1.

Se colocaron 20ml de leche descremada de marca comercial en un vaso precipitado y se

procedió a calentar hasta una Tº de 40º c, llegado a ese punto de Temperatura, fueron
agregados 5gr de sulfato de amonio anhídrido vertiendo en pequeñas cantidades en un
periodo de tiempo de 10 a 12 min. manteniendo agitación constante a la solución.

se añadieron …. en un tubo de 1,5ml para luego centrifugar a velocidad máxima durante 1min.
Se recolecto el sobrenadante de este en otro tubo de….. y se ajustó el pH a 3 agregando……..
de Hcl concentrado.

Se centrifugo nuevamente la suspensión durante 15min. A 4500rpm. Se eliminó el

sobrenadante, para luego resuspender la proteína precipitada con 3ml de agua destilada
en…..y se volvió ajustar el pH a 9 con …… de NaoH 1N.se centrifugo por otros 10min. A
4500rpm. Se recuperó el sobrenadante. Al terminar se cuantifico la concentración de proteína
obtenida con el método de Bradford y se procedió a guardar la muestra a 4ºC.

2.

Se visualizó la proteína mediante la técnica de electroforesis en condiciones denaturantes,

para esto se preparó la muestra agregando 1ml de buffer de carga que contenia B-
mercaptoetanol (950ul de buffer de carga y 50ul de B- mercaptoetanol). Posteriormente en un
tubo eppendorf se calentó la muestra a baño maría a 95ºC por 10min. Se dejó a Tº ambiente,
para luego ser cargada a los pocillos del gel concentrador de nuestra electroforesis, se
cargaron …. De muestra y ……… de buffer de carga en los pocillos numero …….

Cerrado el sistema, se conectó la corriente aplicando un voltaje de 200volts constante durante

40min aprox. Terminando la migración se traspasó el gel a un recipiente con una solución de
tinción ….. dejándolo 30min a Tº ambiente en movimiento, para luego depositar el gel en una
solución de decoloración …… eliminando el exceso de tinción. Y para finalizar se visualizaron
los resultados en gel para el posterior análisis.