R O B IOLOG

M IC ÍA

ELISA
INDIRECTA
DRA. NORKA ORIHUELA

CARDOZO BRANDON
PAZ GABRIEL
VARGAS NAYRA
YANOC ANYELY
 UNDAMENTO
F
FUNDAMENTO
ES UN MÉTODO QUE PERMITE
LA CUANTIFICACIÓN DE UN
MARCADOR DE INTERÉS EN UNA
MUESTRA BIOLÓGICA. DICHO
MARCADOR PUEDE SER UN
ANTICUERPO, UNA HORMONA,
UN PÉPTIDO O UNA PROTEÍNA.
PARA PODER IDENTIFICAR LOS ANTÍGENOS
SE UTILIZAN MOLÉCULAS CON DOS
COMPONENTES ACOPLADOS:
UN ANTICUERPO: SE UNE AL ANTÍGENO DE
FORMA ESPECÍFICA
UNA ENZIMA: SE ACTIVA Y SEÑALA LA UNIÓN
AL ANTÍGENO

ES LLAMADA "INDIRECTO" YA QUE LOS

ANTÍGENOS SE MIDEN INDIRECTAMENTE
MEDIANTE EL USO DE ANTICUERPOS
SECUNDARIOS EL CUAL ESTÁ CONJUGADO
CON LA ENZIMA.
 DIFERENCIAS
ELISA DIRECTO
ELISA INDIRECTO
ANALIZA LA RESPUESTA DETERMINA LA CONCENTRACIÓN DE
INMUNE A UN DETERMINADO ANTICUERPOS EN UNA
ANTÍGENO DETERMINADA
REQUIERE SOLO INCUBACIÓN MUESTRA
CON EL ANTICUERPOS REQUIERE INCUBACIÓN CON EL
PRIMARIO ANTICUERPOS PRIMARIO Y
MÁS ESPECÍFICO SECUNDARIO
MENOS ESPECÍFICO
 MO SE REALIZ
CÓ A
 1. FIJACIÓN DE LOS ANTÍGENOS A LA PLACA

• LLENAR LOS POCILLOS CON LOS ANTÍGENOS PREPARADOS

• INCUBAR EN CONDICIONES ADECUADAS.
• SE ELIMINAN ANTÍGENOS RESTANTES CON LAVADOS.
2. BLOQUEO DE POCILLOS

• RELLENAR ESPACIOS DONDE NO SE FIJARON LOS

ANTIGENOS.
• EVITA MOLÉCULAS NO ESPECÍFICAS EN PRÓXIMAS
INCUBACIONES.
• SE USA SUERO DE ALBUMINA BOVINA.

3. INCUBACIÓN DE LA MUESTRA:

• SE AGREGA LA MUESTRA DE SUERO DEL PACIENTE.

• SE INCUBA EL TIEMPO NECESARIO.
• LOS ANTICUERPOS SE UNIRÁN ESPECIFICAMENTE A
LOS ANTIGENOS Y SE FIJARAN EN LA SUPERFICIE.
 4. LAVADOS:

• SE REALIZAN 3 LAVADOS PARA ELIMINAR

TODO LO QUE NO SE HA UNIDO A LOS
ANTÍGENOS DE LA PLACA

5. INCUBACIÓN DEL ANTICUERPO

SECUNDARIO:

• EL ANTICUERPO ESTÁ CONJUGADO CON UNA ENZIMA

O MARCADOR.
• SE UNE A LOS INMUNOCOMPLEJOS FORMADOS.
6. LAVADOS:

• SE REALIZAN 3 LAVADOS PARA

ELIMINAR EL CONJUGADO NO UNIDO.

7. INCUBACIÓN DE SUSTRATO

• SE AÑADE UN SUSTRATO QUE LA ENZIMA

MARCADA PUEDA CONVERTIR EN UN
PRODUCTO DETECTABLE.
• POR EJEMPLO CAMBIO DE COLOR E
INTENSIDAD.
 8. LECTURA

• SE MIDE LA REACCIÓN DE LA ENZIMA.

