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INTRODUCCION
El cultivo de tejidos se desarroll a partir de los ltimos aos del siglo XIX como una continuacin de las tcnicas de la embriologa. Wilhem Roux mantuvo en el ao 1885 clulas de embrin de pollo en solucin salina durante unos das. El zologo americano R.G. Harrison es considerado el iniciador de los cultivos de tejidos animales, en 1907. En los ltimos aos la aplicacin de la tecnologa del cultivo celular ha permitido grandes avances en la comprensin de los mecanismos implicados en los procesos intracelulares e intercelulares.
Cultivo Celular:
Los cultivos de clulas in vitro consisten en un sistema formado por : cl. provenientes de un rgano o un tejido, normal o tumoral, mantenidas en medios de cultivo de composicin qumica definida y en condiciones de temperatura, pH, aireacin y humedad controladas. De esta forma se aseguran su supervivencia y multiplicacin, manteniendo todas sus funciones metablicas de una manera semejante a las que tenan en el husped.
Aislamiento Viral:
Ventajas:
Control del medio fisicoqumico: pH, t, pr. Osm., tensin de O2 y gas carbnico (CO2) de las cl. cultivadas y, las condiciones fisiolgicas que deben ser constantes. Los cultivos de clulas permiten someter a las mismas a una baja y definida [ ] de reactivos asegurando un acceso directo en ellas, lo que ahorra en un 90% lo requerido para la inyeccin del reactivo in vivo, su excr. y su posterior distribucin a los tejidos en estudio. Permiten el estudio del transporte y la utilizacin de metabolitos.
AISLAMIENTO VIRAL
Desventajas:
Requiere das a sem. para la obtencin del rtdo. Requiere niveles de seguridad 2,3 o 4. Frecuentemente tienen baja sensib. lo que depende en gran medida de la cond. muestra. Susceptible de contam. bact. y de sust. txicas.
Cultivo Celular
Directo
Indirecto s
Cl. Primarias: Tej. Animales (tripsina). Cl. Secun. : Cl. Prim. subcultivados varias veces (misma constitucin cromosmica que el de origen y capaces de un nmero de subcultivos limitado). Lneas Semicontinuas: Cl. embrionarias, configuracin cromosmica diploide y no se subcultivan indefinidamente.
Alt. en n
PRIMER PASO A SEGUIR: La 1era decisin a tomar es saber que lneas celulares vamos a emplear. Cuanto ms rpido es la aparicin del efecto citoptico (CPE) ms rpido es el diagnstico.
LINEA CELULARES
TEJIDO DE ORIGEN
VIRUS QUE PUEDEN SER AISLADOS EN CADA TIPO CELULAR Herpes simplex, Enterovirus, Poliovirus, Adenovirus. Herpes y Adenovirus bovino, estomatitis vesicular. Influenza, Adenovirus
BHK-21
HeLa
Rin de hamster
Carcinoma de cervix humano Cel. Tumorales pulm humanas. Cel. Rion mono
A-549
BGM
MEDIOS DE CULTIVO...
MEM
Medio de crecimiento
Medio de mantenimiento
Medios selectivos
Medios de congelacin
Requerimiento Mnimo
MEM
MEM
Tipo de clulas
MEM
10-15%
2% SFB
50% SFB
SFB
Intervalo de subcultivos
Crecimiento utilizacin
8% dimetil sulfoxido
Oxigeno Agua
Vitaminas
A.A. Suero
Aminocidos
Vitaminas
Sales
Otros compuestos*
Arginina Cistena Glutamina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Treonina Triptofano Tirosina Valina
Cuando esta presente en cultivos celulares, no siempre resulta en alteraciones microscpicas de las clulas o del medio; muchas infecciones crecen lentamente y pueden tener los siguientes efectos:
Uninfected cell cultures and cell cultures showing CPE of viruses commonly isolated. (A) Uninfected A549 cells; (B) HSV-2 in A549 cells; (C) adenovirus in A549 cells; (D) uninfected MRC5 fibroblasts; (E) CMV in MRC-5 fibroblasts; (F) rhinovirus in MRC-5
Detection of HSV-1 and HSV-2 in ELVIS cells. (A) Blue cells positive for HSV with X-Gal stain; (B) immunofluorescence of uninoculated ELVIS cells; (C) HSV-1positive ELVIS immunofluorescence (note nuclear pattern); (D) HSV-2-positive ELVIS immunofluorescence
CONCLUSIONES: