República Bolivariana de Venezuela

Ministerio del Poder Popular Para la Educación

E.T.R. Juan Antonio Román Valecillos
San Cristóbal – Edo. Táchira

Técnicas y Practicas de
Laboratorio Clínico

En Honor a las Prof. Mirian Pabón y Nelly contreras

Integrantes:
Jhon Stiven Grajales #17
5to “A” laboratorio Clínico
San Cristóbal, julio de 2015.
Normas del laboratorio
Clínico

NORMAS GENERALES
 No fumes, comas o bebas en el laboratorio.
 Utiliza una bata y tenla siempre bien abrochada, así
protegerás tu ropa.
 Guarda tus prendas de abrigo y los objetos personales en
un armario o taquilla y no los dejes nunca sobre la mesa
de trabajo.
 No lleves bufandas, pañuelos largos ni prendas u objetos
que dificulten tu movilidad.
 Procura no andar de un lado para otro sin motivo y,
sobre todo, no corras dentro del laboratorio.
 Si tienes el cabello largo, recógetelo.
 Dispón sobre la mesa sólo los libros y cuadernos que
sean necesarios.
 Ten siempre tus manos limpias y secas. Si tienes alguna
herida, tápala.
 No pruebes ni ingieras los productos.
 En caso de producirse un accidente, quemadura o lesión,
comunícalo inmediatamente al Bioanalista.
 Recuerda dónde está situado el botiquín.
 Mantén el área de trabajo limpia y ordenada.
Hematología
 HEMATOLOGÍA
La hematología es la rama de la ciencia médica que se
encarga del estudio de los elementos formes de la sangre y sus
precursores, así como de los trastornos estructurales y
bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una
enfermedad.
ERITROCITOS
Son los elementos formes cuantitativamente más numerosos
de la sangre. La hemoglobina es uno de sus principales
componentes y su objetivo es transportar el oxígeno hacia los
diferentes tejidos del cuerpo. La cantidad normal fluctúa entre
4.500.000 en la mujer y 5.000.000 en el hombre por
milímetro cubico.
LEUCOCITOS
Son un conjunto heterogéneo de células sanguíneas que son
los efectores celulares de la respuesta inmune, así intervienen
en la defensa del organismo contra sustancias extrañas o
agentes infecciosos (antígenos). Se originan en la médula ósea
y en el tejido linfático.
PLAQUETAS
Las plaquetas juegan un papel fundamental en la hemostasia y
son una fuente natural de factores de crecimiento. Estas
circulan en la sangre de todos los mamíferos y están
involucradas en la hemostasia, iniciando la formación de
coágulos o trombos.
 SANGRE Y COMPONENTES
La sangre se define como un tejido liquido por estar constituido por
células , las cuales se encuentran en un medio líquido, que es el plasma
, aunque en realidad tiene más las características de un sistema , al
tener células de diferentes tipos , las cuales tienen el mismo origen
embrionario aunque diferentes funciones

COMPOSICIÓN
La sangre está formada por el plasma que a su vez también
contiene el suero y el fibrinógeno en suspensión como los
glóbulos blancos, glóbulos rojos y plaquetas, la parte solida
representa un 45% de la sangre y la parte liquida un 55%, la parte
gaseosa contiene oxígeno, nitrógeno y ácido carbónico.

SANGRE TOTAL
Es la que está formada por todos los elementos y se obtiene a la
adición de un anticoagulante.

PLASMA SANGUÍNEO
Es la fracción liquida y a celular, de la sangre está compuesta por
agua 90% y múltiple sustancias disueltas en ellas de estos las más
abundantes son las proteínas también contiene lucidos y grasas,
así como los productos de desecho de metabolismo, se obtiene por
la acción del anticoagulante.

DATOS GENERALES
 El plasma es salado arenoso y de color amarillento
translucido.
 Además de traspasar los elementos formes mantiene
diferentes sustancias en solución, la mayoría de los cuales
son productos del metabolismo celular.
 La viscosidad del plasma sanguíneo es 1,5 veces mayor que
la del agua.
 SUERO
Es el remanente una vez consumidos los factores hemostáticos
por la coagulación de la sangre, obteniendo un líquido tenue
opaco, que se utiliza para realizar la mayoría de los exámenes de
la Química sanguínea.

HEMOGLOBINA
Es una proteína conjugada de color rojo integrante de los
eritrocitos (31-34%) que contiene hierro en estado ferroso
(oxidado) al que le corresponde la función de transporte del
oxígeno y anhídrido carbónico.
HEMOGRAMA DE SCHILLING

 Basófilos= 0-1%.
 Eosinofilos= 2-4%.
 Mielocitos= 0%.
 Meta mielocitos= 0-1%.
 Núcleoencallado= 3 -5%.
 Núcleos segmentados= 51-67%.
 Linfocitos= 20-35%.
 Monocitos = 4-8%.
EXÁMENES QUE SE REALIZAN EN EL ÁREA
DE HEMATOLOGÍA

 Hemoglobina.
 Hematocrito.
 Leucocitos.
 Plaquetas.
 TP.
 TPT.
 Fibrinógeno.
 Células L.E.
 Reticulocitos.
 Eusonofilos en moco nasal.
 Gota gruesa, gota fresca.

EQUIPOS EN EL ÁREA DE HEMATOLOGÍA

 Centrifuga.
 Micro centrifuga.
 Microscopio.
 Baño de maría.
 Equipos para hematología.
 Equipos para tiempo.
 Equipos para gases arteriales y venosos.
MATERIALES EN EL ÁREA DE HEMATOLOGÍA
 Laminas porta objeto.
 Laminillas cubre objeto.
 Cánula para VSG.
 Cánula para VSG.
 Pipeta para VSG.
 Soporte para VSG.
 Tubos de ensayo 13x100.
 Tubos de ensayo 7x75.
 Pipeta automática.
 Pipeta automática.

REACTIVOS USADOS EN EL ÁREA DE

HEMATOLOGÍA

 EDTA (etilendiaminotretaaceitico)
 Heparina (se utiliza para tubos tapa morada o gases
venosos).
 Citrato de sodio (se utiliza para los tubos tapa azul para
la prueba de tiempo de coagulación).
 Oxalato de sodio 0,1m para 4,5cc de sangre.

REACTIVO PARA EL CONTEO DE GLÓBULOS

BLANCOS

Se utiliza en reactivo de TURK en una cantidad de 0,4ml mas

20 landas de sangre su función es destruir los glóbulos rojos
así facilitar el contaje de los glóbulos blancos.
 REACTIVOS UTILIZADOS PARA LA
PREPARACION DEL LIQUIDO DE TURK

 Ácido acético glacial 1cc.

 Solución de violeta de genciana 1cc.
 Agua destilada 100cc.
 Se prepara en un tubo de 13x100 primero se
agrega el líquido de turk.

REACTIVO PARA LOS GLÓBULOS ROJOS

 Solución de acido clorhídrico 1cc.

 Agua destilada e 100cc.

PUNCIÓN CAPILAR
Para cantidades pequeñas de sangre o cuando no se puede
efectuar la punción Venosa, como en el caso de los neonatos,
quemaduras externas, obesidad intensa. Se punciona
rápidamente el dedo, el lóbulo de la oreja o en niños la
superficie plantar del talón, con una aguja desechable estéril
penetrando a una profundidad suficiente, para asegurar el
flujo espontaneo de sangre, debe evitarse una presión
indeleble que provoque la dilución de la sangre por los
líquidos tisulares mientras se recoge la muestra.
 TÉCNICA PARA LA RECOLECCIÓN
 Prepare el material según la requisición.
 Identificar al paciente.
 Posición del paciente.
 Verificar condiciones del paciente, restricción de
la dieta tiempo de ayuno, medicamentos.
 Lavarse las manos.
 Usar guantes.
 Asepsia en el sitio de punción.
 Colocar la lanceta de manera firme, esta
disminuirá la resistencia natural de la piel,
desechar la primera gota, continuamos la
recolección de muestra con los micro tubos, o
tubos capilares.
RECOMENDACIONES
No oprima el sitio puncionado para obtener sangre por que se
altera la composición hemática o invalida los resultados,
muchas veces se facilita la toma de la muestra si se calienta
la extremidad en posición colgante.
PUNCIÓN ARTERIAL
La sangre arterial se utiliza para medir el PO2 el PCO2, debe
realizarla un personal capacitado, médico o bioanalista,
enfermera. Las arterias más utilizadas son la femoral, la
humeral, y la radial. Son pocas las arterias utilizadas para la
extracción debido a su localización profunda, sin embargo, en
ocasiones es necesario acudir a ellas por ejemplo, para la
dosificación de vasos arteriales, en problemas respiratorios ,
pacientes quemados. Etc.
 EXTRACCIÓN VENOSA CON VACUTAINER O
VENOYECT
Se utiliza tubos comerciales o preparados con el laboratorio,
camisa o vacutainer.
PROCEDIMIENTO
 La aguja se enrosca en la camisa.
 Se introduce la aguja en vena.
 Introducir el tubo dentro de la camisa y empuje
con el dedo pulgar, para que atraviese la goma de
la aguja, perdiendo el vacío, y entre la sangre
dentro del tubo.
 Saque primero el tubo y luego la camisa.
 Colocar la tapa de los agujas y descartar.
ANTICOAGULANTES
Los anticoagulantes, son medio que actúan como bloqueante
de la coagulación, o bien de la agregación plaquetaria y
preserva el estado natural o fisiológico de la sangre, se utiliza
para romper el trombo o bien para prevenir los trombos se
repitan.
La heparina: se utiliza in vivo o in vitro se utiliza de 1 a 2
ml x mililitro de sangre (1-2 mg/ml de sangre) es decir 1 a 2
gotas por 3 ml de sangre.
Desventajas: no conserva la morfología de los glóbulos
blancos por lo tanto no se puede usar en recuentos
diferenciales.
E.D.T.A: (ácidoetilendiaminotetraacético).
 EXTRACCIÓN VENOSA
El fundamento constituye, el tipo de extracción sanguínea
más comúnmente empleado, el lugar de elección es
generalmente, la región venosa ante cubital antebrazo a la
altura del codo, la cual posee piel fina, móvil y venas de un
grueso calibre y relativamente superficial
Las venas indicadas:
 Cefálica.
 cefálica mediana.
 Basílica.
 media cubita.
 TÉCNICA DE EXTRACCIÓN VENOSA
 Revisar todos los materiales, deben dejarse preparados
el día anterior.
 Leer muy bien la solicitud de exámenes, rotular la boleta
(la orden) y los tubos a utilizar.
 Verificar que el paciente este en posición adecuada con
el brazo apoyado de tal manera de que se mantenga
inmóvil.
 El técnico de laboratorio debe permanecer de frente al
paciente a fin de tener libertad en sus movimientos.
 No usar inyectadoras que se hayan abierto, el protector
se abre en el momento de la extracción de la muestra.
 Verificar que la aguja se encuentre bien, aspirando y
expulsando el aire, si al expulsar hay alguna resistencia
no está permeable y se debe descartar.
 Mantener la aguja tapada hasta la extracción.

SELECCIÓN DE LA VENA.
La vena debe palparse para saber la dirección que trae, puede
ser palpable y visible o no visible y no palpable, para que sea
más visible, se le recomienda al paciente abrir y cerrar el
puño.

ASEPSIA
Una vez seleccionada la vena, se pasa el algodón con anti-
séptico, luego se seca, con la gasa exceso.
 INSERCIÓN DE LA AGUJA
Indique al paciente que empuñe la mano con el pulgar de la
mano izquierda fijar la vena por debajo del sitio de punción,
introducir la aguja en dirección a la vena con el bisel hacia
arriba.
EXTRACCIÓN
Halar suavemente el embolo si está en vena la sangre fluirá
fácilmente cuando tenga aproximadamente 1ml, se le indica al
paciente que abra la mano, e inmediato retirar el torniquete,
nunca se debe retirar la aguja con el torniquete puesto.

RETIRO DE LA AGUJA
Coloque sobre el sitio de la punción una gasa o algodón seco
o retire suavemente la aguja presionando inmediatamente el
sitio de punción, indique al paciente que doble el brazo por
unos minutos o que con la otra mano haga presión para que se
detenga el flujo de sangre.

TRASPASAR LA MUESTRA
Inmediatamente retire la aguja de la jeringa descartar en un
envase plástico con cloro sin el capuchón presionar
suavemente el embolo y distribuya la sangre por las paredes
del tubo de ensayo, colocar el tapón y mesclar suavemente
tras obtener sangre total.
 RELACIÓN ANTICOAGULANTE PARA
MUESTRA HEMATOLÓGICA

Una gota de EDTA para 3cc de sangre.

RELACIÓN ANTICOAGULANTE DE (TP)

TIEMPO DE PROTROMBINA, (TPT) TIEMPO
PARCIAL DE TROMBOPLASTINA Y
FIBRINÓGENO.

0,5 de citrato de sodio para 4,5 de sangre si lo llevamos a la

mitad seria 0,25 de citrato de sodio para 2,25 de sangre.
Extendidos de
Sangre
EXTENDIDO EN LÁMINAS

 Rotular la lámina.
 Colocar una gota de sangre en un extremo de la lámina.
 Sobreponer suavemente otra lámina sobre la gota de
sangre de manera que por capilaridad se extienda a lo
largo de la lámina.
 Haciendo un ángulo de 45º y desliza la lámina, hacia el
otro extremo logrando así un extendido delgado y
homogéneo.
 Dejar secar el extendido al aire libre.
 Rotular nuevamente dentro del extendido usando un
lápiz

NOTA
El extendido no debe ser escalonado ni tener espacios claros,
sebe ser suficientemente delgado de manera que se pueda
leer/observar a través de él.
 GOTA FRESCA

(Detectar Chagas)

 En una lámina portaobjetos se coloca una gota de

sangre.
 Agregar una gota de solución salina.
 Mezclar en forma circular con un palillo de madera.
 Sobreponer una laminilla (cubreobjetos).
 Entregar al bioanalista para su observación.

GOTA GRUESA
(Diagnóstico de protozoarios en la sangre. Ej.: el
paludismo)

 En una lámina portaobjetos colocar una gota de

sangre.
 Se desfibrina la gota hasta obtener hilos.
 Colocar otra gota con la cual se realizara el Frotis
sanguíneo.
 Dejar secar.
 Realizar la coloración de giemsa.
Nota: Se fija solo el frotis la gota desfibrinada no, se colorea
todo.

Coloraciones
 EOSINÓFILOS EN MOCO NASAL

 Se tiene dos láminas porta objetos limpios y

desengrasados y rotulados en la izquierda y derecha.
 con un aplicador estéril (hisopo) se toma la muestra de
las fosas nasales, con un aplicador diferente para cada
fosa.
 se realizara un frotis de forma de vaivén para luego
realizar un frotis de igual manera que el sanguíneo.

COLORACIÓN DE GIEMSA

 Cubra los extendidos con metanol durante 3 o 6 min,

teniendo precaución que no se evapore, el metanol se
utiliza para fijar.
 incline el extendido y descarte el metanol.
 cúbralo con giemsa diluida en proporción 1:10 déjelo
actuar por 20 minutos
 lave con agua destilada y seque al aire.
 limpie el dorso del extendido de los restos de colorante.
 monte la preparación sobre una lámina portaobjetos con
una gota de permount o bálsamo de Canadá de manera
que el extendido quede entre la lámina y laminilla.
 NOTA

Examen de un extendido mal hecho, demasiado grueso

o mal coloreado es completamente inútil.

COLORACIÓN DE WRIGHT

 coloque la laminillas con el frotis hacia arriba, sobre

tapones de goma invertidos, colocados en una bandeja
de coloración.
 cubra las laminillas con solución colorante y déjelo
actuar por 1 o 2 min. En esta etapa se fija el frotis a la
laminilla por desnaturalización de las proteínas con el
metanol.
 añada una cantidad igual de búfer (amortiguador)
evitado que la mezcla se derrame. Mezcle
inmediatamente, soplando suavemente y déjelo actuar
por 2 o 3 min.
 debe aparecer un brillo metálico.
 El tiempo para dejar actuar la mezcla varia con cada
preparación del colorante.
 incline la laminilla para escurrir el agua.
 monte la preparación sobre una lámina con gota de
bálsamo de Canadá o permount.
 RESULTADOS DE LAS COLORACIONES

 Si la coloración está bien hecha.

 el extendido debe tener un color rosado a simple vista.
 microscópicamente los eritrocitos deben verse rosados,
los núcleos de los leucocitos de color azul púrpura, con
las cromáticas basófilos y acidófila netamente
diferenciales, las granulaciones rosa violeta, las
granulaciones basófilos de color púrpura tirando a azul
oscuro, las plaquetas se tiñen de color lila oscuro.
 en los espacios intercelulares no deben haber
precipitado y el color de la extensión debe ser uniforme
sin espacios de color verde oscuro o pálido que
indicarían una tinción excesiva de sus partes gruesas.

COLORACIONES EXCESIVAMENTE
AZULES

Resultan de lavado insuficiente, extendidos muy

gruesos, tiempo de coloración excesivo, alcalinidad
elevada del amortiguador, del agua o del colorante.

COLORACION EXCESIVAMENTE ROJAS

 Resultan de tinción insuficiente, lavado muy prolongado
o de acidez excesiva del colorante, del amortiguador o
del agua.
COLORACIONES PALIDAS

Resultan de insuficiente tiempo de coloración o lavado

excesivo.
PRECIPITADOS EN LA EXTENSION

Laminas sucias, secado durante el periodo de tinción por no

mantener las láminas niveladas horizontalmente durante el
lavado.
COLORACIÓN EXCESIVAMENTE ROSA

Son el resultado excesivo de acides del colorante.

PREPARACIÓN DEL COLORANTE

 Coloque 1 gramo de colorante de Wright

(preferiblemente certificado) en un mortero limpio y
seco.
 Mida 600cc de alcohol metílico q.p libre de acetona y
vaya añadiendo pequeñas cantidades de este en el
mortero y triturarlo el polvo, transfiriendo el
sobrenadante a una botella oscura, limpia y seca.
Añada más alcohol metílico y repita la operación hasta
que todo el polvo se halla disuelto completamente en
los 600cc de alcohol metílico guarda la solución en un
 frasco oscuro y bien tapado en la oscuridad y mezclar
todos los días por 2 semanas.
 De esta solución filtre pequeñas porciones es frascos
goteros bien tapados para evitar la evaporación del
alcohol en la entrada del vapor de agua.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN
AMORTIGUADORA
Buffer de fosfato a PH 6,4:

 Fosfato monobásico de potasio (KH2P0)

(5,63gramos).
 Fosfato dibásico de sodio (Na2HP04) (7,56 gramos).
 Agua destila C.S.P (1000 ml).

Buffer de fosfato a PH 6,7:

 Fosfato monobásico de potasio (KH2P04) (5,13

gramos).
 Fosfato dibásico de sodio (Na2HP04) (4,12 gramos).
 Agua destilada C.S.P (1000ml).

Nota: ambos fosfato deben ser anhidros.

QUE OBSERVAMOS EN EL FROTIS

SANGUÍNEO
Forma leucocitaria o hemograma de Schilling células de
sangre (frotis).
 Basofilos 01%
 Eosinofolos 2,4 %
 Mielocitos 0%
 Linfocitos 23%
 Bastonados 4%
 Metamielocitos 0,1%
 Núcleo encargados 3,4%
 Velocidad de
Sedimentación
Globular
(VSG)
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

Al dejar en reposo durante cierto tiempo la sangre total sin

coagular, los hematíes se separan del plasma y del sedimentan
en el fondo del recipiente. La velocidad con la cual se
produce este descenso de los hematíes se denomina VSG; la
cual es una prueba inespecífica que se utiliza para detectar
procesos inflamatorios, neoplásicos o tumorales, e
infecciosos. Puesto que la VSG tiene carácter inespecífico, no
es una prueba diagnóstica definitiva de ninguna enfermedad o
lesión determinada.

MÉTODO WINTROBER
 mezcle bien la sangre total
 con la cánula insertada en la inyectadora aspire 1cc y
medio de sangre, descarte 1 o 2 gotas e introduzca la
cánula en el tubo
 llénelo hasta la marca superior
 coloque el tubo en el soporte para asegurar la
verticalidad y marque en un reloj 1 hora exactamente
 Una vez cumplido el tiempo.
 si está por arriba de cero debe restársele a la lectura el
número de rayitas que está por arriba de cero
 si está por debajo de cero debe sumársele a la lectura el
número de rayitas que estén por debajo de cero, el
resultado se interpreta mm/h
 en el método wintrober la única lectura que se realiza es
a los 60 min
MÉTODO DE WESTERGREEN.

