¨´ Apuntes de la segunda evaluación parcial de Realiza Análisis Inmunológicos

Inmunógeno
Son partículas de determinado peso molecular (macromoléculas) capaces de estimular al
sistema inmunitario para producir anticuerpos y células sensibilizadas.

Cuando entra por primera vez.

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Antígeno

2
Hapteno
Un hapteno es una sustancia química de pequeño peso molecular que no induce por sí
misma la formación de anticuerpos, pero al unirse a una proteína transportadora como la
albúmina estimula una respuesta inmunitaria.

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Clasificación de inmunógenos

Inmunogenicidad
La inmunogenicidad es una propiedad que permite a una substancia inducir una respuesta
inmunitaria detectable (humoral o celular o con mayor frecuencia ambas) cuando se llega al
humano dicha sustancia capaz de estimular al sistema inmunitario recibe el nombre de
inmunógeno que antiguamente recibía el nombre de antígeno y el sitio del inmunógeno que
estimula al sistema inmunitario recibe el nombre de determinante inmunogénico.

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Antigenicidad
Es la propiedad que tiene un agente (Antígeno) para reaccionar con anticuerpos o células
sensibilizadas inducidas por el inmunógeno y los sitios de un antígeno que se combinan con
un anticuerpo específico o el receptor de la célula T reciben en nombre de epítopos o
determinantes antigénicos.

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Requerimientos para la inmunogenicidad
Para que se lleve acabo la estimulación del sistema inmunitario se deben satisfacer las
siguientes condiciones:

a) Partícula extraña: El sistema inmunitario, discrimina de alguna manera entre lo

propio y lo no propio, de manera que solo las que sean extrañas al organismo serán
normalmente inmunogénicas .

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 b) Tamaño molecular: Las moléculas muy chicas tales como aminoácidos y
monosacáridos, no son inmunogénicas y por lo general se acepta que se necesita un
cierto tamaño mínimo para la inmunogenicidad.
c) Complejidad química: Una molécula debe de poseer cierto grado de complejidad
química para ser inmunogénica . Los homopolímeros que consisten de unidades
repetidas de un solo aminoácido son inmunógenos malos , mientras que copo
limeros de dos o tres aminoácidos pueden ser bastante activos . Otro ejemplo los
aminoácidos aromáticos contribuyen más a la inmunogenicidad que los no
aromáticos .
d) Constitución genética del animal : La capacidad para responder a un antígeno en
particular , es función de la manera en que se controla la respuesta inmunitaria
genéticamente , por ejemplo se sabe que polisacáridos puros son inmunógenos
cuando se inyectan en ratones y humanos pero no cuando se inyectan en conejos.
e) Método de administración del antígeno : El que un inmunógeno induzca una
respuesta inmunitaria , depende de la dosis y forma de administración .Una cantidad
de inmunógeno que es inefectiva al inyectarla por vía intravenosa puede provocar
una gran respuesta de anticuerpos si se inyecta por vía subcutánea con adyuvante.
f) Carga o valencia : Se refiere al numero de epítopos que tiene un inmunógeno o
antígeno ejemplo monovalente , trivalente o polivalente.
El hapteno se define como una pequeña molécula químicamente definidas que no son
inmunogénicas pero que habitualmente se unen a moléculas grandes llamadas
transportadoras con el fin de obtener anticuerpos específicos dirigidos contra la molécula
pequeña .

Antígenos de los grupos sanguíneos

El primer sistema de grupos sanguíneos se describió por Karl Landsteiner , el observó que
los eritrocitos de algunos individuos se aglutinaban cuando se mezclaban con el suero de
otros , pero no con su propio suero , mediante ésta técnica de aglutinación se clasificaron
eritrocitos individuales en cuatro grupos A , B , AB y O . En la actualidad se reconoce
que los grupos A y B representan antígenos de carbohidratos sobre la membrana de los
eritrocitos los del grupo A presentan N – acetil galactosamina , los del grupo B presentan
galactosa los del grupo AB presentan ambos y los del grupo O no los presentan , el sistema
Rhesus de grupos sanguíneos es el segundo en importancia del sistema ABO y se refiere a
la presencia (Rh positivo) del antígeno D o la ausencia ( Rh negativo ) del antígeno D.
Existen otros antígenos eritrocitarios , la mayor parte de los 20 sistemas de grupos
sanguíneos restantes rara vez están implicados en reacciones de transfusión , sin embargo
los anticuerpos contra los sistemas Kidd , Duffy ,Kell y MNS se conocen por su capacidad
para provocar hemólisis si se transfunde sangre antígeno positiva en un individuo
sensibilizado y se les conocen como grupos sanguíneos menores.

