Departamento de Química Física y Analítica

TEMA 2.- Toma y preparación de muestra

 Requisitos básicos del muestreo.
 Plan de muestreo.
 Conservación y transporte de las muestras.
 Errores en el muestreo.
 Almacenamiento de la muestra.
 Preparación de la muestra para el análisis
 Vía seca
Vía húmeda
extraccion
Introducción

Clasificación los métodos de análisis

*
**
*1 g suelo determinación de un contaminante
** 5mg de polvo que se sospecha es una droga ilícita
MUESTRA ANALITO EJEMPLO
Inorgánica Inorgánico Oro en minerales
Inorgánica Orgánico Pesticida en suelo
Inorgánica Bioquímico Moléculas en meteoritos
Orgánica Inorgánico Metales en fármacos
Compuestos orgánicos nitrogenados
Orgánica Orgánico
en petróleos
Actividad enzimática en disolventes
Orgánica Bioquímico
orgánicos

Bioquímico Inorgánico Calcio en fluidos biológicos

Bioquímico Orgánico Drogas y sus metabolitos en orina

Bioquímico Bioquímico Contenido proteínico de la leche

 Introducción

“El primer paso en cualquier análisis químico es conseguir una muestra representativa
de lo que se quiere medir, y a este proceso se le llama muestreo”

(Harris D. C., 2007 p. 2)

PROCESO ANALÍTICO GENERAL

PLANTEAMIENTO DEL
PROBLEMA
PROBLEMA ANALITICO

SELECCIÓN
DEL METODO

DISEÑO DEL
PLAN DE MUESTREO
MUESTREO

TOMA DE MUESTRA

TRATAMIENTO DE
LA MUESTRA

INTERPRETACION
REALIZACION DE
DE LOS
LAS MEDIDAS
RESULTADOS

Fuente: www.uclm.es/profesorado/jmlemus/T-02.ppt
 Introducción

Análisis se realiza sobre una porción material

MUESTREO: Proceso de selección de una porción de material que represente o

proporcione información sobre el sistema en estudio (población).

Introducción

• Recogida de la muestra.
• Conservación.
Concepto • Reducción del tamaño de partícula.
amplio
• Homogeneización.
• Submuestreo.
Muestra: porción de material seleccionado a
partir de una cantidad mayor del mismo

Homogéneas
Muestras
Representativas

Homogéneo
Material de Heterogéneo
partida
Sistema estático
Sistema dinámico
 TIPOS DE MUESTRA
Según su estado físico: sólida, líquida o gaseosa

Según la forma en la que se tome

• Aleatoria
• Selectiva
• Estratificada
• De conveniencia
Según el tamaño y la proximidad con el objeto
• Bruta o primaria
• Agregada o compuesta
• De laboratorio
• Test o alícuota
Según su composición: homogénea o heterogénea
Estrategias generales de toma de muestra
 O por criterio o juicio previo

1. Muestreo de conveniencia: Plan de muestreo en el que las muestras

se recogen porque son fáciles de obtener.
 TIPOS DE MUESTRA
Según su estado físico: sólida, líquida o gaseosa

Según la forma en la que se tome

• Aleatoria
• Selectiva
• Estratificada
• De conveniencia
Según el tamaño y la proximidad con el objeto
• Bruta o primaria
• Agregada o compuesta
• De laboratorio
• Test o alícuota
Según su composición: homogénea o heterogénea
Muestra: Porción pequeña, seleccionada para su examen, de una cantidad de material
mucho mayor

LOTE
Cantidad identificable de productos con
características presumiblemente uniformes

MUESTRA BRUTA
Es la que se obtiene directamente del lote.
Su nº y tamaño viene determinado por el
tamaño del lote.

MUESTRA ANALÍTICA
MUESTRA DE
LABORATORIO
Partes no analizables
Muestra más reducida obtenida
a partir de la muestra bruta por
procesos de reducción y que
debe tener la misma
composición que esta. ¡¡ REPRESENTATIVIDAD!!