 Se utiliza una pipeta graduada de 0-200mm por

aspiración de sangre.
  El anticoagulante usado en este método es Citrato de
Sodio al 3.8% en proporción 0.25ml por cada 2.25ml de
sangre.
 Mezclar bien la sangre total.
 Agregue la sangre a la cánula hasta la marca superior,
posteriormente introduzca la pipeta circularmente hasta
la marca 0.
 Transcurrido el tiempo realice la lectura de la primera y
segunda.
LECTURA DE VGS PARA EL METODO WINTROBER
ÍNDICE DE KATZ:

Sexo
Hombre 3-5 mm 7-15mm
Mujer 4-7mm 12-17MM
1lectura + 2lectura:
2

LECTURA DE VSG POR EL MÉTODO DE

WESTERGREEM

1lectura + 2lectura/2 =?
2
 MÉTODO DE WESTERGREEN DE 90º

Este se realiza en dos lecturas, la primera hora consiste en 60

min, al igual que la segunda y se realiza con anticoagulante
EDTA.

MÉTODO DE 60º

Este método se realiza en dos lecturas, la primera de 12min y

la segunda de 6min con anticoagulante Citrato de Sodio.

MÉTODO DE 45º

Este método se realiza en dos lecturas, la primera de 10min y

la segunda de 5 min con anticoagulante Citrato de Sodio.
 Grupo
Sanguíneo y
Factor Rh
GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR RH
Un grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de
acuerdo con las características presentes o no en la superficie
de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos
clasificaciones más importantes para describir grupos
sanguíneos en humanos son los antígenos (el sistema ABO) y
el factor RH.
CONTAJE DE GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR RH EN
LÁMINA

 Antígeno “A”
 Antígeno “B”
 Factor “Rh”

 Se utiliza sangre total (sangre con anticoagulante).

 Se rotula una lámina porta objeto con “A” “B” “Rh”
 Se agregan una gota de cada antígeno
 Luego se agrega una gota de sangre a cada gota de
antígeno y se mezclan
 Esto se hace para determinar el grupo sanguíneo y factor
Rh del paciente.
Grupo sanguíneo ARh- o ARh+: si se observa sobre la
lámina que aglutina el antígeno “A” u no aglutinan ninguno
de los otros dos, el paciente será grupo sanguíneo ARh-.
Nota: si el factor Rh aglutina será positivo (+) si no aglutina
será negativa (-), pero si aglutina el antígeno “A” y el factor
“Rh” el paciente será grupo sanguíneo ARh+.
Grupo sanguíneo BRh- o BRh+: si se observa que
aglutina el antígeno “B” u no aglutina ninguno de los otros
dos, el grupo sanguíneo será BRh-. Pero si aglutina el
antígeno “B” junto al factor “Rh” el grupo sanguíneo del
paciente es BRh+.

Grupo sanguíneo ABRh- o ABRh+: si se observa que

aglutina los antígenos “A” y “B” al mismo tiempo sin el
factor “Rh” el grupo sanguíneo será ABRh-, pero si de lo
contrario de observa que tanto “A” como “B” y factor “Rh”,
aglutinan el resultado será ABRh+.

Grupo sanguíneo ORh- o ORh+: si se llega observa que

no aglutinan los antígenos “A” o “B” el antígeno que será es
“O” u no aglutina el factor “Rh” tampoco se dirá que el grupo
sanguíneo es ORh-, pero si se observa que aglutina el factor
“Rh” pero no aglutinan los antígenos “A” o “B” el grupo
sanguíneo será ORh+.
TIPO DE SANGRE PUEDE DONAR A PUEDE
RECIBIR DE:
 GRUPO SANGUÍNEO EN TUBOS

 Se utiliza sangre sin anticoagulante.

 Se rotula un tubo de química.
 Se agrega la sangre de 1ml y la dejamos coagular
de 15 a 20min.
 Luego realizamos el rompimiento de los glóbulos
rojos con un palillo de madera.
 Al 1 ml de sangre se le agrega la misma cantidad
de solución salina
 Se lleva a centrifugar 2min por 1500 revoluciones
 Se descarta el sobrenadante y se repite 2 veces el
lavado con solución salina.
 Luego en tres tubos de ensayo de 16x100
previamente rotulados cada uno con el número
del paciente.
 Con las letras “A” “B” “Rh” que corresponden al
antígeno que llevaran dentro (1ml aprox.)
 Le agregamos una gota de sedimento a cada uno
de los tubos y se le pasa al bioanalista.
 Química
Sanguínea
 QUÍMICA SANGUÍNEA

La química sanguínea se encarga del estudio de los

metabolismos presentes en los líquidos corporales, tales
como: hidratos de carbono, proteínas, lípidos, algunos iones,
vitaminas, estudios toxicológicos entre otros.

IMPORTANCIA

A través de las determinaciones que se le realizan a las

diferentes muestras corporales, se pueden obtener resultados,
que guían al médico en la prevención y tratamientos a seguir,
el medico puede ver cómo está funcionando los riñones, el
hígado, azúcar en la sangre, colesterol, niveles de calcio
MUESTRAS A REALIZAR

 Orina (en 24 horas).

 Sangre (plasma y suero).
 Líquidos corporales ejemplo: líquido cefalorraquídeo,
líquido seminal, líquido amniótico, líquido pleural,
líquido sinovial, líquido ascítico.

TERMINOLOGÍA UTILIZADA EN EL
LABORATORIO
  Bioquímica: es el estudio de las sustancias presentes en los
organismos vivos y de las reacciones químicas en las que se
basan los procesos vitales.
 Serología: son los exámenes de sangre que se utilizan para
detectar la presencia de anticuerpos, que se producen como
respuesta del organismo, contra cualquier antígeno
 Inmunología: es la ciencia biológica que estudia todos los
mecanismos fisiológicos de defensa, de la integridad biológica
del organismo, dichos mecanismos co0nsisten esencialmente en
la identificación de los cuerpos extraños y su destrucción.
 Hormonas: son sustancias segregadas por ciertas células
especializadas localizadas en glándulas de secreción interna
(glándulas endocrinas).


REQUISITOS PARA REALIZAR EXÁMENES EN

QUÍMICA SANGUÍNEA
 El paciente debe estar completamente en ayunas de 10 a
12 horas de ayuno.
 Si el examen se realizara en el turno de la tarde, el
paciente debe cenar a las 6 pm alimentos suaves y
livianos y en la mañana desayunar con frutas (un plato
de frutas: lechosa, melón, pera, manzana, cambur,
mango, níspero, uva y patilla.
 Luego de esto debe pasar al laboratorio a la 1 pm.
 Los tubos a utilizar son de tapa roja, tubo sin
anticoagulante, se obtiene el suero tras retracción del
coagulo.

MATERIAL QUE SE UTILIZA EN EL ÁREA DE

QUÍMICA SANGUÍNEA EQUIPOS:
  Centrifuga.
 Micro – centrifuga.
 Baño de maría.
 Campana de extracción.
 Agua destilada.
 Pipetas.
 Tubos de ensayo.
 Reactivos.
REACTIVOS UTILIZADOS EN QUÍMICA
SANGUÍNEA:
Existen los reactivos que son en nevera:
 Glicemia.
 Triglicéridos.
 Ácido Úrico.
 T.G.O.
 T.G.P.
 Amilasa.

LOS DE TEMPERATURA AMBIENTE:

 Calcio.
 Fosforo.
 Urea.
 Creatinina.

EXÁMENES QUE SE REALIZAN EN EL ÁREA

DE QUÍMICA SANGUÍNEA
  Glicemia.
 Urea.
 Colesterol.
 Colesterol H.D.L. L.D.L V.L.D.L.
 Triglicéridos.
 Colesterol total.
 Creatinina.
 Ácido Úrico.
 Calcio Sérico.
 Fosforo.
 Amilasa.
 Transaminasa Glutámico Pirúvica (T.G.P).
 Transaminasa Glutámico Oxalacetica (T.G.O).
 Bilirrubina total y fraccionada.
 Fosfatasa alcalina.
 Fosfatasa acida.
 Proteínas totales y fraccionadas.
 Hierro sérico.
 C.P.K (creatinina fosfoquinosa).
 L.D.H (deshidrogenasa láctica).
 Tolerancia glucosada.
 Gamma glutamil transferasa.
 Sodio y potasio.
 Albumina.

ABREVIATURAS PARA ALGUNOS EXÁMENES

IU = unidad internacional
L = litro
DL = decilitro
G/dl = gramos para decilitros
mg = miligramos
Mmol = milimoles
PRUEBA DE TOLERANCIA GLUCOSADA
 puede ser de 2 a 5 horas.
 el paciente debe estar completamente en ayunas.
 se toma la primera muestra sanguínea que corresponde a
la glicemia en ayunas o glicemia basal.
 junto con la primera orina de la mañana seguidamente
se le da a tomar al paciente glicolab (sustancia
azucarada) y si es un niño se le da a tomar la mitad y le
indicamos que se lo tome lo más lento posible.
 la segunda toma de muestra sanguínea se realiza a los 30
minutos con su respectiva muestra de orina.
 Se toma una tercera muestra a los 60 minutos.
 Una cuarta muestra sanguínea a los 120 minutos
 Luego una quinta muestra sanguínea a las 3 horas o 180
minutos.
 Se toma una sexta muestra sanguínea a las 4 horas 0 240
minutos.
 Una séptima muestra sanguínea a las 5 horas o 300
minutos.
 Cada una con su respectiva orina.
 GLICEMIA PRE Y POST PANDRIAL
 Se toma una muestra sanguínea en ayunas.
 Se le da instrucciones al paciente para que desayune con
abundantes hidratos de carbono (mermelada, café bien
dulce, galletas dulces, pan dulce, jugos que contengan
abundante azúcar.)
 Luego finalizado el desayuno se toma una segunda
muestra sanguínea a las 2 horas de haber desayunado y
se realiza la prueba post pandrial
.NOTA: se le indica al paciente que las 2 horas se toman al
finalizar el desayuno.
SI ES DIABETICO
 Se le toma una muestra sanguínea.
 Se le indica que vaya y desayune lo que el paciente está
acostumbrado a desayunar y que se tome la pastilla.

REQUISITOS QUE DEBE TENER EL PACIENTE

PARA LA PRUEBA DE DEPURACIÓN DE
CREATININA
  Esta prueba debe darse indicaciones previas al
paciente.
 El paciente el día anterior debe realizar una dieta
pobre en proteínas.
 Se le explica al paciente que en un envase
completamente estéril con una capacidad de 2 a 3
litros debe recoger la muestra de orina
correspondiente a las 24 horas de la siguiente
manera:
 Vaciar la vejiga a las 7:00 am.
 Debe recoger en el envase todas las muestras de
orina a partir de dicha hora.
 Hasta la primera orina de la mañana del próximo
día.
 El paciente debe ir al laboratorio en ayunas.
 Debe pesarse y tallarse al paciente.
 Se procede a la toma de muestra sanguínea en un
tubo seco de tapa roja sin anticoagulante. Se debe
medir la totalidad de orina recogida en 24 horas en
un cilindro graduado y anotar dicho volumen

ABREVIATURAS Y EXÁMENES QUE SE USAN

Y PRACTICAN EN QUÍMICA SANGUÍNEA

 Glicemia = glucosa (mide hidratos de carbono en

la sangre).
  Curva de la tolerancia a la glucosa.
 Glicemia post – pandrial.
 Hemoglobina glicosilada.
EXÁMENES DE FUNCIONAMIENTO RENAL
 Urea – creatinina – ácido úrico – depuración de
creatinina – calciuria – fosfaturia – uricosuria (estos
últimos se realizan en orina en 24 horas)
EXÁMENES DE FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO
 Bilirrubina total y fraccionada.
 Bilirrubina directa e indirecta.
 Transaminasas glutámico oxalaceticas = aspartato
aminotranferasas.
 Transaminasas glutámico pirúvica = alanina
aminotranferasas.

LÍPIDOS TOTALES O LIPIDOGRAMA

 Colesterol total y fraccionado (HDL – LDL – VLDL).
 Triglicéridos

FUNCIONAMIENTO PANCREÁTICO.
 Amilasa – lipasa

ELECTROLITOS.
 Na = sodio.
  K = potasio.
 Ca = calcio.
 P = fosforo.
 Cl = cloro.
 Mg = magnesio.
ENZIMAS
 CK = creatina – fosfoquinasa.
 LDH = deshidrogenasa láctica.
 Troponina.
 GGT = gamma glutamil transferasa.
 PSA = antígeno prostático total y libre.
 FAP = fosfatasas acidas prostáticas (solo para hombres).
ESTUDIOS OSEOS
 Calcio, hierro, fosforo
INDICADORES TUMORALES
 Ca 125 = cáncer de ovario.
 Ca 15-3 = cáncer de mamas.
 Ca 19-9 = cáncer de páncreas.
 AFP = alfa feto proteínas.
 CEA = antígeno carcinoma embrionario.

HORMONAS
Perfil tiroideo
 T3 (total o libre) = triyodotironina
 T4 (total o libre) = tetrayodotironina
 TSH = hormona estimulante de la tiroides.
PERFIL REPRODUCTIVO
 FSH = folículo estimulante
 LH = luteinizante
 PRL = prolactina
 Estradiol
 Progesterona
 Testosterona
OTRAS HORMONAS
 Insulina
 HGC = gonadotropina corionica
INMUNOLIGIA
 HIV = síndrome de inmunodeficiencia adquirida.
 PCR = proteína C reactiva.
 RA test.
 T.A.E.L.O o ASLO = título de antiestreptolicina.
 IGG – IGM = inmunología pruebas de alergias.
 Células L.E = lupus eritematoso.
 Mono test = mononucleosis infecciosa.
 Reacción de widal (fiebre tiroidea).
 Machado guerreiro (Chagas).
 Hepatitis A = viral; B = trasfusiones; C = transmisión
sexual.

HEMOLISIS
Es la lisis o destrucción de la membrana del glóbulo
ocasionado de la liberación de la hemoglobina, se reconoce
por el color más o menos rojizo del suero o plasma, después
de centrifugado.

CAUSAS DE LA HEMOLISIS:

 El uso de cristalería sucia o húmeda.

 Toma de muestra rápida o con dificultad.
 Tiempo prolongado de uso del torniquete.
 Trasvasar la sangre con la aguja puesta en la
inyectadora.
 Trasvasar la sangre demasiado rápido al fondo del tubo.
 Agitar, no mezclar la muestra.
 Maltratar el coagulo con un aplicador.
 Las repetidas centrifugaciones del coagulo para obtener
más suero.

SUERO SANGUÍNEO
Es la porción clara de un líquido orgánico (sangre) después de
la coagulación y centrifugación del mismo.

IMPORTANCIA

Con él se realiza la mayoría de las pruebas en el laboratorio

clínico.

TÉCNICA PARA LA OBTENCIÓN DE SUERO:

 Se rotula un tubo de 13x100.

 Se agrega una cantidad de sangre.
 Esta se deja coagular espontáneamente unos 10 minutos.
 El coagulo formado se despega muy suavemente con un
palillo de madera.
 Luego se coloca a centrifugar 10 min por 2500
revoluciones.
 Luego el sobrenadante de trasvasa a un tubo seco y
limpio.
 PLASMA SANGUÍNEO

Es la fracción liquida y acelular de la sangre. Está compuesta

por 90 % agua y múltiples sustancias disueltas en ella

TÉCNICA PARA LA OBTENCIÓN DEL PLASMA:

 Se obtiene de sangre total en tubos con anticoagulante.

 Se centrifuga de 5 a 10 minutos a 3000 revoluciones.
 Luego de centrifugada la muestra se separa el plasma a
través de un gotero el sobrenadante.
 Ese sobrenadante se trasvasa a un tubo previamente
rotulado.
 Los exámenes que se realizan con el plasma debe
hacerse de inmediato.

DIFERENCIAS ENTRE EL PLASMA Y

SUERO
PLASMA
 Se obtiene con anticoagulante.
 La realización de los exámenes es de inmediato.
 Presenta todos los factores de la coagulación (fibrina).
 SUERO
 Se obtiene sin anticoagulante.
 La realización de los exámenes con necesariamente es
de inmediato, se puede guardar en la nevera.
 No presenta los factores de la coagulación.

PRESERVACION DEL SUERO

Son las técnicas usadas en el laboratorio para conservar por
un tiempo determinado el suero cuando las pruebas no se van
a realizar de inmediato.
PASOS
 Centrifugar
 Refrigeración: se debe conservar el suero separado del
coagulo, en la nevera si las pruebas se van a realizar en
otro momento o en el congelador si se van a realizar
días más tarde
 Se debe preservar tapado con el tapón o papel parafil, y
el tubo se debe rotular con los siguientes datos: nombre
y apellido del paciente, número del paciente, exámenes
a realizar, fecha.

EJEMPLO:

 Debe evitarse el congelamiento y

descongelamiento de la muestra sino se va a usar
en ese mismo momento.
 Para conservar el suero de los electrolitos,
obligatorio debe conservarse tapado, en la nevera
sino se van a realizar de inmediato, ya que el
sodio se evapora.
 Si el suero se debe enviar a otro laboratorio (casos
que sucede en laboratorios privados) este debe
estar preservado en la nevera, antes de su
transporte, tapado y rotulado.

TIPOS DE SUERO
 Suero normal: es el de color amarillo claro, de aspecto
transparente (el varia de colores según la ingesta de
proteínas del individuo).
 Suero hemolizado: es de color rojizo (el color varia de
intensidad de la lisis).
 Suero ictérido: su color es amarillo oscuro.
 Suero lipemico o lechoso: es de color blanquecino
debido al aumento de la concentración de grasa en la
sangre.
 Suero inactivo: es cuando se calienta el suero a 56°C
por 30 min, en baño de María, con la finalidad de
desproteinizarlo, ejemplo en la técnica para VDRL.
 Uroanalisis

ORINA
Es un líquido excretado por los riñones a través de las vías
urinarias, por medio del cual se eliminan sustancias de
desechos innecesarios para el organismo.
COMPOSICIÓN DE LA ORINA:
 Está compuesta por sustancias orgánicas e inorgánicas.

Orgánicas:
 Urea
 Creatinina
 Calcio
 Sodio
 Potasio
 Magnesio
Inorgánicos
 Cristales.
 Uratos.
 Sulfatos.
 Fosfato.
 Bacterias.
 Cuerpos Atónicos.
 Glucosa.
 Células Renales.
 Células Epiteliales.
 Leucocitos.
 Eritrocitos.
 Bilirrubina.
 Proteínas.
¿POR QUÉ LA PRIMERA ORINA DE LA
MAÑANA?
Porque es la más concentrada, tiene los ácidos apropiados
para mantener las siguientes estructuras (Cilindros,
Eritrocitos).
Niños: (bolsas de plástico para orina).
Bolsas Plásticas (5ml, 6ml).
Adultos: Envases circular de boca ancha de tapa hermética.
REQUISITOS PARA RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE
ORINA:

1.- Se recomienda recolectar la primera orina de la mañana

previo el lavado de los genitales.
2.- Se elimina el primer chorro y se recoge el intermedio y se
recolecta en un envase estéril.
3.- Evitar la recolección de Orina con la menstruación
(niñas). Hematuria Proteínas (Resultado falso).
4.- En caso de estudio bacteriológico, transportar la muestra
con un poco de hielo (fría).
Nota: Orina de 24 horas preservativo.
5.- Si se desea saber el funcionamiento de cada riñón la orina
se debe tomar a través de cateterismo. Urólogo o nefrólogo.
6.- La orina debe estar libre de debris.
7.- Debe realizarse dentro de las horas que la muestra fue
recolectado.

PRESERVATIVOS UTILIZADOS:
  Ácido Clorhídrico 10 CC. Por Litro de Orina.
 Timol 10 gotas por cada litro de Orina.
 Ácido Bórico 1 gramo por cada litro de Orina.

Nota: Si la Orina se realiza de inmediato. Pueden producirse

los siguientes cambios:

 Aumento del PH.

 Aumento de Bacterias.
 Cambio de Color.
 Deterioro de Células y Cilindros.
 Disminución de Glucosa.
 Aumento de Bilirrubina.
 Aumento de Olor.

CARACTERÍSTICAS FÍSICAS O
MACROSCÓPICAS DE LA ORINA.
COLOR:
Normal: Amarillo La Variación depende de:
Color Rojo: Indica presencia de Sangre Fresca o Hematuria.
Color Verde: Ingesta de Drogas.
Amarillo Verdoso: Presencia de Bilirrubinas.
Marrón: Presencia de Sangre Vieja.
Color Ámbar: Presencia de alteraciones en el Hígado o de la
Bilis.
Amarillo Claro: Muy diluida o paciente diabetes millitos.
OLOR:
1. Frutas Diabético.
2. Normal o Suigenerisis.
3. Fétido o Infección.
4. Amoniaco por ingesta de Medicamentos.

