Temario Poliploidia Inducida

Tema 1.
1: Poliploidía inducida Aplicaciones biotecnológicas en Acuicultura
TEMA 1.1: POLIPLOIDÍA INDUCIDA
INTRODUCCIÓN
La ploidía de un organismo es el número de juegos cromosómicos que tiene. Un poliploide contiene más de dos juegos
cromosómicos: triploides (3n), tetraploides (4n), ...
La poliploidía es letal en mamíferos y aves, PERO en otros grupos (peces y moluscos) los poliploides pueden ser viables.
En especies con fecundación externa (mayoría de peces y moluscos) es posible acceder a las divisiones de maduración
del huevo y a las primeras divisiones del embrión. Esto permite manipular la dotación cromosómica y crear embriones
poliploides. Sin la fecundación externa no tendríamos acceso a las divisiones de maduración del huevo así que esta es la
clave.
Las técnicas de manipulación de la ploidía se aplicaron por primera vez en peces en 1972 y una década más tarde en
especies de bivalvos. Son manipulaciones clásicas.
En acuicultura tiene interés la tecnología de triploides y tetraploides.
POLIPLOIDÍA NATURAL
La poliploidía ha estado implicada en la evolución de

animales y plantas.
En el caso de los peces, se sabe qe los teleósteos

sufrieron una duplicación del genoma ancestral (225-333
MYA) precedida por otros dos eventos de duplicación
más antiguos. Además, la poliploidía parece producirse
repetidamente en algunos órdenes taxonómicos de peces,
incluidos Cypriniformes, Salmoniformes, Perciformes,
Siluriformes, Acipenseriformes, Gymnotiformes y
Characiformes, es decir que se dio lugar a otras
duplicaciones de su genoma sucesivas.
Evidencias de que, por ejemplo, en el caso de los salmónidos, que tienen origen tetraploide:
 El tamaño del genoma (2,5x109 pb) es el doble que el de otros peces relacionados
 El número de brazos cromosómcios (NF=74-170) es también dos veces el de otros peces relacionados (NF=48-
60)
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Tema 1.1: Poliploidía inducida Aplicaciones biotecnológicas en Acuicultura
 En algunas especies de salmónidos se observan multivalentes en la meiosis: son cromosomas que vienen de un
proceso de duplicación
 Muchos loci están duplicados
Incluso en bivalvos se cree que ha habido duplicación del genoma. Evidencias:
 Procesos de poliploidización en bivalvos dulceacuícolas (familia Sphaeriidae)

 Especies con distintos niveles de ploidía (2n a 13n)
Indicativo que tanto en peces como moluscos toleran la

poliploidía. Otra evidencia es que espontánemente pueden
aparecer individuos poliploides (peces y moluscos).
Cariotipo de un mejillón de Galicia. Vemos que es un individuo

triploide que se ha encontrado de manera espontánea en la
naturaleza.
Lo mismo se observa en el segundo cariotipo de una ostra.
Indicios de que la triploide es tolerable.
¿Cómo se produce un poliploide? Los poliploides pueden

producirse por varias causas:
 Alteraciones en los procesos de meiosis o mitosis de una especie

o Endorreduplicación premeiotica de la dotación cromosómica: antes de la meiosis se da una duplicación
de los cromosomas que no va acompañada de una división del citoplasma y por ello la célula dobla su
cromosoma
o Supresión de la primera y/o segunda división meiótica

o No disyunción de los cromosomas durante la división del embrión
 Interferencia en el proceso de fecundación: por ejemplo si se produce poliespermia
AUTOPOLIPLOIDES
Todos los juegos cromosómicos son de la misma especie: aumenta el número de cromosomas pero todos vienen de la
misma especie
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También se pueden producir poliploides por: Contacto reproductivo entre especies
AULOPOLIPLOIDES
Cuando se da hibridación entre dos especies, a menudo se altera la gametogénesis en la progenie: Esto puede ir asociado
con cambios en los modos de reproducción y frecuentemente con poliploidía.
Ejemplo. Squalius alburnoides (calandino), ciprínido endémico de la Península lbérica.
Comprende hembras y machos diploides (2n = 50), triploides (3n = 75) y tetraploides (4n = 100) con diferentes
composiciones genómicas: se sabe que tienen el genoma de una especie desconocida (genoma A) y luego puede tener el
genoma de S. pyrenaicus (genoma P) o el genoma de S. pyrenaicus o S. carolitertii (genoma C) dependiendo de la
cuenca.
Se originó por hibridación interespecífica entre S. pyrenaicus (genoma P) y una especie desconocida (genoma A).
Actualmente incorpora el genoma de S. pyrenaicus o S. carolitertii dependiendo de la cuenca.
Estos individuos pueden reproducirse de diferentes formas:
 Hibridogénesis: modo de reproducción bisexual caracterizado por la exclusión de un genoma parental y

endorreplicación y transmisión clonal de los genomas restantes
Uno de los genomas es eliminado en el proceso de formación de gametos y el otro genoma se transmite de
manera clonal (= se da un endorreplicación de los cromosomas y es el único que se hereda y no hay hibridación)
 Hibridogenesis meiótica: exclusión de un genoma parental en la formación de gametos. Se excluye uno de los
genomas parentales y los dos que quedan sufren una meiosis normal.
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 Gametos clonales: el genoma del hibrido se transmite íntegro. El hibrido se transmite de manera íntegra.
 Meiosis no reduccional: productos meióticos no reducidos. Se forman gametos NO reducidos
¿Cómo se pueden inducir poliploides?
A. INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA POR MÉTODOS FÍSICOS
1. PRESIÓN HIDROSTÁTICA
Los ovocitos fecundados se introducen en un cilindro de acero lleno de agua cerrado con un
pistón y se someten a una presión de 58-85 MPa.
La presión lo que hace es impide la extrusión de corpúsculos polares: Desorganiza los

microtúbulos del huso mitótico/meiótico e impide su formación
Problema: La cantidad de ovocitos que pueden tratarse simultáneamente está limitado por el
volumen del cilindro.
2. CHOQUE TÉRMICO
Someter los ovocitos fecundados a cambios bruscos de temperatura.
Aumento (caliente) o disminución (frío) brusco de temperatura respecto al ambiente lo que hace es:
 Desorganiza los microtúbulos del huso mitótico/meiótico

 Provoca cambios en la densidad celular
Esta es más fácil de aplicar que la presión hidrostática porque no estamos sujetos a las limitaciones de volumen por ello es
un método más utilizado por la industria. PERO debemos tener cuidado que la temperatura que aplicamos sea homogénea
en todos los puntos. Con volúmenes grandes puede ser dificultoso mantener la temperatura uniforme.
Los choques calientes parecen producir mejores resultados en peces de aguas frías y los choques fríos en los de aguas
calientes.
LOS MÉTODOS FÍSICOS SE USAN SOBRE TODO EN PECES
B. INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA POR MÉTODOS QUÍMICOS
1. CITOCALASINA B (ALCALOIDE FÚNGICO)
Bloquea la polimerización de la actina de los microfilamentos del anillo de microfilamentos y por ello lo que hace es
impedir la formación del anillo de microfilamentos requerido para la separación del corpúsculo polar (= bloquea la
citocinesis).
 No es soluble en agua y se disuelve en dimetil sulfóxido (DMSO). El DMSO penetra fácilmente en la célula
facilitando la entrada de la citocalasina B.
 Su efecto es muy inmediato y el tratamiento requiere una sincronización precisa porque en el momento que se
hecha ya actúa.
 PROBLEMA: Muy tóxico. Su uso para inducir poliploidía no está permitido en Europa (a nivel experimental sí
que se puede usar, PERO no a nivel de industria).
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2. 6-DIMETILAMINOPURINA
Inhibidor de la fosforilación de proteínas. Destruye los microtúbulos e impide la extrusión de los corpúsculos polares
 Soluble en agua
 Efecto retardado en comparación CB por ello es más fácil de aplicar porque hay mas margen
 Compuesto no tóxico
3. OTROS (CAFEÍNA, COLCHICINA, NOCODAZOL)
Afectan también a la formación de los microtúbulos.
LOS MÉTODOS QUÍMICOS SE USAN SOBRE TODO EN MOLUSCOS
INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA POR MÉTODOS FÍSICOS Y QUÍMICOS
Tanto los métodos físicos como los químicos raramente muestran una eficacia del 100%.
Las variables que más influyen en la efectividad de los tratamientos son:
 Momento (después de la fecundación) de aplicación: cunado debemos aplicar el tratamiento es clave

 Intensidad del tratamiento
 Duración
 Temperatura del agua para la activación de los gametos: porque la Tº condiciona la duración de la meiosis.
Tenemos que saber una vez fecundado los ovocitos en qué momento realmente debemos realizar el tratamiento
 Calidad de los ovocitos: evitar los ovocitos inmaduros (porque no habrá fecundación) y también los
sobremadurados
LAS CONDICIONES ÓPTIMAS DEPENDEN DE CADA ESPECIE
OBTENCIÓN DE POLIPLOIDES EN PECES
En peces el ovocito liberado en la puesta está

detenido en la METAFASE 2 de la meiosis y tras
la fecundación se reanuda la meiosis hasta
liberarse el 2º corpúsculo polar y formarse el
cigoto.
Lo que debemos hacer es aplicar el choque justo

antes de que se libere el 2º corpúsculo polar
obteniendo triploides de tipo M2 porque lo que
menos hecho es bloquear la 2º división meiótica.
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También podríamos aplicar un choque la 1º división del huevo (1º división mitótica): obtendríamos tetraploides. El huevo
es 2n y si bloqueo la 1º división mitótica, es decir que los cromosomas se duplican, pero no hay división del citoplasma,
obtendría células 4n.
Momentos tras la fecundación en los que

aplicar los choques tantos de presión como
frio/calor.
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OBTENCIÓN DE POLIPLOIDES EN MOLUSCOS
Oocitos liberados en la puesta pueden estar en PROFASE 1 O METAFASE 1 según la especie.
 Spisula: meiosis parada en profase 1, fecundación en profase 1 y esta estimula la reactivación de la meiosis.
 Mytilus, Venerupis y Crassostrea: meiosis parada en profase 1, PERO su reactivación se ve estimulada hormonal
u por otros estímulos y se para en metafase 1 hasta la fecundación tras la cual se reanuda la meiosis hasta
completarse.
En estas especies se puede bloquear la extrusión tanto del 1º corpúsculo polar como del 2º corpúsculo polar.
 Si aplicamos un choque para bloquear loa extrusión del 1º corpúsculo polar hablaremos de triploides M1
 Si aplicamos un choque para bloquear loa extrusión del 2º corpúsculo polar hablaremos de triploides M2
Al igual de cómo hemos dicho en peces, se podría aplicar un choque para impedir la 1º división mitótica y esto daría
lugar a tetraplóides, PERO esto en bivalvos NO funciona.
Momentos tras la fecundación en