MUESTRA ANALÍTICA PORCIÓN ANALÍTICA

 Toma de muestra para analizar la composición promedio

BOE: 23 de Febrero de 2001

 TIPOS DE MUESTRA
Según su estado físico: sólida, líquida o gaseosa

Según la forma en la que se tome

• Aleatoria
• Selectiva
• Estratificada
• De conveniencia
Según el tamaño y la proximidad con el objeto
• Bruta o primaria
• Agregada o compuesta
• De laboratorio
• Test o alícuota
Según su composición: homogénea o heterogénea
 El objetivo básico de cualquier programa de muestreo es
asegurar que la muestra tomada sea REPRESENTATIVA
de la composición del material a analizar
El programa de muestreo consta de las siguientes etapas:
TOMA DE MUESTRA

1. Estudios preliminares
2. Definición de los parámetros a determinar
3. Frecuencia de muestreo y tamaño de la muestra
4. Elección de los puntos de muestreo
5. Tipo de muestra a analizar
6. Estado físico de la fracción que se va a analizar
7. Propiedades químicas del material
8. Selección del sistema de preparación, transporte y
almacenamiento
9. Reducción de la muestra a un tamaño adecuado
10. Preparación de la muestra para el laboratorio
En la medida en que se logra que las muestras sean homogéneas
y representativas, el error de muestreo se reduce.
 ANÁLISIS INDUSTRIAL Y DE PROCESOS
Módulo 2.- Toma de muestra
Introducción

PROBLEMAS:
1. La heterogeneidad espacial y/o temporal de la materia.
2. Sujeta a errores sistemáticos y aleatorios.
3. El muestreo puede ser diferente según las especies a determinar y la técnica analítica a
emplear.
4. Gran variedad de materiales objeto del análisis y tamaño de los mismos.
5. Evolución del material (aseguramiento de la integridad de las especies).
Hasta 15 toneladas

Más de 15 toneladas
Hasta 15 toneladas

Más de 15 toneladas
 Real Decreto 90/2001, de 2 de febrero por el que se establecen los
métodos de toma de muestras y de análisis para el control oficial
del contenido máximo de aflatoxinas en cacahuetes,
frutos de cáscara, frutos desecados, cereales, leche
y los productos derivados de su transformación.
BOE 23 febrero 2001

ANEXO I
Métodos de toma de muestras para el control oficial
del contenido máximo de aflatoxinas en cacahuetes,
frutos de cáscara, frutos desecados, cereales, leche
y los productos derivados de su transformación.

ANEXO II
Preparación de las muestras y criterios generales
Aflatoxina B1 que deben cumplir los métodos de análisis
para el control oficial del contenido máximo de aflatoxinas
en cacahuetes, frutos de cáscara, frutos desecados, cereales,
leche y los productos derivados de su transformación.
Recogida de muestras.

Cinta
transportadora
 Toma de Muestras

● Para productos sólidos, se tomaran las muestras en varias zonas con

sacabocados, taladros, sierras y se introducirán asépticamente en
recipientes estériles.

● Es conveniente anotar la temperatura de almacenamiento del producto e

incluso su propia temperatura
Toma de Muestras
 TECNICAS DE MUESTREO

Etiquetado de la muestra

 Las muestras se etiquetan en el momento en que son tomadas con la siguiente

información:
 Persona que realiza el muestreo
 Día , hora y lugar
 Información sobre la metodología seguida
 Incidencias durante el muestreo.

 Subdivisión de la muestra

 La muestra bruta obtenida resulta de la mezcla de un cierto número de unidades de

muestreo (incrementos).

 El número de unidades de muestreo depende mas de :

 Tamaño de las partículas
 Grado de heterogeneidad del material
 Exactitud requerida en los resultados
 cantidad de muestra sometida al muestreo, por lo que esta se somete a un proceso de
subdivisión.
Fuentes de error durante la toma de muestra:

PLANIFICACION POSIBLE FUENTE DE ERROR

Definición y Heterogeneidad de la muestra. Variabilidad espacial de
subdivisión del área los contaminantes: puntos calientes.
Método de toma de muestra Falta de representatividad estadística. Distribución
sesgada. Contaminación o pérdida de analitos.
Número de muestras Pocos replicados. Falta de representatividad.
Masa de muestra Falta de representatividad.
Momento de la Variabilidad estacional. Condiciones climáticas.
toma de muestra