ASPECTO:
 Claro o Transparente.
 Ligeramente Turbio. (Posible infección). Cristales:
Uratos, Fosfatos, Etc.
 Turbio o muy Turbio. (Cristales).

REACCIÓN: Se toma con las tiras de Tornasol.

 Tiras Rosadas: Si en la Orina quedan de un color
Rosado es Acida, Lila o Morado es Alcalina.
 Tiras Moradas: Quedaran de un Color Lila o Morado si
es alcalina, si cambia a Rosado será Acida.
MÉTODOS PARA MONTAR LA DENSIDAD DE
LA ORINA:
  URODENSÍMETRO: es un cilindro que contiene en su
parte interna un tubo delgado graduado que posee en su
extremo inferior una esfera de color rojo la escala que
posee dicho tubo está indicada entre 1000 y 1080.
VENTAJAS: es económico
DESVENTAJAS: necesita mucha cantidad de orina entre
15 a 20 ml
 REFRACTÓMETRO: s un tubo metálico que presenta
en uno de sus extremos un lente mediante el cual se
mide la densidad de la orina en una escala, en su otro
extremo presenta una ventanilla por donde se agrega la
orina.
VENTAJAS: requiere muy poca cantidad de orina de 1 a 3
gotas.
DESVENTAJAS: es muy caro y no se encuentra en el
mercado.
 TIRAS REACTIVAS.
NOTA: Normalmente la densidad de la Orina oscila entre
1000 y 1025.
CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS O MÉTODOS:
Cuando Hablamos de un Laboratorio Privado nos llega la
orina al laboratorio, con su respectiva orden si es un Hospital
viene con su área y cama. (LA ORDEN LA ROTULAMOS
ABAJO “EN UNA ESQUINA”).
1. Debe ser las ¾ partes de Orina en el Envase, antes de
destaparla la Mezclamos.
2. Luego observaremos las Características Físicas en un tubo
de ensayo de 16x100.
3. Color.
4. Aspecto. Lo observamos a través de la luz, si se ve perfecto
(transparente) más o menos (ligeramente turbia) nada (turbia).
5. Olor. Nada (Suigenerisis) si es Fétido lo anoto en la Orden.

MONTAR ORINA MANUAL:

1. Tiras Reactivas: Con estas lo realizamos.
+ Glucosa, Trazos.
+ Proteínas Pos. (+)(+)(+).
+ Leucocitos.
+ Densidad. Etc.
NOTA: Todo lo positivo se debe anotar el resto si se
encuentra normal, se coloca en la orden normal.

MÉTODOS QUÍMICOS:
MÉTODOS DE PROTEINURIA:
Robert:
 Tubo de ensayo cualquiera.
 1cc de Reactivo de Robert.
 Por las paredes del tubo se agrega 0,5 de sobrenadante
Orina.
 Positividad: ANILLO BLANQUECINO.

Ácido Acético:

 Se centrifuga.
 2-3 cc. De sobrenadante de Orina.
 Se coloca a hervir 5-10 min.
 5-8 gotas de A. Acético al 50%.
 Todo esto en un tubo de 18x250.
Positividad: PRESENCIA DE TURBIDEZ.

Ácido Sulfosalicilico:

 2-3 CC. De sobrenadante de Orina.

 5-8 gotas de A. Sulfosalicilico al 20%.
Positividad: PRESENCIA DE TURBIDEZ.

MÉTODOS DE CETONURIA:

Lange:
 5 CC. de sobrenadante de Orina Centrifugada.
 0,5 CC. De ácido acético Glacial.
  0,55 de Nitropursiato.
 Se Mezcla.
 2cc. De agua destilada al 28% sin mezclar.
Positividad: DESARROLLO DE UN ANILLO
ENTRE LAS DOS FASES (Color del anillo Purpura).

Rothera:

 10 CC. De sobrenadante de Orina.

 2 CC. De hidróxido de amonio.
 2 gramos de Sulfato de amonio.
 1 cristal de Nitropursiato.
 Se Mezcla.

Positividad: Color Purpura Intenso.

Si esta Negativo (NADA).

MÉTODOS DE GLUCOSURIA:

Benedict:

 2 CC. De reactivo de Benedict.

 3 gotas de sobrenadante Orina.
 Se coloca a Hervir 10 min.
Positividad: Degradación de Colores> AZUL>
VERDE> AMARILLO NARANJA> ROJO
LADRILLO.

Tabletas de Clinitest:

 5 gotas de sobrenadante de Orina. (Centrifugada).

 10 gotas de agua destilada.
 Se agrega una tableta de clinitest.
 Disuelva.
 Se coloca a hervir de 5 a 10 min.
 Tubo de ensayo de 18x250
Positividad: Degradación de Colores: AZUL>
VERDE> AMARILLO NARANJA > ROJO
LADRILLO.

PIGMENTOS BILIARES:
Harrison 1 y 2:

 5 cc de Orina sin centrifugar.

 1 cc de cloruro de Bario al 10%, Mezclar.
  Se centrifuga 3-5x1500rpm. En Harrison 1 se
(FILTRABA).
 Se descarta el sobrenadante.
 Al sedimento se le agrega de 3-8 gotas de reactivo de
Fauchet.
Positividad: COLOR AZUL VERDOSO.

Yodo o Lugol:
 5 CC. De Orina centrifugada.
 1 CC. De solución de Yodo al 0,7% por las paredes del
tubo.
Positividad: ANILLO COLOR VERDE ENTRE LAS
DOS FASES.

Azul de Metileno:
 5 CC. De Orina centrifugada.
 Misma cantidad de Azul de metileno. 2, 3,5CC.
Positividad: ANILLO COLOR VERDE.
(No la mezclo cuando es Anillo).
DETERMINACIÓN DE UROBILINOGENO:

Método de Erlichs:

 3 gotas de reactivo de Erlichs.

 3 gotas de Orina.
 Mezclo.
Positividad: COLOR FUCSIA

HEMOGLOBINURIA:

(Sangre en Orina).

 Al Sedimento urinario agregar:

 De 3 a 4 gotas de ácido acético.
 De 3 a 4 gotas de Pirandón.
 De 3 a 4 gotas de agua oxigenada.

NOTA: Se debe agregar los reactivos siguiendo el

orden, para que el método tenga eficacia.

Positividad: DESARROLLO DE UN COLOR

VIOLETA. SU LECTURA ES INMEDIATA.

OTRAS PRUEBAS A REALIZAR EN EL AREA

DE UROANALISIS:
 PRUEBA DE EMBARAZO: 5-7 CC. De orina y
entregárselo al bioanalista para su posterior.
 DEPURACION DE CREATININA.
 ALBUNOMETRIA O PROTEINURIA EN
ORINA DE 24 HRS: A esta muestra se le debe medir
el volumen total y se realiza una proteinuria, luego se
separa 10 CC. Que es con lo que va a trabajar el
bioanalista.
 TOLERANCIA GLUCOSADA: Esta prueba
requiere realizar glucosuria en orina tantas veces como
muestras de sangre se tomen.

OBTENCION DEL SEDIMENTO URINARIO:

 Se trasvasa 5-7 CC. De Orina a un tubo seco.
 Se mezcla.
 Se coloca a centrifugar 5-10 minx1500rpm.
 El sobrenadante se trasvasa a otro tubo seco.
 El sedimento urinario se mezcla.
 Colocamos una gota del sedimento en una lámina
portaobjetos previamente rotulada.
 Se sobrepone o cubre con una laminilla y se le
entrega al bioanalista.

PRESERVACION DE LAS TIRAS REACTIVAS:

 No deben exponerse a la humedad, luz directa del sol, y
sustancias volátiles como alcohol y acetonas.
 No colocar los dedos sobre las tiras reactivas.
 Deben mantenerse en su envase original.
  No deben cortarse las tiras.
 No hablar encima de ellas.
 Sumergirla completamente en la orina sin centrifugar.
 Eliminar el exceso y realizar su lectura con buena
iluminación
SIGNIFICADO DE LAS TIRAS REACTIVAS
Tira reactiva: este método, es el mismo que se utiliza para
confirmar la existencia de un embarazo. Consiste en una tira
de papel impregnada de reactantes químicos que se introduce
en la orina y nos arroja los siguientes datos y resultados.
 PH: es la medida que se utiliza para medir la acidez de
la orina, un ph menor de 7 se considera bajo y por lo
tanto es acido. Un ph mayor a 7 se considera alto e
indica que la sustancia es básica. Habitualmente la orina
tiene un ph que oscila entre 4.5 a 7.5, es decir, es
ligeramente acido.
PH menor a 4.5, indica que hay un exceso de sustancias
acidas en el organismo y que se están eliminando, esto
sucede en infecciones graves o en la diabetes mellitus no
controlada.
PH mayor a 7.5, principalmente sucede cuando los
riñones no son capaces de eliminar las sustancias acidas en
la sangre, de forma que se acumulan u producen
alteraciones metabólicas. Esto sucede en la insuficiencia
renal.
 DENSIDAD: es la medida de las sustancias disueltas
en la orina y depende del número de partículas y de la
masa de las mismas
 PROTEINAS: los riñones saludables remueven los
desechos y exceso de líquido en la sangre. El cuerpo se
deshace de estos desechos y líquidos por medio de la
orina.
 GLUCOSA: si la concentración de glucosa en sangre
aumenta tal u como en la diabetes mellitus se supera la
capacidad, se supera la capacidad de reabsorción
tubular, todo esto conocido como umbral de reabsorción
renal y por ello aparece en la orina.
 URUBILINOGENO: es un derivado de la
bilirrubina, solo muestra indicios en la orina normal, se
presenta en enfermedades hepáticas, pulmonías y
escarlatinas.
 HEMOGLOBINA: las causas más frecuentes de
hematuria son: nefrolitiasis, enfermedades glomerulares,
tumores, la hematuria sin importancia patológica se
abarca luego del ejercicio extenuante y durante la
menstruación.
 NITRITOS: la orina es ricas en nitratos, la presencia
de bacterias en la orina transforma estos nitratos en
nitritos por lo tanto, los nitritos positivos es señal directa
de presencia de bacterias. No todas las bacterias tienen
la capacidad de metabolizar el nitrato, por ello el
examen de orina con nitritos negativos no descarta la
posibilidad de una infección urinaria.

 BIIIRRUBINA: aparece en la orina cuando se lesiona

la integridad del hígado, permitiendo la fuga de la
bilirrubina conjugada hacia la circulación (ejemplo la
hepatitis) la detección de la bilirrubina urinaria
promueve un indicio temprano de hepatopatías y su
presencia o ausencia puede utilizarse para determinar las
causas itericas clínicas, la detección de la bilirrubina en
orina es importante ya que es un marcador de
enfermedades hepáticas, antes de que sean evidentes
otros síntomas.
Espermograma

ESPERMOGRAMA
Al llegar el paciente al laboratorio debemos preguntarle si le
han dado las instrucciones para realizarse el examen
(ESPERMOGRAMA) si está al tanto le indicamos que
recolecte la muestra y si no sabe, se le explica que debe tener
de 3 a 5 días de abstinencia sexual y la muestra no puede
durar más de 30 minutos después de recolectada.
EXAMEN DE ESPERMOGRAMA

FASE MACROSCÓPICA DEL ESPERMOGRAMA

Se agrega el semen en un tubo cónico ya previamente
rotulado, allí se observan las características físicas del semen:
Volumen……….. (Este se mide en el tubo cónico).
Color……………. (Este puede ser: amarillo, grisáceo o
blanquecino).
Aspecto…………… (Este puede ser opalescente o
ligeramente opalescente).
Viscosidad………… (Si tiene moco presente es positivo (+)
y si es abundante se coloca (POS+++) o (POS++) y si hay
poco se coloca (POS+) y si no hay se coloca NORMAL).
Licuefacción…………… (Es para observar si tiene
partículas como grumos, gránulos, filamentos y si no tiene se
coloca COMPLETA).
PH……………….. (Se utiliza una tira especial la cual tiene
una escala que indica el PH).

FASE QUÍMICA DEL ESPERMOGRAMA

 Se rotulan 4 tubos, 2 tubos de 13x100 y 2 de tubos de
16x100:
 Al primer tubo (13x100), se le agrega 1ml de solución
hiposmolar.
 Al segundo tubo (13x100), se le agrega 2.5ml de agua
destilada.
 El tercer tubo (16x100), se le agrega 5ml de agua
destilada.
 El cuarto tubo (16x100), se le agrega 0.5cc de semen y
se lleva a centrifugar 10minx2000rpm.
 Utilizando una pipeta, se agregan 50 landas de semen
(del tubo cónico), al primer tubo que contiene 1ml de
solución hiposmolar.
 Se agregan 50 landas de muestra centrifugada (del
cuarto tubo) al tercer tubo, el cual contiene 5nl de agua
destilada y se mezcla.
 Después, se toman 50 landas de la dilución hecha
anterior mente (del tercer tubo) y se le agrega al
segundo tubo el cual contiene 2.5 ml de agua destilada y
se mezcla.
 Al cuarto tubo (ya centrifugado), se mezcla u se le
agregan 10 landas de formol y 20 landas de solución
salina; para que se conserve la muestra.
 El tercer tubo se puede descartar y los tres restantes se
conservan en la nevera para su análisis.

FASE MICROSCOPICA DEL ESPERMOGRAMA

Antes de empezar a observar las características físicas se debe
montar una muestra de semen para que el bioanalista lo
observe y compare movilidad:

 Se rotula una lámina portaobjeto con su respectivo

número.
 Se coloca una gota de semen en cada extremo de la
lámina.
 A una gota de semen se le agrega una gota de
eosina y se cubren con laminillas.
Se lleva al bioanalista para su observación.

ESPERMOCULTIVO

 Se rotula una inyectadora de insulina.

 Se absorbe 0.5 cc de semen.
 Se coloca en un envase de bacteriología y se le
lleva al bioanalista para su observación.
NOTA: si el bioanalista no esta se lleva a la estufa a 37º.

TEST DE KRUGER
 Se rotula un tubo de 13x100 con las letras
TK.
 Agregamos 1 ml de solución salina
fisiológica.
 Luego tomamos 100 landas de muestra y se
agregan al tubo mezclamos.
 Luego tapamos y llevamos a centrifugar 8
min por 1000 revoluciones.
 Ya centrifugada la muestra se descarta el
sobrenadante y tomamos el sedimento.
 Mezclamos bien el sedimento y en una
lámina previamente rotulada (TK).
 Colocamos 25 landas de sedimento, luego
con otralamina se realiza un extendido.
 Se deja escurrir y secar, ya seca la extensión
se fija con metanol y se lleva para su
observación.
 Inm
uno
logí
VACUNA
a
Las vacunas son un preparado de antígenos que una vez
dentro del organismo provoca la producción de anticuerpos y
con ello una respuesta de defensa ante microorganismos
patógenos. Esta respuesta genera, en algunos casos, cierta
memoria inmunitaria produciendo inmunidad transitoria
frente al ataque patógeno correspondiente.
La palabra fue acuñada por Jenner a partir del latín variola
vaccinia, adaptado del latín vaccīnus, del latín vacca, ‘vaca’.

Las vacunas son el principal logro de la investigación

biomédica y una de las principales causas de la mejora de la
salud y la calidad de vida del ser humano. Desde el comienzo
de las epidemias en China, la experiencia y la observación
dieron lugar a los primeros métodos de profilaxis, la
variolización. Las primeras evidencias de estas prácticas son
atribuidas a Zhang Lu.1

La primera vacuna descubierta fue la usada para combatir la

viruela por Edward Jenner en 1796,2 y debe su nombre al
hecho de que las ordeñadoras de la época que estaban en
contacto con la viruela de vaca o viruela bovina (viruela
"vacuna"), la cual era menos patógena, hacía que estas
personas se inmunizasen y no contrajesen la viruela humana.

TIPOS DE VACUNAS

Inactivadas: microorganismos dañinos que han sido tratados

con productos químicos o calor y han perdido su peligro. Este
tipo de vacunas activa el sistema inmune pero es incapaz de
reproducirse en el huésped. La inmunidad generada de esta
forma es de menor intensidad y suele durar menos tiempo,
por lo que este tipo de vacuna suele requerir más dosis. Dado
que la respuesta inmune lograda es menor, se utilizan en estas
vacunas unas sustancias denominadas adyuvantes.
Vivas Atenuadas: microorganismos que han sido cultivados
expresamente bajo condiciones en las cuales pierden o
atenúan sus propiedades patógenas. Suelen provocar una
respuesta inmunológica más duradera, y son las más usuales
en los adultos. Esto se debe a que el microorganismo no se
encuentra inactivado y conserva su estructura.
Toxoides: son componentes tóxicos inactivados procedentes
de microorganismos, en casos donde esos componentes son
los que de verdad provocan la enfermedad, en lugar del
propio microorganismo. Estos componentes se podrían
inactivar con formaldehído, por ejemplo. En este grupo se
pueden encontrar el tétanos y la difteria.
Acelulares: consisten en una mezcla de componentes
subcelulares purificados del patógeno contra el que se quiere
inmunizar, que normalmente consta de proteínas antigénicas
altamente inmunogénicas y que pueden contener toxoides.
Una vacuna de este tipo se utiliza en la actualidad contra la
tos ferina

Recombinantes de Subunidad: se utiliza la tecnología del

ADN recombinante para introducir el gen codificante para un
antígeno altamente inmunogénicas en el genoma de un
microorganismo productor (como E. coli o S. cerevisiae) con
el objetivo de súper producir y purificar la proteína
antigénica, que será la base de una vacuna. Estas técnicas de
producción de vacunas son muy útiles cuando el patógeno
contra el que se quiere inmunizar es difícil de cultivar in vitro.
Un ejemplo característico es la vacuna subunitaria contra la
hepatitis B, que está compuesta solamente por la superficie
del virus (superficie formada por proteínas).
ESQUEMA DE VACUNACIÓN:
Coproanalisis
 CONCEPTOS BÁSICOS DE COPROANÁLISIS
HECES: son los resultados de la ingesta de los jugos
digestivos. Varía dependiendo de la
Alimentación:
 Cárnico 50 – 100 G/24 hrs.
 Vegetariano 250 – 400 G/24 hrs.
 Mixto 100 – 200 G/24 hrs.
 Diarrea excede los 200 G/24 hrs.

Composición de las Heces

35%
65 % AGUA
65%
35 % BACTERIAS NITROGENOS
ALIMENTOS

COPROANALISIS: es la identificación de parásitos y

protozoarios. Así como de otras anomalías gastrointestinales
en materia fecal.
 RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA DE HECES

 Utilizar un recolector de heces correcto.

 No contaminar la muestra con orina ni con agua.
 Se debe recoger una porción de heces de 2 a 5 gr.
 Se debe recolectar de diferentes partes.
 En caso de heces diarreicas emplear envases de orina.
 En los lactantes las heces se deben recolectar
directamente del pañal.
 Si hay moco y sangre se debe recolectar preferiblemente
de esa parte.
 En caso de estreñimiento se le indica al paciente una
dieta rica en frutas y fibras.
 Evitar laxantes aceitosos.
 Evitar medicamentos como antidiarreicos o antibióticos.