los que aplicar los choques tantos
de presión como frio/calor.
De normal para saber cuándo aplicar el tratamiento, tendremos dos grupos:

un control y otro tratamiento. Triploides M2: los tratamientos se aplican
normalmente cuando en el grupo control >50% de los huevos fecundados han
extruido el primer cuerpo polar. Esto es lo que suelen hacer en los criaderos.
Para los triploide M1 es por prueba error es decir debemos ver por cada
especie cuando debemos aplicar el choque.
Cuando se bloquea el 1º corpúsculo polar se obtienen triploides, PERO se

pueden obtener también individuos con otros niveles de ploidía incluidos
tetraploides y pentaploides.
Si impedimos la extrusión del 1º corpúsculo polar los cromosomas homólogos

no se separan: número de cromosomas que entran en la meiosis 2 es el doble
de la normal. PERO si de estos un juego de cromosoma segrega normalmente
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(separación de las cromátidas) y el otro no segrega obtendré un tetraploides (= 3 juegos de cromosomas). Mientras que
si ambos no segregan obtendré un pentaploide (= 5 juegos de cromosomas).
La meiosis 1 es mucho más compleja que la meiosis 2: intervenir en la meiosis 1 tiene más consecuencias que intervenir
en la meiosis 2.
Un grupo francés se dieron cuenta que al inducir triploides M1 había mucha diversidad en las tallas de los individuos y
luego vieron que los más pequeños eran tetraploides en realidad.
OTROS MÉTODOS DE INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA
Podemos obtener poliploides por cruzamientos interploides: CRUZAMIENTO DE INDIVIDUOS CON PLOIDÍAS
DIFERENTES
Este es el método de producción comercial para C. gigas y C virginica. En Francia la mayoría de la ostra que se cultiva
es triploide. En interés de vender la ostra triploide es que crece más y que la ostra normal cuando está madura NO se
puede consumir porque tiene un sabor amargo, PERO como los triploides tienen un crecimiento gonadal reducido se
pueden comercializar todo el año.
Si suele hacer hembra 2N x macho 4N en lugar que cruzamiento de macho 2N x hembra 4N porque en este último caso se
suele dar mayor incidencia de individuos anormales.
¿Cómo obtengo triploides? Puedo hacerlo a través de métodos físicos o químicos, pero esto implica estar pendiente del
tratamiento (momento de la fecundación, temperaturas, etc. además la eficacia no es del 100% con ninguna técnica y
puede que obtenga otros niveles de ploidía) o puedo producirlos a partir de los tetraploides. Obtener tetraploides es más
complicado, PERO una vez que los tengo me van a dar triploides.
COMBINACIÓN DE CRUZAMIENTOS INTERPLOIDES Y MÉTODOS FÍSICOS O QUÍMICOS
La trucha arco iris se obtienen individuos tetraploides gracias al cruzamiento de los gametos 2N de la hembra con los 4N
de un macho a los cuales se aplica un choque térmico para dar descendencia 4N.
En salmónidos la obtención de triploides no se está haciendo a partir de progenitores tetraploides porque no va tan bien
así que se usa más la técnica de choque térmico para obtener triploides.
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Crassostrea gigas. En esta especie de produce mucho triploide y tetraploide.
En un triploide tenemos la idea que es

estéril, PERO no siempre. En C. gigas
la tetraploidía más que esterilidad
provoca un desarrollo gonadal
reducido, pero si que pueden formar
gametos. Si alteramos la meiosis de un
triploide impidiendo la extrusión del 1º
corpúsculo polar se forman gametos
3N que al ser fecundado por machos
normales darán individuos 4N
(tetraploides).
También se pueden obtener

tetraploides cruzando 2N x 4N
impidiendo la extrusión del 2º
corpúsculo polar y obtendría
individuos 4N.
Los tetraploides no interesan porque al

cruzarlos con diploides me dan descendencia toda triploide que es
lo que se vende en el caso de ostra.
Produccion de poliploides en el dojo Misgurnus anguillicaudatus

(especie asiática incluida en el Catálogo Español de Especies
Exóticas Invasoras): en esta especie hay individuos diploides y
tetraploides y por ello se han alcanzado distintos niveles de
poliploidía cruzando individuos.
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HIBRIDACIÓN INTERESPECÍFICA
Puede provocar cambios en el nivel de ploidía por hibridación interespecífica.
En este caso hibridan distintas especies de carpa que dan hídricos

F1 que son alotriploides ya que los genomas vienen de dos
especies.
En este otro ejemplo, la F1 son

híbridos diploides fértiles que sirven
como progenitores para la F2 que
serán diploides pero sufren una
duplicación cromosómica así que la F3
ya será tetraploides. La F3 si se cruza
con una de las especies parentales dará
lugar a alotriploides que se usa a nivel
comercial.
Otro ejemplo es con S. salar y S. trutta,

donde los F1 son hidridos que se
cruzan con S. salar para obtener alotriplioides.
El cruzamiento de 2 especies da individuos con

distintas dotaciones cromosómicas entre ellos un
hibrido tetraploides que da gametos que producirán
individuos autotetraploides.
La hibridación puede disparar mecanismos

meióticos inusuales que permiten a los híbridos
producir gametos viables.
DETERMINACIÓN DEL NIVEL DE PLOIDÍA
A. RECUENTO DE CROMOSOMAS
 Es el método más directo

 Se realiza en células en metafase: fase de la mitosis donde los
cromosomas muestran la mayor condensación y por ello son visibles.
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 La obtención de buenas preparaciones cromosómicas puede ser dificultosa, los cromosomas pueden perderse o
mostrar una dispersión deficiente: necesitamos células en división y parar la mitosis en el momento exacto lo cual
es complicado
 Método que consume tiempo (un par de horas por individuo). No permite la evaluación de muestras en masa
 Barato
B. ANÁLISIS DE NORS
Al aumentar la ploidía aumenta el número de regiones organizadoras del nucleolo (NORs)
Los NORs se detectan con tinción de nitrato de plata que

tiñe los NORs activos transcripcionalmente en la interfase
precedente (Ag-NORs). No es necesario disponer de
cromosomas, puede analizarse el número de nucleolos por
núcleo: podemos contar las NORs en cromosomas
metafásicas como en el núcleo interfásico a través del
número de nucleolos. Para esta técnica, como vamos a contar los núcleos en el núcleo interfásico, NO necesitamos
metafases es decir que la célula esté en división. PERO el nitrato de plata tiñe los NORs que fueren activos
trascripcionalmente en la interfase anterior: los NORs contiene los genes que codifican por el ADN ribosómico y cuando
tiño con el nitrato de plata lo que hago es teñir los NORs, las regiones, que contienen los genes que se expresaron en la
interfase anterior y si no hubo expresión no vamos a detectar los NORs. Esto quiere decir que el nº de nucleolos en las
células puede variar de una célula a otra. Además, el Nº de NORs varia de una especie a otra y esto dificulta la
identificación del nivel de ploidía.
En especies con NORs en un par cromosómico, los diploides mostrarán 1 o 2 nucleolos por núcleo y los triploides 1, 2 o 3
nucleolos por núcleo debido a la expresión variable de los Ag-NORs
 En especies con NORs en más de un par cromosómico su uso presenta dificultades

 En individuos con un nivel de ploidía mayor de 3N, solo es posible distinguir los diploides de los poliploides
 Método sencillo y de bajo coste, pero no apropiado para muestras en masa porque llevaría tiempo
 Depende del Nº de NORs para ser informativo y es lento, PERO es útil en el caso de los embriones
C. CITOMETRÍA DE FLUJO
Técnica de análisis celular que consiste en hacer

pasar una suspensión de células alineadas de una en
una por delante de un rayo láser. El impacto de cada
célula con el rayo láser produce señales (dispersión
de la luz, fluorescencia) que corresponden a
diferentes parámetros de la célula y que son
recogidas por detectores: la fluorescencia es
proporcional a la cantidad de ADN presente en la
célula.
Problema: en los criaderos no suelen tener un

citómetro de flujo así que muy probablemente
vamos a enviar las muestras a un laboratorio lo
cual encarece la técnica.
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Cuando las células se tiñen con un colorante fluorescente (ej. ioduro de propidio o DAPI), la fluorescencia emitida es
proporcional a la cantidad de ADN. Se mide el contenido de ADN de las células en comparación con un control conocido
 Es posible analizar cientos de individuos en un día.

 Se trata de un método rápido y preciso.
 Requiere ejemplares con una cantidad
apropiada de células: para cada individuo
requiere un determinado número de célula.
Esto para un embrión no es viable, me
funciona por individuos ya más grande. EN el
caso de los embriones puedo hacer análisis
de lotes de embriones, no de un único
individuo.
Resultados. Eje X: cantidad de ADN. Eje Y: Nº de

células.
Si la base del pico es ancha es que hay células que

difieren en el número exacto de 3N y 4N.
D. TAMAÑO NUCLEAR O CELULAR
En un poliploide al tener más ADN tendremos un núcleo más grande y por ello la célula será más grande. Las diferencias
de tamaño se peuden medir por Coulter o por un sistema de análisis apropiado con microscopio.
El aumento extra de DNA conlleva un incremento del tamaño del núcleo y de la célula.
Las diferencias de tamaño pueden estimarse a partir de diferentes medidas tomadas directamente en un microscopio
equipado con un análisis de imagen o en un contador Coulter. El Coulter es un aparato que mide diferencias en la
resistencia eléctrica cuando las células, suspendidas en un líquido conductor se hacen pasar por un orificio. El número
de cambios en la resistencia eléctrica hace referencia al nº de células y la intensidad del cambio al tamaño de las células.
En el Coulter las muestras se pueden almacenar más tiempo (citometría debe ser inmediata) y se pueden analizar más
células por hora.
En moluscos se mide el tamaño del núcleo en células de branquia y hemolinfa: no es un método invasivo, no debemos
matar al individuo (incruento).
En peces, la longitud del eje mayor de los eritrocitos en una

muestra de sangre es un método usual y fiable y es aplicable
para distinguir diferentes niveles de ploidía (triploides,
tetraploides y niveles superiores).
 Necesitamos un microscopio y el programa de

análisis: no es un equipamiento caro
 Nº de muestra que se analizan es lento: Nºmuestra/hora bajo
 Se debe validar con otra técnica para ver que los resultados que nos da son válidos para la especie de interés
 No es válido para el estudio de muestras en masa, sino que se analiza preparación por preparación
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E. MICROSATÉLITES
Los microsatellites son marcadores genéticos codominantes muy

polimórficos: son marcadores que identifican cambios en el número de
una repetición corta. Para analizarlo debemos extraer el ADN, hace una
PCR para amplificar el microsatélite y luego hacer una separación
electroforética en n gel de acrilamida o más comúnmente se hace una
análisis en secuenciador automático y veríamos los picos
correspondientes al producto amplificado.
Repeticiones de 2-8 pares de bases que abarcan menos de 500 bp en total.

