiempo prudente, se removió el exceso con
agua destilada. La lámina se secó con una toalla absorbente para eliminar los restos de
agua y se llevaron las muestras al microscopio electrónico, en donde se ubicaron las
muestras con un aumento de 10X. Para finalizar, se agregó aceite de inmersión para
mejorar la observación e identificación de las bacterias en cada muestra en un aumento
de 100X.  Finalmente se procedió a realizar la lectura e identificación de los resultados
que se podrán observar más adelante.
 
RESULTADOS:

Muestra A
Agar McConkey

Colonias rojas, separadas

Agar Endo

Bacteria roja en endo

Agar XLD

Bacteria roja en endo

Agar Verde Brillante Bacteria blanca

Agar zinc

No es móvil, no presenta anillos, solo

se ve
donde se realizó el cultivo, y no
presenta
ninguna coloración negra. Con el
colorante
de Kovas-s, mostrando indol negativo,
motilidad negativa, sulfuro negativo en
indol.

Tsi

Los tres azucares dan de un color

amarillo,fermentadora productora de
gas, sulfuro negativo

Citrato de Simons

Coloración azul, lo cual indica que

utiliza el
citrato , positivo.

LIA

Sin cambio

Urea Negativo
Caldo Lactosa

Positivos

Caldo glucosa

Positivos

Caldo Sacarosa

Positivos

Muestra B
 Agar McConkey

Colonia rojas

Agar Endo

Bacteria roja en endo sin tinte verde

metalico

Agar Verde Brillante

No crece colonia roja si no con colonia

verde amarillenta

Agar zinc Motil, sulfuro negativo, indol Positivo

TSI

Totalmente amarillo, positivo, sulfuro

negativo.

Urea

Totalmente negativo

LIA

Negativo

Citrato de Simons

Negativo

Sacarosa Positivo
Glucosa

Positivo

Lactosa

Positivo

Muestra C
AgarMcConkey

Bacteria color blanco

Agar XLD

Color Amarilla

Verde brillante Colonia blanca transparente

Citrato de Simons

Movil sulfurompositivo, indol negativo

TCI

Base amarilla

Urea

Negativo

LIA
Positivo, color amarillo palido,
indicando que crecio acidificando el
medio

Sacarosa Positivo
Glucosa

Positivo

Lactosa

Negativo

DISCUSIÓN:
Muestra A: Enterobacter aerogenes
Encontrado en las heces de humanos y animales, agua, plantas, insectos y
productos lácteos, las cuales tienen significancia clínica, como bacterias
oportunistas y una mayor frecuencia en infecciones en seres humanos (Jordan
Romero, 2017).
Muestra b : E coli
E. coli es una bacteria que figura como una especie predominante entre la flora
anaeróbica facultativa normal del intestino del hombre y animales, donde juega un
rol importante en su fisiología. Sin embargo, dentro de la especie se encuentran
cepas patógenas que causan distintos síndromes diarreicos. Donde su
clasificaciòn depende a sus propiedades de virulencia, interacción con la mucosa
intestinal, cuadro clínico, epidemiología y serotipos. ( Borie, C., et al. 1997)
Muestra c: Salmonella
Ha sido reconocida debido a los múltiples casos de salmonelosis humana y grandes
pérdidas económicas que se han enumerado a través de las décadas por
contaminaciones en los animales que se destina a consumo (vacas, cerdos, aves), razón
por la cual en algunos países se han puesto en marcha programas de prevención y
control de la salud y bienestar animal con respecto a la salmonelosis, con la finalidad de
ofrecer un producto de calidad y con normas claves de seguridad alimentaria, salud
animal.

CONCLUSIONES
 Se puede concluir que para lograr un buen diagnóstico dentro del laboratorio es
importante tener un orden establecido desde el cumplimento de las normas de
bioseguridad,el uso de los equipos,marcación de muestras, aislamiento y medios
de cultivo para así generar una clasificación bacteriana exitosa sin errores que
puedan afectar los resultados.
 Tras realizar el análisis de las muestras trabajadas y los resultados obtenidos se
lograron identificar las bacterias teniendo en cuenta su tinción Gram,su
estructura,morfología y reacciones ante las diferentes pruebas bioquímicas
realizadas.  
 Las pruebas bioquímicas de identificación bacteriana permitieron establecer que
bacterias teníamos basándonos en las diferentes reacciones metabólicas propias
de cada microorganismo comprendiendo a una mayor profundidad sus
comportamientos para así tener un diagnóstico eficaz y veraz.

REFERENCIAS: 

 BAÜMLER, A.J; TSOLIS, R.M; FITCH. T.A Y ADAMS, L.G. 1998. Evolution of host
adaptation in Salmonella enteric. Infection and Immunology.
 BORIE, C., MONREAL, Z., GUERRERO, P., SANCHEZ, M.L., MARTINEZ, J.,
ARELLANO, C., & PRADO, V.. (1997). Prevalencia y caracterización de
Escherichia coli enterohemorrágica aisladas de bovinos y cerdos sanos faenados
en Santiago, Chile. Archivos de medicina veterinaria, 29(2), 205-
212. https://dx.doi.org/10.4067/S0301-732X1997000200005

 Brooks, G. F., Carroll, K. C., Butel, J. S., Morse, S. A., Mietzner, T. A. (2014).
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procedimiento para llevar a cabo la práctica de fermentación y destilación en la
planta de biocombustibles del laboratorio de Ingeniería Ambiental y Sanitaria de la
Universidad de La Salle. Retrieved from
https://ciencia.lasalle.edu.co/ing_ambiental_sanitaria/361
 John C. Sherris, James J. Champoux, PHD, Frederick C. Neidhardt,PHD,
W.Lawrance Drew, MD. PHD, James.Plorde, MD. 2004. MICROBIOLOGÍA
MÉDICA "Una introducción a las enfermedades infecciosas", 4th Ed. Mc Graw Hill.
 Jordan Romero, M. F. (2017). Determinación de la presencia de enterobacterias
con resistencia antibiótica de importancia en salud pública en psitácidos
mantenidos en cautiverio en el Parque Zoológico Huachipa, Perú.

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https://www.medioscultivo.com/m-ident-voges-proskauer/
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Microbiología Clínica.
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiolo
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 Rodriguez, E. (2012) . Prueba Oxidación- fermentación (OF). Recuperado de:
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 Rodriguez, F. (2018). Voges Proskauer. Blog de laboratorio clínico y biomédico.
https://www.franrzmn.com/voges-proskauer/