PRESERVATIVOS PARA HECES

1. Formaldehido al 10%
2. Alcohol polivinilico
3. Fijador de shaudin
 CARACTERÍSTICAS FÍSICAS O
MACROSCÓPICAS DE LAS HECES
COLOR:
 Marrón: normal.
 Pardo: durante la lactancia.
 Oscuras: gran cantidad de pigmentos biliares.
 Aún más oscuras: presencia de sangre coagulada (si la
sangre es de procedencia alta es de color oscuro y de
aspecto alquitranado y si es de precedencia baja es de
color rojo y no bien Mezclada).
 Amarillo pardo: diarrea de origen pancreático.
 Claro: heces acolicas (suelen tener mucha grasa
emulsionada) pueden indicar una alteración pancreática.
 Verde: diarreas de una fermentación del niño.
 Rojo: derivado de un sangrado o hemorroides.
 Negro: debido a medicamentos como el hierro, también
por hemorragias del tubo digestivo, Alimentos como la
remolacha, hígado, etc...
CONSISTENCIA:
 Pastosa dura: normal (puede modificarse en ciertas
circunstancias).
 Liquida: se debe a una patología del intestino delgado.
 Escasas y mucosas: se debe a una patología del intestino
grueso.
 Semiblandas: indican un tránsito rápido por el intestino
delgado o son propias de las Afecciones pancreáticas o
biliares.
  Duras: por estreñimiento (en forma de grandes bolos en
la atonía)
ASPECTO:
 Homogéneo: cuando no hay presencia de restos
alimenticios.
 Heterogéneo: cuando hay restos alimenticios.
OLOR:
Se puede reportar como olor fecal u olor fétido.
PH:
 Acida: mal absorción de hidratos de carbono.
 Alcalina: una mal absorción más generalizada.
El PH de las heces es generalmente alcalino, cuanto mayor es
el PH, mayor es la concentración de Sales biliares.
MOCO:
Su presencia en las heces es debido a estados inflamatorios
(enteritis y colitis), pero también se presenta en el síndrome
de intestino irritado, en el que no hay inflamación.
PUS:
Se presenta en pequeñas cantidades en la enteritis
(inflamación del intestino delgado) y colitis (inflamación del
intestino grueso) de cualquier etiología.
SANGRE:
Muy frecuente en la enteritis y colitis, aparece en cantidades
pequeñas y mezclada con moco-pus, sin embargo, su
presencia en las heces hará sospechar una ulcera, tumor,
angiosdisplasia, entre otros o también en una enfermedad
hemorrágica.
CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS DE LAS HECES
La presencia de alimentos sin digerir o mal digeridos es
prueba de una perturbación en el proceso normal de la
digestión
 Grasas
Se mide por el método de van de kamer, es menos de 7
gr/24horas
 Compuestos nitrogenados
El contenido en nitrógeno es de 0.5 a 2.5 gr/24horas, lo que
varía en relación con la dieta y especialmente en las
enfermedades que afectan a la digestión proteica.
 Hidratos de carbono
Los glúcidos pueden encontrarse en casi todas las endopatías
y síndromes de malabsorción. Los hidratos de carbono en las
heces son de menos de 2 gr/24horas.
 Calcio
Se eliminan unos 600 mg/24horas.
 Electrolitos
La determinación de sodio y potasio en heces tiene interés
para diferenciar diarreas osmóticas de diarreas secretoras. Los
electrolitos en heces son de 290 mg/24horas.
 Urobilinogeno
De 40 a 280 mg/24horas, aumenta en las ictericias
hemolíticas. Disminuye en la obstrucción biliar y en ciertas
hepatopatías, así como con la administración de tetraciclinas
 Coproporfirinas
De 400 a 1000 mg/24horas, aumenta en las hepatopatías y en
la porfiria cutánea tarda, además de algunas porfirinurias
secundarias.

EXAMEN CORRIENTE DE HECES

Materiales utilizados para el examen corriente de heces:

Laminas, laminillas, tapa bocas, aplicadores de madera,

solución salina, lugol, guantes.

 Se mezcla la muestra de heces con un palillo de madera

 En una lámina portaobjeto previamente rotulado se
agrega en la derecha 1 gota de solución salina y en el
lado izquierdo se agrega 1 gota de lugol
 Con un palillo de madera, se toma una pequeña cantidad
de heces
 Se realiza una primera mezcla en la gota de solución
salina
 Luego se realiza una segunda mezcla en la gota de lugol
 Se cubren con dos laminillas diferentes para su
observación
  El bioanalista va a observar las bacterias, parásitos y
polimorfos nucleares.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN SALINA AL

0.85%

 Cloruro de sodio 8.5g

 Agua destilada 1000cc
 Se disuelve el cloruro de sodio en agua destilada
 Colocar la dilución en un envase de color ámbar y
rotular guardar en la nevera

PREPARACIÓN DEL LUGOL

 Yodo 1 g
 Agua destilada 100 cc
 Yoduro de potasio 2 g

Se disuelve el yoduro de potasio en agua, poco a poco se le

añaden los cristales de yodo, se agita hasta disolver
completamente y se coloca en un frasco de color ámbar.
Mantener en lugares oscuros donde no llega la luz.
 METODO DE QUENSEL

 Se usa como una forma rápida y fácil para la

identificación de quistes y de amiba histolitica.
 Se rotula una lámina porta objetos
 Se coloca una gota de reactivo de QUENSEL.
 Con un aplicador de madera se toma una pequeña
cantidad de heces y se mezcla.
 Colocar una laminilla o cubrir.
 Dejar por 3 minutos y luego pasar al bioanalista.

Preparación del QUENSEL

 Solución alcohólica sudan III 20 cc

 Solución de azul de metileno 30 cc
 Solución de cloruro de cadmio 50 cc

Se mezcla la solución de sudan III y azul de metileno en un

matraz, se le añade el cloruro de cadmio, agitar de 15 a 20
min, filtrar y se deja en reposo hasta el día siguiente, se
vuelve a filtrar, se lava con 20 a 25cc de agua destilada, el
precipitado lavado se disuelve en 250 cc de agua y luego se
mezcla todo y se envasa.

RECUENTO DE POLIMORFOS NUCLEARES O

CUENCE

 Se rotula una lámina porta objetos

 Se coloca una gota de azul de metileno (si el azul de
metileno está muy grueso se le agrega un a gota de
solución salina)
 Utilizando un palillo de madera se recoge una pequeña
cantidad de heces
 Se mezcla el reactivo con las heces
 Se cubre con una laminilla
 Se deja en reposo durante 15 min y se lleva al
bioanalista

TECNICA CRYPTOSPORIDIUM

 Se rotula una lámina porta objeto

 Se coloca una pequeña porción de heces (moco) Se
agregan 2 gotas de solución salina y mezclar en redondo
 Hacer un extendido y dejarlo secar por 1 hora
 Fijar con metanol de 3 a 5 min
  Agregar fucsina por 20 seg
 Lavar con abundante agua de chorro
 Colorear con azul de metileno de 20 seg y se le agrega
aceite de inmersión y se pasa al bioanalista

METODO DE CONCENTRACION DE WILLIS

 Se rotula un tubo de ensayo

 Se coloca 1 gramo de heces con 10 a 20 cc de cloruro de
sodio y agitar
 Pasar la mezcla por un colador y que caiga en un
recipiente cilíndrico para separar las partículas de grasa
 Se llena el envase con cloruro de sodio hasta la parte
superior del cilindro
 Se deja en reposo la mezcla 30 min
 Se coloca una laminilla sobre la superficie del menisco
hasta que se adhiera a la laminilla
 Esa laminilla se coloca cobre una lámina portaobjetos
para su observación.
METODO DE GRAHAM DE CINTA PEGANTE
Para investigación de oxiuros (larvas comunes en los niños)
REQUISITOS:
 Las muestras deben recolectase en la mañana, antes que
el paciente se bañe.
 También, pueden recolectarse en las horas nocturnas
cuando el paciente siente picazón.
TECNICA:
  Colocar una cinta pegante sobre una paleta baja lengua
dejando la parte gomosa hacia afuera.
 Mantenga segura la cinta y proceda a presionar los
pliegues perianales.

DETERMINACION DE AZUCARES
REDUCTORES
(Para pacientes con intolerancia a la lactosa)
 Se rotula un tubo de ensayo
 Se coloca aproximadamente de 2 gramos de heces
 Agregar 2 ml de solución salina
 Mezclar con un palillo de madera
 Agregar 2 ml de reactivo de benedict
 llevar a hervir durante 5 – 10 minutos
POSITIVIDAD: degradación de colores que van desde
el verde al rojo ladrillo

TECNICA DE SUDAN III O GRASAS NEUTRAS

 Se rotula una lámina porta objetos

 Colocar en el centro de la lámina una gota de reactivo
de sudan III.
 Tomar una pequeña cantidad de heces con un palillo de
madera
 Realizar una suspensión homogénea entre muestra y
reactivo
  Cubrir con una laminilla
 Colocar en el mechero hasta que emita vapores y pasar
al bioanalista
NOTA: la muestra no debe quedar humeado

EXAMEN DIRECTO DE HECES DE LA MUCOSA

RECTAL

 Se toma la muestra directamente del recto

 No realizar presiones fuertes con un aplicador con el
algodón sino simplemente tocamientos en las paredes
del recto
 Este aplicador junto con la muestra se coloca en un tubo
de ensayo previamente rotulado que contiene 1 cc de
solución fisiológica
 Se mezcla bien y se descarta el aplicador
 Se centrifuga la muestra 2min x 1500 revoluciones
 El sedimento se coloca en una lámina portaobjetos
previamente rotulada
 Se coloca una laminilla y se pasa para su observación.
METODOS PARA CONCENTRACION DE HECES
(ESTUDIOS COPROPARASITOSCOPIOS)

TECNICA DE FLOTACION

 Se rotula un tubo de ensayo

 Se agrega 8 gotas de solución de sulfato de zinc, 2 ml de
agua destilada y de 1 a 2 gramos de heces.
 Con un palillo de madera se trituran las heces que se
encuentran en el tubo de ensayo.
 Se centrifuga 2min x 1500 revoluciones
 Se descarta el sobrenadante u se aplican 3 lavados, es
decir, al sedimento agregar 2 ml de agua destilada
 Al último lavado se descarta el sobrenadante.
 Al sedimento agregar 2 ml de sulfato de zinc, se agita y
se agrega 6 ml de sulfato de zinc
 Se filtra a través de una gasa y se le agrega 2 ml de
sulfato de zinc y se agita
 Centrifugar 2min x 1500 revoluciones
 Utilizando un aza de platino se retira con ella dos gotas
del tubo
 Esas dos gotas se colocan en una lámina portaobjetos
previamente rotuladas realizando una suspensión con
una gota de solución salina y lugol
 Se sobrepone una laminilla a cada gota y se le pasa al
bioanalista

TECNICA DE FORMALINA – ETER

 Se mezcla con un palillo de madera la totalidad de heces

con 10ml de formalina – éter al 10% en un vaso
precipitado de 15ml
 Triturar con un palillo de madera dejando en reposo
dicha muestra durante 15min
 Realizando una filtración en un vaso precipitado de
22x350 con papel de filtro
 Se completa el envase del vaso precipitado con 10 ml de
solución fisiológica y mezclar
 Luego trasvasar la muestra a un tubo de 18x200 y llevar
a centrifugar 2min x 1500 revoluciones
 Descartar el sobrenadante y realizar los 3 primeros
lavados con solución salina
 Al último lavado descartar el sobrenadante, suspender
(golpear) el sedimento y agregar 10 ml de formalina
más 5 cc de éter y se mezcla
 Centrifugar a 2min x 1500 revoluciones
 Se descarta el sobrenadante
 Se suspende el sedimento y con un aza de platino de
realiza la suspensión en una lámina portaobjetos
 previamente rotulada con una gota de solución salina y
una gota de lugol
 Se sobrepone una laminilla en cada suspensión para su
observación.

METODO DE KATO
 Colocar sobre una lámina portaobjetos previamente
rotulada un aproximado de 30 gramos de heces
 Con las pinzas tomar un recuadro de papel celofán
previamente humedecida con solución de kato
 Se coloca dicho recuadro de papel sobre una toalla de
papel absorbente
 Colocar este recuadro sobre la porción de heces
 Se invierte la lámina sobre una superficie plana
realizando presión con el dedo pulgar para extender la
muestra
 Dejar secar la separación y se deja a temperatura
ambiente por un lapso de 80min, pero si se desea
acelerar el proceso debe colocarse dicha lamina sobre
una lámpara a una distancia de 30cm durante 10 min y
llevar al licenciado.
VENTAJAS:
  Permite el despistaje de varios parásitos (hematelmintos,
platelmintos, trichuris trichuras, ascarias umbricoides,
etc.)
 Es un método de bajo costo, fácilmente utilizado en
cualquier laboratorio
DESVENTAJAS:
 No es recomendable cuando las heces son liquidas
 No son recomendables en el despistaje de protozoarios
como; guardia lamblia, amibas.

CLASIFICACION DE LOS PARASITOS

AMEBAS INTESTINALES NO PATOGENAS
 Entamoebacoli
 Endolimax nana
 Entamoebagingivalis
FLAGELADOS INTESTINALES Y GENITALES
 Giardialamblia
 TrichomonasVaginalis
 TrichomonasHominis
 TrichomonasTenax
PATOGENAS PARA EL HOMBRE
 LEISHMANIA
 Donovani
 Braziliensis
AMEBAS DE VIDA LIBRE
  Naegleria
 Acanthamoeba

Sin embargo, los parásitos pueden clasificarse teniendo

en cuenta distintos criterios:
SEGÚN DONDE HABITEN
 Endoparásitos
 Ectoparásitos

SEGÚN LA CAPACIDAD DE PRODUCIR UNA

INFECCION
 Patógenos
 No patógenos
SEGÚN EL TIEMPO DE PERMANENCIA
 Permanentes
 Temporales
 Periódicos
SEGÚN LA NESECIDAD
 Obligatorio
 Facultativo
 Accidental

SEGÚN SU GRUPO TAXONOMICO:

 Protozoarios, Helmintos, Artrópodos:
PROTOZOARIOS
 Amebas flagelados ciliados
 Coccidios
HELMINTOS
 Nematodos platelmintos
ARTROPODOS
 Arácnidos e insectos
Bacteriología
BACTERIOLOGÍA
Es la ciencia que trata del estudio de las bacterias o
microorganismos, también se le conoce como Microbiología.
IMPORTANCIA
Permite identificar en los cultivos de las diferentes muestras y
secreciones corporales, los microorganismos causantes de las
enfermedades.
CONDICIONES PARA LA TOMA DE MUESTRAS
UTILIZADAS EN BACTERIOLOGÍA
HEMOCULTIVO:
 Se debe realizar la apepsia con alcohol yodado o alcohol
isopropilico.
 Es importante conocer la edad del paciente, porque de
esto depende la cantidad de sangre a utilizar.
Niños: 1.5 ml.
Adultos: 2ml.
 Se agrega la sangre por las paredes del tubo que
contiene el medio de cultivo (schaedler; caldo
nutriente).
 Se flamea la boca del tubo, se tapa y se mezcla por
inversión.
 Se traslada al laboratorio para incubarlo por 48 horas y
se sigue el procedimiento, en una estufa a 37 grados
centígrados.

UROCULTIVO:
 En un recolector de orina estéril, recoger la primera
orina de la mañana, descartando el primer chorro
tomando el intermedio y previo al lavado de los
genitales.
 Transportar la Muestra al laboratorio, con el recipiente
frio con un poco de Hielo.
 El paciente no debe haber ingerido antibióticos, por lo
menos 8 días antes del Examen.
COPROCULTIVO:
 Las heces deben ser recién emitidas.
 Se trasladaran al laboratorio en el recipiente Adecuado.
ESPUTO:
 La muestra debe ser la más purulenta, sin saliva.
 Se deben obtener la muestra antes de la administración
de antibióticos.
(Más o menos 3 días).
 Utilizar recolectores estériles (de orina).
 En ayunas, el objetivo es sacar el esputo desde lo
profundo de las vías respiratorias y la garganta.
 Es necesario hacer tres respiraciones profundas y luego
forzar alguna cantidad de esputo a salir al momento de
toser profundamente.

SECRECIÓN OCULAR:
 La Muestra debe tomarse sin lavarse los ojos la noche
anterior. No se deben aplicar gotas al ojo ni tomar
antibióticos.
 SECRECIÓN NASAL:
 La muestra debe tomarse sin sacudirse la nariz, sin
haberse realizado ningún tipo de lavado, sin colocarse
gotas y si haber ingerido antibióticos.

SECRECIÓN OTICA:
 La muestra debe de obtenerse sin haberse limpiado los
oídos, sin haberse colocado gotas y sin haber ingerido
antibióticos.
EXUDADO FARÍNGEO:
 La muestra se obtiene sin haberse lavado los dientes,
sub enjuagarse la boca ni hacer gárgaras ni tocamientos,
sin haber ingerido alimentos y sin haber tomado
antibióticos.

SECRECIÓN URETRAL:
 La muestra se toma sin lavarse los genitales, sin orinar y
sin haber ingerido antibióticos.

SECRECIÓN VAGINAL:
 Se obtiene la muestra sin lavarse los genitales, sin
colocarse cremas, ni pomadas, sin orinar, sin haber
ingerido antibióticos y debe ser libre de óvulos.
Otras muestras como: abscesos, purulentas heridas, entre
otras infecciones haciendo la asepsia del sitio de la lesión,
previo las anteriores indicaciones.
IMPORTANCIA DE ESTAS MUESTRAS
Al aislar la bacteria que produce la infección, y realizar el
antibiograma (es la prueba microbiológica que se realiza en el
laboratorio para determinar la sensibilidad y resistencia de
una bacteria a un grupo de antibióticos) al microorganismo
obtenido, se sabrá cuál es el antibiótico adecuado para
combatir la infección.
EXTENDIDOS DE MUESTRAS
BACTERIOLÓGICAS

 Se deben de utilizar láminas preferiblemente nuevas.

 El extendido debe ser una capa muy fina.
 Se debe de secar a temperatura ambiente.
 Se fija con el calor suave de la llama de del mechero, es
decir, se flamea de tres a cuatro veces, para matar las
bacterias y que así se adhieran a la lámina, si no se
flamea, en el momento de lavar el exceso de colorante,
la muestra se lava y no se observa Nada.

COLORACIONES

Su objeto es facilitar la observación mediante el colorante de

la morfología y la estructura bacteriana, pero sin provocar
alteraciones celulares ni destruir las bacterias.
Se deben emplear las cantidades adecuadas de reactivo y una
correcta coloración.

CLASIFICACIÓN DE LAS COLORACIONES

Coloraciones simples: utilizan un solo colorante y

permitirán conocer la morfología y tipo de agrupación
bacteriana.
 Coloración Azul de Metileno.
 Coloración de Fucsina Fenicada.

Coloraciones diferenciales: utilizan más de un colorante y

sirven para poner en manifiesto las características de afinidad
por ciertos colorantes de los microorganismos.
 Coloración de Gram.
 Coloración de Ziehl-Neelsen.

Coloraciones estructurales: utilizan más de un colorante y

sirven para poner de manifiesto estructuras bacterianas.
 Coloración de Flagelos.
 Coloración de Capsulas.
 Coloración de Esporas.
 Coloración de Capsulas Metacromáticas.

COLORACIONES SIMPLES

Coloración de Azul de Metileno:

 Se extiende, se fija y se seca al calor.

 Se cubre con el colorante de 1 a 5 minutos.
 Se lava con abundante agua, para eliminar el exceso.
 Se deja secar a temperatura Ambiente.

Coloración de Fucsina Fenicada:

 Se extiende, se fija y se seca al calor.

 Se cubre con el colorante de 1 a 3 minutos.
 Se lava con abundante agua, para eliminar el exceso.
 Se deja secar a temperatura ambiente.

COLORACIONES DIFERENCIALES

Coloración de Gram:
Representa la primera y más importante etapa del diagnóstico
bacteriológico, el cual ayuda junto al cultivo, a identificar el
agente causal de las infecciones, además es una técnica
sencilla, confiable y económica. Se clasifica en: GRAM
positiva y GRAM negativo, dependiendo del colorante que
permitan retener.

 Se realiza un frotis delgado sobre la lámina.

 Se deja secar a temperatura ambiente.
 Se flamea, 3 a 4 veces.
 Se coloca el frotis sobre un soporte adecuado.
 Cubrir con violeta de genciana o cristal violeta por 1
min.
 Escurrir y lavar con abundante agua de chorro.
 Cubrir el frotis con Lugol por 1 min.
 Decolorar con alcohol acetona por 30 seg.
 Escurrir y lavar con abundante agua de chorro.
 Cubrir con safranina o fucsina por 30 seg.
 Lavar, escurrir y dejar secar a temperatura ambiente.
 Entregar al Bioanalista.
 Coloración de Ziehl-Neelsen:

 Cubrir el extendido con Ziehl-Neelsen por 5 min.

Durante las cuales se debe flamear con el mechero (por
debajo de la lámina) evitando que se seque el reactivo
hasta que emita vapores.
 Lavar y escurrir con abundante agua de chorro.
 Agregar acido alcohol resistente por 3 segundos para
decolorar. Escurrir y Lavar con abundante agua de
chorro.
 Agregar azul de metileno para colorear el fondo por 30
segundos. Escurrir y lavar con abundante agua de
chorro.
 Secar a temperatura ambiente y entregar al bioanalista.

NOTA: El extendido debe quedar de un color azul morado.

Coloración de Hansel:
Se utiliza en la secreción Nasal para colorear eosinofilos,
estas son células que aumentan en los procesos alérgicos, las
cuales son eliminadas por las mucosas de las fosas nasales.

 Fijar el extendido con metanol por 3 minutos (no fijar al

calor). Descartar el metanol.
 Cubrir la lámina con el colorante de Hansel, por 1
minuto. Al transcurrir el tiempo, agregar H2O destilada
por 30 seg.
 Lavar con abundante agua de chorro, para eliminar el
exceso colorante.
 Se puede agregar una pequeña cantidad de metanol, para
eliminar ´precipitado o exceso colorante.
 Dejar secar a temperatura ambiente y entregar al
Bioanalista.