Distribuidos por todo el genoma. Son más abundantes en regiones no
codificantes.
El número de repetiones puede ser muy variable (muchos alelos por locus).
Se han utilizado para la detección de triploides en algunas especies.
Electroferograma con dos (diploides) o tres (triploides) picos en tres loci

microsatélite (negro, azul, verde) de C. gigas
Los genotipos triploides deben tener tres alelos diferentes.
La probabilidad de detectar triploides depende principalmente de la comprobación de un número suficiente de loci

microsatélites altamente polimórficos y distantes del centrómero.
Gráfica: Cada serie de picos es un cromosoma marcado con un color. Cada pico es un alelo contenido por color.
IMPORTANTE: Para ver el triploide o tetraploide (3-4 picos) los progenitores deben ser heterocigoto para los diferentes
alelos porque si no no vemos los picos distintos.
Y por otra parte, el microsatélite también debe estar alejado del centrómero para
ver los distintos alelos.
Los peces se obtienen triploides M2 porque inhibimos la expulsión del 2º CP,

entonces si el microsatélite está muy cerca del centrómero lo que pasa es que las
dos cromátidas tendrá el mismo alelo microsatélite si no hubo recombinación (hay
más probabilidad que haya recombinación si los dos alelos se encuentran en
heterómeros): vamos a ver en el triploide un patrón de diploide aún siendo triploide
porque tiene el mismo alelo para el microsatélite por lo que en la gráfica voy a ver
un solo pico.
Los microsatélites son marcadores difíciles de desarrollar y no en todas tengo

muchos y no necesariamente están en las regiones teloméricas.
Necesito equipamiento sofisticado y una formación especializada.
DETERMINACIÓN DEL NIVEL DE PLOIDÍA: COMPARACIÓN DE MÉTODOS
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Tema 1.2: Triploides Aplicaciones biotecnológicas en Acuicultura
TEMA 1.2: TRIPLOIDES
COMPORTAMIENTO MEIOTICO
Los triploides hay varias posibilidades de

apareamiento de los cromosomas homólogos:
pueden dar trivalentes o bivalentes + univalente.
Ej. Crassostrea gigas (2n = 20; 3n = 30): los

huevos tienen como media 8 trivalentes, 2
bivalentes y 2 univalentes.
Si la distribución de los N cromosomas de más que

tiene un triploide fuera al azar, la frecuencia de los distintos gametos producidos seguiría una distribución binomial.
Los gametos tendrán una dotación cromosómica entre N y 2N.
Si los cromosomas que están demás migrasen a los polos de manera aleatoria, la frecuencia de gametos con un
determinado número de cromosomas va a ser determinadas por una distribución binomial.
La frecuencia de gametos con un número determinado de cromosomas (N+X) viene dada por:
(N!) 0.5X0.5N-X/X!(N-X)!
 N: Nº haploide
 X: número de cromosomas de más el gameto
C. gigas (2n=20). Gametos con 13 cromosomas: (10!) 0.53 x 0.57 / 3!7! = 0.1177
Ej. Crassostrea gigas: los cromosomas extra segregan aleatoriamente es decir que hay un buen ajuste a la distribución
binomial: Vemos que las frecuencias observadas y las esperadas asumiendo segregaciones aleatorias de los cromosomas
extra, casi coinciden.
Esto significa que un triploide si forma gametos tiene la posibilidad de formar gametos que va desde N hasta 2N.
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En general, como el Nº de cromosomas varía mucho puede ser que el triploide sea esteril PERO hay especie donde si que
puede ser viable.
Los triploides son estériles en muchos casos, pero en otros pueden producir gametos funcionales y descendencia viable.
Datos de hembra diplide x macho triploide: vamos que la dotación cromosómica de los descendientes varia. No hay
individuos con entre 24 y 27 cromosomas por lo que probablemente esas dotaciones no son viables PERO si hay
aneuploide (es decir el número de cromosomas no es múltiplo exacto del Nº aploide).
 No se observan dotaciones de 24 a 27 cromosomas

 Cruces DT: descendencia principalmente aneuploide Diferencias entre machos y hembras en la
 Cruces TD: descendencia principalmente diploide y triploide herencia de los cromosomas
TRIPLOIDES: HERENCIA TRISÓMICA
Las segregaciones geno- y fenotípicas serán diferentes de las mendelianas típicas de los organismos diploides.
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Un triploide me puede dar gametos: AA – Aa – aa.
La segregación va a depender de la posición del locus es decir si hay segregación cromosómica (gametos vana a
depender solo de la separación de los cromosomas por lo que el gameto puede llevar cualquier combinación de
cromosoma) o segregación cromátida (gametos vana a depender solo de la separación de las cromátidas: los locus están
separado del centrómero que se puede producir recombinación y por ello el gameto puede llevar cualquier combinación
de cromátida).
Si tenemos un triploide AAa se pueden dar varias combinaciones de separaciones de cromosomas:
 AA – a
 Aa – A
 Aa – A
Los gametos, la proporción será: 2/6 A + 2/6 Aa + 1/6 aa + 2/6 a
Qué pasa si se da segregación cromatídica es decir si se trata de un locus alejado del centrómero, tenemos que pensar en
cromátida en este caso NO en cromosomas por lo que un cromosoma AAa va a tener:
 4 cromátidas A
 2 cromátidas a
Para formar los gametos las proporciones serán:
 AA: 4/6 + 3/5 = 12/30

 Aa: (4/6 x 2/5) + (2/6 x 4/5) = 16/30
En este caso hago una suma porque podría ser que la combinación sea Aa o aA.
 Aa: 2/6 + 1/5 = 2/30
Un triploide va a formar gametos con 2 cromosomas y otro gameto que solo lleva uno. Los gametos que solo llevan una
cromátida, su proporción depende de la proporción de cada tipo de cromátida.
TRIPLOIDES: HETEROCIGOSIDAD
Los triploides deberían mostrar mayor heterocigosidad (= probabilidad que un individuo tenga alelos ≠) que los
diploides debido a que contienen dos juegos cromosómicos de un parental y otro del otro parental ( el triploide tiene 3
copas de cada cromosoma = mayor probabilidad de heterocigosidad) PERO la heterocigosidad en un locus depende en
qué meiosis se suprime la división y de la recombinación entre el locus y el centrómero.
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Un diploide heterocigoto va a dar gametos A y B.
En un triploide M1 impido la extrusión del 1º CP (= no se separan los dos cromosomas homólogos) y si no hay
recombinación (= los cromosomas llegan a alelos) lo que obtengo es que los gametos lleven los alelos AB. PERO si hay
recombinación puedo haber varias combinaciones: AA, AB o BB.
Si tengo triploides M2, si no hay recombinación, los gametos serán AA o BB mientras que si hay recombinación los
gametos van a ser AB.
La heterocigosidad puede predecirse por la tasa de recombinación (= la frecuencia de segregación en la meiosis II).
Considerando solo los juegos cromosómicos maternos:
y/2 porque cuando hay recombinación será solo la mitad de los

gametos para ser heterocigoto.
En el caso de los M2 la frecuencia de heterocigoto solo va a

depender de y.
En general, se espera mayor heterocigosidad en los triploides M1

porque en el caso de los M2 es dependiente de que se de recombinación.
EFECTOS DE LA TRIPLOIDÍA
A. SUPERVIVENCIA
Los tratamientos de inducción de triploidía reducen la

supervivencia sobre todo durante el desarrollo
embrionario y larvario.
La condición de triploide puede reducir la

supervivencia en etapas más tardías, sobre todo cuando
las condiciones ambientales no son óptimas. PERO en
peces, los triploides presentan una menor mortalidad
que los diploides durante el periodo de maduración
sexual (inmunosupresión en diploides).
Si el procedimiento de obtención de triploides está

optimizado, el nivel de mortalidad se encuentra dentro
de límites industriales aceptables.
Ostras
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 Triploides inducidos químicamente tienen menor supervivencia larvaria que triploides inducido por 2N x 4N.
Se debe a la toxicidad del tratamiento y porque se da una producción no intencionada de tretraploides y
aneuploides que tienen menor viabilidad
 Triploides M1 tienen mayor mortalidad que Triploides M2 debido a una producción más alta de tretraploides y
aneuploides que son menos viabilidad
B. REPRODUCCIÓN
Peces. La presencia de tres cromosomas homólogos dificulta seriamente la sinapsis y la segregación cromosómica e
interfiere el desarrollo gonadal y la gametogenésis en prácticamente todas las especies de acuicultura examinadas.
No obstante, existen diferencias entre sexos
 Hembras triploides: raramente producen huevos y si los producen generalmente son pocos, no están desarrollados
y son infecundables
 Machos triploides:
o ej. lubina, rodaballo, dorada: no producen esperma
o ej. salmón atlántico, trucha arcoíris: producen pequeñas cantidades de espermatozoides. No obstante, al
ser aneuploides son incapaces de generar descendencia viable si participan en la fecundación
En general la triploidía inducida confiere esterilidad genética

