Microbiología Farmacéutica Juan Sebastián Buitrago

Juan Camilo Segura

PRUEBAS DE PROMOCION DE CRECIMIENTO

Juan Sebastián Buitrago

Juan Camilo Segura1

25 de +agosto de 2023

1
Estudiantes curso Microbiología Farmacéutica-CIE-2872
RESUMEN

Los medios de cultivo como reactivos de laboratorio son clave para los resultados de cada una de
las pruebas microbiológicas en las que se usan, para el análisis se tiene en cuenta los diferentes
tipos de análisis entre los cuales se encuentran: prueba método cuantitativo, prueba método
cualitativo, y prueba método semi-cuantitativo. En esta práctica se tuvo en cuenta cada tipo de
análisis para el reporte de datos ya que sin estos es imposible diferenciar la sección experimental
para así mismo poder determinar el crecimiento de las cepas.

Palabras Clave: cultivo, pruebas microbiológicas, análisis, métodos, experimental, cepa.

ABSTRACT

The culture media as laboratory reagents are key to the results of each of the microbiological tests in which they
are used, for the analysis the different types of analysis are taken into account, among which are: quantitative
method test, method test qualitative, and test semi-quantitative method. In this practice, each type of analysis
was taken into account for the data report, since without these it is impossible to differentiate the experimental
section in order to determine the growth of the strains.

Key Words: cultivation, microbiological tests, analysis, methods, experimental, strain.