PREPARACION DEL COLORANTE:

 Eosina al 0.5% en metanol.
 Azul de metileno al 0.1% en metanol.
 Mezclar a partes iguales.
 Conceptos
de Medios
de Cultivo
MEDIOS DE CULTIVO
Consiste en un gel o una solución que cuenta con los
nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones
favorables del ph y temperatura) el crecimiento de virus,
microorganismos, células o incluso pequeñas plantas. Estos
medios deben ser, los más semejantes al hábitat natural del
microorganismo, para lograr su objetivo.
 CRITERIOS PARA LA PREPARACIÓN DE
CULTIVOS

 Revisar la fórmula del medio deseado y disponer de

todos los componentes.
 Realizar los cálculos de acuerdo a la cantidad que se va
a preparar.
 Medir con exactitud los componentes del medio
deseado.
 Ajustar el ph, envasar, rotular y esterilizar.

FINALIDAD DE LOS CULTIVOS

 Desarrollar y conservar cultivos de bacterias.

 Estudiar reacciones o acciones de los microorganismos
sobre algunas sustancias del medio.
 Facilitar la producción por los microorganismos, de
algún producto determinado.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Según su Origen:
 Naturales: Agua, orina, sangre, leche (poco utilizados).
 Sintéticos: Son sustancias químicas orgánicas e
inorgánicas (extracto de carne, peptona, cloruro de
sodio, agua).
 Vivos: Son cultivos para parásitos (huevos, empollados,
células LE, crecimiento de virus).

Según su Estado Físico:

 SÓLIDOS: Ejem: Agar en placas y en tubo.

 SEMI-SÓLIDOS: Ejem: Agar indol, agar movilidad,

medio OF.

 LÍQUIDOS: Ejem: Caldos (se preparan en tubos de

16x150).

Según su Función:

 BÁSICOS: Son utilizados para el desarrollo de

microorganismos no exigentes en cuanto a nutrición.
Ejem: Caldo Nutriente.
 ENRIQUECIDOS: Contienen un medio básico, al
cual se le añaden sustancias nutrientes, permitiendo el
crecimiento de microorganismos exigentes. Ejem: Agar
Sangre.

 DIFERENCIALES: Permiten diferenciar dos o más

tipos de microorganismos. Ejem: Manitol Salado.

 ALTAMENTE DIFERENCIALES: Ejem: Agar

Chocolate.

 SELECTIVOS: Son específicos para un solo tipo de

microorganismos.

 MEDIOS DE TRANSPORTE: Tienen gran utilidad

en aquellos casos en que existe demora entre la toma de
muestra y su procedimiento. Ejem: Cary Blair- Smart.

MEDIOS UTILIZADOS SEGÚN EL EXAMEN

REQUERIDO
 AMINOÁCIDOS: L.O.A: lisina omitina arginina.

 AZUCARES: Lactosa, ramnosa, rofinosa, sorbitol,

arabinosa, adonitol, inositol, maltosa, manitol.
  PARA SECRECIÓN OTICA, OCULAR Y
NASAL: Agar sangre, agar chocolate, agar Mc conkey,
y mueller hinton.

 PARA SECRECIÓN VAGINAL Y URETRAL:

Agar sangre, agar chocolate con suplemento y VCN,
mueller hinton y Mc conkey.

 PARA UROCULTIVOS: Agar sangre, agar Mc

conkey, agar mueller hinton para el antibiograma

 PARA COPROCULTIVO: Agar SS (salmonella

shiguella), agar XLD y trateionato broth.

 PARA BK: Agar lowestein Jensen.

 PARA HEMOCULTIVOS: Agar shardler, agar

sangre, Mc conkey.

 PARA EXUDADO FARÍNGEO: Agar sangre y

agar Mueller hinton.

CONDICIONES PARA MONTAR MUESTRAS DE

ESPUTO BK
1. MATERIALES:

 Mechero.
 Aplicadores de Madera.
  Laminas porta Objeto.
 Papel Absorbente.
 Bandeja de aluminio.
 Cloro o Creolina.
 Colorantes (coloración de Ziehl-Neelsen).
 Lápiz Graso o Marcador Sharpie.
 Lápiz punta de diamante.
2. NORMAS DE BIOSEGURIDAD: Guantes, bata,
tapa bocas, etc.
3. PASOS:
 Para montar un BK el mechero debe estar encendido.
 El Sitio debe poseer una Buena iluminación.
 Se debe realizar un lavado correcto de manos (antes-
después).
 Usar la campana de extracción o extractor.
NOTA: Si no se trabaja con las normas de Bioseguridad
como por ejemplo: En el medio Rural, se puede agregar a la
muestra de esputo 5 a 10 gotas de cloro o creolina (evitando
contaminación), tapar y dejar por 30 min, pasado ese tiempo
se procede a realizar el extendido porque no habrá peligro de
contaminación.

DELIMITAR EL SITIO DE TRABAJO

1. Se debe trabajar sobre una bandeja metálica, cubierta

con papel absorbente y humedecido con cloro o
creolina.
2. Colocar las muestras rotuladas en orden sobre una
bandeja metálica humedecido con cloro o creolina,
rotular las láminas.

3. Realizar el extendido, se debe destapar solo el

recolector de la muestra que se va a procesar, mezclar
el esputo con el aplicador de madera y tomar las
partículas de moco purulento.

4. Realizar el extendido con movimiento de vaivén o en

forma circular sin tocar los bordes de la lámina,
descartar el aplicador en el papel absorbente
humedecido con creolina.

5. Una vez realizado el extendido flamearlo, dejarlo secar

en temperatura ambiente y colorear con Ziehl-Neelsen
y agrego una gota de aceite de inmersión.
 ESTERILIZACION

Es el proceso mediante el cual se distribuye de forma total

cualquier tipo de vida microbiana, como virus y esporas, que
se hallan en un objeto, sustancia o lugar, con el fin de hacer
estéril algo que antes no lo era.

TIPOS DE ESTERILIZACION

 SECO: directo a través de la llama (flameado).

 INDIRECTO: horno de aire caliente.

 CALOR: vapor de agua (puede ser: a presión o sin

presión).

 CALOR HUMEDO: ebullición.

MATERIALES PARA PREPARAR CULTIVOS

 Balanza
 Mechero con trípode
 Agua destilada
  Medios de cultivo comerciales
 Espátula
 Varilla de vidrio
 Rejilla metálica
 Fiola
 Vasos precipitados
 Cilindro graduado

MATERIALES PARA ENVASAR MEDIOS DE

CULTIVO

 Placas estériles
 Tubos con tapas de baquelita
 Mechero
 Bata
 Guantes
 Tapaboca
 Gorro

PARA ENVASAR CULTIVOS

AGAR en Placas
  Pesar en la balanza, la cantidad requerida
 Disolver con agua destilada en un Fiola
 Llevar a ebullición
 Dejar enfriar aproximadamente por 5min
 Cubrir la Fiola con papel kraff y sellar con cinta
adhesiva
 Llevarla a la autoclave por 15 min 121ºC a 15 libras de
presión
 Dejar enfriar en la autoclave con la puerta cerrada
 Sacarla del autoclave y se procede a envasar
 El cultivo se traslada al área de trabajo donde estarán
dispuestos todos los materiales: placas, tubo, fiola.
 Se prende el mechero, cerrar la puerta no dejar entrar ni
salir personal en el ambiente que se está preparando y
no se debe hablar en el momento que se valla o que se
esté envasando.
 Se debe flamear la placa, si queda burbujas, vuelve a
flamear hasta que se eliminen (sin la tapa), se deja
solidificar, se invierte y se guarda en la nevera.

AGAR en Tubo

 Pesar en la balanza, la cantidad requerida.

 Disolver con agua destilada en un fiola.
  Llevar a ebullición
 Se envasa en el mechero prendido
 Se esteriliza en la autoclave de 15min a 121ºC a 15
libras de presión
 Se deja enfriar
 Dosificar bien sea en taco recto o en pico
 Se guarda en la nevera rotulado las cestas

Caldos en Tubos

 Se pesa el medio y se diluye en agua

 Se calienta sin llevar a ebullición
 Se envasa en tubos con tapa de baquelita (la tapa debe
quedar semi-ajustada) para permitir el adecuado ajuste
de las presiones, durante la esterilización
 Llevar al autoclave por 15 min 121ºC a 15 libras de
presión
 Se deja enfriar y ajustar la tapa baquelita
 Llevar a la nevera

Azucares y aminoácidos

 Se pesa y se diluye en agua

 Se toma el PH, que debe ser neutro, si queda acido se
alcaliniza con hidróxido de sodio Na (OH), si esta
 alcalino, se acidifica con ácido clorhídrico HCL (unas
gotas)
 Se lleva a la fiola al mechero, si es AGAR se lleva a
ebullición y si es CALDO solo se calienta
 Se envasa en tubos de 13x100con tapa de baquelita
 Luego se lleva al autoclave por 15min a 121ºC y a 15
libras de presión
 Se deja enfriar y se lleva al bioanalista

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS:

Los medios de cultivos preparados, se toma un tubo o una

placa al azar, la colocamos dentro de la estufa o en el horno
por 24 horas a 37ºC para observar si hay crecimientos
bacterianos, debe haber, fue mal esterilizado el material.

MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN DE LOS

CULTIVOS:

Se debe mantener en nevera a 4ºC, pueden durar de 8 a 15

días las pacas, los caldo, azucares y aminoácidos de 1 a 2
meses.

CULTIVOS EN PLACA

 Agar sangre
 Agar mc conkey (MK)
 Agar SS (salmonella Shiguella)
 Agar XDL (xilosa-Lactosa Desxosicolato sódico)
 Agar chocolate simple (CH)
 Agar chocolate con suplemento (CHs)
 Agar chocolate VCN (Vancomicina nistatina)
 Agar muellerhinton.

CULTIVO EN TUBO (16 X 150)

 Agar urea
 Agar kligler
 Agar citrato
 Agar lowenstein Jensen
 Agar Stuart ( medio de trasporte)

CULTIVOS EN TUBOS (CALDOS)

 Brucelabroth
 Shaedlerbroth
 M.E.R.V.P (rojo de metilo vegesproskaur)
 Tetrathionatebroth
 Triptycasebroth
 Thioglicolatebroth

AGAR SANGRE

 Se disuelven 40gr en 1 litro de agua destilada

calentando y agitando gasta disolver completamente.
 Se cierra el matraz, con 2 capas de papel aluminio.
 Se lleva la autoclave a 121ºC por 15min a 15 libras de
presión.
 se enfría el medio agitando al mismo tiempo para que se
enfrié por igual en todo su volumen y no se quede
adherido en las paredes del matraz.
 Se enfría de 45 a 50ºC se le añade de forma aséptica, un
5 x 100 de sangre desfibrinada estéril de carnero,
humana o conejo.
 Se mezcla bien y se reparte en placas de Petri a un
volumen de 20ml por placa

AGAR CHOCOLATE

 Se disuelven 41gr en 1 litro de agua destilada

calentando y agitando hasta disolver completamente.
 Se cierra el matraz, con 2 capas de papel aluminio.
 Se lleva el autoclave a 121ºC
 se enfría el medio agitando al mismo tiempo para que se
enfrié por igual en todo su volumen hasta llegar a 82ºC
de temperatura
 se le añade en condiciones asépticas un 10% de sangre
carnero, conejo o humana.
 Se enfría de 45 a 50ºC se mezcla y se dosifica en
placas de Petri a un volumen de 20ml por placa.

AGAR NUTRITIVO

 Suspender 23gr del medio, en 1 litro de agua destilada.

 Hervir por un minuto hasta la ebullición
 Estabilizar en baño de maría por 45 min, a 56ºC
 Repartir 6cc en tubos de baquelita de 15 x 120.
 Llevar al autoclave por 10min a 121ºC

AGAR MC CONKEY

 Se disuelve 50g del medio en 1 litro de agua destilada,

calentando hasta disolverlo por completo
 Se cierra matraz con 2 capas de papel aluminio.
 Se esteriliza en el autoclave a121ºC por 15 libras de
presión
 Se enfría el medio, agitando al mismo tiempo para que
se enfrié por igual en todo su volumen de 0ml por placa.

TRIPTICASE SOYA BROTH (CALDO DE SOYA)

 Para 500cc de agua, se le agrega 50gr de este medio.

 Se mezcla.
 Se deja hervir.
 Se reparte 8cc en tubos de 16 x 150.
 Se tapa con tapas de baquelita
 Se lleva a la autoclave a 121ºC, por 15min a 15 libras de
presión
 Se deja enfriar.
 Se lleva a la estufa a 37ºC para el control
 El control debe ser de 6 o 24 horas

EQUIVALENCIAS DE ML A LANDAS
  5 landas 0.005ml
 10 landas: 0,01ml
 15 landas: 0,015ml
 20 landas: 0,02ml
 25 landas: 0,025ml
 30 landas: 0,03ml
 40 landas: 0,04ml
 50 landas: 0,05ml
 100 landas: 0,1 ml
 200 landas: 0,2 ml
 500 landas: 0,5 ml
 1000 landas: 1ml

CENTÍGRADOS A FAHRENHEIT

____ºC = (ºF – 32) _______

1,8

FAHRENHEIT A CENTÍGRADOS

ºF = ºC x 1,8 + 32

Nota: para calibrar los equipos

PRECAUSIONES QUE SE DEBEN TENER PARA

PESAR EN UNA BALANZA

 No pesar objetos calientes, estos deben estar a la misma

temperatura de la balanza
 Aprender cual es la capacidad de la balanza y nunca
pesar objetos que sobrepasen esa cantidad.
 Pesar en recipientes limpios y secos, para pesadas de
alta presión es recomendable mantener los recipientes
en un desecador, no colocar sustancias directamente
sobre el plato.
 Asegúrese que los platos de la balanza estén limpios
antes de operar con ella, en caso contrario elimine el
polvo de plato y del fondo de la balanza con una brocha
suave.
 Confirmar la nivelación de la balanza
 Confirmar el 0 de la balanza, si se emplea papel debe
ajustarse el 0 de la balanza, al igual que cuando se usa
recipientes.

DESPUES DE TERMINAR UNA PESADA EN

LA BALANZA ASEGURARNOS DE:

 Tapar herméticamente el frasco contenedor del reactivo.

 Anotar en la libreta de registros el peso utilizando.
 Que la balanza quede impecablemente limpia
 Las ventanas de vidrio debidamente cerradas.
 Colocar la cubierta a la balanza que la protege del
polvo.
Medios de
Cultivo

AZUCARES VERDES OFF

  Base OFF basal Médium
 Componentes: Glucosa, Maltosa, Manitol, Fructuosa,
Sucrosa, Xilosa, Lactosa.
PREPARACIÓN:
En una Fiola medir 1000ml de agua destilada y agregar para
esta cantidad de agua 1gr de la Base de off Basal Médium,
colocar a hervir, luego de esto agregar 1gr, del componente
deseado mezclar y llevar al autoclave. Al sacarlo del
autoclave bajar la temperatura del medio y medio el pH 6.8,
repartir en tuvo de pequeño de 3cc y rotular con su
componente respectivo y llevar a la nevera.

AZUCARES CON BASE ROJO PHENOL

 Broth base penol red
 Componentes: glucosa, maltosa, xilosa, manitol,
sucrosa, fructuosa.
PREPARACIÓN:
En una Fiola medir 1000 de agua destilada, agregar para esta
cantidad de agua 1.5gr de base de Broth Phenol Red, colocar
a hervir. Luego de eso agregar 1gr del componente deseado,
mezclar y llevar a la autoclave al sacarlo del autoclave bajar
la temperatura del medio y medir pH 6.8. Repartir en tubos
pequeños 3cc rotular con su respectivo componente, llevar a
la never
NOTA:
Para bajar pH: Ácido Clorhídrico.
Para subir pH: Hidróxido de Sodio

OF BASAL MÉDIUM (SOLO TACO)

(CARBOHIDRATO 1%)
 Bacto triptone………………………….. 2gr
 Sodium Chloride………………………..5gr
 Dipotasium phosphate………..………0.3gr
 Bacto broom timol blue…...0.08gr.
 Bacto agar………..………………………2gr
 Agua Destilada……………...………1000ml
PH final: 6.8

PREPARACIÓN:
Suspender 9.4gr del medio OF basal Médium en un litro
de agua destilada, hervir por un minuto, estabilizar en baño
de María a 56ºC por 45min. Separar 100ml del medio en
fiolas y agregar 1gr del carbohidrato deseado: Glucosa,
Xilosa, Manitol, Maltosa, Fructuosa, Sucruosa, Lactosa;
mezclar, medir el pH 6.8, ajustar si es necesario, repartir 3m
del medio en tubos de ensayo de 13x100 (taco), autoclave a
15 libras de presión a 121ºC por 10min.

LACTOSA AL 10% (TACO Y BISEL)

  Rojo de fenol………………….....0.025gr
 Lactosa……………………………100gr
 Agar nutritivo……………………..23gr.
 Agua destilada………………….1000ml
PREPARACIÓN:
En una Fiola agregar los 23gr del agar nutritivo y los
1000ml de agua destilada, calentar hasta el punto de
ebullición por un minuto, estabilizar en baño de María por
45min a 56ºC, agregar la lactosa y rojo fenol y repartir en
tubos de ensayo de 18x150 de 5 a 6 ml del medio, esterilizar
en autoclave a 15libras de presión a 121ºC por 10min, inclinar
de tal forma que quede igual taco e igual bisel.

AGAR NUTRITIVO: DIFCO (TACO Y BISEL)

 Bacto beef extract…….………….....3gr
 Bacto peptone………...…………….5gr
 Bacto agar………………………..15gr
 Cloruro de sodio………………...8.5gr
PH: 6.8
PREPARACIÓN:
Suspender 23gr del medio nutriet agar en un litro de
agua destilada, hervir por un minuto hasta la ebullición,
estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC, repartir en
tubos de baquelita de 15x120: 6ml, autoclave a 15 libras de
presión a 121ºC por 10 min, inclinar de tal forma que quede
igual taco e igual bisel.
LISINA-ARGININA-ORNITINA-DC
  Moeller decarboxylasa broth base…….10.5gr
 Agua destilada……………….....1000ml
PH: 6.0 +/- 2
PREPARACIÓN:

Disolver 10.5gr del medio Mueller decarboxylasa broth-

base en un litro de agua destilada, separar 250ml en Fiola y
agregar 2.5gr de aminoácido deseado, luego repartir en tubos
con tapa de baquelita de 15x100: 2cc, autoclave a 15 libras de
presión a 121ºC por 100min.
NOTA: El DC es la base solamente sin agregar nada.

CALDO SALADO
 Brain Heart infusión broth….13.5gr
 Cloruro de sodio……………….30gr
 Agua destilada………………1000ml

PREPARACIÓN:

Pesar los ingredientes, mezclar, repartir 3ml en tubos de

baquelita de 15x100, autoclave a 15 libras de presión a 121º C
por 10min. También se puede separar con caldo tripticasa
soya o nutrient broth al cual se le agrega 65gr de cloruro de
sodio por un litro.
 UREA AGAR BASE (TACO Y BISEL)

 Pancreatic digesto of gelatin….1.0gr

 Dextrose……………………….1.0gr
 Sodium Chloride………………2.0gr
 Potassium phosphate………….2.0gr
 Urea…………………………..20.0gr
 Phenol red…………………..0.012gr

PREPARACIÓN:

A.- Disolver 15gr del medio de urea agar base

granulado en 900ml de agua destilada, hervir por un minuto
hasta que el medio se disuelva, autoclave a 121ºC a 15libras
de presión por 15min, estabilizar en baño de María a 56ºC
por 45min.