PERO AUNQUE EXISTEN CASOS RAROS QUE SON
FÉRTILES (como el caso de antes de la ostra).
Moluscos. La triploidía no produce necesariamente esterilidad

completa sino más bien un desarrollo gonadal reducido.
C. CRECIMIENTO
Los triploides podrían crecer más rápido que los diploides. Una de las razones es la esterilidad porque no invierten la
energía en la reproducción sino que se usa para el crecimiento.
Esterilidad. Ganancia de peso de los triploides en comparación con los diploides determinada por la falta de inversión
energética en la reproducción.
PECES: crecen igual o incluso menos que los diploides desde las primeras fases del desarrollo hasta la fase juvenil (antes
de la maduración sexual). Una vez que los diploides experimentan la maduración sexual, en varias, pero no todas las
especies, los triploides alcanzan mayor peso. Por ejemplo en la lubina y la dorada no crecen más pero el salmón y la
trucha arcoíris sí que tras la madurez sexual si que crecen más.
Debe estimarse la rentabilidad de la triploidía en cada caso.
19
MOLUSCOS Y CRUSTÁCEOS:
crecimiento similar en la fase juvenil; después de la maduración
sexual, los triploides crecen más en la mayoría de los casos.
Ostras:
 Triploides 2N x 4N > crecimiento triploides inducidos

químicamente
 Los dos métodos de inducción de triploides no son
equivalentes
 Triploides y diploides pueden responder de forma
diferente a las condiciones ambientales: Crassostrea
virginica:
o ↓ salinidad →crecimiento triploides < diploides
o ↑ salinidad →crecimiento triploides > diploides
20
Otra razón por la que los triploides se espera que crezcan más es por la heterocigocisidad.
HETEROCIGOSIDAD. En diferentes organismos se demostrado la existencia de una relación positiva a nivel individual
entre heterocigosis y caracteres relacionados con la eficacia biológica. La mayor heterocigosidad media de los triploides
podría manifestarse en mayor crecimiento o mayor viabilidad.
En algunos casos (ej. Ostrea edulis, Crassostrea gigas, C. virginica) los triploides M1 mostraron mayor heterocigosidad
(medida a partir de varios loci) y crecieron más que los triploides M2 (tal y como se espera). En otros casos (Pinctada
martensii, Mytilus edulis, Mya arenaria) los triploides M1 y M2 no mostraron una correlación positiva entre el tamaño del
cuerpo y la heterocigosidad. Resumen: habría que analizar más loci para realmente verificar esta teoría o en principio
este mayor crecimiento no se debe a la heterocigosidad. Esta última hipótesis se confirma si pensamos que la
heterocigosidad NO varía a lo largo de la vida de un individuo así que no tiene sentido que, si presente, su efecto sobre el
crecimiento se manifieste solo tras la madurez sexual.
TAMAÑO CELULAR. Las células triploides son más grandes al tener un 50% más de DNA. Asumiendo que el número
de divisiones celulares sea igual en diploides y triploides, existiría una correlación entre el tamaño celular y el tamaño del
cuerpo y podría esperarse que los triploides creciesen más rápido y alcanzasen mayor tamaño que los diploides.
 Peces: las células triploides son más grandes, pero no confieren ventajas en el crecimiento porque el aumento
del tamaño celular es compensado por una reducción en el número de células: el aumento del tamaño es
compensado por una reducción del Nº de células
 En moluscos y otros invertebrados el aumento del tamaño celular no es compensado por una reducción en el
número de células y resulta en un mayor crecimiento o incremento del tamaño corporal
Existen datos que apoyan a cada una de las causas planteadas pero las tres presentan limitaciones.
Al igual que en el caso de la heterocigosidad, si el tamaño celular fuera el condicionante del mayor crecimiento, sus
efectos se verían ya antes de la madurez sexual.
¿Mayor crecimiento por un efecto integrado de esterilidad, mayor heterocigosidad y gigantismo celular? Ninguna de las
tres explica porque el triploide tiene más crecimiento. Probablemente se debe a un nivel integrado de las tres causas.
D. PROPORCIÓN DE SEXOS
La poliploidía inducida puede alterar los mecanismos de determinación del sexo.
En especies con un sistema XY fuerte los triploides XXX son hembras y los XXY machos.
En especies con un sistema ZW existe la posibilidad de que el locus de determinación del sexo esté cerca o alejado del
centrómero por lo que la determinación del sexo depende de si hay recombinación entre el locus de la determinación
sexual y el centrómero, por lo que la proporción de sexos en los triploides puede variar:
 0 - 50 % Machos ZZZ si no se da recombinación porque el locus está cerca del centrómero

 0 - 50 % Hembras ZWW si no se da recombinación porque el locus está cerca del centrómero
 0 - 100 % Hembras ZZW dependiendo de la recombinación
Para sistemas poligénicos, en triploides existe una contribución diferencial de factores determinantes de hembra y macho
aquí sí que se espera una alteración en la producción de sexos.
Proporción de sexos en algunos triploides:
21
 Oreochromis niloticus (XY), Oncorhynchus mykiss (XY) y Crassostrea gigas: igual proporción de sexos
 Oreochromis aureus (ZW): 80% hembras
 Mytilus edulis y M. galloprovincialis: 90-100% machos
 Mya arenaria: 100% hembras
IMPORTANCIA DE LA TRIPLOIDÍA EN PECES Y MOLUSCOS
 El interés de los triploides radica en su presunta esterilidad

 Los triploides adultos pueden crecer más rápido
 Reduce los efectos contraproducentes de la maduración sexual (ej. deterioro de la calidad de la carne -mal
sabor-, pico de mortalidad debido a la maduración sexual)
 Reduce las interacciones reproductivas (contención reproductiva) por lo que impide la diseminación de
especies foráneas en el medio natural: evita la interacción de las especies que se cultivan (triploides estériles) sin
riesgo de producir impacto porque no se pueden reproducir con las con las autóctonas
 Evita impactos genéticos producidos por escapes de stocks de cultivo, OMGs o híbridos (contención genética),
permitiendo preservar la diversidad genética natural. En los criaderos se producen semillas o alevines que luego
se lleva al mar y que se da a partir de un Nº reducido de reproductores por lo que probablemente es muy
endogámica por lo que en el medio reduce la diversidad presente en el medio. SI llevo una semilla o alevín
triploide al ser estéril no tiene impacto en el medio. En UK desde el 2015 no se puede repoblar con trucha común
diploide por esta razón, por no crear impacto. PERO si con la triploide porque es estéril.
Ejemplo: Producción de trucha común Salmo trutta triploide para repoblar ríos y lagos de UK. No está permitido
repoblar con trucha común diploide de piscifactoría.
 Permite la comercialización continua de productos (ej. ostras)
 Buena aceptación por parte del consumidor
 Evita la formación de gametos de especies subrogadas con xenotrasplantes de línea germinal: se pueden
hacer trasplantes de las líneas germinal, pero en este caso las especie a la que se le hace el trasplante NO quiero
forme sus propios gametos así que para esto uso especies triploides
La triploidía inducida supone beneficios, pero también inconvenientes:
 No todos los triploides crecen más rápido

 Aumento de la mortalidad inicial
 Aumento de deformidades (peces)
 Los stocks de triploides pueden contener algún diploide
 Reversión a diploides (ej. ostras)
LOS BENEFICIOS ESPERADOS DEBEN SER EVALUADOS EN RELACIÓN A LOS INCONVENIENTES

PREVISTOS
22
Hay industrias basadas en la producción de triploides sobre todo para trucha y ostras.
Peces triploides utilizados en acuicultura/gestión de pesquerías/control biológico
 Oncorhynchus mykiss (principalmente)

 Salmo trutta
 Salmo salar
 Plecoglossus altivelis
 Misgurnus anguillicaudatus
 Ctenopharyngodon idella
23
Tema 1.3: Tetraploides Aplicaciones biotecnológicas en Acuicultura
TEMA 1.3: TETRAPLOIDES: COMPORTAMIENTO MEIÓTICO
Ejemplo. Crassostrea gigas: los huevos tienen como media 9

cuadrivalentes y 2 bivalentes (o un univalente y un trivalente)
Si los 2N cromosomas extra segregan al azar, la gametogénesis

originará gametos con una dotación cromosómica entre N y 3N
La frecuencia de gametos con un número determinado de

cromosomas (N + X) viene dada por:
(2N!) 0.5X x 0.52N –X/X! (2N-X)!
X: número de cromosomas extra
Los cromosomas extra no segregan aleatoriamente; se

producen preferentemente gametos equilibrados: en la
gráfica vemos como la frecuencia esperada es diferente de
la observada, se dan sobre todo gametos equilibrados es
decir que un tetraploide da sobre todo gametos con un nº
de cromosomas 2N.
Ejemplo. Crassostrea gigas:
Los tetraploides tienden a producir

gametos equilibrados, pero producen
más gametos aneuploides que los
diploides: hay tendencia a segregación
regular pero con mayor incidencia que la
aneuploidía.
24
TETRAPLOIDES: HERENCIA TETRASÓMICA
Las segregaciones geno- y fenotípicas serán diferentes de las mendelianas típicas de los organismos diploides
Los gametos producidos se deben como antes a si se da segregación cromosómica o cromatídica:
 Si el locus está próximo al centrómero los gametos formados dependen de la segregación cromosómica y no hay
recombinación
 Si el locus está alejados al centrómero los gametos formados dependen de la segregación cromátida y hay
recombinación
TETRAPLOIDÍA EN PECES
Teóricamente la tetraploidización es posible mediante la inhibición de la primera división mitótica o inhibición del 2º
corpúsculo polar de hembras diploides fecundadas por machos tetraploides (pero para obtener este tetraploide inhibo la
1º división mitótica).
 En especies de interés acuicultura, solo se obtuvieron tetraploides viables y fértiles en Onchorhynchus mykiss
(trucha arco iris), Megalobrama amblycephala y Misgurnus mizolepis (peces dulceacuícolas de Asia)
 En otras muchas especies la supervivencia de tretraploides es muy reducida
ONCHORHYNCHUS MYKISS
 La supervivencia larvaria y juvenil es muy baja respecto a diploides y triploides

