UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL II

TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DE PARÁSITOS

ASESORA:

Q. F. B CAROLINA JIMÉNEZ LÓPEZ

ALUMNOS:

GARCÍA VIDAL ALFONSO BRAYAN

GÓMEZ ISLAS JONATAN
GONZÁLEZ YAÑEZ ALAN RAMSES
OBJETIVOS

1. Aprender a recolectar material

parasitario de animales de
experimentación y domésticos.
2. Conocer y utilizar las
diferentes técnicas de tinción,
utilizadas en Parasitología.
 CLASIFICACIÓN
POR LOCALIZACIÓN

Endoparásito Ectoparásito
Parásito que vive en el Que vive sobre la
interior del cuerpo del superficie de un
hospedero. hospedero.

Siphonaptera
Trypanosoma cruzi Ixodoidea
CLASIFICACIÓN DE
PARÁSITOS CON
BASE AL ÓRGANO
QUE AFECTAN
 SISTEMA QUE PARASITOSIS
AFECTAN

Amibiasis, Ascariasis, Balantidiasis, Blastocistosis, Criptosporidiosis,

Sistema Ciclosporosis, Difilobotrioisis, Dipilidiosis, Enterobiosis,
Esquistosomosis, Estrongiloidosis, Fasciolosis, Giardiasis,
gastrointestinal. Himenolepiasis, Isosporosis, Microsporidiosis, Paragonimiasis,
(Enteroparasitos) Sarcocistosis, Teniasis, Tricocefalosis, Tricomoniasis, Triquinosis,
Uncinariasis

Ascariasis, Estrongiloidosis, Hidatidosis, Paragonimiasis, Toxocariasis,

Tracto respiratorio Uncinariasis,

Amibiasis, Cisticercosis, Estrongiloidosis, Gnatostomosis, Malaria

Sistema nervioso celebral, Microsporidiosis, Oncocercosis, Toxoplasmosis,
Tripanosomiasis africana.

Enfermedad de Chagas, Estrongiloidosis, Gnatostomosis (dermatitis),

Piel Leishmaniasis, Toxocariasis humana, Uncinarias.

Hemoparasitosis Chagas, Malaria, Toxoplasmosis, Tripanosomiasis africana

Pasos para realizar una preparación permanente

Fijación
Tinción
Deshidratación
Aclaramiento
Montaje
Limpieza
Etiquetado
 PREPARACIONES FIJAS O PERMANENTES
Utilidad:
Preservar los diferentes estadios de los protozoarios o helmintos aislados.

Fijación:
Los procedimientos químicos son
los más utilizados. La mayoría son
venenos citoplasmáticos y actúan
más rápido con calor.

NOTA: No utilizar recipientes con

tapa metálica
 FIJADOR CONSERVADOR

Se emplean para detener los Sustancia o mezcla de sustancias

procesos metabólicos, manteniendo que previene, retarda o detiene la
la estructura morfológica de células fermentación, putrefacción u otra
y tejidos sin que ocurran cambios alteración estructural morfológica
notables en ellos. parasitaria.

Fijadores coagulantes
Físicos

Fijadores de enlaces Químicos

cruzados
Fijadores coagulantes: Extraen agua de los tejidos provocando coagulación y
desnaturalización de las proteínas.

Fijadores de enlace cruzados: Establecen enlaces químicos entre moléculas del

tejido.

Características de un buen fijador

Rapidez de penetración.
Rapidez de acción.
No entorpece las técnicas de procesamiento posteriores.

El método de fijación utilizado depende del tipo de estructura parasitaria (quistes,

ooquistes, trofozoítos, huevos, larvas o adultos).
 FIJADORES
Utilidad Componentes Función

Útil para fijar nemátodos, Acido acetico Previene endurecimiento

tremátodos y cestodos Formol ocasionado por el formol
AFA Alcohol 95% Conservadores y Fijadores

Fijación de helmintos y Acido picrico Demuestra la presencia de

amebas de vida libre Formaldehido glucógeno. Coagula proteínas.
Bouin Acido acético glacial Puentes de metilo en proteínas.
Fija las nucleoproteínas por
precipitación

Fijación de quistes, Formaldehido 0.5% Puentes de metileno en

microsporidios, esquites, Fosfato de sodio bifásico y proteínas.
Formaldehido ooquistes, huevos y larvas. monofásico Amortiguador.
5% Solución salina.