1. INTRODUCCIÓN referencia que permite comparar los resultados

En la práctica de laboratorio siempre hay que tener
en cuenta ciertos parámetros para poder tener más
claridad del tema y por ende entender mejor la
parte experimental, es por esto que siempre es
necesario tener en cuenta las definiciones, las
normas, los medios de cultivo y todo lo relacionado
con la práctica.
Para evaluar el comportamiento esperado de los
medios de cultivo a nivel del rendimiento o
recuperación microbiológica existen métodos
cuantitativos, métodos semi-cuantitativos y métodos
cualitativos. Para llevar a cabo estos métodos
existen condiciones como el uso de un medio de
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obtenidos, éste medio debe ser reconocido por su
calidad, debe tener las pruebas de promoción de
crecimiento y es de uso obligatorio en las pruebas
cuantitativas; en las pruebas semi-cuantitativas o
cualitativas ayuda a la interpretación de los
resultados. [ICONTEC, GTC171,2008] Por otro lado,
se requiere el uso de cepas de referencia que serán
específicas de acuerdo a cada medio de cultivo a
evaluar y se debe controlar el número de pases, que
no superen los establecidos acordes al R04.6022-
035“ManejodeCepario”, además de verificar su
pureza.
Cepas de referencia: Microorganismos definidos
por lo menos al nivel de género y especie,
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catalogados y descritos según sus características y
preferiblemente de origen conocido. [ISO 11133-
1:2014] Normalmente obtenidos de una colección
nacional o internacional reconocida.
Cepas de reserva o stocks de referencia:
Conjunto de cultivos individuales idénticos obtenidos
por medio de un único subcultivo de una cepa de
referencia [ISO 11133-1:2014].
Cepas de trabajo: Subcultivos de microorganismos
obtenidos a partir de las cepas de referencia para
ser utilizados en los ensayos. [ISO 11133-1:2014].
Cultivo puro: es aquel que contiene una sola clase
de microorganismo.
Especificidad: Demostrar bajo condiciones
definidas, que un microorganismo objetivo no
muestra las mismas características visuales que un
microorganismo no objetivo. [ISO/TS 11133:2014
Microorganismos Target u objetivo: Grupo de
microorganismos a detectar o cuantificar. [ ISO/TS
11133:2014]
Microorganismos No- Target: Grupo de
microorganismos suprimidos por el medio o en
condiciones de incubación no muestra las
características esperadas. [ISO/TS 11133:2014
Medio de referencia: Medio usualmente no
selectivo, para la evaluación comparativa del
rendimiento independiente del
medio sometido a prueba y demostrado que es
adecuado para el uso de control. Este debe ser de
calidad reconocida y es de uso obligatorio en
métodos cuantitativos. [ISO 11133-1:2014].
Prueba de productividad: Nivel de recuperación
en el medio de cultivo de los microorganismos target
bajo condiciones definidas. [ISO/TS 11133:2014]
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Prueba de selectividad: Inhibición de
microorganismos non-target en un medio de cultivo
en condiciones definidas. [ISO/TS 11133:2014]
Prueba de Promoción del crecimiento de los
medios de cultivo: De acuerdo a la USP 39 ésta se
debe realizar para cada lote de medio de cultivo listo
para usar o de medio preparado, en la cual se evalúa
la capacidad de recuperación de microorganismos
específicos, por lo tanto, es equivalente a la prueba
de productividad. Esta se describe para las pruebas
microbiológicas de productos no estériles y para la
prueba de esterilidad. USP 40.
PR: Relación de productividad (PR): Es la
capacidad del medio de recuperar los
microorganismos que son usados como control. Se
utiliza un inoculo estándar y se examina
cuantitativamente el resultado obtenido. [ISO/TS
11133:2014]
Teniendo en cuenta los parámetros y las definiciones
se podrá hacer un mejor análisis para determinar los
medios que se utilizaran.
Caldo Tripticasa de soya
Este medio contiene dos peptonas que permiten el
crecimiento de una gran variedad de
microorganismos aerobios y anaerobios. El aporte de
caseina y peptonas de soja hace que medio sea muy
nutritivo, por el suministro de nitrógeno orgánico,
particularmente aminoácidos y péptidos de cadena
más larga. El cloruro sódico proporciona electrolitos
esenciales.
Agar Tripticasa de soya
En el medio de cultivo, la tripteína y la peptona de
soya aportan nutrientes ricos en péptidos,
aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas,
minerales y vitaminas. La peptona de soya además
es fuente de hidratos de carbono que estimulan el
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crecimiento de diversos microorganismos. El cloruro
de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es
el agente solidificante. Puede ser utilizado como
base a la cual se suplementa con nutrientes o con
antimicrobianos, lográndose un medio enriquecido o
selectivo de acuerdo al aditivo.
2. SECCIÓN EXPERIMENTAL
2.1 Prueba Método Cuantitativo
tripticasa de soya
Se realizaron diluciones seriadas de 1/10 tomadas
de la fase estacionaria del microorganismo
Staphylococcus aureus, de la última dilución seriada
se tomaron 100 μL para agregarlos a los tres medios