 Las hembras producen huevos no reducidos
 La cabeza del espermatozoide es demasiado grande para atravesar el micrópilo del ovocito = baja capacidad de
fecundación de los machos
 Datos de crecimiento limitados e inconsistentes: tetraploides crece menos que los diploides; otros casos en los que
los tetraploides crecen igual que los diploides; o casos en los que los tetraploides crecen menos que los diploides.
MISGURNUS MIZOLEPIS
25
 No todos los machos producen espermatozoides diploides (desarrollo gonadal reducido, esperma haploide,
mosaicos)
PROPORCIÓN DE SEXOS
Las constituciones XXXX y XXYY son hembras y machos, respectivamente.
La segunda generación de tetraploides (trucha arcoíris) muestra un sesgo hacia machos debido a que los machos pueden
formar gametos XX, XY e YY. En generaciones posteriores los machos son XXXY y producen gametos en una
proporción 1 XX: 1 XY lo cual hace que la descendencia sea la mitad macho y la mitad hembra.
Las constituciones ZZWW y ZZZZ deberían ser hembras y machos, respectivamente, PERO no hay confirmación
experimental.
La hibridación interespecífica puede provocar la aparición de tetraploides.
Los alotetraploides pueden mostrar vigor híbrido: sean superiores en algún carácter con respecto a las especies
parentales.
La obtención de traploides es problemática (sobre todo en peces), pero se dedican esfuerzos para su obtención
aunque los resultados no son toda vía muy buenos.
TETRAPLOIDÍA EN MOLUSCOS
Crassostrea gigas: Obtención de tetraploides viables por tres métodos: DD+CP1; TrD+CP1; y DT+CP2
 TrD + CP1: cruzamiento de triploide por diploide normal + Inhibición de la expulsión del 1º CP.
Desventajas:
o Número reducido de hembras fértiles
o La fecundidad de las ostras triploides es extremadamente baja: reducido número de huevos porque hay un
desarrollo gonadal reducido
o Queremos triploides para que sean esteriles PERO para producir tetraploides buscamos triploides
fértiles: es una contradicción. Incremento de la fertilidad en generaciones sucesivas de cruzamientos
diploide x tetraploide
o Necesidad de pasar por triploides para introducir en tetraploides mejoras genéticas obtenidas en diploides:
tengo una línea diploide resistente a una enfermedad y quiero pasar este carácter a un tetraploide o a un
triploide, para ello tengo que hacer el triploide para obtener el tetraploide y luego cruzo el tatraploide
con el diploide. Esto en realidad es una cuestión que hay entre americanos y francés.
Este último método de producción de triploides es de patente americana. Hay otro que es francés:
 DD+CP1, DT+CP2: cruzamiento de diploide por diploide + Inhibición de la expulsión del 1º CP y se obtienen
así otros niveles de ploidía y se selecciona de aquí los tetraploides. O bien cruzamiento de tetraploide por
diploide normal + Inhibición de la expulsión del 2º CP.
o Requiere un manejo cuidadoso de las larvas tetraploides. Su uso en algunos laboratorios resultó
infructuoso
Sea por un método u otro, se pueden producir los tetraploides, PERO muestran baja viabilidad y menor crecimiento
(desarrollo lento) en el estado larvario. La tetraploidía reduce la eficacia biológica pero los adultos tienen un desarrollo
normal.
26
Tetraploide NO se quiere para le venta comercial, sino que para producir triploides.
El método TrD+CP1 empleado en C. gigas es válido para otros bivalvos (ej. Pinctada martensii, C. virginica, C.
ariakensis) pero NO es aplicable a especies donde las hembras triploides no producen huevos (= donde no hay desarrollo
gonadal. Ejemplo: Mytilus galloprovincialis, Mya arenaria, Saccostrea commercialis): debería ir al método DD+CP1.
En otras especies (ej. M. galloprovincialis, M. edulis, Tapes philippinarum) la obtención de tetraploides se abordó por
tratamiento con citocalasina B.
Se obtienen diferentes niveles de ploidía incluido tetraploides Mytilus: 18-60% de tetraploides tras tratamiento corto con
CB (3 min después de la fecundación)
En muchos casos los tetraploides no sobrepasan la etapa juvenil.
Esta de producción USA:
 Inducción de triploides por

inhibición del 1º CP o del 2º:
obtengo los triploides
 Cruzo los triploides con los
diploides + Inhibición del 1º CP =
tetraploides
Se puede expandir los tetraploides:
3N x 2N, 2N x 4N o 4N x 4N
 Estos tetraploides se reproducen con
los diploides = 100% descendencia
triploide
IMPORTANCIA DE LA
TETRAPLOIDÍA EN LA ACUICULTURA
El interés de los tetraploides radica en su uso en cruzamientos con diploides para producir 100% triploides y también para
producir otros tipos de poliploides
Ventajas potenciales de la tetraploidía
 La mayor heterocigosidad que puede conducir a heterosis

 La redundancia génica enmascara alelos recesivos y proporciona un potencial evolutivo para diversificación de la
función génica
Desventajas de la tetraploidía
 La producción de tetraploides es difícil

 Los espermatozoides diploides pueden mostrar una capacidad de fecundación reducida
 Formación de óvulos no reducidos
27
 Andrógénesis espontánea
 Mosaicismo diploide-tetraploide en diferentes órganos
 Problemas en el emparejamiento y segregación de los cromosomas homólogos puede conducir a aneuploidía
LOS TETRAPLOIDES DEBEN MANTENERSE BAJO ESTRICTA VIGILANCIA PARA EVITAR RIESGOS
POTENCIALES DE IMPACTO GENÉTICO Y AMBIENTAL
28
Tema 2: Androgénesis, Ginogénesis, Líneas clónicas y Poblaciones monosexo Aplicaciones biotecnológicas en Acuicultura
TEMA 2: ANDROGÉNESIS, GINOGÉNESIS, LINEAS CLONICAS Y POBLACIONES MONOSEXO
INTRODUCCIÓN
La ginogénesis es un tipo de reproducción uniparental en la que la descendencia hereda una dotación cromosómica de
origen exclusivamente materno.
La androgénesis se trata igualmente de reproducción uniparental pero la descendencia hereda una dotación
cromosómica de origen exclusivamente paterno.
En algunos casos raros (en peces sobre todo) puede producirese ginogénesis o androgénesis espontáneamente.
En PECES algunas especies se reproducen por ginogénesis de forma natural. Ejemplo: Poecilia formosa, ciprínido de
agua dulce de América, y carpa dorada Carassius auratus gibelio
 Producen oocitos diploides (a veces triploides) que son activados por esperma homólogo o de una especie
próxima
 El mecanismo más común por el que se producen oocitos diploides conlleva la duplicación del genoma ( antes de
la meiosis), seguido por la división normal de la célula en la que los cromosomas hermanos aparean
preferencialmente. No hay recombinación y se elude la segregación
 En C. auratus gibelio la ausencia de histoquinasas, necesarias para romper la envuelta nuclear del esperma,
impide la formación del pronúcleo masculino (= por ello la información no puede pasar a la descendencia)
En MOLUSCOS, almejas de agua dulce (Corbicula spp.) se reproducen sexualmente y por androgénesis (reproducción
asexual). En este caso los cromosomas maternos son eliminados con los corpúsculos polares y reemplazados por
fecundación con esperma no reducido.
Con esto lo que queremos decir es que hay especies que ya tiene
precedentes con estas formas de reproducción.
La primera descripción detallada de cómo manipular el origen de la dotación cromosómica en especies de peces se realizó
en 1981. Una década más tarde se obtuvieron ginogenéticos en moluscos.
La androgénesis y ginogénesis permite la obtención rápida de líneas isogénicas (individuos completamente homocigotos:
todos los genes están en homocigosis. Otro métodos para obtener esto es cruzar líneas de hermanos por al menos 20
29
generaciones pero esto implica mucho tiempo), la obtención de clones (individuos genéticamente idénticos. Pueden ser
completamente homocigóticos o no) y de poblaciones monosexo (todo macho o todo hembra).
INACTIVACIÓN DEL GENOMA
La inducción de ginogénesis y androgénesis requiere la inactivación de uno de los genomas parentales
El ADN puede destruirse mediante RADIACIÓN IONIZANTE (γ o rayos X).
Las radiaciones ionizantes generan una estela de iones que pueden iniciar diversas reacciones químicas, provocando daños
de bases y roturas de cadena simple y doble en el ADN.
Tanto la radiación γ como los rayos X tienen una alta capacidad de penetrar los tejidos celulares y fragmentar el ADN de
manera efectiva. Es el método a elegir para irradiar grandes volúmenes de esperma o huevos grandes.
Las radiaciones ionizantes tienen la desventaja de que pocos laboratorios están autorizados para tener fuentes
radiactivas: un criadero no va a tener una fuente de rayos gama o rayos X de manera que tendrá que enviar los huevos y
espermatozoide a un laboratorio lo cual encarece la técnica. El transporte hasta una fuente de radiación está limitado en
los huevos por tener solo unas horas de viabilidad.
La RADIACIÓN UV produce una descondensación de la cromatina que puede interferir con la inyección del genoma
paterno en el ovocito y dímeros de timina que inhiben la replicación de los cromosomas paternos tras la fecundación.
La radiación UV es más barata y más fácil de aplicar: se usan lámparas germicidas.
Generalmente, se emplean lámparas germicidas que emiten luz ultravioleta a 254 nm. Para evitar
la fotorreactivación (reparación del DNA) la radiación UV se aplica en obscuridad ( porque hay
enzimas que en presencia de luz eliminan los dímeros de timina).
El poder de penetración de la radiación UV es muy bajo
 Huevos y esperma deben estar diluidos y extendidos formando una fina capa
 Pueden irradiarse volúmenes grandes (hasta 10 ml) siempre que la muestra esté agitada y
refrigerada
 El uso de UV para huevos grandes hasta ahora no ha sido efectivo. Sin embargo huevos pequeños (<2 mm)
pueden irradiarse con éxito
Es el método más utilizado para irradiar el esperma
 Cuando se aplica apropiadamente, la producción de ginogenéticos obtenidos con esperma irradiado con UV es
mayor que la obtenida con esperma sometido a radiación γ
La radiación ionizante y UV en condiciones subóptimas pueden producir fragmentos cromosómicos que persistan la
descendencia ginogenética o androgenética. Los fragmentos cromosómicos interrumpen el ciclo celular, provocan
reordenaciones cromosómicas e incrementan la mortalidad: es importante usar la dosis adecuada de radiación tanto
UV como ionizante para evitar estos efectos.
30
INDUCCIÓN DE GINOGÉNESIS
Se consigue fecundando huevos con esperma al que previamente se ha inactivado su genoma.
En peces los ovocitos liberados en la puesta están en metafase 2 hasta el momento de la fecundación. Si fecundamos con
esperma irradiado obtenemos un citogenético haploide que es inviable (viable solo hasta un estadio muy temprano del
desarrollo) por lo que podemos bloquear la 1º división mitótica para obtener un citogenético diploide
(MITOGINOGENÉTICO o DOBLE HAPLOIDE). Este ginogenético tiene material genético solo materno y todos los
genes están en homocigosis.
31
Otra manera para producir ginogenéticos es bloqueando la extrusión del 2ºCP. En este caso obtenemos un ginogenético
diploide (MEIOGINOGENÉTICO) en el cual el material genético es todo materno PERO hay genes que están en
heterocigosis.
La producción de ginogenéticos vía bloqueo de la primera división mitótica es más dificultosa que la producción de
ginogenéticos por retención del segundo corpúsculo polar: son más viables los MEIOGINOGENÉTICO que los
MITOGINOGENÉTICO.
En MOLUSCOS, la diploidía puede restaurarse teóricamente inhibiendo la expulsión del primer o segundo corpúsculo
polar o bien la primera división mitótica PERO ya vimos que la inhibición de la primera división mitótica no funciona.
EN la mayoría de los casos se inhibe la extrusión del 2ºCP.
 En la mayoría de los casos se inhibe la expulsión del segundo corpúsculo polar