TOMA DE MUESTRA POSIBLE FUENTE DE ERROR

Condiciones experimentales
Envasado
Conservación de la muestra
Efectos de matriz, lixiviación o deposición.
Contaminación o extracción por el material del
contenedor. Volatilización.
Contaminación o pérdidas por volatilización. Reacciones
químicas (cambios de especies).
 ERRORES EN EL MUESTREO
Niveles de elementos traza en el aire del laboratorio y en diversas
sustancias
AIRE COSME-
AIRE FILTRADO HUMO SUDOR
ION TICOS
µg µg/g µg/g µg/g
µg/g
Al 3000 6.00 - - -
As 55 <0.01 2.85 - -
Br 2 <0.02 71.50 0.4 -
Ca 2690 <0.04 - 60000 -
Cl 1.5 <0.005 - 630 1700
Fe 3250 <0.006 7.30 1100 1
K 7920 <0.004 - 250 300
Na 2950 134 - - 2500
P 1150 1,50 - 1400 0.8
S 20000 <0.003 - 400 -
Pb 2150 <0.04 - 1400 0.8
Se 0.6 <0.02 0.22 - -
Ti 258 3.00 6300 - -
Zn 1640 <0.02 10 35000 1 Impurezas de elementos traza en el material del laboratorio

VIDRIO POLIETI- CUARZO TYGON TEFLON

µg/g LENO ng/g µg/g ng/g
ION ng/g
Al 10000 80-3100 0.17 55 -
Ca 1000 200-20000 0.38 5 -
Co 0.082 5 0.33 - 0.33-1.7
Cr - 5 1.60 6 30
Cu - 15-300 2.00 10 22
Fe 280 4 160 50 35
K 3000 600-2000 500 ND ND
Mn 1000 - - - 2
Na 300000 10 - ND 3000
Pb - 200 - - 200
Si 400000 2000 0.70 ND -
Zn - 0.73 90 34 8
 TRANSPORTE Y CONSERVACION DE LA MUESTRA
El tiempo que transcurre entre la toma de muestras y el comienzo del análisis debe ser el mas corto
posible.
 El trasporte además de rápido deberá mantener temperaturas de refrigeración o congelación para los
productos que lo requieran

Representatividad de la muestra
 La concentración de los analitos en la muestra obtenida debe ser idéntica a la
concentración en la muestra real en la posición y tiempo en la que se ha realizado el muestreo
y que esta no varíe hasta la ejecución de los análisis.

• PRECAUCIONES EN EL TRANSPORTE
 Evitar la exposición a humedades extremas y mantenerlas a 4 º C.
 Las muestras biológicas o de alimentos es necesario transportarlas congeladas

• PRECAUCIONES PARA LA CONSERVACION

 Reducir los riesgos de alteraciones por contacto con la atmósfera, absorción y oxidación
 Evitar su exposición al aire ya la luz y su manipulación
 Los sólidos se mantienen secos eliminando el agua en una estufa
 Las muestras biológicas se congelan en nitrógeno líquido o se liofilizan
 El tratamiento de los líquidos depende del tipo de análisis
 ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

 Las muestras se almacenan por dos motivos:

 Porque su análisis no va a ser inmediato
 Para guardar un duplicado con el fin de hacer un chequeo de los resultados obtenidos en los
análisis iniciales

 Para conservar las muestras durante largos periodos de tiempo en sus recipientes es
recomendable:
 Que el aire contenido en el espacio libre del recipiente sea mínimo
 Que el material sea hidrófobo
 Que su superficie sea lisa y no porosa

 Los materiales utilizados para almacenar las muestras son de tres tipos :
 Polimeros ( teflón, polietileno, polipropileno, plexiglás y goma de silicona )
 Vidrios (cuarzo sintético y borosilicato de vidrio)
 Metales (papel de aluminio, platino y titanio de elevada pureza)
Toma de muestra
 PREPARACION DE LA MUESTRA