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Complejo mayor de histocompatibilidad ( CMH )

El término CMH denota a un grupo de genes localizados en el cromosoma 6 y que también

se les conoce como ALH (Antígeno de Leucocitos Humanos) . Las moléculas codificadas
por estos genes desempeñan una función importante en la respuesta inmunitaria , están
presentes sobre la superficie celular y son los agentes causantes del reconocimiento de la
naturaleza extraña de los tejidos trasplantados de un individuo a otro de la misma especie ,
de donde se le da el nombre de antígenos de histocompatibilidad , cuando se realizan
trasplantes de tejidos u órganos con incompatibilidad en el CMH , el sistema inmunitario
destruye por completo el tejido trasplantado.

Moléculas del CMH

Las moléculas de CMH o ALH y los genes que las codifican caen dentro de dos clases I ,
II , : Las moléculas de ALH clase I y II son glucoproteínas de superficie.
Molécula clase I : Están presentes en todas las células nucleadas y su función es presentar
al antígeno a los linfocitos T CD8 para que sea reconocido .Cuando por ejemplo un virus
infecta a una célula , ciertos antígenos virales se metabolizan hasta fragmentos peptídicos
que entonces se unen a la molécula clase I y se presentan a las células T citotóxicas CD8, el
receptor para el antígeno de un linfocito T determinado , reconocerá un péptido viral sólo
en el contexto de una molécula ALH de clase I en particular y el linfocito T mata la célula
en diana que lleva el antígeno viral.( Replicación viral )
Molécula clase II: Tienen distribución limitada se encuentran principalmente sobre las
células, linfocitos B, macrófagos y células dendríticas: Su función es presentar los péptidos
antigénicos procesados a los linfocitos T CD4 (colaboradores). (Endocitosis)

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INMUNIDAD INDUCIDA, ADQUIRIDA, ADAPTATIVA O ESPECÍFICA
Características y clasificación
Cuando las defensas que proporciona la inmunidad innata son incapaces de prevenir
totalmente la infección o evitar completamente la diseminación de inmunógenos no
vivientes , funciona la inmunidad adquirida .
Es aquella que obtiene durante la vida desde el nacimiento después de haber estado en
contacto con los inmunógenos (Microorganismos o productos de ellos) y se clasifica en dos
tipos:
A) La inmunidad humoral: Tiene las siguientes características Protección llevada a
cabo por los linfocitos B mediante la producción de anticuerpos, actúa
principalmente contra microorganismos extracelulares.
B) La inmunidad celular: Tiene las siguientes características Protección llevada a cabo
por los linfocitos T mediante células sensibilizadas, actúa principalmente contra
microorganismos intracelulares.

La inmunidad especifica se adquiere de dos maneras que son las siguientes:

1) Inmunidad adquirida activa: Se caracteriza cuando el individuo produce sus propios

anticuerpos o células sensibilizadas, después de haber estado en contacto con los antígenos
y puede obtenerse de dos formas:
a) En forma natural: Esta ocurre cuando el individuo está en contacto con los
organismos vivos ejemplo en la enfermedad y produce sus anticuerpos.
b) En forma artificial: Esto ocurre cuando se aplican las vacunas, administrando
microorganismos atenuados que no causan la enfermedad produciéndose los
anticuerpos.
2) Inmunidad adquirida pasiva: Se caracteriza cuando un individuo no produce sus propios
anticuerpos ni células sensibilizadas, sino que llegan a él de dos formas:
a) En forma natural: Esto ocurre cuando la madre pasa anticuerpos al hijo a través de la
placenta y de la leche materna.
b) En forma artificial: Esta ocurre mediante la aplicación de anticuerpos ya elaborados
mediante la aplicación de sueros.

Características de la inmunidad adquirida, específica, inducida o adaptativa

a) Inducida: Para que esta ocurre se requiere de un estimulo que es la presencia de los
antígenos es decir se necesita de la presencia de los antígenos para que se produzcan
los anticuerpos y células sensibilizadas.
b) Especifica: Los anticuerpos y células sensibilizadas solo actúan sobre el antigeno que
estimuló su producción.
c) Memoria: En un segundo contacto con un antígeno, las células sensibilizadas actúan de
una manera más rápida.
d) Trasferible: Se pueden administrar células sensibilizadas, o anticuerpos ya elaborados
de un individuo a otro.