Es un montaje aclarante Glicerol puro, Cristales de Aclarador de los huevos de

para nemátodos pequeños Fenol (fundidos), Gelatina helmintos
Glicerogel y Agua destilada.
 FIJADORES
Utilidad Componentes Función

Fija y tiñe simultáneamente los quistes y Merthiolate Desnaturalización de proteínas

Puentes de metileno en
MIF huevos de parásitos, permitiendo la Formaldehido proteínas
Determina la presencia de
observación inmediata de la muestra. Yodo glucógeno

Preserva quistes y trofozoítos, también Fenol, Suero Desnaturaliza y

para huevos y larvas fisiologico, Alcohol precipita las proteínas
PAF Puentes de metilo en
95%, Formaldehido.
proteínas

Fija y preserva trofozoítos y quistes de Alcohol polivinilico, Conservador

PVA protozoarios, por tiempo muy prolongado Acido acetico glacial, Fija las nucleoproteínas
sin modificación importante de su Glicerol, Solucion por precipitación
morfología. Schaudinn

Fija y facilita la preservación de todas las Bicloruro de Combinación con los grupos
ácidos de las proteínas
Schaudinn formas parasitarias quistes, trofozoitos, mercurio (6%) Desnaturaliza y precipita las
huevos y larvas Alcohol 95%, Acido proteínas
Fija las nucleoproteínas por
acetico glacial. precipitación
TINCIONES PARA PROTOZOARIOS

Giemsa Lugol Wright

Tricromica de Hematoxilina
Gomori-Wheatley férrica modificada
 Tincion de Giemsa

Reactivos Fundamento Usos

● Giemsa II-eosina 0.4 g La acidez o basicidad de Tinciones de protozoarios

● Giemsa II 0.2 g las diferentes estructuras
● Giemsa B-eosina 0.2 g celulares como es el
● Glicerina 50.0 ml núcleo del citoplasma
● Metanol 50.0 ml determina su afinidad por
el colorante.
hemáticos e intestinales.
Trofozoítos maduros de
Plasmodium vivax
(hemáticos) y Trofozoítos
de Giardia intestinalis
(intestinales).

Frotis sanguíneo teñido con Giemsa. Se notan eritrocitos, un Trofozoítos de Giardia intestinalis teñidos con
leucocito y trofozoítos maduros de Plasmodium vivax Giemsa (100x).
(100×).
 Tincion tricromica de
Tinción Lugol
Gomori-Wheatley

Reactivos Fundamento Usos Reactivos Fundamento Usos

Se usa para la Lugol parasitológico: La coloración Detectar

Solución concentrada Colorante
coloración de ● Yodo (cristales) 5 g producida por el trofozoítos en una
● Cromotropo 2R 0.6 g cromotropo 2R
trofozoítos y quistes de ● Yoduro de potasio Lugol se debe a amebiasis invasora
● Verde brillante SF 0.3 g (ácido) presenta
protozoarios 10 g que tiene afinidad por Entamoeba
● Ácido fosfotúngstico afinidad permitiendo
● Agua destilada 100
0.7 g ver algunos detalles intestinales (Entamoeba para combinarse spp o detectar
ml
● Ácido acético 1.0 ml del citoplasma y el histolytica). con las estructuras trofozoítos de
● Agua destilada 100.0 núcleo. que contienen Blastocystis
ml glucógeno. hominis.

Quiste inmaduro de Trofozoito de Entamoeba Trofozoítos de Blastocystis

Entamoeba histolytica histolytica teñido con hominis teñidos con lugol. (40x) Quiste de Entamoeba
teñido con tricrómico. Tricrómico (1000x) coli. Lugol (400x)
(1000x)
 Tinción de Hematoxilina Férrica
Tincion de Wright modificada

Reactivos Fundamento Usos Reactivos Fundamento Usos

● Wright en polvo Colorea componentes Se emplea para la Solución concentrada A Las sales férricas Tiñe quistes y
(certificado) 1.5 g ácidos de azul detección de ● Hematoxilina 10.0 g actúan como trofozoítos de
● Alcohol metílico violeta. Las organismos ● Etanol absoluto 1 mordiente. El
000.0 ml protozoarios
puro, absoluto 485 estructuras básicas intracelulares como material de base y intestinales como
mL Leishmania sp. o Solución concentrada B los
se tiñen de rosa. Su ● Sulfato ferroso de los trofozoítos de
● Glicerina 15 mL citoplasma se torna Trypanosoma cruzi amonio 10.0 g
microorganismos
azul pálido y el además de permitir se tiñen de azul Balantidium coli y
● Sulfato férrico de trofozoitos de
núcleo paracentral observar Trofozoítos de amonio 10.0 g grisáceo negro con
rosa. Trichomonas vaginalis. ● Ácido clorhídrico 10.0 estructuras Entamoeba
ml nucleares y histolytica.
● Agua destilada 1 cuerpos de
000.0 ml inclusión más
Solución de Trabajo oscuros que el
● Solución concentrada citoplasma.
A 15.0 ml
● Solución
concentrada B 15.0
ml