B.- Disolver 29gr de la media urea en 100 ml de agua

destilada previamente esterilizada, mezclar ambas soluciones,
repartir en tubos de ensayo de 13x100 o de 18x150
previamente esterilizados, se inclinan y se da prueba de
esterilidad.
 CALDO SOYA TRIPTICASA

 Pancreatic digest of casein…….17gr

 Papaic digest of soybean meal...3.0gr
 Sodium Chloride………………5.0gr
 Dipotassium phosphate..……...2.5gr
 Dextrose……………………….2.5gr
 Agua destilada………………1000ml

PH final de 7.3

PREPARACIÓN:

Disolver 30gr del medio de tripticasa soya broth en un

litro de agua destilada, disolver y repartir 3ml en tubos con
tapa de baquelita, luego autoclave por 15min a 121ºC a 15
libras de presión.
 MEDIO DE TRANSPORTE (TACO)
(CARY BLAIR)

 Sodium tioglycolate…………...1.5gr
 Disodium phosphate…………..1.1gr
 Sodium Chloride……………....5.0gr
 Agar…………………………....5.0gr

PH final 8.4

PREPARACIÓN:

Disolver 12.6gr del medio de Cary Blair en 991ml de

agua destilada, hervir hasta el punto de ebullición por un
minuto, estabilizar en baño de María por 45min a 56º, agregar
9ml de cloruro de calcio al 1%, repartir de 4 a 5 ml del medio
en tubos con tapa de baquelita de 18x150, autoclave por
15min a 15 libras de presión a 121ºC.
 FRASCO A PARA HEMOCULTIVO

 Tripticase soya broth o caldo todd hewitt broth o Brain

Heart infusión………….30gr
 Agua destilada………………………1000gr
 Gelatina………………………………...12gr
PREPARACIÓN:
Disolver 30gr del medio de tripticasa soya broth en
1000ml de agua destilada, mezclar y agregar los 12gr de
gelatina y 250mg de SPS (liquido), luego repartir 50ml del
medio en frascos con tapa de baquelita para hemocultivo,
autoclave a 121ºC a 15 libras de presión por 15min.
FRASCO B PARA HEMOCULTIVO

 Tioglicolate médium 135 C……………30gr

 Agua destilada……………...……….1000ml
PREPARACIÓN:
Disolver 30gr del medio de caldo tioglicolato en 1000ml
de agua destilada, mezclar, hervir hasta e punto de ebullición
por un minuto, estabilizar en baño de María por 45min a
56ºC, agregar 10ml de hemina menadione, luego repartir 50
ml del medio en frascos con tapa de baquelita para
hemocultivo, autoclave a 121ºC a 15ºlibras de presión por
15min.

CALDO PEPTONADO
  Bacto peptona…………………10gr
 Cloruro de sodio….……………30gr
 Agua destilada………………1000ml
PH final de 8.4 o 8.6
PREPARACIÓN:
Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada,
ajustar pH a 8.6 y repartir 8ml en tubos con tapa de baquelita,
autoclave por 15min a 121ºC a 15libras de presión.

CALDO MALONATO DE SODIO

 Yeas extract……………………………1.0gr
 Amonuim sulfate…………………..….2.0gr
 Dipotasium phosphate…………..……0.6gr
 Monopotasium phosphate……………0.4gr
 Sodium chloride………………………2.0gr
 Sodium malonate……………………...3.0gr
 Dextrose…………………………….0.025gr
 Agua destilada……………………...1000ml
PH final de 6.7
PREPARACIÓN:

Disolver 9.3 del medio malonate broth en un litro de agua

destilada, ajustar pH a 6.7, repartir 3ml en tubos con tapa
baquelita, autoclave por 15min a 121ºC a 15 libras de presión.
 CALDO THIOGLYCOLATE 135C

 Pancreatic digest of casein……….……17gr

 Papaoc digest of soybean meal…………3gr
 Dextrose…………………………………6gr
 Sodium Chloride……………………...2.5gr
 Sodium Thioglycolate……………...…0.5gr
 Ag……………..………………………0.7gr
 L-Cystine………………………...…..0.25gr
 Sodium Sulfite……………..………….0.1gr
 Agua destilada……………...………1000ml

PH final de 7.0

PREPARACIÓN:
Disolver 30gr del medio tioglicolato en 1000ml de agua
destilada, mezclar, hervir hasta el punto de ebullición por un
minuto, luego estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC,
agregar 10ml de hemina-menadione, repartir 8ml del medio
en tubos con tapa de baquelita, autoclave a 121ºC a 15 libras
de presión por 15min.

CALDO MH
  Muelller hinton broth…………………21gr
 Agua destilada……………………...1000ml
 Isovitalex………………………………10ml

PREPARACIÓN:

Disolver 21 gr del medio de Mueller hinton broth en

1000ml de agua destilada, agregar 10ml de isovitalex, repartir
de 3ml del medio en tubos con tapa de baquelita de 13x100,
autoclave por 15 minutos a 15 libras de presión a 121ºC.

CALDO MRVP
 Buffered peptone……………………...7.0gr
 Dipotasium phosphate………………..5.0gr
 Dextrose………………………………5.0gr
 Agua destilada……………………...1000ml
PH final de 6.9
PREPARACIÓN:
Disolver 17gr del medio MR-VP broth en 1000ml de
agua destilada, repartir de 3ml del medio en tubos con tapa
baquelita de 13x100, autoclave por 15min a 15 libras de
presión a 121ºC.

CALDO HIPURATO
 Heart infusión broth…………………..25gr
  Hipurato de sodio……………………...10gr
 Agua destilada……………………...1000ml
PREPARACIÓN:
Disolver ambos medios en 1000ml de agua destilada,
repartir en 3 tubos con tapa de baquelita de 13x1000,
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.

INDOL
(TRYPTICASE PEPTONE PANCREATIC DIGEST
OF CASEIN) BBL

 Trypticase Peptone Pancreatic Digest of

Casein…………………………………..20gr
 Cloruro de sodio……………………….10gr
 Agua destilada……………………...1000ml
PH final: 7.0 +/- 0.2

PREPARACIÓN:
Disolver ambos medios en 1000ml de agua destilada,
repartir de 3ml del medio en tubos con tapa de baquelita de
13x100, autoclave por 15min a 15libras de presión a 121ºC
 LIA LISINA IRON AGAR (TACO Y BISEL)

 Gelisate peptone: 5.0gr

 Yeast extrac: 3.0gr
 Dextrose: 1.0gr
 1-Lysine: 10.0gr
 Ferric ammonium citrate: 0.5gr
 Sodium thiosulfate: 0.04
 Purpura de bromo cresol: 0.02gr
 Agar: 13.5gr
 Agua destilada: 1000ml
 Alcoruro de Sodio: 8.5gr
PH final de 6.7

PREPARACIÓN:

Disolver 33 gr del medio de lisina iron agar en 1000ml de

agua destilada, agregar el cloruro de sodio, hervir hasta el
punto de ebullición por un minuto, estabilizar en baño de
María por45min a 56ºC y repartir 4ml del medio en tubos con
tapa de baquelita de 13x100, autoclavar por 15min a 15 libras
de presión a 121ºC. Luego colocar en posición inclinada que
solidifique.
 TRIPLE SIGAR IRON AGAR (DIFCO)
TSI (TACO Y BISEL)
 Bacto beef extract: 3.0gr
 Bacto yeast extrac: 3.0gr
 Bacto peptone: 15.0gr
 Proteosa peptona, DIFCO: 5.0gr
 Bacto dextrose: 1.0gr
 Bacto lactosa: 10.0gr
 Bacto saccharose: 10.0gr
 Ferrous sulfate: 0.2gr
 Sodium chloride: 5.0
 Sodium thiosulfate: 0.3gr
 Bacto phenol red: 0.024gr
 Bacto Agar: 2.0gt
 Agua destilada: 1000ml
PH final de 7.4

PREPARACIÓN:

Disolver 65gr del medio TSI en 1000ml de agua

destilada, hervir hasta el punto de ebullición por un minuto,
estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC y repartir en 4
ml del medio en tubos de ensayo de 18x150, autoclave por
15min a 15 libras de presión a 121ºC. Luego colocar en
posición inclinada de tal forma que quede 2.5mm de taco y
5mm de bisel hasta que solidifique.
 MOTILIDAD MÉDIUM (TACO)
 Bacto heart infusión broth o Brain Heart Infusión Broth:
2.5 gr
 Bacto gelatin: 53.4gr
 Bacto Agar: 3.0gr
 Agua destilada: 1000ml
PH final de7.3 +/- 0.2

PREPARACIÓN:
Disolver los 3 medios en 1000ml de agua destilada,
hervir hasta el punto de ebullición por un minuto, estabilizar
en baño de María por 45min a 56ºC y repartir 3ml del medio
en tubos con tapa de baquelita de 13x100, autoclave por
15min a 15 libras de presión a 121ºC-
También se puede preparar con los siguientes
ingredientes:
 Triptona: 10gr
 Cloruro de sodio: 5.0gr
 Agar: 5.0gr
 Agua destilada: 1000ml
La preparación y el pH son iguales al descrito anteriormente.
También está el medio Motilidad test médium que se prepara
siguiendo las indicaciones de la casa comercial.
(CITRATO) SIMMONS CITRATO AGAR (TACO
Y BISEL)

 Magnesio sulfate: 0.2gr

 Ammonium dihydrogen phosphate: 1.0gr
 Dipotassium phosphate: 1.0gr
 Sodio Citrato: 2.0gr
 Bacto broth thymol blue: 0.08gr
 Bacto Agar: 15.0gr
 Agua destilada: 1000ml
PH final 6.8

PREPARACIÓN:

Disolver 24.2gr del medio Simmons Citrato Agar en

1000ml de agua destilada, hervir hasta el punto de ebullición
por un minuto, estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC
y repartir 4ml del medio en tubos de ensayo, autoclave por
15min a 15 libras de presión a 121ºC, Colocar en posición
inclinado hasta que se solidifique.
 GELATINA EN TUBO (TACO)

 Gelysate peptone: 5.0gr

 Beff extractives o extracto de carne: 3.0gr
 Gelatina: 120gr
 Agua destilada: 1000ml

PH final 6.8

PREPARACIÓN:

Disolver 24.2gr de la media gelatina Agar en 1000 ml de

agua destilada, hervir hasta el punto de ebullición por un
minuto, estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC y
repartir 3 ml en tubos con tapa de baquelita de 13x100,
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
 BILIS ESCULINA AGAR BASE (TACO Y
BISEL)

 Bacto beef extract o extracto de carne: 3.0gr

 Bacto de peptone: 5.0gr
 Esculin: 1.0
 Bacto oxgal o bilis de buey: 40gr
 Ferric Citrate: 15.0gr
 Agar: 15.0gr
 Agua destilada: 1000ml

PH final 7.0

PREPARACIÓN:

Disolver 64gr del medio Bilis Esculina agar en 1000ml

de agua destilada, hervir hasta el punto de ebullición por un
minuto, estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC y
repartir 4ml del medio en tubos con tapa de baquelita de
13x100, autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
Colocar en posición inclinada hasta que solidifique
 PHENYLALANINE AGAR (TACO Y BISEL)

 D- phenilalanine: 2.0gr
 Yeast extrac o extracto de levadura: 3.0gr
 Sodium chloride: 5.0
 Sodium phosphate: 1.0gr
 Agar: 12gr
 Agua destilada: 1000ml

PH final de 7.3

PREPARACIÓN:

Disolver 43.4gr del medio phenylalanine agar en

1000ml de agua destilada, hervir hasta el punto de ebullición
por un minuto, estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC
y repartir 8ml del medio en tubos con tapa de baquelita de
18x150, autoclave por 15 minutos a 15 libras de presión a
121ºC. Colocar en posición inclinada hasta que solidifique.
 CAMPYTHIO (TACO)
 Caldo thioglicolate 135C: 30gr
 Bacto Agar o Agar granulado: 0.9gr
 Agua destilada: 1000ml
PREPARACIÓN:
Disolver los medios en 1000ml en agua destilada, hervir
por un minuto hasta que el medio se disuelva, autoclave a
121ºC por 15minutos a 15 libras de presión, estabilizar en
baño de María a 56ºC por 45 min. Agregar los antibióticos
Anphotericina B, trimetropin-sulfa, colimicina, vancomicina,
cephalotina o cefoperazona. Repartir 8ml del medio en tubos
con tapa de baquelita de 18x150 previamente esterilizados y
dar prueba de esterilidad en estufa por 24hrs.

SELENIO CYSTINE BROTH

 Bacto tryptone: 5.0gr

 Bacto lactose: 4.0gr
 Sodium selenite: 4.0gr
 Sodium phosphate: 10.0gr
 Agua destilada: 1000ml
PREPARACIÓN:
Hervir el agua destilada, estabilizarla, agregar 23gr del
medio selenito Cystine broth, mezclar y repartir 8 ml del
medio en tubos de ensayo con tapón de algodón de 18x1590
previamente esterilizados y dar prueba de esterilidad en estufa
por 24hrs.
 C T A (MEDIO) + CARBOHIDRATO (2%)

 Cistina: 0.5gr
 Peptone trypticase: 20 gr
 Agar: 2.5gr
 Cloruro de sodio 5gr
 Sulfito de sodio: 0.5gr
 Rojo de fenol: 0.017gr
 Agua destilada: 600ml

PREPARACIÓN:

Suspender 17.1gr del medio CTA base en 600ml de

agua destilada, hervir por un minuto, estabilizar en baño de
maría a 56ºC por 45min, separar 100ml del medio en Fiola y
agregar 1gr de glucosa o maltosa o lactosa o Sucruosa o
fructuosa, mezclar medir el pH y ajustar si es necesario a 7.3,
repartir 5ml del medio en tubos de ensayo con tapón de
algodón de 13x100, autoclavar por 10min 1 121ºC a 15libras
de presión.
 CALDO VERDE BRILLANTE

 Oxigal dehydroted: 20gr

 Lactose: 10gr
 Pancreatic Digest of gelatin: 10gr
 Brillant green: 13.3mg
 Agua destilada: 1000ml.
PH final 7.2
PREPARACIÓN:
Disolver 49gr del medio caldo verde brillante en
10000ml de agua destilada, repartir 12ml del medio en tubos
con tapa baquelita de 18x1059, colocar tubo de fermentación,
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.

CALDO NITRITO

 Heard infusión broth: 40gr

 Potasio nitrito: 10gr
 Agua destilada: 1000ml
PREPARACIÓN:
Disolver 40gr del medio Heard infusión broth y los 10gr
de Potasio nitrito, en 1000ml de agua destilado, repartir 4ml
del medio en tubos con tapa de baquelita de 13x100, colocar
tubo de fermentación autoclave por 15min a 15libras de
presión a 12.
 CALDO ESCULINA PARA NO
FERMENTADORES

 Peptona o gelisat: 5.0gr

 Dipotassium phosphate: 1.0gr
 Esculina broth: 0.3gr
 Férrico Citrato: 0.5gr
 Indicador de Andrade: 10ml
 Agua destilada: 990ml
PREPARACIÓN:
Disolver los ingredientes en 1000ml de agua destilada,
repartir 4ml del medio en tubos con tapa de baquelita de
13x100, autoclave por 10min a 15 libras de presión y 121ºC.

SOLUCIÓN SALINA AL 0.85%

 Cloruro de sodio: 8.5gr

 Agua destilada: 1000ml
PREPARACIÓN:
Disolver el cloruro de sodio en 1000ml de agua
destilada, repartir 9.9ml (solución para urocultivo y punta de
catéter) y 5ml (solución para antibiogramas) del medio en
tubos con tapa de baquelita de 18x150, autoclave 15min a
15libras de presión a 121ºC.
 SOLUCIÓN SALINA FISIOLÓGICA AL 0.5%

 Cloruro de sodio: 5.0gr

 Agua destilada:1000ml
PREPARACIÓN:
Disolver el cloruro de sodio en 1000ml de agua
destilada, repartir 5ml del medio en tubos con tapa de
baquelita de 18x150, autoclave 15min a 15libras de presión a
121ºC.

KCN

 Proteasa peptone Nº3 Difco: 3.0gr

 Disodium phosphate: 5.64gr
 Monopotassium phosphate: 0.225gr
 Sodium chloride: 5.gr
 Agua destilada: 500ml
PREPARACIÓN:
Disolver 6.9gr de la media base en 500 ml de agua
destilada, autoclave por 15min a 15 libras de presión y 121ºC.
Estabilizar en baño de María a 56ºC por 45min. Agregar
7.5ml de solución de KCN al 1% (0.5ml de KCN en 50ml de
agua destilada estéril), luego repartir 3ml del medio en tubos
con tapa de baquelita de 13x100 previamente esterilizados.
 CREMIDE O PSEUDOSELLER

 Gelisate peptone: 20gr

 Magnesium chloride: 1.4gr
 Potassium sulfate: 10gr
 Cetrimide: 0.3gr
 Glycerol: 10ml
 Agar: 13.6gr
 Agua destilada: 1000ml

PREPARACIÓN:

Disolver los ingredientes en 1000ml de agua destilada,

hervir hasta el punto de ebullición por un minuto, estabilizar
en baño de María por 45min a 56º y repartir 4ml del medio en
tubos con tapa baquelita de 13x100, autoclave por 10min a
15libras del presión a 121ºC. Colocar en posición inclinada
hasta que solidifique dejando un buen taco y un bisel.
 SABOURAUD EN TUBO (TACO Y BISEL)

 Dextrosa: 40gr
 Mezcla de peptone: 10gr
 Agar: 15gr
 Agua destilada: 1000ml

PH final de 5.6 +/- 0.2

PREPARACIÓN:

Suspender 65gr del medio Saboread en los 1000ml de

agua destilada, dejar reposar por 5min y calentar agitando
frecuentemente. Luego hervir durante un minuto, estabilizar
en baño de María por 45min a 56ºC y repartir 4ml del medio
en tubos con tapa de baquelita de 13x100 y esterilizar en
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC. Colocar
en posición inclinada hasta que se solidifique dejando un
buen taco y un buen bisel.
Medios de
Cultivo en
Placa
 PLACAS SANGRE

 1000ml de agua
 40gr medio Tryptic Soy Agar.
PREPARACIÓN:
Agregar el medio Tryptic soy Agar de 40gr en 1000ml
de agua, colocar a hervir hasta el punto de ebullición. Enfriar
a temperatura media y agregar 50ml de sangre mezclar bien y
repartir en placas.

AGAR ARABINOSA

 Base Columbia Nº78

 2gr Rojo Fenol (Phenol Red Broth Base Nº29)
 Arabinosa 10gr/ 1 Nº61
PREPARACIÓN:
Para 200cc de agua, agregar 8.5 Base Columbia, mas
4gr Phenol Red Broth Base, mas 2gr Arabinosa. Colocar a
hervir luego llevar al autoclave a esterilizar, bajar la
temperatura, repartir en palcas dobles que quede grueso y
rotular las placas Arabinosa.
 PLACAS CHOCOLATE
 Agar GC #2
 HB Chocolate -#1
PREPARACIÓN:
En un balón del 1000ml Agregar 500 ml de agua
destilada, disolver en el mismo 36 gr del medio GC Agar
base, otro balón de 1000m. Agregar 500 ml de agua destilada,
disolver en la misma 10gr del medio HB CHOCOLATE,
hervir cada uno de estos y llevar al autoclave, salir del
autoclave bajar un poco la temperatura a los medios y
mezclarlos agregándoles una ampolla de Isovitalex y repartir
en placas.
PLACAS MANITOL
 Broth base phenol red – 29
 Cloruro de Na – 27
 Manitol – 43
 Agar
*Manitol Salt Agar – 8b solo utilizar este medio no se
le agrega ningún otro componente*
PREPARACIÓN:
En un balos de 1000ml medir 500ml de agua destilada,
agregar en la misma Broth Base Phenol Red 7.5gr, Cloruro de
Na 37.5gr, Manitol 5gr, Agar 7.5gr, Mezclar todo esto y
colocar a hervir, luego llevar al autoclave. Al sacar de la
autoclave bajarle un poco la temperatura al medio y repartir
en placas dobles de grueso regular, rotular las Placas de
Manitol.
 GC AGAR

 Peptona polipeptone: …………………15gr

 Almidón de maíz: ………………………1gr
 Fosfato dipotásico: ……………………...4gr
 Phosphate monopotasioco: …………….1gr
 Cloruro de Sodio: ………………………5gr.
 Agar: …………………………………..10gr.
 Agua destilada: …………………….1000ml

PREPARACIÓN:
Pesar 36gr del medio GC base Agar y agregar en 500ml
de agua destilada, mezclar y dejar reposar 5min, luego
calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto,
esterilizar en autoclave por 15min a 15 libra de presión a
121ºC. Suspender en una fiola 10 gr de hemoglobina en
500ml de agua destilada, esterilizar en autoclave por 15 min a
15 libras de presión y 121ºC. Estabilizar las dos soluciones en
baño de María por 45min a 56ºC y luego unir las dos
soluciones y agregar asépticamente 10ml de Isovitalex, por
último, repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 VCN AGAR

 Peptona polipeptone:………………… 15gr

 Almidón de maíz: ………………………1gr
 Fosfato dipotásico: ………………...……4gr
 Phosphate monopotasio: ………….……1gr
 Cloruro de sodio: ……………………….5gr
 Agar: …………………………………...10gr
 Agua destilada: …………………….1000ml

PREPARACIÓN:
Pesar 36gr del medio GC base Agar en 500ml de agua
destilada mezclar y dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, esterilizar en
autoclave por 15min a 15 libras de presión y 121ºC.
Suspender en una Fiola 10gr de hemoglobina en 500ml de
agua destilada, esterilizar en autoclave por 15min a 15libras
de presión a 121ºC. Estabilizar las dos soluciones en baño de
María por 45min a 56ºC, luego unir las dos soluciones,
agregar asépticamente 10ml de Isovitalex y 10ml del
inhibidor VCN, repartir en placas Petri previamente
esterilizadas.
 AGAR SANGRE HUMANA (BASE BRAIN
HEART INFUSIÓN AGAR)

 Infusión de cerebro de ternera: ………20gr

 Infusión de corazón de res: …………..25gr.
 Peptona (Polypeptone BBL): ………….1gr.
 Cloruro de sodio: ………………………5gr.
 Fosfato di potásico: …………………0.25gr.
 Dextrosa:……………………………... 0.2gr
 Agar : …………………………………..15gr
 Agua destilada: ……………………..950ml.