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Respuesta inmunitaria
La inmunidad adquirida se lleva acabo mediante la respuesta inmunitaria, que se define
como la acción colectiva coordinada frente la exposición de microorganismos y productos
de estos y que comprende las fases de reconocimiento, activación y efectora ocurriendo en
tres fases tanto en la respuesta inmune humoral y respuesta inmune celular.

Fases de la Respuesta Inmune o Inmunitaria

a) Fase de reconocimiento: Consiste en la unión de los inmunógenos a los receptores

específicos situados sobre los linfocitos maduros que existen antes de la estimulación
inmunogénica.
Respuesta inmune humoral: Llevada a cabo por los linfocitos B existiendo más de 109
clones de linfocitos con receptores de inmunógenos (antigeno) en la superficie de la
membrana de los linfocitos B maduros expresándose a través de IgM e IgD
específicas de cada antígeno como pueden ser proteínas , polisacáridos y lípidos.
Respuesta inmune celular: Llevada a cabo por los linfocitos T maduros, reconocen
fracciones peptídicas derivados de antígenos proteicos procesados y presentados por
las células presentadoras de antígeno a través del CMH por las clases I y II.
Moléculas clase I: Presentan péptidos derivados de las proteínas citosólicas a los
linfocitos T CD8 (Citolíticos).
Moléculas clase II: Presentan peptidos que derivan de las proteínas extracelulares que
han sido endocitadas por las células presentadoras de antígeno y son reconocidos por
los linfocitos T CD4 (colaboradores).
b) Fase de activación: Es la secuencia de acontecimientos inducida en los linfocitos como
consecuencia del reconocimiento del inmunógeno específico ocurriendo en ambas
respuestas lo siguiente:
Primero: Proliferan, se lleva a cabo la expansión de los clones de linfocitos específicos
para el antígeno y a la ampliación de la respuesta protectora.
Segundo: Los linfocitos evolucionan de células de reconocimiento a células de memoria y
efectoras las que actuarán eliminando los antígenos.
Inmunidad Humoral
Los linfocitos B reconocedores se diferencian a células secretoras de Inmunoglobulinas
(anticuerpos ) los cuales se unen a los antígenos y se activan diferentes mecanismos para
eliminarlos.
Las inmunoglobulinas son glucoproteínas y presentan las siguientes características: Con
actividad de anticuerpo, es decir se combinan de manera específica con la sustancia que
indujo su formación. Cada inmunoglobulina contiene al menos una unidad básica llamada
monómero que comprende cuatro cadenas polipeptídicas (dos cadenas pesadas y dos
cadenas ligeras). Cada monómero presenta dos fracciones llamadas Fab (captadoras de
antígeno) y una fracción llamada Fc (cristalizable).
Existen cinco tipos de inmunoglobulinas siendo estas la IgA (dimérica), IgD
(monomérica), IgE (monomérica), IgG (monomérica) e IgM (pentamérica) , la única que
pasa placenta es la IgG y es la de mayor vida en suero que es de 23 días .
La IgM es la que se produce en la respuesta primaría contra un antígeno.
La IgG se produce en el segundo contacto con el mismo antígeno.

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 Inmunidad celular
Los linfocitos T se diferencian a células que activan a fagocitos que matan
microorganismos y otros linfocitos lisan directamente células que están produciendo
antígenos ejemplo la infección viral.
C) Fase efectora: Se llevan a cabo funciones por los linfocitos activados para eliminar a
los antígenos.
Respuesta inmune humoral: Los anticuerpos se unen a los antígenos (Opsonización) y
aumentan la fagocitosis por neutro filos y los fagocitos mononucleares, los anticuerpos
también activan el sistema de complemento que participa en la lisis y fagocitosis de
microorganismos; otros anticuerpos estimulan la de granulación de los mastocitos y
liberación de mediadores de la inflamación, neutralizan virus y toxinas.
Respuesta inmune celular: Los linfocitos T secretan hormonas proteicas llamadas citocinas
que aumentan las funciones de los fagocitos, estimulan la respuesta inflamatoria.