de cultivo a evaluar y se homogenizo el inoculo con
siembra masiva en la superficie del medio de cultivo
a evaluar.
Se dejaron incubar el microorganismo
Staphylococcus aureus en los medios a evaluar de
Agar tripticasa de soya a 72 horas a una temperatura
de 32,5ºC±2°C. y se correspondió a realizar la
lectura de colonias a cada medio de evaluación a los
8 días previos a su incubación; se determinó el
promedio de UFC de las cajas de cada medio y se
realizó el cálculo de PR con los medios de referencia
determinando si medio de cultivo evaluado cumple
o no con la prueba de productividad
2.2 Prueba Método Cualitativo para medios
líquidos
Se inocularon 100 μl de la fase estacionaria del
microorganismo Staphylococcus aureus en cada uno
de los 2 medios a evaluar y se incubaron durante 72
horas a 22,5 ±2 ℃. Por último, se realizó las
lecturas a cabo visualmente asignando un score de
crecimiento.
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2.3 Prueba de Productividad y Selectividad
Método Ecométrico Medios de cultivo sólidos
(Medio Salado Manitol)
Primero se preparó los cultivos en fase estacionaria
de los microorganismos TARGET y NO TARGET,
luego en cada uno de los 3 Medios Salados Manitol
se dividió la base de las cajas Petri en cuatro
cuadrantes y se marcaron cada uno de estos como
1, 2, 3, 4 y luego, se trazaron cinco estrías en cada
–Agar uno de ellos y una línea en la intersección de los
cuadrantes. En cada cultivo se tomaron con un asa
de 1 μL y se trazó en cada cuadrante 5 líneas
paralelas separadas entre sí, y una estría central,
sin que se tomara un inoculo del tubo entre cada
línea.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3.1 Prueba Método Cuantitativo –Agar
tripticasa de soya
La productividad del método cuantitativo en el agar
tripticasa de soya no cumple según la normativa ISO
11133:2014, ya que el agar tripticasa de soya al ser
un medio de cultivo no selectivo la productividad
debería estar entre 0,8 y menor a 1,4 y en este caso
ocupa un valor menor a 0,8 como se puede ver en
la ecuación uno. Esto se debe a que no se realizaron
bien las diluciones seriadas de la fase estacionaria
obteniendo una concentración mínima no deseada y
por lo tanto no hay un crecimiento adecuado de las
cepas del microorganismo Staphylococcus aureus
3 𝑈𝐹𝐶
𝑃𝑅 = = 0,035
86,3 𝑈𝐹𝐶
Ecuación 1. Cálculo de productividad para el agar
tripticasa de soya
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Por otro lado, se evidencia en el agar tripticasa de
soya la contaminación del medio con una bacteria
que contenía una forma irregular, una elevación
plana y una margen rizada, al observar por el
microscopio este microorganismo, se determina
que es un bacilo gram negativo.
3.2 Prueba Método Cualitativo para medios
líquidos
Se evidencia en los tubos de ensayo que los dos
tubos de referencia mantuvieron un color opaco,
mientras que un solo tubo no cambio su color
característico, esto se debe a que fue a los 2 tubos
a los que se le agrego el inoculo, al revisar en la
literatura, se confirma que es un score dos ya que
cumple con todas las características de un buen
crecimiento por su turbidez y cambio de color, lo
que nos indica que el microorganismo
Staphylococcus aureus es un microorganismo
target. Esto se demuestra en la imagen 1
Imagen 1. Prueba método Cualitativo para medios
liquido (caldo Tripticasa de soya)
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3.3 Prueba de Productividad y Selectividad
Método Ecométrico Medios de cultivo sólidos
(Medio Salado Manitol)
Con base en los resultados de la ecuación 2 y
tomando en cuenta que el medio usado fue salado
manitol (ver imagen 2), allí el cloruro de sodio tiene
la capacidad de inhibir el desarrollo de la flora
acompañante como lo es Escherichia coli, por eso se
puede observar que al ser un medio salado es más
probable que Staphylococcus aureus crezca y por
ende lo corrobra riamos con el valor del ICR que es
de 100% y 84% (valores que están permitidos según
la literatura) lo que nos indica que Staphylococcus
aureus es una cepa target mientras el Escherichia
coli es una cepa no target. por esta razón no se
obtuvo ninguna colonia de Escherichia coli.
3,8 𝐼𝐶𝐴
𝐼𝐶𝑅 = ⋅ 100 = 84%
4,5 𝐼𝐶𝐴
5 𝐼𝐶𝐴
𝐼𝐶𝑅 = ⋅ 100 = 100%
5 𝐼𝐶𝐴
Ecuación 2. Prueba de Productividad y selectividad
método ecométrico agar salado manitol cepa target
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Imagen 2. Foto de los medios de salado manitol

con las cepas target ( Staphylococcus aureus) y
cepa no target (Escherichia coli)

4. CONCLUSIONES
• La prueba de productividad para el método
Cuantitativo con el medio Agar tripticasa de soya
no cumple debido a que se realizaron las
diluciones de manera incorrecta
• Los medios de cultivo nos permiten observar y
analizar los diferentes microorganismos desde su
morfología macroscópica y microscópica hasta
sus requerimientos estrictos para la incubación de
estos mismos.
• Los calculos para hallar PR, ICR, ICA y el analisis
visual por score, permiten evaluar principalmente la
productividad o selectividad dependiendo del medio

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