Trofozoito de Balantidium coli

teñido con hematoxilina férrica
T. cruzi (1000x)

Plasmodium spp
TINCIONES PARA HELMINTOS

Supravital Índica

Carmin
clorhídrico
 Tinción Supravital

Reactivos Usos
Microfilaria de Wuchereria bancrofti
(1000x)

● Azul de cresilo al Se usa para teñir microfilarias viva

75% en solución ● Brugia malayi
salina. ● Loa loa
● Azul de metileno ● Onchocerca volvulus
al 1% en solución ● Wuchereria bancrofti.
salina. Se tiñen los núcleos y también
provee un contraste entre el
portaobjetos y el microorganismo.

Microfilaria sp. (100x)*

 Tinción Carmín clorhídrico Tinción Índica

Reactivos Usos Reactivos Usos

● Cytoseal o bálsamo Coloración de ● Tinta india Se emplea para teñir

de Canadá.
● Alcohol 70%, 85%,
95% y absoluto.
● Creosota de la Haya
o xilol.
● Colorante Carmín
● Ácido clorhídrico.
● Agua destilada.
estructuras internas (colorante) segmentos de Cestodos.
(Núcleos celulares y ● Etanol al 50% ó Permite diferenciar entre
tejidos) de helmintos 70% (deshidratante) Taenia solium y Taenia
adultos o segmentos de ● Xilol (aclarante) saginata.
éstos como son Fasciola ● Montaje en bálsamo
de Canadá.
hepática y clonorchis
sinensis.

Extremo inferior (trasero) de Fasciola

hepática teñido con carmín clorhídrico
(100x)

Taenia saginata
 Deshidratación de helmintos
Deshidratar en una serie progresiva de
Sirve para eliminar el agua etanol al 50%, 60%, 70%, 80%, 90% y 100%.
(1 a 12h por cada cambio)

Nota: Si no está deshidratado se

oscurecerá al aclarar.
 ACLARAMIENTO
El aclarante es una sustancia miscible con
el alcohol absoluto y con el bálsamo

Imparten transparencia a los

ejemplares y es un punto crítico

Aclarantes: creosota de Haya, aceite

de cedro, aceite de clavo, terpineol,
salicilato de metilo, xilol (hace las
preparaciones quebradizas).
 MONTAJE
Se montan con bálsamo de Canadá o resina sintética (algunos utilizan un
aclarante y un colorante de contraste).
*Cytoseal XYL, Glicerogel, Permount,
Entellan, DPX base de tolueno
LIMPIEZA Y ETIQUETADO

● Quitar el exceso de medio de

montaje y limpiar con una navaja u
hoja de bisturí, también se limpia
con una gasa impregnada de xilol
● Etiquetar con nombre del parásito
estadio, fecha y nombre de quién
elaboró.
TÉCNICAS DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS
La preparación en fresco es ideal para la
EN FRESCO observación de parásitos, detecta
infecciones moderadas

La clave de una gota gruesa bien hecha está

en la hemólisis completa de los glóbulos
GOTA GRUESA rojos para que aparezcan los parásitos
desnudos

Los frotis teñidos (delgados) sirven para

FROTIS DELGADO identificar diferencias morfológicas de
protozoarios en células sanguíneas

Consiste en utilizar una pequeña porción del

tejido por investigar, con el que se hace la
IMPRONTA impresión en portaobjetos, se deja secar, se
fija con metanol y es teñido con Giemsa o
Wright.
 TÉCNICA EN FRESCO
● Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el centro del portaobjetos con
la ayuda de una pipeta. 01

02 Las preparaciones en fresco son utilizadas

principalmente para la identificación de
tripanosomas y Microfilarias
03

05
 TÉCNICA DE GOTA GRUESA
Utilidad
Es una técnica de concentración para parásitos en baja proporción, principalmente Plasmodium spp y
T.cruzi
01
Colocar sobre un portaobjetos El siguiente paso es el
limpio una gota de sangre del lacado o lizado de los Observar en el
Realizar la
animal estudiado y se extiende
con una de las aristas de un
eritrocitos en agua 02 tinción de
microscopio a
destilada, durante 8 a 10x, 40x y 100x
portaobjetos formando un Giemsa
cuadro de aproximadamente 1.5
10 minutos y dejar aumentos
cm y se deja secar. secar.
03

05
 TÉCNICA DE EXTENSIÓN FINA

Depositar sangre Realizar extensión 01 Realizar tinción

en un extremo del con un movimiento Dejar secar (Wright o Giemsa)
portaobjetos rápido.