 La inhibición de las meiosis I y II produce ginogenéticos tetraploides
 Los intentos de suprimir la primera división mitótica resultaron infructuosos
Para asegurar que esperma genéticamente viable no fecunda al huevo y produce diploides normales, puede irradiarse
esperma de una especie próxima (uso esperma de otra spp inactivado para poner más obstáculos a la transmisión del
material genético paterno) y utilizarlo para activar la división celular.
Los valores de supervivencia normalmente están por debajo del 10% del valor de los controles no tratados. Las
principales causas de la reducción en la tasa de supervivencia son:
 El estrés que provoca el choque de la diploidización

 La homocigosis de alelos recesivos deletéreos: explica porque los MEIOGINOGENÉTICO son más viables que
los MITOGINOGENÉTICO ya que los MEIOGINOGENÉTICO estaban en heterocigosis.
La baja tasa de supervivencia impide la producción de ginogenéticos a gran escala: NO se usa para la producción
comercial pero si se usan como reproductores
Ejemplo de citogenéticos de peces.

32
En la mayoría de los casos se usó
radiación UV.
INDUCCIÓN DE ANDROGÉNESIS
Se han diseñado diferentes protocolos para la activación del huevo
HUEVOS CON GENOMA INACTIVADO + ….
 Esperma haploide y supresión de la primera división mitótica. Uso huevo con genoma inactivado, fecundado
con genoma haploide y luego hago una inhibición de la 1º división mitótica.
Ej. Oncorhynchus mykiss, Oreochromis niloticus, Cyprinus carpio
 Esperma haploide de otra especie y supresión de la primera división mitótica. Puedo usar esperma de spp ≠
Ej. Carasius auratus usando huevos de Cyprinus carpio y Puntius conchonius con huevos de P. tetrazona
SIN DIPLOIZACIÓN: NO tenemos que hacer un choque térmico para dar una duplicación de la dotación cromosómica
por lo que se espera que estos métodos den mejores resultados.
 Activación dispérmica. La incubación del esperma con polietilenglicol (PEG) o cloruro cálcico facilita la
entrada de dos o más espermatozoides en el huevo.
Ej. esturión pigmeo Acipenser ruthenus, Oncorhynchus mykiss
 Esperma diploide.
Ej. Oncorhynchus mykiss. Esperma de machos Tetraploides: Si tengo tetraploides, puedo usar el esperma del
tetraploide para fecundar ovocito inactivado.
 Esperma híbrido no reducido.
Ej. Huevos de Carasius auratus fecundados por esperma de híbridos alotetraploides Carasius auratus x Cyprinus
carpio
La androgénesis es más difícil de inducir que cualquier tipo de ginogénesis. Teóricamente, la radiación de los huevos
puede producir mutaciones en el ADN mitocondrial, ARNm citoplasmático o producir daños en el citoplasma que
afecten al desarrollo o viabilidad de los androgenéticos.
33
En general la supervivencia es baja debido:
 al daño que conlleva la radiación para inactivar el genoma del huevo y el estrés que provoca el choque de la
diploidización
 a la homocigosis de alelos recesivos deletéreos
La viabilidad de peces androgenéticos:
 obtenidos con radiación γ o rayos X tiene menor viabilidad que la de los obtenidos con radiación UV
 obtenidos con esperma diploide producido machos tetraploides (ej. trucha arcoíris) > obtenidos con esperma
haploide > obtenidos por activación dispérmica
Para aumentar la supervivencia, además de eliminar la diploidización, se ha empleado esperma diploide relativamente más
homocigoto: líneas que se han cruzado ya mucho entre si las generaciones y se han ido eliminando los individuos que
presentaban alelos recesivos deletéreos, es decir usar poblaciones muy cruzadas entre ellas y en las que ya se ha ido
purgando la población más homocigota con mayor proporción de alelos recesivos deletéreos.
La baja tasa de supervivencia impide la producción de androgenéticos a gran escala.
INDUCCIÓN DE ANDROGÉNESIS SIN RADIACIÓN
Misgurnus anguillicaudatus: choque frío (0ºC y 3ºC) durante 60 min justo después de la fecundación induce un
desarrollo androgenético haploide a frecuencias relativamente altas (>30% en larvas): choque frio provoca que se
eliminen los cromosomas del gameto femenino con el corpúsculo polar y así se queda solo el pronúcleo masculino dando
lugar a un androgénico haploide que NO es viable, PERO usando esperma 2N si se obtienen andorgenéticos diploides.
Presumiblemente, el núcleo del huevo es extruido con el segundo

cuerpo polar por el tratamiento de choque en frío.
El núcleo del espermatozoide se transforma en pronúcleo masculino

e inicia el desarrollo androgenético.
Utilizando esperma 2N se obtuvieron androgenéticos diplodes
Método aplicado a Paralichthys olivaceus (lenguado japones) y

Cyprinus carpio restaurando la diploidía con choque de presión y
choque caliente, respectivamente.
Nueva vía que es de interés porque evita el uso de la radiación.
MÉTODOS DE DETECCIÓN DE GINOGENÉTICOS Y ANDROGENÉTICOS
GINOGENÉTICOS Y ANDROGENÉTICOS HAPLOIDES
 Cariotipado, verificando que poseen la mitad del número de cromosomas de los diploides
 Contaje de NORs
 Citometría de flujo (contenido de ADN)
 Síndrome haploide: morfología externa característica (ej. columna vertebral doblada y corta, ojos acromáticos,
saco vitelino deformado)
34
Embriones y larvas de rodaballos normales y cinogenéticos haploides: los cinogenéticos tienen morfología alterada
como por ejemplo columna vertebral alterada y saco vitelino alterado = NO son viables.
GINOGENÉTICOS Y ANDROGENÉTICOS DIPLOIDES
MARCADORES GENÉTICOS
No puedo contar los cromosomas o el número de nucleolos o el contenido de ADN porque son diploides (normales)
aunque vengan de un solo progenitore: USO MARCADORES GENÉTICOS.
Deben tener un número de cromosomas idéntico al de los diploides, pero es preciso demostrar la herencia exclusivamente
materna o paterna.
La condición de ginogenéticos o androgenéticos diploides puede inferirse a partir de marcadores genéticos. PERO PARA
MUCHAS ESPECIES NO SE CONOCEN MARCADORES GENÉTICOS.
En algunas especies se dispone de marcadores fenotípicos (ej. carpas, tilapia, barbos) pero para otras muchas especies no
se han identificado.
MARCADORES MOLECULARES:
MICROSATÉLITES
35
Se analizan en un secuenciador automático: deben tener solo alelos maternos o paternos según si son ginogenéticos o
androgenéticos.
Cromatograma de un locus microsatélite de Solea senegalensis. Genotipos de parentales y descendientes ginogenéticos.
Los microsatélites deben localizarse en regiones teloméricas y cubrir diferentes grupos de ligamiento, especialmente en el
cribado de mitoginogenéticos ya que puede haber loci heterocigotos en las regiones teloméricas de meioginogénéticos.
Para poder distinguir entre MEIOGINOGENÉTICO y MITOGINOGENÉTICO convienen utilizar marcadores

próximos al centrómero porque los MITOGINOGENÉTICO porque tendrían que tener únicamente un único pico
(homocigótico), un único alelo, mientras que los MEIOGINOGENÉTICO va a tener varios picos (heterocigótico).
Obviamente debemos usar marcadores que sean muy polimórficos para que el genotipo de machos y hembras que usemos
tengan alelos distintos porque si el macho y la hembra comparten alelos no podemos diferenciar la descendencia es decir
si son androgénicos o citogenéticos.
MARCADORES MOLECULARES: ADN POLIMÓRFICO AMPLIFICADO AL AZAR (RAPDS)
RAPDS es un marcador que se basa en la amplificación de fragmentos

de ADN. Se hace una PCR con un único cebador corto de 8-10
nucleótidos este hibrida en distintos puntos. Si hibrida en regiones
repetidas e invertidas y que están a una distancia que es amplificable
por PCR, esto va a generar una banda y que se va a generar en varias
partes del genoma dando lugar a un patrón de múltiples bandas. Cada
banda es un marcador RAPDS y representa un locus. Lo que tiene este
método es que es muy sencillo de hacer porque solo hay que hacer
extracción del ADN y amplificación (microsatélite es más complicado y
más costoso).
Marcador basado en la PCR en el que se amplifican segmentos anónimos de ADN empleando un solo cebador de 8-10 pb
(GC > 50%).
La amplificación tiene lugar entre secuencias repetidas e invertidas complementarias al cebador.
Al emplearse cebadores cortos y bajas temperaturas de annealing (35-40ºC) hay una probabilidad elevada de que se
generen múltiples productos. Presuntamente cada producto representa un locus diferente.
Marcadores dominantes: imposibilidad de diferenciar homocigotos de heterocigotos.
Se discute un poco la reproducibilidad de la técnica porque se usan Tº de hibridación bajas por lo que el cebador puede
hibridar en múltiples sitios muchas veces aunque no haya una complementariedad perfecta con el ADN molde por lo que
hay que hacer la pruebas en condiciones muy estrictas.
36
Identificación de carpas androgenéticas (esperma de Carassius auratus y huevos de Cyprinus carpio)
La
descendencia androgénica tiene bandas exclusivamente paternas.
H: ADN de la madre
P: son los ADN de los padres
DP: son los ADN de la descendencia de cada padre.
Las bandas de los DP deben coincidir solo con las bandas dl respectivo padre, no con el de la madre, con la excepción de
las secuencias comunes tanto al padre como a la madre.
MARCADORES MOLECULARES: POLIMORFISMOS DE LONGITUD DE FRAGMENTOS AMPLIFICADOS

(AFLPS)
Marcador basado en la amplificación selectiva de fragmentos de restricción

obtenidos de ADN genómico.
Se extrae ADN del individuo, se digiere con 2 enzimas de restricción (uno de

corte frecuente y otra de corte menos frecuente) y los productos de la digestión
se añaden unos adaptadores que llevan en un extremo una secuencia que va a
hibridar a uno de los sitos de restricción y en otro extremo pasa lo mismo pero
el adaptador será complementario a otro sitio de restricción.
En la secuencia de los adaptadores va un sitio para la hibridación de un

cebador pero este cebadores tiene bases selectivas: de todos los fragmentos
que se han formado solo se van a amplificar los que puedan combinar con el
cebador es decir los que lleven el adaptador: de todos los fragmentos que se
forman con la digestión SOLO se amplifica una parte. Esto es para evitar que
el patrón de bandas sea muy grande y no se puedan separar los fragmentos.
37
Esta técnica es más reproducible que la RAPDS PERO no en esta técnica no podemos distinguir los homocitos de los
heterocigotos (marcadores dominante).
Amplificación de múltiples fragmentos
Marcadores dominantes.
Los progenitores se analizan para

identificar bandas variables (diagnóstico)
entre machos y hembras. La progenie se
analiza en base a las bandas diagnóstico.
Por ejemplo, en ginogénesis se busca la
ausencia de bandas macho-específicas.
Buscamos que la descendencias

cinogenética NO tenga bandas que sean
especifica del macho.
Todo esto es útil para las spp que no

tengamos desarrollados los microsatélites.
MARCADORES MOLECULARES:
POLIMORFISMO DE UN SOLO
NUCLEÓTIDO (SNP)
Estos tienen la ventaja de que son muy

abundante en el genoma.
Hoy en día se identifican por técnicas

de secuenciación masiva.
Técnica MUY COSTOSA.
Las tecnologías de secuenciación de

nueva generación (NGS) posibilitan el
descubrimiento y la detección
simultánea de un número elevado de
SNPs. Esto permite evaluar con mayor
precisión la eficacia de los procesos de
manipulación cromosómica.
38
APLICACIONES DE LA GINOGÉNESIS
 Producción de poblaciones monosexo en especies con hembras homogaméticas: Cuando la hembra es el sexo
homogamético, los ginogenéticos meióticos y mitóticos serán todos hembras
 Mapeo de genes en relación a los centrómeros: objetivo es determinar la posición relativa de un gen con respecto a
otro. Usamos los citogenéticos para mapear genes en relación al centrómero (distancia de estos genes con respecto
al centrómero). Si bloqueo el 2CP me quedo con las 2 cromátidas de un cromosoma entonces si uso una hembra
heterocigota para obtener los meiocinogenéticos, la descendencia homocigota de esta hembra por citogenética me
indica los individuos donde NO ha habido entrecruzamiento mientras que la descendencia heterocigota me indica los
individuos donde SI ha habido entrecruzamiento. En base a la proporción de la descendencia heterocigota puedo
calcular la frecuencia de hibridación entre el locus y el centrómero es decir al frecuencia de segregación. La
distancia la calculamos con la frecuencia de hibridación que es la mitad de la frecuencia de entrecruzamiento.
o El análisis de dos de las cuatro cromátidas de una división meiótica (medias tétradas) después de inhibir la
meiosis II en el parental femenino permite conocer la posición de un marcador respecto al centrómero.
o Si la hembra es heterocigota para un marcador concreto, los gametos serán homocigotos en ausencia de
entrecruzamiento entre el centrómero y el marcador o heterocigotos si se produce un entrecruzamiento en la
meiosis 1.
o La proporción de descendencia heterocigótica es una medida de la frecuencia de segregación en la meiosis II (y).
o La distancia en centimorgans entre el centrómero y el marcador puede calcularse como 100(1/2)y, asumiendo
interferencia completa (= solo 1 entrecruzamiento por brazo). Otras fórmulas desarrolladas asumen 50% de
interferencia o ausencia de interferencia.
 Esclarecimiento de los mecanismos de terminación del sexo
o Sistemas XX-XY y XX-X0. Los ginogenéticos meióticos y mitóticos serán TODOS HEMBRAS
En especies con un sistema XX-XY a menudo la ginogénesis resulta en la aparición de un porcentaje variable
de machos ginogenéticos. Esto puede ser debido a la existencia de genes determinantes del sexo en los
autosomas o a la presencia de otros factores como la temperatura o interaciones genotipo- ambiente pueden
modular el sexo fenotípico
o Sistemas ZZ-ZW. Ginogénesis MITÓTICA

 Homocigotos WW viables: igual número de machos ZZ y hembras WW
 Homocigotos WW no viables: descendencia solo machos
o Sistemas ZZ-ZW. Ginogenéticos MEIÓTICOS de varios tipos:

 Depende de la posición del locus de determinación del sexo ligado al centrómero.
o Se producirán cigotos ZZ o WW en igual proporción.
o Si los individuos WW no son viables sólo se producirá descendencia masculina
 Locus de determinación sexual NO estrechamente ligado al centrómero. La recombinación puede
producir cromátidas ZW en cada cromosoma. En ausencia de efectos letales (WW viables. Si WW no
fuera viable la interpretación sería más compleja), la proporción de sexos será:
o Esencialmente 50% hembras, en el caso de muy poca recombinación (todos ZZ o WW)
o Entre 50 y 100% hembras, si se produce algo de recombinación (ZZ y WW en igual proporción y
ZW en el resto)
o 100% hembras ZW, si siempre se produce recombinación
APLICACIONES DE LA ANDROGÉNESIS
39
 Recuperación de peces de bancos germoplasma

Los genomas de peces pueden conservarse mediante la crioconservación de esperma y ser recuperados por
androgénesis usando huevos con genoma inactivado de otra especie.
o Práctica útil en especies en peligro de extinción o incluso extinguidas
o La crioconservación de esperma diploide obtenido de machos tetraploides permite recuperar genotipos
diploides heterocigotos.
 Producción de supermachos YY en especies con machos heterogaméticos
La androgénesis diploide generada por supresión de la primera división mitótica produce descendencia 50% XX y
50% YY (supermachos).
En algunas especies los machos YY son viables (ej. carpa dorada, medaka, salmón coho o plateado): Los machos YY
tienen el potencial de producir descendencia todo machos al cruzarse con hembras normales (XX).
 Producción de poblaciones monosexo en especies con machos homogaméticos
La androgénesis genera descendencia constituida exclusivamente por macho.
 Esclarecimiento de los mecanismos de terminación del sexo
o Sistemas XX - XY: el esperma puede portar el cromosoma X o Y, produciendo hembras XX y machos YY tras la
diploidización por choque físico.
o Si el macho es el sexo homogamético (ZZ), la androgénesis genera descendencia constituida exclusivamente por
machos.
 Reproducción durante todo el año de especies con una puesta anual
Pueden emplearse huevos con genoma inactivado de una especie que se reproduzca todo el año y esperma de la
especie con puesta anual
Los MITOGINOGENÉTICOS y los ANDROGENÉTICOS (obtenidos por supresión de la primera división mitótica)
son útiles en proyectos de secuenciación_ La homocigosis facilita la computación del ensamblaje de genomas (el
proceso de ensamblaje es muy complejo, pero como los homocigotos es más fácil porque no hay variaciones que pueden
crear ruidos y variaciones en la secuencia por variaciones alélicas).
POBLACIONES MONOSEXO
Las poblaciones monosexo son deseables en la acuicultura por varias razones
 Existencia en muchos casos de dimorfismo sexual para caracteres de interés (ej. crecimiento, maduración
sexual o resistencia a enfermedades)
 Impedir la reproducción en situaciones no deseadas (ej. introducción de especies exóticas, cultivo de híbridos
fértiles)
40
Pueden producirse poblaciones monosexo por tratamiento con hormonas. El sexo genotípico se establece en el
momento de la fecundación, pero el sexo fenotípico se establece más tarde en el desarrollo y puede alterarse mediante la
administración de estrógenos o andrógenos. El incremento de la hormona apropiada durante el periodo de diferenciación
sexual es suficiente para dictar el sexo del individuo.
La reversión del sexo no siempre es efectiva al 100% y en algunas especies no se consigue o puede ser dificultosa. La
comercialización de peces tratados con hormonas NO está permitida en algunos países (ej. países de la UE).
Interesa obtener lotes de progenitores que generen naturalmente poblaciones monosexo cuando se apareen.
La producción de poblaciones monosexo requiere tener un conocimiento básico del mecanismo de determinación del sexo
y cumplir dos requisitos: posibilidad de invertir el sexo y que los individuos con sexo invertido sean fértiles.
NO funciona en todas las especies, hay que ver en cada caso.
Factores a tener en cuenta:
 Químico: Se han descrito más de una veintena de químicos que producen reversión sexual: esteroides,
antagonistas de receptores de esteroides, inhibidores de esteroides
 Método de administración: Inmersión/ o incluido en la dieta
 Concentración
Depende de la especie y del
tamaño/edad de la
41
diferenciación sexual
 Momento en que se inicia el tratamiento: Antes de los primeros signos de diferenciación morfológica de la
gónada
 Duración del tratamiento
PRODUCCIÓN DE SOLO HEMBRAS EN SISTEMAS XX-XY
Combina la cinogenésis y el tto hormonal.
Fecunda con esperma irradiado y provoca un choque: descendencia es

100% cinogenética y toda hembra y asumimos que la sobrevivencia es
baja debido a la cinogenética. Estos individuos, antes de la madurez
sexual, se tratan con un andrógeno de manera que vamos a tener
NEOMACHOS CINOGENÉTICO: genéticamente hembras XX pero
fenotípicamente machos.
Estos neomachos se cruzan con hembras normales = descendencia