• SE COMPARA CON UN CONTROL POSITIVO Y NEGATIVO.
• CAMBIO DE COLOR O INTENSIDAD
INDICA LA PRESENCIA DE ANTICUERPOS EN LA MUESTRA.
VENTAJAS
 SENDIBILIDAD
EL ELISA INDIRECTO ES
ALTAMENTE SENSIBLE LO QUE
SIGNIFICA QUE PUEDE
DETECTAR INCLUSO PEQUEÑAS
CANTIDADES DE ANTÍGENOS Y
ANTICUERPOS EN UNA
MUESTRA
VERSATILIDAD
ESTA TÉCNICA SE PUEDE
UTILIZAR PARA DETECTAR
ANTIGENOS COMO
ANTICUERPOS LO QUE LE
HACE ADECUADO PARA UNA
AMAPOLA GAMA DE
APLICACIONES

ESPECIFICIDAD CUANTIFICACIÓN
EL ELISA INDIRECTO ES ESTA TÉCNICA PERMITE LA
ALTAMENTE ESPECIFICO LO CUANTIFICACIÓN DEL ANTÍGENO O
QUE SIGNIFICA QUE PUEDE ANTICUERPOS PRESENTES EN UNA
DIFERENCIAR ENTRE MUESTRA, LO QUE ES ÚTIL PARA
DIFERENTES ANTÍGENOS O ELABORAR LA RESPUESTA
ANTICUERPOS CON ALTA INMUNOLÓGICA O LA
PRECISIÓN CONCENTRACIÓN DE UN ANTÍGENO EN
PARTICULAR
 ESVENTAJAS
D
 SENSIBILIDAD
CRUZADA
EN ALGUNOS CASOS, EL ELISA
INDIRECTO PUEDE PRESENTAR
SENSIBILIDAD CRUZADA LO QUE
SIGNIFICA QUE PUEDE
DETECTAR ANTICUERPOS O
ANTÍGENOS SIMILARES PERO
NO IDÉNTICOS AL OBJETIVO
DESEADO
TIEMPO
EL ELISA INDIRECTO PUEDE
SER UN PROCESO LARGO Y
LABORIOSO, YA QUE IMPLICA
VARIAS ETAPAS DE
INCUBACIÓN Y LAVADO.
REQUERIMIENTOS
TÉCNICOS
LA REALIZACIÓN DEL ELISA
INDIRECTO REQUIERE EXPERIENCIA Y
HABILIDADES TÉCNICAS ADECUADAS,
LO QUE PUEDE LIMITAR SU USO EN
ENTORNOS SIN PERSONAL
CAPACITADO
COSTO
LA REALIZACIÓN DE UN ELISA
INDIRECTO PUEDE REQUERIR LA
COMPRA DE KIDS COMERCIALES
O REACTIVOS ESPECIALIZADOS
LO QUE PUEDE RESULTAR
COSTOSO
 CCIÓN DE VIR
ETE US
D
VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO (VPH)
ENFERMEDADES QUE OCASIONA:
1. CÁNCER DE CUELLO UTERINO

2. CÁNCER OROFARINGEO

3. CÁNCER DE ANO

4. CÁNCER DE PENE
 VIRUS DE LA HEPATITIS B (VHB)
ENFERMEDADES QUE OCASIONA:
1. HEPATITIS B CRÓNICA

2. CIRROSIS HEPÁTICA

3. HEPATOCARCINOMMA
 VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA
HUMANA (VIH)
ENFERMEDADES QUE OCASIONA:
1. SÍNDROME DE LA INMUNODEFICIENCIA
ADQUIRIDA (SIDA)
2. TUBERCULOSIS

3. CANDISIASIS

4. MENINGITIS CRIPTOCOCICA

5. ENFERMEDADES RENALES

6. LINFOMA
¡MUCHAS
GRACIAS!