Inmunodiagnóstico
Características
Uno de los mayores retos para la medicina moderna es el traslado de los avances básicos
en la inmunoquímica e inmunobiología hacia procedimientos diagnósticos y terapéuticos
que serán útiles en la práctica de la medicina clínica.
Las reacciones inmunológicas in vivo pueden tener valor diagnóstico, principalmente las
reacciones antígeno anticuerpo; muchos de estos se pueden realizar in vitro en condiciones
controladas de experimentación y se emplean extensamente en las pruebas diagnósticas.
La rama de la inmunología que se encarga de estudiar las reacciones de antigeno –
anticuerpo in vitro recibe el nombre de serología para detectar antígenos o anticuerpos para
un diagnóstico.

Pruebas serológicas
Las pruebas serológicas más frecuentemente empleadas en el diagnóstico de las
enfermedades microbiológicas, no microbiológicas, inmunológicas o para detectar ciertos
compuestos son las siguientes:

a) Reacciones de aglutinación
b) Reacciones de precipitación
c) Reacciones de fijación de complemento
d) Reacciones inmunoenzimáticas
e) Inmunofluorescencia
f) Radioinmunoanálisis

a) Reacciones de aglutinación: La aglutinación es una reacción inmunológica

que se efectúa cuando se combinan antígenos particulados con sus anticuerpos
específicos; esta prueba no permite la cuantificación exacta de anticuerpos y los
resultados solo pueden expresarse en función de la dilución mayor del suero
que aún permite la observación de un aglutinado lo cual se denomina título del
suero.
La reacción de aglutinación puede ser activa o directa, pasiva o indirecta en ambos
casos se pueden realizar en placa o en tubo.

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1) Aglutinación activa: Los antígenos que intervienen son componentes naturales
de las partículas ejemplo bacterias, levaduras, eritrocitos, linfocitos etc.
Ejemplo de aglutinaciones activas: Aglutinación bacteriana, Reacciones febriles,
Tipificación de grupos sanguíneos, Pruebas de Coombs, Pruebas cruzadas
1) Aglutinación bacteriana: Hacer una suspensión bacteriana de la bacteria a
serotipificar, agregar un agota del antisuero específico de la bacteria, mezclar
con un aplicador y observar si se presenta aglutinación.
2) Reacciones febriles : La infección por gérmenes de diversas especies conduce a
una elevación marcada de la temperatura , entre otros síntomas igualmente
inespecíficos , por lo cual se dificulta el diagnóstico de la enfermedad .tal es el
caso de la fiebre Tifoidea causada por Salmonella typhi reacción de Widal ;
las paratifoideas causadas por Salmonella paratyphi A y Salmonella paratyphi
B ; la fiebre de malta causada por Brucella abortus Reacción de Huddleson y
el tifo causado por Rickettsia prowaseki reacción de Weil-Félix ; sin embargo
cada uno de estos microorganismos induce una respuesta humoral con la
producción de anticuerpos que pueden fácilmente identificarse con antígenos
específicos , en el caso de Rickettsia prowaseki es muy difícil contar con el
antígeno proveniente de ella , pero se utiliza Proteus OX –19 el cual posee
determinantes antigénicos comunes de la Rickettsia.
Se extrae sangre y se obtiene suero.
Se utiliza una placa de aglutinación
Se colocan 80 (1:20) microlitros de suero en seis círculos y se les agrega por
separado una gota de cada uno de los antígenos y se mezclan con aplicadores de
madera.
Se observa en cual se presenta aglutinación, con el antígeno que se presente se
vuelve a colocar en cuatro círculos con 40 (1:40 ) , 20 (1 : 80 ) ,10 ( 1 :160 ) y 5 (
1 : 320 ) microlitros de suero y una gota del mismo antígeno para determinar el
título de anticuerpos.
3) Tipificación de grupos sanguíneos :Los eritrocitos poseen en su membrana
sustancias antigénicas determinadas genéticamente , las cuales pueden
identificarse serológicamente mediante anticuerpos específicos . Los
individuos del grupo A poseen solo la sustancia A ( N acetilgalactosamina ) y
contienen aglutininas contra B , los individuos de grupo B presentan la
sustancia B ( Galactosa ) y contienen aglutininas contra A , los del grupo AB
contienen la sustancia A y B ( Nacetil galactosa mina y gaclactosa ) y no
contienen aglutininas , los individuos de l grupo O no contienen sustancia A ni
B pero contienen aglutininas contra A y B. El Rh determina la presencia del
antígeno D .
La determinación de los grupos sanguíneos se realiza rutinariamente en placa
aunque también se realiza en tubo.
Se mezclan una gota de sangre con anticoagulante con cada uno de los antisueros ,
cuatro gotas para el grupo sanguíneo y el Rh , se mezclan con aplicadores de
madera y se observa la presencia de aglutinación.
4) Pruebas de Coombs : En algunas ocasiones , los anticuerpos unidos a sus
antígenos correspondientes que están en la membrana de los eritrocitos no dan
lugar a la formación de un agregado visible en un tiempo relativamente corto :