PH final 7.4

PREPARACIÓN:
Suspender 52gr del medio Brain Heart Infusión Agar o
Tripticase soya Agar en los 950ml de agua destilada, dejar
reposar 5min, calentar agitando frecuentemente y hervir
durante un minuto, esterilizar en autoclave por 15min a 15
libras de presión y 121º. Estabilizar en baño de María por
45min a 56º, luego agregar 50ml de sangre humana evitando
que se formen burbujas de aire y repartir en placas de Petri
previamente esterilizadas.
AGAR SANGRE HUMANA EN ANAEROBIOSIS
CON KANAMICINA

 Infusión de cerebro de ternera: ………20gr

 Infusión de corazón de res: …………...25gr
 Peptona de corazón de res: ……………1gr.
 Cloruro de Sodio: ……………………….5gr
 Fosfato di potásico: ………………….0.25gr
 Dextrosa: ……………………………...0.2gr
 Agar: …………………………………...15gr
 Agua destilada: ……………………...950ml
PH final 7.4
PREPARACIÓN:
Suspender 52gr del medio Brain Heart Infusión Agar o
Tripticase soya Agar en los 950ml de agua destilada, dejar
reposar 5min, calentar agitando frecuentemente y hervir
durante un minuto, esterilizar en autoclave por 15min a 15
libras de presión y 121º. Estabilizar en baño de María por
45min a 56º, agregar 10ml de hemina-menadione y la
kanamicina (1ml por litro del medio) luego agregar 50ml de
sangre humana evitando que se formen burbujas de aire y
repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
AGAR SANGRE HUMANA EN ANAEROBIOSIS

 Infusión de cerebro de ternera: ………20gr

 Infusión de corazón de res: …………...25gr
 Peptona de corazón de res: ……………1gr.
 Cloruro de Sodio: ………………………5gr
 Fosfato di potásico: ………………….0.25gr
 Dextrosa: ……………………………...0.2gr
 Agar: …………………………………...15gr
 Agua destilada: ……………………...950ml

PH final 7.4

PREPARACIÓN:
Suspender 52gr del medio Brain Heart Infusión Agar o
Tripticase soya Agar en los 950ml de agua destilada, dejar
reposar 5min, calentar agitando frecuentemente y hervir
durante un minuto, esterilizar en autoclave por 15min a 15
libras de presión y 121º. Estabilizar en baño de María por
45min a 56º, agregar 10ml de hemina-menadione y 50ml de
sangre humana evitando que se formen burbujas de aire y
repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 AGAR SANGRE DE CARNERO

 Heart Muscle Infusión From (Solids)…..10gr

 Peptic Digest of animal tissue: ………..10gr
 Sodium chloride: ……………………….5gr
 Agar: …………………………………...15gr
 Agua destilada: ……………………..950 ml

PH final de 7.3 +/- 0.2

PREPARACIÓN:

Suspender 40gr del medio Bood Agar base en los 950ml

de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, esterilizar en un
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC, luego agregar
50ml de sangre de carnero evitando que se formen burbujas
de aire. Repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 AGAR SANGRE DE CARNERO CON
KANAMICINA

 Heart Muscle Infusión From (Solids).. ..10gr

 Peptic Digest of animal tissue: ………..10gr
 Sodium chloride: ……………………….5gr
 Agar: …………………………………...15gr
 Agua destilada:…………………….. 950 ml

PREPARACIÓN:

Suspender 40gr del medio Bood Agar base en los 950ml

de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, esterilizar en un
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC. Luego
agregar la Kanamicina (1ml por litro del medio) y los 50ml de
sangre de carnero evitando que se formen burbujas de aire.
Repartir en placas de petri previamente esterilizadas.
 AGAR MÜELLER HINTON
(Antibiograma)

 Infusión de carne: ……………………..30gr

 Ácidos de casamino técnicas: ……….17.5gr
 Almidón: ……………………………...1.5gr
 Agar:…………………………………... 17gr
 Agua destilada: …………………….1000ml

PH Final 7.4

PREPARACIÓN:

Suspender 38gr del medio MÜELLER HINTON en los

1000ml de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar
agitando frecuentemente y hervir durante un minuto,
esterilizar en un autoclave por 15min a 15 libras de presión a
121ºC. Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC.
Repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 AGAR MÜELLER HINTON CON SANGRE

 Infusión de carne: ……………………..30gr

 Ácidos de casamino técnicas: ………17.5gr
 Almidón:…………………………… 1.5gr
 Agar: …………………………………17gr
 Agua destilada: ……………………...950ml

PH Final 7.4

PREPARACIÓN:

Suspender 38gr del medio MÜELLER HINTON en los

950ml de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar
agitando frecuentemente y hervir durante un minuto,
esterilizar en un autoclave por 15min a 15 libras de presión a
121ºC. Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC.Luego
agregar 50ml de sangre humana evitando que se formen
burbujas de aire. Repartir en placas de Petri previamente
esterilizadas.
 AGAR MÜELLER HINTON ACHOCOLATADO

 Infusión de carne: ……………………..30gr

 Ácidos de casamino técnicas: ……….17.5gr
 Almidón: ……………………………...1.5gr
 Agar: …………………………………...17gr
 Agua destilada:……………………..1000ml

PH Final 7.4

PREPARACIÓN:

Agregar 38gr del medio MÜELLER HINTON en 500ml

del agua destilada, mezclar bien y dejar reposar por 5min,
calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto,
esterilizar en autoclave por 15min a 15 libras de presión y
121ºC. Suspender en una Fiola de 10gr de hemoglobina en
500ml de agua destilada, esterilizar en autoclave por 15min a
15libras de presión a 121ºC. Estabilizar las dos soluciones en
baño de María por 45min a 56º y luego unir las dos
soluciones y agregar asépticamente 10ml de Isovitalex.
Repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 AGAR NUTRITIVO DE PLACA

 Pancreatic Digest of gelatin peptone: ….5gr

 Beef extractives: ………………………..3gr
 Agar: …………………………………..15gr
 Agua destilada: ……………………1000ml

PH final 6.8

PREPARACIÓN:

Suspender 26gr del medio Agar nutritivo en los 1000ml

de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, esterilizar en un
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC.Repartir en
placas de petri previamente esterilizadas.
El agar gelatinado al 4% y 2.5% se prepara con el agar
nutritivo, pero se le agrega además 40gr/1000ml o
255gr/1000ml de gelatina, antes de autoclavar.
 DATA AGAR

 DNasaAgar: ……………………………42gr
 Azul de toluidina: …………………….0.1gr
 Ampicilina:………………………..30mg/ml
 Agua destilada:……………………. 1000ml

PREPARACIÓN:

Suspender 42gr del medio DNasa Agar en los 1000ml

de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, esterilizar en un
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC. Agregar el
azul de toluidina, esterilizar en autoclave por 15 min a 15
libras de presión a 121ºC. Estabilizar en baño de maría por
45min a 56ºC y agregar la Ampicilina (1ml por litro del
medio) Repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 SABOURAUD EN PLACA

 Dextrosa: ………………………………40gr
 Mezcla de peptone: …………………...10gr
 Agar: …………………………………..15gr
 Agua destilada: ……………………1000ml

PH final de 5.6 +/- 0.2

PREPARACIÓN:
Suspender 65gr del medio Sabouraud en los 1000ml de
agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, esterilizar en un
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC.
Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC y esterilizar en
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC. Repartir
en placas de Petri previamente esterilizadas.
 T C B S AGAR

 Bacto yeas extrac: ………………………5gr

 Bacto protease peptone A3:………….. 10gr
 Sodium Citrate: ……………………….10gr
 Sodium tiosulfate: …………………….10gr
 Bacto Oxgal: ……………………………8gr
 Bacto saccharose: ……………………...20gr
 Sodium Chloride: …………………….10gr.
 Ferric Citrate: ………………………….1gr
 Bacto broomtymol blue: ……………0.04gr
 Bacto tymol blue: …………………...0.04gr
 Bacto Agar: ……………………………15gr
 Agua destilada ……………………..1000ml

PH final de 8.6

PREPARACIÓN:
Suspender 65gr del medio SS en los 1000ml de agua
destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, Estabilizar en
baño de maría por 45min a 56º. Repartir en placas de Petri
previamente esterilizadas.
 S. S. AGAR

 Extracto de carne de res:………………. 5gr

 Peptona poli peptona: ………………….5gr
 Lactosa: ………………………………..10gr
 Mezcla de sales biliares: ……………...8.5gr
 Citrato de sodio:…………………….. 8.5 gr
 Tiosulfato de sodio: …………………..8.5gr
 Citrato férrico: ………………………….1gr
 Agar: …………………………………13.5gr
 Rojo neutro: ………………………0.025mg
 Verde brillante: …………………...0.330mg
 Agua destilada: …………………….1000ml

PH final de 7.0

PREPARACIÓN:
Suspender 60gr del medio SS en los 1000ml de agua
destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, Estabilizar en
baño de maría por 45min a 56º. Repartir en placas de Petri
previamente esterilizadas.
 X.L.D. AGAR
 Xilosa: ………………………………...3.5 gr
 L-Lisina: ………………………………...5gr
 Lactosa:………………………………. 7.5gr
 Sacarosa: ………………………………7.5gr
 Cloruro de Sodio: ………………………5gr
 Extracto de levadura:………………….. 3gr
 Rojo de fenol: ……………………….0.08gr
 Agar (desecado):…………………… 13.5gr
 Desoxicolato de sodio: ……………….2.5gr
 Tiosulfito de sodio:……………………6.8gr
 Citrato de hierro y amonio: ………….0.8gr
 Agua destilada: …………………….1000ml

PREPARACIÓN

Suspender 60gr del medio XLD en los 1000ml de agua

destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto y Estabilizar en
baño de maría por 45min a 56ºC. Repartir en placas de Petri
previamente esterilizadas.
NOTA: El medio debe tener un color rojizo y estar claro. El
calentamiento excesivo, o prolongado estancia al baño de
María, produce precipitación.
 AGAR MAC CONKEY (MC)

 Peptona Gelisate: ……………………...17gr

 Peptona polipeptona: …………………..3gr
 Lactosa: ………………………………..10gr
 Mezcla de sales biliares; ……………...1.5gr
 Cloruro de sodio:………………………..5gr
 Agar:………………………………… 13.5gr
 Rojo Neutro:………………………... 0.03gr
 Cristal violeta: ……………………..0.001gr
 Agua destilada:……………………. 1000ml

PH final 7.1 +/- 0.2

PREPARACIÓN:
Suspender 50gr del medio MC en los 1000ml de agua
destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, Estabilizar en
baño de maría por 45min a 56ºC. Luego esterilizar en
autoclave por 15min a 15 libras de presión y 121ºC.
Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC. Repartir en
placas de Petri previamente esterilizadas.
 DNAasa
 Tryptone: ……………………………...20gr
 Acido desoxirribonucleico:……………..2gr
 Cloruro de sodio:………………………..5gr
 Agar: …………………………………...15gr
 Agua destilada:……………………..1000ml

PREPARACIÓN:

Suspender 42gr del medio DNasa en los 1000ml de agua

destilada, dejar reposar por 5min, calentar agitando
frecuentemente y hervir durante un minuto, Estabilizar en
baño de maría por 45min a 56ºC. Añadir 50mg de verde de
metileno, Luego esterilizar en autoclave por 15min a 15
libras de presión y 121ºC. Estabilizar en baño de maría por
45min a 56ºC. Repartir en placas de Petri previamente
esterilizadas.
 CAMPY BAP JEJUNI (CBM)

 Brucella agar: …………………………42gr

 Samgre de carnero:…………………..100ml
 Cancomicina, Polimicina B o colimicina, Trimetropin-
sulfa Anfotericina B, Cefolatina o Cefoperazone:
…….1ml de c/u
 Agua destilada: ……………………...900ml

PREPARACIÓN:

Suspender 43gr del medio Brucella agar base en los

900ml de agua destilada, dejar reposar por 5min, calentar
agitando frecuentemente y hervir durante un minuto.
Esterilizar en autoclave por 15min a 15 libras de presión y
121ºC. Estabilizar en baño de maría por 45min a 56ºC. Añadir
los antibióticos (¡ml por litro de C/u) y la sangre de carnero
(100ml por litro) Repartir en placas de Petri previamente
esterilizadas.
AGAR GELATINADO AL 4% Y AL 2.5% Placas
(GEL)

 Agar nutritivo (base)…………………. 23gr

 Cloruro de sodio: ……………………..8.5gr
 Gelatina: ……………………………….40gr
 Agua destilada:……………………. 1000ml

PREPARACIÓN:

Se pesan los ingredientes, se unen y se disuelven en el

agua destilada, se hierven por 1 minuto, se esteriliza en
autoclave por 15min a 15 libras de presión a 121ºC. Se
estabiliza en baño de maría a 56ºC por 45min y luego se
dispensan en las placas de petri estériles.

El Agar gelatinado al 2.5% (copros) se prepara igual al

descrito anteriormente, pero la concentración de la gelatina es
de 25gr por litro.
NOTA: Ingredientes para placas Gelatina.
Gelatina extra puré #6-1000-40gr
Agar granulado #9 – 1000 – 31gr
 Medios de
Cultivo para
Anaerobios
 INDICADOR DE ANDRADE
 Fuschina Acida: ………………………0.2gr
 Agua destilada: ……………………...100ml
 NaOH1N (hidróxido de sodio): ………16ml
PREPARACIÓN:
Disolver la Fuschina en el agua destilada, agregarle el
NaOH1N. Dejarlo Reposa varias horas. Rotular con fecha de
elaboración y expiración de 6 meses. Es usado al 1%
PH 7.2
CITRATO FÉRRICO
(ESCULINA)
Solución Madre:
 Citrato ferrio:………………………… 1gr
 Agus destilada_............................... 100ml
 Indicador de Andrade:……………… 1ml
PREPARACIÓN:
Mezclar todos los ingredientes y calentar (sin dejar que llegue
a hervir)

Solución de trabajo
 Solución madre: …………....................10ml
 Agua destilada: ……………………….90ml
 Indicador de Andrade: …………….2 gotas.
 CALDO ESCULINA PARA ANAEROBIOS
 Caldo Infusión: ………………………..25gr
 Esculina: ………………………………...1gr
 Agar: …………………………………….1gr
 Agua destilada:……………………. 1000ml
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes, agregarlos en una Fiola junto
con el agua, calentar hasta el punto de ebullición por un
minuto, Repartir en 8 tubos con tapa de baquelita de 18x150.
Esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de presión y
121ºC. Leer la reacción luego de 48 horas de incubación,
añadiendo varias gotas de citrato férrico amonio al 1% y llera
inmediatamente. Un color negro parduzco se lee positivo,
ningún cambio de color se leerá negativo.

LITMUS MILK
 Litmus milk: ………………………….100gr
 Agua destilada: …………………….1000ml
PREPARACIÓN:
Pesar el medio, agregarle el agua y homogenizar
completamente repartir 8ml en tubos con tapa de baquelita de
18x150. Esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de
presión a 121ºC. Este y todos los medios para anaerobios
deben guardarse en temperatura ambiente.
 CALDO DE FERMENTACIÓN PARA
ANAEROBIOS
(BASE)
 Caldo tioglicolato sin indicador y sin dextrosa:
……………………………….30gr
 Extracto de levadura: …………………..2gr
 Azul de bromotimol:………………….. 2ml
 Vitamina K: …………………………….1ml
 Hemina menadiona:…………………. 10ml
 Agua destilada: …………………….1000ml
PREPARACIÓN:
Pesar el caldo tioglicolato y l extracto de levadura y
agregarlo en los 1000ml de agua destilada, calentar hasta el
punto de ebullición por un minuto. Estabilizar en baño de
María a 56º por 45min, agregarle el azul de bromo timol, la
vitamina K y hemina menadione y repartir 8ml en tubos con
tapa de baquelita de 18x150. Llevar a autoclave por 10min a
121ºC y 15 libras de presión.
SOLUCIÓN STOCK CARBOHIDRATOS:
Pesar 10gr del carbohidrato deseado en 100ml de agua
destilada, llevar a autoclave por 10 min a 121ºC a 15 libra de
presión. Después de estabilizada la base, agregarle a cada
tubo 0.6ml del carbohidrato que se vaya a utilizar.
Al colocar la bioquímica para bajar hay que calentarla por
10min a 100ºC. Los Carbohidratos son: Sucruosa, maltosa,
glicerol, salicina, threalosa, Xilosa, celobiosa, lactosa
arabinosa, glucosa Ramnosa, manitol.
 MEDIO SEMI- SOLIDO DE UREA PARA
ANAERÓBICOS
SOLUCIÓN “A”
 Caldo tioglicolato sin indicador y sin dextrosa: ….9.6gr
 Extracto de levadura: …………….…0.80gr
 Agua destilada: ……………………...450ml
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes y el agua y agregarlos en una
Fiola, calentar hasta el punto de ebullición por un minuto.
Esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de presión a
121ºC. Estabilizar en baño de María por 45min de 50 a 60ºC.
RESULTADO:
Un color rojo intenso es positivo, la ausencia de color es
negativa (de 2 a 5 días de incubación). Si el indicador rojo de
fenol es reducido, añada 2 o 3 gotas de rojo de fenol diluido el
último día de incubación.
TIOGELATINA
 Caldo tioglicolato 135: ………………..30gr
 Gelatina: ………………………………50gr
 Agua destilada: ……………………...100ml
PREPARACIÓN:
Suspender los polvos en una Fiola junto con el agua,
calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición
por un minuto, repartir 8ml en tubos con tapa de baquelita de
18x150. Esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de
presión.
 INDOL NITRITO
 Trypticasa: ……………………………20gr
 Sodium phosfate: ………………………2gr
 1gr
 Agar: …………………………………….1gr
 Potassium Nitrito: ……………………...1gr
PREPARACIÓN:
Suspender 25 gramos del medio en una Fiola con
1000ml de agua destilada, calentar agitando frecuentemente
hasta el punto de ebullición por un minuto, repartir 8ml en
tubos con tapa de baquelita 18x150, esterilizar en el autoclave
por 10min a 15 libras de presión a 121ºC
CALDO THIOGLICOLATE SIN DEXTROSA
 Pancreatic Digest of Casein: ……….…17gr
 Papaic Digest of soybean meal: ………...3gr
 Sodium Chloride:……………………. 2.5gr
 Sodium thioglicolate: ………………..0.5gr
 Agar:…………………………………. 0.7gr
 L- Cystine:………………………….. 0.25gr
 Sodium Sulfite:………………………. 0.1gr
PH 7
PREPARACIÓN:
Suspender 30 gramos del medio en una Fiola con
1000ml de agua destilada, calentar agitando frecuentemente
hasta el punto de ebullición por un minuto, repartir 8ml en
tubos con tapa de baquelita de 18x150, esterilizar en el
autoclave por 10min a 15 libras de presión a 121ºC.
 CALDO THIOGLICOLATE 135
 Pancreatic Digest of Casein: ………….17gr
 Papaic Digest of soybean meal: ………..3gr
 Dextrose: ……………………………….6gr
 Sodium Chloride:…………………….2.5gr
 Sodium thioglicolate:……………….. 0.5gr
 Agar:…………………………………...0.7gr
 L_ Cystine:……………………..…… 0.25gr
 Sodium Sulfite; ……………………….0.1gr
PH 7
PREPARACIÓN:
Suspender 30 gramos del medio en una Fiola con
1000ml de agua destilada, calentar agitando frecuentemente
hasta el punto de ebullición por un minuto, repartir 8ml en
tubos con tapa de baquelita de 18x150, esterilizar en el
autoclave por 10min a 15 libras de presión a 121ºC.
 AMARILLO DE HUEVO AGAR

 Tripticasa: ……………………………..20gr
 NaHPO4:…………………………….. 2.5gr
 NaCl: …………………………………..10ffr
 MgSO4 (5%sol): …………………….0.1ml
 Glucosa: ……………………………….1.0gr
 Agar: …………………………………..1.0gr
 Agus destilada ……………………….500ml
(La base utilizada es Brain Heart Infusión Agar)

PREPARACIÓN:

Lavar un huevo con agua y jabón, colocarlo en remojo

con alcohol por una hora. Pesar la base y agregarle los 500ml
de agua destilada, calentar hasta el punto de ebullición por un
minuto, esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de
presión a 121ºC, estabilizar en baño de maría por 45 min a
56ºC. Separa asépticamente la yema del huevo y agregársela a
la base con un pipeta estéril homogenizar la base, repartir en
placas de Petri previamente esterilizadas.
El medio de Agar sangre en anaerobiosis sin kanamicina se
prepara igual al anterior pero sin agregarle esta última.
 LD AGAR
MEDIO BASE LOMBARD DOVEL (LD BASE
AGAR)
 Tripticasa B B L: 5gr.
 Extracto de levadura: …………………5gr
 Cloruro de sodio: …………………….2.5gr
 Sulfito de Sodio:………………...… 100mgr
 L triptófano: ………………………….200gr
 L Cistina: ……………………………400mg
 Agar:………………………………….. 10gr
 Agua destilada: …………………….1000ml
 Hemina Menadione: ……………..…..10ml
 Vitamina K.