TODO HEMBRA. Estas hembras NO se trataron con hormonas, se
trataron sus padres.
Una parte de estas hijas se vuelven a tratar con andrógenos para obtener
otros reproductores neomachos.
42
Cruzamiento normal macho y

hembra y tratamos la
descendencia con andrógenos:
descendencia va a ser
fenotípicamente TODO macho,
pero algunos serán XX y otros
XY.
Para diferenciarlos puedo usar

un marcador molecular o, sino
no lo tengo, hago una prueba de
progenie: miro a la descendencia
cruzando estos machos con
hembras normales: si salen todos
hembras su padre es un
neomacho XX.
Una vez que tengo los neomachos los cruzo con hembras normales obtengo todo hembra XX y una parte se vuelve a
tratar con andrógenos para reponer la población de neomachos padres.
Estos esquemas se están usando en la actualidad y funciona.
43
En trucha quiero hembra porque la hembra crece más que los machos.
En los casos que quiero impedir la propagación de la spp en el medio natural lo que hago es producir todo hembra y
además triploide: si evito la extrusión del 2ºCP obtengo todo hembra y triploide. Esto es lo que se hace en USA y
Canadá para el salmón transgénico.
PRODUCCIÓN DE SOLO MACHOS EN SISTEMAS ZZ-ZW
Es lo mismo que antes, pero con el

modelo ZZ y ZW.
NO se aplica a escala comercial porque

no funciona muy bien.
PRODUCCIÓN DE SOLO MACHOS

EN SISTEMAS XX-XY
Esquema de producción aplicado a la tilapia del Nilo.
Tratamos con estrógenos los individuos sin diferenciar

sexualmente para obtener hembras XY.
Hago un test de progenie para identificar las hembras XY

y luego las cruzo con machos normales y obtengo:
machos YY, XY y XX.
Hago otro test de progenie para identificar los machos YY

y estos los cruzo con hembras XY, trato la descendencia
con estrógenos y obtengo hembras XY e hembras YY.
Identificamos las hembras YY con test de progenie y ya

tenemos un stock de reproductor de hembras y machos YY
que al cruzarse entre si me darán todo macho YY. Esto los
cruzo con hembras normales para que me den
descendencia TODO macho.
44
Es un programa largo con varias generaciones PERO que una vez que tengo el stock reproductor de hembras y machos
YY, al tratar con estrógenos los machos YY obtengo las hembras YY progenitores.
Producción de supermachos YY y todo machos XY

en Pelteobagrus fulvidraco (especie de acuicultura
comercial en China)
Demostración de que los machos y las hembras

YY son viables y fértiles
Consiguen los machos YY: cruzamiento normal >

reversión sexual > selección de las hembras XY y
estas se tratan con ginogénesis mitótica = machos
YY.
PRODUCCIÓN DE PORTADORES DE
CROMOSOMAS SEXUALES TROYANOS PARA EL
CONTROL DE ESPECIES EXÓTICAS
INTRODUCIDAS
Un elemento genético troyano es algo de un gen o

cromosoma que tiene el potencial de modificar las
características demográficas de la población es decir la
proporción de sexo.
Puedo conseguir hembras YY que si se liberan en el

medio se cruzan con machos XY = machos XY y machos
YY (descendencia SOLO macho): lleva al colapso de la
población porque no hay hembras y la spp no se puede
reproducir.
45
Se puede obtener con tratamiento de individuos con estrógenos directo (= libero el individuo tratado aquí).
Otra estrategia es liberar individuos que derivan de animales tratados con hormonas, no tratados directamente.
NO se ha usado esta técnica en el medio aún porque no se sabe que consecuencias puede tener en el medio.
Elementos genéticos troyanos: tienen el potencial de cambiar la demografía de una población
Teóricamente, la introducción repetida de hembras YY en la población exótica conduce a un

sesgo extremo en la proporción de sexos hacia machos, con la consiguiente desaparición de
hembras, provocando el colapso de la población
Descendencia todo machos XY al aparearse con hembras XX o todo machos YY (al

aparearse con hembras YY (introducidas).
Hasta ahora no se han liberado portadores de cromosomas sexuales troyanos en poblaciones naturales. Las
consecuencias demográficas y genéticas no se conocen bien.
PRODUCCIÓN DE LÍNEAS
CLÓNICAS/ISOGÉNICAS
Líneas clónicas constituidas por

individuos completamente
homocigóticos. Se puede obtener por una
cinogénesis mitótica o por androgénesis.
Cinogénesis mitótica: me da
cinogéneticos diploides homocigóticos
PERO puede que no sean homocigóticos
por los mismos genes. Si estos los trato
46
con cinogénesis meióticas, sus descendientes si que son todos iguales, clones. Para mantener la línea clónica puedo
hacer una nueva ronda de cinogénesis o bien producir reversión sexual en algunos y dar lugar a neomachos que si se
cruzan con hembras me dan nuevos clones.
En el caso de la androgénesis por ovocitos fecundados con esperma haploide e inhibición de la 1º división mitótica:
obtengo androgénicos diploides que serán hembras XX o machos YY. Si trato las hembras XX con cinogénesis meiótica
obtendré clones homocigóticos XX mientras que si trato los machos YY con androgénesis obtengo los clones
homocigóticos YY. Como antes para mantener la línea puedo hacer reversión sexual de algunos individuos.
Obtención de clones en lenguado japones.
Hacen una cinogénesis obteniendo MITOCINOGENÉTICOS doble haploide > reproducción inhibiendo la eliminación
del 2ºCP = primera generación de clones. Mediante otra cinogénesis se obtiene otra generación.
PRODUCCIÓN DE HETEROCLONES
Heteroclones se obtienen cruzando

individuos de dos lineas clónicas
distintas.
Los clones heterocigotos se espera que

tengan vigor hibrido.
Estos estos heteroclones se pueden

someter a cinogénesis o androgénesis y
obtener clones recombinantes.
47
Los clones heterocigótos muestran mayor tasa de supervivencia, crecimiento y resistencia a enfermedades que los clones
homocigotos
Los clones homocigotos (fijados para características específicas) son útiles como progenitores y los clones heterocigotos
para la acuicultura comercial.
PRODUCCIÓN DE LÍNEAS CLÓNICAS
48

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Tema 1.

1: Poliploidía inducida Aplicaciones biotecnológicas en Acuicultura

TEMA 1.1: POLIPLOIDÍA INDUCIDA

En acuicultura tiene interés la tecnología de triploides y tetraploides.

La poliploidía ha estado implicada en la evolución de

En el caso de los peces, se sabe qe los teleósteos

Incluso en bivalvos se cree que ha habido duplicación del genoma. Evidencias:

 Procesos de poliploidización en bivalvos dulceacuícolas (familia Sphaeriidae)

Indicativo que tanto en peces como moluscos toleran la

Cariotipo de un mejillón de Galicia. Vemos que es un individuo

Lo mismo se observa en el segundo cariotipo de una ostra.

Indicios de que la triploide es tolerable.

¿Cómo se produce un poliploide? Los poliploides pueden

 Alteraciones en los procesos de meiosis o mitosis de una especie

o Supresión de la primera y/o segunda división meiótica

Ejemplo. Squalius alburnoides (calandino), ciprínido endémico de la Península lbérica.

Estos individuos pueden reproducirse de diferentes formas:

 Hibridogénesis: modo de reproducción bisexual caracterizado por la exclusión de un genoma parental y

¿Cómo se pueden inducir poliploides?

A. INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA POR MÉTODOS FÍSICOS

La presión lo que hace es impide la extrusión de corpúsculos polares: Desorganiza los

Someter los ovocitos fecundados a cambios bruscos de temperatura.

 Desorganiza los microtúbulos del huso mitótico/meiótico

LOS MÉTODOS FÍSICOS SE USAN SOBRE TODO EN PECES

B. INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA POR MÉTODOS QUÍMICOS

1. CITOCALASINA B (ALCALOIDE FÚNGICO)

3. OTROS (CAFEÍNA, COLCHICINA, NOCODAZOL)

Afectan también a la formación de los microtúbulos.

LOS MÉTODOS QUÍMICOS SE USAN SOBRE TODO EN MOLUSCOS

INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA POR MÉTODOS FÍSICOS Y QUÍMICOS

Las variables que más influyen en la efectividad de los tratamientos son:

 Momento (después de la fecundación) de aplicación: cunado debemos aplicar el tratamiento es clave

LAS CONDICIONES ÓPTIMAS DEPENDEN DE CADA ESPECIE

OBTENCIÓN DE POLIPLOIDES EN PECES

En peces el ovocito liberado en la puesta está

Lo que debemos hacer es aplicar el choque justo

Momentos tras la fecundación en los que

OBTENCIÓN DE POLIPLOIDES EN MOLUSCOS

Oocitos liberados en la puesta pueden estar en PROFASE 1 O METAFASE 1 según la especie.

Momentos tras la fecundación en

De normal para saber cuándo aplicar el tratamiento, tendremos dos grupos:

Cuando se bloquea el 1º corpúsculo polar se obtienen triploides, PERO se

Si impedimos la extrusión del 1º corpúsculo polar los cromosomas homólogos

OTROS MÉTODOS DE INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA

COMBINACIÓN DE CRUZAMIENTOS INTERPLOIDES Y MÉTODOS FÍSICOS O QUÍMICOS

En un triploide tenemos la idea que es

También se pueden obtener

Los tetraploides no interesan porque al

Produccion de poliploides en el dojo Misgurnus anguillicaudatus

Puede provocar cambios en el nivel de ploidía por hibridación interespecífica.

En este caso hibridan distintas especies de carpa que dan hídricos

En este otro ejemplo, la F1 son

Otro ejemplo es con S. salar y S. trutta,

El cruzamiento de 2 especies da individuos con

La hibridación puede disparar mecanismos

DETERMINACIÓN DEL NIVEL DE PLOIDÍA

 Es el método más directo

Al aumentar la ploidía aumenta el número de regiones organizadoras del nucleolo (NORs)

Los NORs se detectan con tinción de nitrato de plata que

 En especies con NORs en más de un par cromosómico su uso presenta dificultades

Técnica de análisis celular que consiste en hacer

Problema: en los criaderos no suelen tener un

 Es posible analizar cientos de individuos en un día.