• Teniendo en cuenta el elevado número de matrices posibles a analizar, es imposible dar un

esquema detallado de los procedimientos operativos y riesgos de error para cada una de las
muestras.
 La preparación de la muestra es un proceso muy elaborado y en el se incluyen varias etapas:
Esta preparación es muy diferente y depende del estado de agregación de la muestra

Digestión ácida

preconcentración

vía seca
vía húmeda

Preconcentración
Eliminación
interferentes
Limpieza

Preconcentración
PREPARACION DE LA MUESTRA

Digestión ácida

preconcentración

vía seca
vía húmeda
vía seca
vía húmeda

Preconcentración
Eliminación
interferentes
 PREPARACION DE UNA MUESTRA SÓLIDA: SECADO

Perdida de elementos en el secado en horno  Secado de la muestra

 Se lleva a cabo antes de la homogeneización
Tiempo Pérdida de la muestra sólida o de la medida instrumental
Elemento Matriz Temp.
(horas) (%)
Cd Hígado 110 16 1 Secado en horno :
• Se introduce la muestra en el horno
Co Ostras 110 24 14
controlando adecuadamente la temperatura
Cr Sangre 120 16 3 y el tiempo.
Ostras 110 16 5 • Temperaturas altas descomponen
Fe la muestra y producen perdidas de
Sangre 110 16 3 elementos.
Plankton 60 50 60 • Temperaturas bajas exponen la muestra
Hígado 80 72 5 a posibles contaminaciones
Hg
Músculo 120 24 21
Liofilización
• Consiste en secar la muestra a vacío a
Pb Ostras 120 48 20 bajas temperatura
Mn Ostras 110 48 14
Zn Ostras 110 24 9
TRITURACIÓN Y HOMOGENEIZACIÓN DE ALIMENTOS

Jarra: Consiste en un envase de vidrio o acero provisto de una hélice.

Vástago: Provisto de una hélice en su extremo, que se introduce en la mezcla que se va a triturar. Necesita un envase de
vidrio o acero que se adapte especialmente al vástago.
Triturador de paletas (Stomacher), que actúa golpeando rítmicamente la mezcla de alimento y diluyente que ha sido
introducida previamente en una bolsa de plástico estéril.
Molino criogénico
Limpieza/
preconcentración
PREPARACION DE LA MUESTRA

Digestión ácida

preconcentración

vía seca
vía húmeda
vía seca
vía húmeda

Preconcentración
Eliminación
interferentes
 PREPARACION DE UNA MUESTRA SÓLIDA: DISOLUCIÓN
 La mayoría de las técnicas analíticas requieren disponer de la muestra en disolución, por lo
que abordaremos los tratamientos químicos mas importantes y los posibles errores que se
puedan cometer para obtener una disolución que represente a la muestra. (tratamiento de la
muestra).
 Es la etapa previa a la mayoría de los análisis y consiste en convertir los analitos en una forma
química para que permanezcan estables en disolución.

 En la mayoría de los casos el proceso implica la eliminación de la materia orgánica por

conversión en compuestos volátiles.
Mineralización a elevada
Se lleva a cabo por vía seca o por vía húmeda temperatura (horno)

Mineralización en plasmas de
oxigeno a bajas temperaturas
VIA SECA Combustión en frasco de
Oxigeno (Frasco Schöniger)

DISOLUCION Técnicas de fusión

DE LA MUESTRA (Disgregación)

VIA HUMEDA
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA SECA

 MINERALIZACIÓN A ELEVADAS TEMPERATURAS

 Se somete la muestra a la acción de temperaturas elevadas durante cierto tiempo
 La temperatura debe seleccionarse de manera que permita una mineralización
eficaz sin pérdidas de analitos por volatilización
 Ciertas muestras requieren la adición de agentes estabilizantes para evitar la
pérdida por volatilidad de analitos volátiles
Se pueden perder elementos como: Ag, As, Cr, Hg, I, K, Na, Pb, Sb, Se, Sn y Te

 COMBUSTIÓN EN FRASCO DE SCHÖNIGER

 Se basa en la volatilización cuantitativa de los elementos de interés de la muestra
y posterior recuperación de sus productos gaseosos por adsorción
Se recuperan elementos como: F, Cl, Br, I, S, Se, P, As, Hg, Cu, Cd, Zn, Al, Ba,
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA SECA