02

03

05
Los frotis teñidos (delgados) sirven para identificar diferencias
morfológicas de parásitos intracelulares
 La palabra impronta es de origen italiano cuyo significado
IMPRONTA es “impresión” o también llamado frote por aposición (sellar
con una biopsia un portaobjetos).

Dejar secar las

Diseccionar órganos Observar al
cavernosos (pulmón,
impresiones, fijar 01 microscopio a
corazón, hígado). y teñir (Wright o
100x
Giemsa).

Ejercer presión 03
Colocar entre dos
sobre el tejido a
portaobjetos.
examinar.
4

05
 PARÁSITOS EN PERRO
Toxocara canis Dipylidium caninum

02

03
Rhipicephalus sanguineus
Ancylostoma caninum
4
 PARÁSITOS EN GATO
Toxoplasma gondii Giardia cati

02

03
Uncinaria stenocephala
Toxocara cati
4
 PARÁSITOS EN GALLINA Y PALOMA
Trichomonas gallinae Knemidocoptes mutans

02

03
Ornithonyssus sylviarum
Ascaridia galli
4
 NORMATIVIDAD
NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la
producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

NORMA Oficial Mexicana NOM-059-ECOL-1994 Determina las especies y

subespecies de flora y fauna silvestres terrestres y acuáticas en peligro de
extinción, amenazadas, raras y las sujetas a protección especial, y que
establece especificaciones para su protección
 NORMATIVIDAD

NORMA Oficial Mexicana NOM-033-SAG/ZOO-2014, Métodos para dar muerte

a los animales domésticos y silvestres.
METODOLOGÍA BÚSQUEDA Y ESTUDIO DE
ECTOPARÁSITOS

Localizar y obtener
Colocar una gota Realizar preparaciones
ectoparásitos de solución salina,
presente en la con diversas porciones del
enseguida el
paloma. ectoparásito y artrópodo y observar
colocar el
cubreobjetos
METODOLOGÍA TÉCNICA DE GOTA GRUESA

Lacado (colocar
Colocar gota de sangre
portaobjetos en
en portaobjetos y
agua destilada o
extender.
de la llave, 8- 10
minutos y dejar
secar).

Realizar tinción y observar al

microscopio
(seco débil, seco fuerte e
inmersión).
METODOLOGÍA TÉCNICA DE FROTIS

Realizar extensión
Realizar tinción y observar al
Colocar gota de sangre con un movimiento
microscopio
en el portaobjetos. rápido y dejar
(seco débil, seco fuerte e
secar. inmersión).
 OBTENCIÓN DE
METODOLOGÍA PROTOZOARIOS Y HELMINTOS

Hacer incisión a lo largo

Extraer órganos y Observar
de la línea ventral y
colocar en contenido
buscar presencia de
solución salina intestinal
protozoarios o helmintos

Conservar en AFA los

Realizar improntas
helmintos
con órganos
encontrados para su
extraídos y
posterior
teñirlas.
fijación.
 Aplicaciones

Bioquímica clínica:
Farmacia Industrial Farmacia clínica
Identificación de parásitos y
crear un acervo para Para identificar al parásito y hacer
Investigación y el
ajustes en la dosificación del
desarrollo de nuevos familiarizarse con los tratamiento
fármacos diferentes estadios
antiparasitarios.
 REFERENCIAS
● Proyecto AECID. Procesamiento de Muestras Para Diagnóstico de Parásitos Intestinales. Enlace Hispano
Americano de Salud; 2012.
● Becerril, F.M.A. Parasitología Médica. McGraw-Hill Education; 2014.
● Tay-Zavala J, Gutiérrez QM, López MR, Manjarrez ZM, Medina LJ. Microbiología y parasitología médicas.
3a ed.México: Méndez Editores; 2003
● Romero C.R. Microbiología y parasitología humana: bases etiológicas de las enfermedades infecciosas y
parasitarias. 3a ed. México: Editorial Panamericana; 2007.
● Norma Oficial Mexicana NOM-033-ZOO-1995, Sacrificio humanitario de los animales domésticos y
silvestres. (Diario Oficial de la Federación, 20 de diciembre de 1996).
● Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso
de los animales de laboratorio. (Diario Oficial de la Federación, 22 de agosto de 2001).
● Norma Oficial Mexicana NOM-059-ECOL-1994, que determina las especies y subespecies de flora y fauna
silvestres terrestres y acuáticas en peligro de extinción, amenazadas, raras y las sujetas a protección
especial, y que establece especificaciones para su protección.. (Diario Oficial de la Federación, 2 de
agosto de 1993).
●
Thank
you