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 Coombs diseñó un método para poner en evidencia la presencia de estos
anticuerpos ( que por su comportamiento han sido llamados incompletos )
mediante la adición al sistema de un anticuerpo anti-inmunoglobulinas humanas
preparado en otra especie ( Suero de Coombs ).
En caso de incompatibilidad en el sistema Rh entre la madre y su producto , en la
cual la madre es Rh – y el producto Rh + , puede haber isoinmunización con la
producción de anti D de la clase IgG que se comporta como incompleto ; estos
anticuerpos pueden atravesar placenta , unirse a los eritrocitos del producto y
desencadenar un estado patológico ( enfermedad hemolítica del recien nacido ,
eritroblastosis fetal ) .Por tal motivo es de gran importancia la búsqueda de los
anticuerpos anti- D en el suero de la madre o los que se han unido a los eritrocitos
del recien nacido y como estos no anticuerpos no aglutinan , es necesario recurrir a
las pruebas de Coombs ( Indirecta y directa ) , es importante señalar que esto puede
ocurrir con otros sistemas de grupos sanguíneos .
5) Prueba directa de Coombs: Esta prueba se aplica en el caso de que los
eritrocitos estén naturalmente recubiertos con anticuerpos incompletos utiliza
en el caso de glóbulos rojos provenientes de niños con eritroblastosis fetal , en
el estudio de anemia hemolítica adquirida ( en la que se buscan auto anticuerpos
) y en la investigación de reacciones consecutivas a transfusiones de sangre
incompatible.
Técnica
Suspensión de glóbulos rojos problema y de normales , lavados 5 veces con
solución salina y ajustar a una concentración de 2 %
1.- En un tubo de ensaye se colocan 2 gotas de la suspensión al 2 % de glóbulos
rojos problema.
2.- Se añaden 2 gotas de suero de Coombs.
3.-Se mezcla bien y se centrifugan a 1000 rpm durante 1 minuto.
4.- Se desprende el botón suavemente y macroscópicamente se busca la presencia
de aglutinación.
5.- De la misma manera se prepara un tubo en el cual se sustituye el suero de
Coombs por solución salina ( testigo negativo de los eritrocitos problema )
6.-Simultáneamente se prepara de la misma forma un tubo que contenga una
suspensión de glóbulos rojos normales y suero de Coombs ( Testigo negativo del
suero de Coombs )
Resultados
La presencia de aglutinación de los eritrocitos problema con suero de Coombs
indica que los glóbulos rojos del paciente están recubiertos por anticuerpos
específicos .
Prueba indirecta de Coombs : Esta prueba se usa para determinar la presencia de
anticuerpos incompletos en el suero de sujetos sensibilizados a uno o más antígenos
sanguíneos.Es útil en el estudio del suero proveniente de mujeres afectadas por
isoinmunización maternofetal
Técnica
Suspensión de glóbulos rojos grupo O Rh + ( D ) lavados 3 veces con solución
salina y ajustados a una concentración del 10 %.
1.-En un tubo de ensaye se colocan dos gotas de suero problema.
2.- Se añade dos gotas de la suspensión al 10 % de eritrocitos O Rh +.