 MINERALIZACIÓN EN PLASMA DE O2 A BAJAS TEMPERATURAS

 Se basa en la capacidad del oxigeno excitado, obtenido al pasar una corriente
de oxigeno a bajas presiones a través de un campo de radiofrecuencia, de oxidar
a la muestra al incidir sobre ella a temperaturas inferiores a 200 ºC
 Presenta el inconveniente de poca capacidad de muestras y largos periodos de
tiempo no se volatilizan elementos como : As, Cd, Sb, Pb, B y Ge

 TECNICAS DE FUSIÓN O DISGREGACIÓN

 Se usan para transformación de sales insolubles en ácidos como silicatos,
ciertos óxidos minerales y algunas aleaciones de hierro, en otras solubles en
ácidos mediante mezclado con una cantidad elevada de una sal de metal alcalino
(fundente) y fusión de la mezcla a elevada temperatura (de 300 a 1200ºC).
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
 Ácidos y bases más frecuentes

 Ácido clorhídrico (37%):

 Útil en la disolución de carbonatos, fluoruros, sulfuros, fosfatos, sulfatos
insolubles, óxidos metálicos y metales más fácilmente oxidables que el hidrógeno
(Eo<0).
 El HCl concentrado es 12 M pero en ebullición se diluye hasta 6 M (p.e. 110ºC).
 Forma algunos cloruros volátiles.

 Ácido nítrico (70%):

 Fuerte agente oxidante.
 Disolución de metales excepto Al y Cr que se pasivan y con Sn, W o Sb forma
óxidos hidratados poco solubles.
 Descompone las muestras orgánicas y biológicas.

 Ácido sulfúrico (98%):

 Disuelve muchos materiales, incluyendo metales y muchas aleaciones, debido a
su punto de ebullición tan elevado (p.e. 340ºC).
Los compuestos orgánicos se deshidratan y oxidan a CO2 y H2O en ácido
sulfúrico caliente.

 Ácido perclórico (70%):

 En caliente es un potente oxidante capaz de disolver aleaciones de hierro y
aceros inoxidables.
 Peligro de explosión violenta cuando el ácido perclórico caliente entra en
contacto con materia orgánica o sustancias inorgánicas fácilmente oxidables.
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
Ácidos y bases más frecuentes

Ácido fluorhídrico (50%):

 Descomposición de rocas y minerales de silicato cuando no se va a determinar
silicio ya que éste se pierde en forma de SiF4 que es volátil.
 Normalmente es necesario eliminar el exceso de HF ya que disuelve el vidrio.
 Se evapora en presencia de H2SO4 o HClO4 o bien se inactiva complejándolo con
ácido bórico.
 Forma algunos fluoruros volátiles y algunos fluoruros insolubles como LaF3, CaF2
y YF3.
 El HF es extremadamente tóxico, ocasiona serias quemaduras y heridas muy
dolorosas en contacto con la piel mostrándose los efectos horas después de la
exposición.

 Ácido bromhídrico (48%):

 Semejante al HCl en cuanto a sus propiedades.

Ácido Fosfórico (85%):

 En caliente disuelve a los óxidos refractarios que son insolubles en otros ácidos.

 Hidróxido sódico:
 Disuelve Al y los óxidos anfóteros de Sn, Pb, Zn y Cr.

 Mezclas oxidantes:
 El agua regia (3 partes de HCl + 1 parte de HNO3) se emplea en digestiones
difíciles.
 La adición de agua de bromo o peróxido de hidrógeno a ácidos minerales
aumenta la acción disolvente y acelera la oxidación de materia orgánica.
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
 Una muestra se puede disolver con la ayuda de un ácido cuya naturaleza depende del
tipo de muestra, sin embargo se suele recurrir a:

 MEZCLAS DE ACIDOS
 Aprovechando sus diferentes propiedades: carácter complejante de uno y
carácter oxidante del otro (HF+HNO3; HF+H2SO4)
 Un ácido modera una propiedad no deseable del otro: (HNO3 + HClO4)
 Los ácidos pueden reaccionar entre si dando productos mas reactivos
que los ácidos solos ( 3 HCl + HNO3)
 Un ácido permite eliminar otro no deseado después de haber realizado
su efecto (HF+ HCl; HNO3+ H2SO4; HNO3+ H3PO4 )