PREPARACIÓN:

Pesar los primeros 8 ingredientes y hervir hasta la

completa disolución del Agar, estabilizar en baño de María a
56ºC por 45min, agregar la hemina menadione, la vitamina K
y repartir en matraces a razón de 100ml cada uno. Esta es la
base LD.
 LD ESCULINA Agar
 LD Base Agar: 100ml
 Esculina: 1gr
 Citrato férrico amoniacal: 50gr
PREPARACIÓN:
En los 100ml de LD base Agar preparada se disuelve la
esculina y el citrato férrico amoniacal. Luego estabilizar en
autoclave a 15 libras de presión y 121ºC por 10min,
estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC y repartir en
placas de Petri.

LD EYE Agar
 L D base Agar:……………………… 100ml
 D glucosa:……………………………100mg
 Fosfato di sódico de sodio: …………...0.5gr
 Sulfato de magnesio (solución acuosa al 5%):…0.02ml
 Yema de huevo: ……………………...10ml.

PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes y disolver en los 100ml de LD base
Agar preparada, esterilizar en autoclave a 15 libras de presión
y 121ºC por 10min, estabilizar en baño de María a 45min a
56ºC, luego agregarle la yema de huevo y repartir en placas
de Petri.
 LD ALMIDÓN
 L D base Agar: ……………………….100ml
 Almidón soluble:…………………… 50mg
PREPARACIÓN:
Pesar el almidón y disolver en los 100ml de LD base
Agar preparada, esterilizar en autoclave a 15 libras de presión
por 10 min a 121ºC, estabilizar en baño de María a 56ºC,
repartir en placas de Petri.
LD GELATINA
 LD base Agar:……………………… 100ml:
 Gelatina: ……………………………400mg
 Glucosa: …………………………….100mg
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes (gelatina y glucosa) y disolver en
los 100ml de Lb base Agar preparada, esterilizar en autoclave
a 15 libras de presión y 121ºC por 10min, estabilizar en baño
de María a 56º por 45min y repartir en placas de Petri.
LD BILIS Agar
 LD base Agar: ………………………..100ml
 D Glucosa: …………………………..100mg
 Oxigal; ………………………………….2gr
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes y disolver en los 100ml de Lb base
Agar preparada, esterilizar en autoclave a 15 libras de presión
y 121ºC por 10min, estabilizar en baño de María a 56º por
45min y repartir en placas de Petri.
 LD LECHE Agar
Preparar el LD Agar base a la mitad de concentración en
50ml de agua, hervir por un minuto, esterilizar en autoclave
por 10min a 15libras de presión y 121ºC, estabilizar en baño
de María a 56ºC por 45min y luego agregar asépticamente 50
ml de leche descremada al 10% previamente esterilizada,
repartir en placas de Petri.
LD DNA Agar
 LD Base Agar: …………………….....100ml
 Acido desoxirribonucleico: ………125mg
 Solución de toluidina:…………….. 0.25%
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes y disolver en los 100ml de LD
base Agar preparada, esterilizar en autoclave a 15 libras de
presión y 121ºC por 10min, estabilizar en baño de María a 56º
por 45min y repartir en placas de Petri.

LD RAMNOSA
 LD Agar base; ………………………..100ml
 Ramnosa:…………………………… 600mg
 Azul de bromotimol al 1%: …………..0.2%
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes y disolver en los 100ml de LD
base Agar preparada, esterilizar en autoclave a 15 libras de
presión y 121ºC por 10min, estabilizar en baño de María a 56º
por 45min y repartir en placas de Petri.
 LD GLUCOSA
 LD Agar base: ………………………100ml
 Glucosa: …………………………….600mg
 Azul de bromotimol al 1%: ………….0.2ml
PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes y disolver en los 100ml de LD
base Agar preparada, esterilizar en autoclave a 15 libras de
presión y 121ºC por 10min, estabilizar en baño de María a 56º
por 45min y repartir en placas de Petri.
AZUL DE BROMOTIMOL
 azul de bromo timol: …………………1gr
 naoh1n: …………………………….20ml
 agua destilada: ……………………….80
PREPARACIÓN:
Mezclar todos los ingredientes, rotular con fecha de
vencimiento: 6 meses Indicador para los carbohidratos de
anaerobios.
FRAZIER (HIDRÓLISIS DE GELATINA)
 Cloruro de mercurio: ………………….15gr
 Ácido clorhídrico concentrado:……... 20ml
 Agua destilada: ……………………...100ml
SOLUCIÓN AZUL DE TOLUIDINA
 Azul de toluidina:…………………250mg
 Agua destilada: …………………….100ml
 HEMINA MENADIONE

SOLUCIÓN MADRE DE HEMINA:

 Hemina: ………………………50mg
 NaOH al 1N: …………………...1ml
 Agua destilada: ……………...100ml
Mezclar esterilizar en autoclave por 15min a 15 libras
de presión a 121ºC
SOLUCIÓN MADRE DE MENADIONE:
 Menadione: …………………100mg
 Alcohol etílico: ……………….20ml
Mezclar esterilizar por filtración
Solución de trabajo:
 Solución madre de hemina: …100ml
 Solución madre de menadione: …1ml

CONCENTRACIÓN DE KANAMICINA
 Kantrex:…………………………. 1ml
 Solución salina fisiológica; ………9ml
 1ml025.000gr/ml
 AEROMONAS DIFERENCIAL

 Peptona: ………………………………10gr.
 Meat extract: ……………….…………..3gr
 Cloruro de sodio: ……………………….5gr
 Dextrim:……………………………….15gr
 Sulfito de sodio: ………………………1.6gr
 Fuchsim: …………………………….0.25gr
 Dipotasium hydrogene phospfate: 7.75mg
 Agua destilada:……………………1000ml

PREPARACIÓN:

Pesar todos los ingredientes menos el Dextrina.

Agregaros a una Fiola y calentar hasta el punto de ebullición
por un minuto, estabilizar en baño de María de 45 a 50ºC por
45min, agregarle el Dextrina y llevar al autoclave por 15min a
15 libras de presión y 121ºC. Estabilizar en baño de María a
56ºC y repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
 BACTO OXGAL
Solución A:
 Oxgal: ………………………………….10gr
 Agua destilada: ……………...………..50ml
PREPARACIÓN:
Pesar el oxgal y disolver en el agua destilada.
Solución B:
 Caldo tioglicolato sin indicador y6 dextrosa: 12gr
 Agua destilada: 450ml
PREPARACIÓN:
Pesar el medio, verterlo en una Fiola junto con el agua,
hervir, estabilizar a 56ºC por 45min, unir las dos soluciones y
repartir 8ml en tubos de baquelita de 18x100, esterilizar en
autoclave por 15min a 15 libras de presión y 121ºC.

CONTROL PARA EL OXGAL

 Caldo tioglicolato 135: ………………..30gr
 Agua destilada: …………………….1000ml
PREPARACIÓN
Pesar el caldo tioglicolato y disolver en los 100ml de
agua destilada, calentar hasta punto de ebullición por un
minuto, luego repartir 8ml en tubos con tapa baquelita de
18x150, esterilizar en autoclave por 10 min a 121ºC y 15
libras de presión.
Otros Medios
de Cultivo
 MEDIO DE CONSERVACIÓN
(CARACAS)

 Peptone:…………………………… 10.00gr
 Beef extract: …………………………5.00gr
 Na Cl: ……………………………….3.00gr
 Na2HPO4. 12H22O: .………………2.00gr
 Granulated Agar: ……………………8.00gr
 H2O: ……………………………….1000ml

PREPARACIÓN:

Pesar los medios en una Fiola junto con el agua, hervir

por un minuto, estabilizar hasta el punto de ebullición por un
minuto, repartir después de estabilizar en tubos de 12x75
hasta la mitad del tubo y llevar al autoclave por 12min a
121ºC a 15 libras de presión.
 VIALES DE LECHE
Leche descremada al 10%, repartir en viales de 3ml,
esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de presión y
121ºC.

CALDO DE SOYA TRIPTICASA GLICEROL

 Caldo de soya Tripticase: …………...100ml
 Glicerol: ………………………………20ml
PREPARACIÓN:
A 100ml de caldo de soya tripticase agregarle 20ml de
glicerol, esterilizar en autoclave por 10min a 15 libras de
presión y 121ºC.

Agar SUCROSA AL 5%
 Brain heart infusión Agar: ……………40gr
 Sucrosa: ………………………………..50gr
 Agua destilada: ………….…………1000ml
PREPARACIÓN:
Pesar la base agregarle 1000ml de agua destilada,
mezclar y hervir, estabilizar en baño de María por 45min a
56ºC, agregarle la Sucruosa, esterilizar en autoclave por 15
min a 15libras de presión y 121ºC: estabilizar en baño de
María por 45min a 56ºC, repartir en placas de Petri
previamente esterilizadas.

ALMIDÓN AGAR
 Brain heart infusión Agar:………….. 40mg
 Almidón: ………………………………20gr
 Agua destilada: …………………….1000ml
PREPARACIÓN:
Pesar la base y el almidón, agregar los 1000 ml de agua
destilada, hervir, esterilizar en autoclave por 15 min a 15
libras de presión a 121ºC estabilizar en baño de María por
45min a 56ºC repartir en placas de Petri previamente
esterilizadas.

TELURITO DE POTASIO

 Brain heart infusión Agar: …..............40mg

 Sangre humana:……………………… 50ml
 Solución de telurito al 0.004%
 Agua destilada: 800ml

PREPARACIÓN:
 Pesar la base, agregar los 800 ml de agua destilada,
hervir, esterilizar en autoclave por 15 min a 15 libras de
presión a 121ºC estabilizar en baño de María por 45min a
56ºC agregar la solución de telurito al 0.004% y la sangre
humana, repartir en placas de Petri previamente esterilizadas.
TETRAZOLIUM T.T.C
 Brain heart infusión Agar: …………..40mg
 Dextrosa:………………………………. 5gr
 Solución de tetrazolium:……………..10ml
 Agua destilada: …………………….1000ml
PREPARACIÓN:
Pesar la base, agregar el agua destilada, hervir,
esterilizar en autoclave por 15 min a 15 libras de presión a
121ºC estabilizar en baño de María por 45min a 56ºC,
agregarle la solución de tetrazolium repartir en placas de Petri
previamente esterilizadas.
Agar SANGRE BILIS
Solución A:
 Brain heart infusión Agar: ……………40gr
 Agua destilada: ……………………...850ml
 Sangre de conejo: ……………………..50ml
Solución B:
 Oxgal:…………………………………. 40gr
 Agus destilada:……………………... 100 ml
Disolver el oxgal en el agua destilada.
PREPARACIÓN:
 Pesar la base, agregar el agua destilada, hervir, agregar
la solución B y esterilizar en autoclave por 15 min a 15 libras
de presión a 121ºC estabilizar en baño de María por 45min a
56ºC, agregarle asépticamente la sangre y repartir en placas
de Petri previamente esterilizadas.
CALDO DE pH 9.6

 Brain heart infusión Agar:…………… 40gr

 Agua destilada: …………………….1000ml

PREPARACIÓN:

Agregar Na OH a la media base hasta alcanzar un pH

9.6. Repartir en tubos con tapa de baquelita de 13x100.
Esterilizar en autoclave por 15min a 15 libras de presión y
121ºC
GELATINA AL 6.5%

 Brain heart infusión Agar: ……………40gr

 Gelatina: ……………………………..120gr
 Agua destilada: …………………….1000ml

PREPARACIÓN:
Pesar los ingredientes, agregar el agua destilada, mezclar
hervir, hervir, repartir 3ml en tubos con tapa baquelita de
13x100, autoclave 10min a 15 libras de presión a 121ºC

CARBOHIDRATOS A AZUCARES EN TUBO

 Purpura broth: gr
 Agua destilada: …………………….1000ml

Disolver los gr que indica el medio base en el agua destilada,

separa 100ml en Fiola, agregar 1gr del carbohidrato (1%) y
repartir 2ml en tubos con tapa de baquelita de 13x100,
autoclave 10min a 15 libras de presión y 121ºC.
Los carbohidratos son sorbosa, lactosa, sorbitol, Sucruosa,
glicerol, manitol, arabinosa, rafinosa, inulina, trehalosa,
milibiosa, ribosa, xilosa, inositol, adonitol, glucosa,

CALDO SUPLEMENTADO

 Tripticase soya broth: …………………30gr

 Agua destilada: …………………….1000ml
 Isovitalex: …………………………….10ml
 Hemina menadiona:…………………..10ml
PREPARACIÓN:

Disolver 30gr del medio tripticase soya broth en un litro

de agua destilada, agregar Isovitalex y la hemina, mezclar y
repartir 3ml en tubos con tapa de baquelita, luego autoclave
por 15min a 121ºC a 15 libras de presión.
C.C.C
 Brain heart infusión Agar: ……………40gr
 Agua destilada: ……………………1000ml.
PREPARACIÓN:
Pesar la base, agregar el agua destilada, mezclar, repartir
3ml en tubos de baquelita de 13x100, autoclave 10min a 15
libras de 121ºC

CALDO HIPURATO
MRVP
TSI
BILIS ESCULINA
BRAIN HEART INFUSIÓN AGAR
SOLUCIONES
Telurito:
 Telurito de potasio: …………………..0.5gr
 Agua destilada estéril: ………………150ml
Tetrazolium al 0.4%
  2,3,5 triphenil tetrazolium:……………. 1gr
 Agua destilada estéril.

PLACA COLUMBIA #5
 1000ml de agua
 42.5gr de CNA Columbia
 50ml de sangre humana.
PREPARACIÓN:
Para 1000ml de agua destilada, suspender 42.5gr del
medio, mezcle bien, caliente agitando frecuentemente y hervir
durante 1 minuto para disolver completamente el medio.
Autoclave por 15min, luego bajar la temperatura a 37ºC y
agregar 50ml de sangre humana, mezclar y repartir en placas
dobles.

UREA (BISEL)
 500ml de H2O
 Urea Nº8
 Agar granulado Nº9

PREPARACIÓN:
En una Fiola medir 50 ml de agua destilada, agregarle 15gr de
Agar granulado, hervirlo hasta el punto de ebullición. A los
50ml de agua destilada después de esterilizada agregarle
14.5gr de urea, unirlo con el Agar granulado. Trasvasar a un
matraz y repartir 5ml en tubos medianos.

C.L.E.D Agar

 1000ml de agua
 36.2gr CLED Agar #87

PREPARACIÓN:

Suspender 36.2gr del polvo por 1000ml de agua

destilada. Reposar 5min y mezclar hasta uniformar. Calentar
agitando frecuentemente y hervir 1min hasta disolver. Llevar
al autoclave a esterilizar 15min a 121ºC, bajar temperatura y
repartir en placas.
 BUFFER
Solución A fosfato di sódico 0.1M:
 Na2 HPO4: 14.2gr
 Agua destilada: 1000ml
Solución B fosfato mono sódico 0.1M:
 NaH2 PO4: 13.8gr
 Agua destilada: 1000ml
Buffer fosfato pH 8.0:
 Solución A fosfato di sódico 0.1M: 94.5ml
 Solución B fosfato mono sódico: 0.1M
Buffer fosfato pH 6.0:
Solución A NaH2PO4 O.2M:
 NaH2PO4: 27.8gr
 Aguas destilada: 1000ml
Solución B NaH2PO4 0.2M:
 NaH2PO4 7H2=: 53.65gr ò 71.7gr.
 Agua destilada: 1000ml.
Buffer fosfato pH 6.0
 Solución A NaH2PO4 O.2M: 87.7ml
 Solución B NaH2PO4 0.2M: 12.3ml
 Agua destilada:100ml
Buffer Alcalino 0.067 M NaH2PO4:
 NaH2PO4: 9.5gr
 Agua destilada: 1000ml
 Perfiles
PERFIL PREOPERATORIO:

 Glicemia, Urea, Creatinina.

 Hematologia Completa.
 HTLC-III (SIDA).
 Orina.
 Tiempo de Protombina.
 Toempo Parcial de Tromb.
 V.D.R.L.
PERFIL OBSTÉTRICO:

 Grupo sanguíneo y factor Rh

 Glicemia pre-post
 Hematología completa
 V.D.R.L
 HIV(SIDA)
 Orina , toxoplasma, rubeola

PERFIL DIABÉTICO

 Glicemia pre-post
 Insulina pre-post
 Glucosuria fracc.24 horas
 Hemoglobina , glicosilada
 Orina, microalbuminuria

PERFIL HEPÁTICO

 Anticore
 Antígeno Australia
 Bilirrubina total y frac.
 Colesterol
 LDH
 Hepatitis A (IGG)
 Hepatitis B (IGM)
 Hepatitis C (anti-HCV)
  Tiempo de protombina
 Transaminasa Oxal
 Transaminasa pirúvica

PERFIL FUNCIÓN SEXUAL

 Androstenodiona
 Dehidroepiandrosterona
 17 OH progesterona
 Estradiol
 Estrógeno
 FSH
 LH
 Pool de prolactina
 Progesterona
 Testosterona
 Prolactina

PERFIL ANEMIA

 Cuenta de reticulositos
 Frotis de sangre periférica
 Hematología completa
 Hierro serico
 Sangre oculta en heces

PERFIL FUNCIÓN RENAL

  Calcio, fosforo
 Creatinina
 Depuración de creatinina
 Albuminuria en Orina/24 Horas
 Sangre , orina
 Sodio, potasio
 Urea

PERFIL SUPRARRENAL

 17 OH-progesterona
 A.C.T.H
 Orina 24 horas
 Cortisol orina 24 horas
 D.H.E.A

PERFIL CARDÍACO

 Ck-mb
 LDH
 Troponina T, troponina I
 Ck total
 Colesterol total
 Colesterol HDL-LDL
  Triglicéridos
 TGO
 Tiempo de protombina
 Fibrinógeno

PERFIL 20

 Hematología completa
 Glicemia
 Urea, creatinina
 Colesterol HLD-LDL
 Triglicéridos
 Ácido urico
 Proteínas (totales y fracc)
 Albumina , bilirrubina
 Hierro serico

PERFIL TIROIDEO

 T3:triyodotironina
 T4:tetrayotironina
 TSH Ultra sensible
 Anticuerpos antitiroideos
 Tiroglobulina
 THR
PERFIL LIPÍDICO

 Colesterol
 Triglicéridos
 Lípidos totales
 HDL-LDL-VLDL
 Lipemia post pandrial

PERFIL DROGAS

 Ac. Valproico
 Carbamacepina
 Catecolamina en orina 24 horas
 Cocaína, marihuana
 Epamin
 Fenobarbital
 Litio

PERFIL MENOPAUSIA

 Calcio y fosforo
 Sangre / orina 24 horas
 Estradiol
 F.S.H
 L.H
PERFIL OSTEOPOROSIS

 Calcio, fosforo
 Orina de 24 horas
 P.T.H
 Marcadores oseos
 Crossplap

PERFIL REUMÁTICO

 A.S.T.O
 Acidourico
 Anti-cuerpos antinucleares
 Celulas L.E
 Hematología completa
 Proteína C reactiva
 RA test
 V.D.R.L