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3.-Se mezclan bien y se centrífuga a 1000 rpm durante 1 minuto.
4.-SE desprenden suavemente los glóbulos rojos sedimentados y se observa si hay
aglutinación macroscópica.En caso de ser negativa o débilmente positiva , se
resuspenden los eritrocitos y se incuban en el baño María durante 20 minutos.
5.- Se lavan los eritrocitos por centrifugación con solución salina una sola vez y
después de escurrirlos se resuspenden en la solución salina remanente.
6.- Se añaden dos gotas de suero de Coombs
7.-Se mezcla bien y se centrífuga a 1000 rpm durante 1 minuto.
8.-Se desprende el botón suavemente y se busca macroscópicamente aglutinación.
9.-De la misma manera se prepara un tubo en el cual se sustituye el suero de
Coombs por solución salina ( Testigo negativo de los eritrocitos O Rh +) .
10.-A dos gotas de la suspensión de eritrocitos O Rh + se añade una gota de suero
anti D , diluido 1 : 16 : se incuban 15 minutos a 37 ° C y se continua con los pasos
6 , 7 ,8 del la técnica ( Testigo positivo de los eritrocitos O Rh + )
Resultados
La aglutinación de los glóbulos rojos conocidos con suero problema indica la
presencia de anticuerpos aglutinantes (paso 4 ). La aglutinación de setos eritrocitos
con suero problema y suero de Coombs señala la presencia de anticuerpos
incompletos en el suero problema ( Paso 8 )
Pruebas cruzadas : Previo a la realización de una transfusión sanguínea entre
individuos compatibles en el sistema ABO y para el sistema D , es necesario
realizar una prueba cruzada que ponga de manifiesto la existencia de otros
anticuerpos dirigidos contra antígenos de los sistemas sanguíneos menores: Esta
prueba cruzada se lleva acabo con eritrocitos del donador y suero del receptor
(Prueba mayor ) que evalúa al RECEPTOR y con eritrocitos del receptor y suero
del donador ( Prueba menor )Que evalúa al DONADOR.

Técnica
1.-Se obtienen unos 5 ml de sangre venosa sin anticoagulante del donador y se
colocan 0.1 ml de esa sangre en un tubo que contenga 5 ml solución salina
(suspensión al 2 % ) .El resto de la sangre se deposita en un tubo para obtener
suero.
2.- Se repite el proceso , afora con la sangre del receptor .
3.- Se dispone una serie de nueve tubos y se etiquetan de la siguiente manera:
P. M. ( s ) Prueba mayor salina
p.m. ( s ) Prueba menor salina
auto (s) Auto testigo salina
P.M. (a) Prueba mayor albúmina
p.m. (a) Prueba menor albúmina
auto (a) Auto testigo albúmina
P.M. (fop) Prueba mayor ficina o papaína
p.m. (fop ) Prueba menor ficina o papaína
auto (fop)Autotestigo ficina o papaína
4.-A cada tubo se le agregan los siguientes reactivos :

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 Susp. 2 % Suero del Susp. 2 % Suero del Sol. Alb Ficina
G.R donador G.R. receptor al 30 % o
donador receptor Papaína
P.M.(s) 1 gota - - 1 gota - -
p.m.( s) - 1 gota 1 gota - - -
Auto(s) - - 1 gota 1 gota - -
P.M.(a ) 1 gota - - 1 gota 2 gotas -
p.m.(a) - 1 gota 1 gota - 2 gotas -
Auto (a ) - - 1 gota 1 gota 2 gotas -
P.M.(fop) 1 gota - - 1 gota - 1 gota
p.m.(fop) - 1 gota 1 gota - - 1 gota
Auto(fop) - - 1 gota 1 gota - 1 gota

5.-Se mezclan bien los tubos y centrifugan 1 minuto a 2500 rpm.

6.-Se busca la presencia de aglutinación en todos los tubos y se anota resultado
7.-En caso que no se presente aglutinación en ninguno de los nueve tubos se
incuban todos a 37 ° C durante 30 minutos.
8.-Se centrifugan los tubos a 2500 rpm por 5 minutos y se descarta el
sobrenadante.
9.-Se lava el paquete celular de cada tubo con solución salina y se centrífuga a
2500 rpm por cinco minutos .se descarta el sobrenadante.
10.-Se repite el paso anterior.
11.-Se agrega una gota de suero de Coombs al paquete celular de cada tubo.
12.-Se busca aglutinación.
13.-Simultáneamente se deben montar 2 tubos adicionales uno que servirá como
testigo positivo (TP) y el otro como testigo negativo ( TN ).
14.- Al tubo marcado TP se le agregan 2 gotas de suero comercial anti –D diluido
1:32 y 2 gotas de una suspensión al 2 % de eritrocitos O Rh ( + ).
15.-Al tubo marcado TN se le agregan 2 gotas de suero comercial diluido 1 : 32 y
2 gotas de una suspensión al 2 % de eritrocitos O Rh ( - ).
16.-Ambos tubos TP y TN se incuban a 37 ° C por 30 minutos y se procesan igual a
los señalados en los pasos 8 a 12 .
RESULTADOS:
Si hay aglutinación en cualquiera de los tubos marcados como PM o pm , después
de cualquiera de los pasos esto será indicativo de que hay incompatibilidad entre el
posible donador y su receptor.

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