 MEZCLAS DE ACIDOS CON OTROS REACTIVOS

Entre los reactivos mas usados junto a ácidos cabe destacar:
 Oxidantes (H2 O2 ; Br2 ; KClO3 )
 Electrolitos inertes que aumentan el punto de ebullición permitiendo
temperaturas mayores (Na2SO4 , (NH4)2SO4 )
 Agentes complejantes (citrato o tartrato)
 Catalizadores que aumentan la velocidad de disolución de las muestras
(Cu(II), Hg(II) , V2O5 , ect.)
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
Método Sistema Digestión con ácidos a P.A.
Ventajas Inconvenientes
Radiación de calor a Digestión por ácidos * Lentitud
presión atmosférica * Sistema abierto
* Bien conocida (pérdidas de volátiles,
* No hay límite de espumas y humos
cantidad de muestra corrosivos, etc.)
Radiación de calor a Digestión por ácidos en * Sencillez
bombas de teflón en * Elevado riesgo de
presión elevada recipientes de acero * Facilidad de adición contaminación
de reactivos y * Peligrosidad de
muestras reactivos
Radiación de Digestión por ácidos en * Material barato
microondas bombas de teflón

Digestión con ácidos en

Digestión con ácidos equipos de microondas
en bombas a presión
Ventajas Inconvenientes Ventajas Inconvenientes
* Limitación en la
cantidad de muestra * Rapidez (minutos)
* Sistema cerrado * Lentitud (horas) * Limitación en la
* Sistema cerrado
(se evita pérdidas de * Peligrosidad de cantidad de muestra
* Menor riesgo de
volátiles, evolución reactivos * Peligrosidad de
contaminación
de humos y * Material más caro reactivos
(aislamiento de
espumas, etc.) * Dificultad de adición * Material más caro
atmósfera del
* Menor riesgo de de reactivos * Dificultad de adición
laboratorio, material de
contaminación de reactivos
teflón, etc.)
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
Calentamiento Convencional Tipos de equipos de microondas para
digestión
de convección
Corrientes

Mezcla ácido-muestra
Guí
Guía de microondas

Paredes del recipiente

Calor por Dispersor
conducción
Magnetró
Magnetrón

La temperatura en la superficie inferior es mayor Cavidad de

microondas
que la del punto de ebullición del ácido

Calentamiento por Microondas Microondas Difusas

Mezcla ácido-
muestra
(absorbe energía de
microondas) Guía de microondas
Magnetrón

Paredes del recipiente

(transparente a la energía de Microondas) Microondas Focalizádas
 Digestión enzimática

• Aminoácidos.
• Determinación de organometálicos
p.e. As, Hg en alimentos
• Suplementos nutricionales y alimentos
enriquecidos: Selenoespecies
• Identificación de especies por MS
  Teniendo en cuenta el elevado número de matrices posibles a analizar, es imposible dar un
esquema detallado de los procedimientos operativos y riesgos de error para cada una de las
muestras.

 La preparación de la muestra es un proceso muy elaborado y en el se incluyen todos las

etapas que se muestran en la tabla.
 Esta preparación es muy diferente y depende del estado de agregación de la muestra

vía seca
vía húmeda
Bibliografía:

● http://www.fao.org/DOCREP/005/Y1453S/y1453s0f.htm

●L.M.L. Nollet, Handbook of Food Analysis, Marcel Dekker, Inc., New York, 2004

● Daniel C. Harris: Análisis Químico Cuantitativo. Ed. Reverté.

● Métodos estándares AOAC (1990)

● WF bKwolek, EB Lilleboj, J. Assoc. Off Anal. Chem., 59, 787, 1976

● American Chemical Society, Anal. Chem., 52, 2242, 1980.

● International Standards Organization. Fresh Fruits and Vegetables-Sampling.

ISO 874, 1980

● JA Lyn, MH Ramsey, R Wood, Analyst, 127, 1252, 2002.