Toma y Tratamiento de muestras

Química Analítica e Instrumental 2020

Universidad Andrés Bello
 Obtención y preparación de muestras para el análisis.

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 Obtención y preparación de muestras para el análisis.

1 Definición del problema

Es la primera etapa, en ella se plantean Identificación y determinación de

preguntas generales de modo de que Contaminación de un río contaminantes orgánicos e
puedan tener una respuesta mediante inorgánicos
mediciones químicas.
Determinación de anfetaminas,
“Doping “en los Juegos Olímpicos hormonas, etc, en muestras de
2 Elección del método orina
Determinación de Cd en pinturas
Toxicidad en juguetes
amarillas

• Balance entre exactitud y economía.

• Considerar el número de muestras.

• Método elegido siempre debe estar determinado por la complejidad de la muestra que se analiza y por la
cantidad de componentes en la matriz de la muestra.

MUESTREO Y LA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

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Objetivos
1.- Resaltar la importancia de la toma de muestra dentro del proceso analítico y su influencia en la calidad del
resultado final.
2.- Destacar las principales estrategias de toma de muestras sólidas, líquidas y gaseosas.
3.- Conocer los métodos más comunes utilizados para disolver muestras.
4.- Adquirir los conceptos básicos de las distintas técnicas
 Obtención y preparación de muestras para el análisis.

Definiciones:

MUESTRA: Parte representativa de la materia objeto de

estudio (agua, alimento, materias primas, otros.)
MATRIZ: Entorno que contiene el analito.
ANALITO: Especie química objeto del análisis
TÉCNICA: Medio de obtener información sobre el analito.
Forma en la que hacemos la medida
MÉTODO: Conjunto de operaciones y técnicas aplicadas al
análisis de una muestra. Aplicación de la técnica
ANALISIS: Estudio de una muestra para determinar su
composición o naturaleza química

INTERFERENTE: Especie presente en la matriz que causan resultados erróneos en la determinación del analito.
COMPONENTE MAYORITARIO: Analito cuya concentración es mayor o igual al 1% en peso de la muestra.
COMPONENTE MINORITARIO: Analito cuya concentración esta entre 0.01 y 1% en peso de la muestra.
COMPONENTE TRAZA: Analito cuya concentración es menor al 0.01% en peso de la muestra.
 Obtención y preparación de muestras para el análisis.

La IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry) recomienda la utilización de los siguientes conceptos:

Lote / Objeto: Material completo del que se toma la muestra.

Muestra primaria bruta: De gran tamaño y tomada para el análisis o almacenamiento.

Muestra agregada o compuesta: varias porciones de muestra bruta.

Muestra de laboratorio: Muestra reducida tomada de la muestra agregada o bruta que debe tener la misma composición.

Muestra test o alícuota: Tomada de la muestra de laboratorio que es sometida al proceso de medida química (PMQ),
tras reducción o adecuación.

Otros conceptos importantes que deben manejar son:

Matriz de la muestra: Medio que conforma todos los componentes de la muestra que contiene el analito.

Muestra heterogénea: Sustancia cuya composición difiere de una parte a otra. Sus componentes pueden distinguirse a
simple vista o bajo un microscopio.

Muestra homogénea: Sustancia cuya composición es la misma en todas partes.

Interferente: Especie distinta del analito que aumenta o disminuye la respuesta de un método analítico y hace que parezca
más o menos analito del que realmente hay.

Enmascaramiento: Transformación de una especie interferente en una especie que no es detectada.

 ETAPAS IMPLICADAS EN UN ANALISIS

PLANTEAMIENTO DEL
PROBLEMA PROBLEMA ANALITICO

SELECCIÓN
DEL METODO

DISEÑO DEL
PLAN DE MUESTREO
MUESTREO

TOMA DE MUESTRA

TRATAMIENTO DE
LA MUESTRA

INTERPRETACION
REALIZACION DE DE LOS
LAS MEDIDAS RESULTADOS
 CALIDAD EN LA TOMA Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

❖ MUESTREO
✓ Proceso de selección de una porción de material que represente o proporcione
información sobre el sistema en estudio (población).
✓ Concepto amplio :
▪ Recogida de la muestra.
▪ Conservación.
▪ Reducción del tamaño de partícula.
▪ Homogeneización.
▪ Submuestreo.
✓ Uno de los aspectos mas importantes para obtener resultados de calidad en un
análisis es disponer de una muestra que represente el lote que se va a analizar .
✓ Es fundamental conocer e identificar los errores que se pueden cometer en el proceso
y durante la manipulación de la muestra hasta que llega al laboratorio.
✓ La mayoría de las técnicas analíticas requieren disponer de la muestra en disolución,
por lo que abordaremos los tratamientos químicos mas importantes y los posibles errores
que se puedan cometer para obtener una disolución que represente a la muestra.
(tratamiento de la muestra).

❖ ETAPAS DEL MUESTREO

Identificación de Toma de una Reducción demuestra bruta a

la población muestra bruta muestra de laboratorio
 REQUISTOS BÁSICOS DEL MUESTREO
❖ TOMA DE MUESTRA : Proceso de obtención de muestras

MUESTRA PORCIÓN ANALITICA

✓Fracción de una cantidad
mayor de un material , obte-
nida para que represente y
proporcione información del
mismo
INCREMENTO
✓Porción de material
obtenida en una operación
individual de toma de muestra
✓Cantidad de material
obtenido de la muestra
analítica para la medida
❖ CARACTERISTICAS DE LAS
MUESTRAS
✓Composición media repre-
sentativa
La composición de la muestra de
laboratorio debe ser igual que la
muestra analítica MUESTRA ANALITICA
✓ Varianza representativa ✓Obtenida a partir de la
muestra de laboratorio, y
La varianza de la concentración
de la muestra analítica debe ser de la que se extraen las
igual a la de la muestra original porciones analíticas
✓Error en el muestreo
Debe ser menor o igual que el del
procedimiento analítico

MUESTRA PRIMARIA MUESTRA DE

✓Conjunto de uno o más LABORATORIO
incrementos que se obtienen ✓Cantidad de material que
directamente de una llega al laboratorio para ser
población analizada
 PLAN DE MUESTREO
❖ REQUISITOS DEL PLAN DE MUESTREO
✓ Informar sobre la naturaleza de la muestra y su matriz
✓ Informar sobre la instrumentación a utilizar en el muestreo
✓ Conocer el grado de homogeneidad de la muestra
✓ Indicar el numero de submuestras necesarias para una exactitud determinada
✓ Presentar un esquema sobre las precauciones a seguir en la preparación de la muestra
❖ PLAN DE MUESTREO
✓ Procedimiento para seleccionar, extraer, conservar, transportar y preparar las porciones a separar de la población en
calidad de muestras.
✓ El proceso de muestreo debe estar planificado, detallado y escrito y el plan de muestreo debe incluir:
▪ Donde realizar la toma de la muestra
▪ Quien tiene que realizar la toma de la muestra
▪ Que procedimiento debe seguirse en la toma de la muestra

❖ TIPOS DE MUESTRAS
✓ Representativa: composición y propiedades similares al conjunto de la muestra.
✓ Selectiva: obtenida en el muestreo de determinadas zonas.
✓ Sistemática: obtenida según un procedimiento sistemático.
✓ Aleatoria: obtenida al azar.
✓Compósita : formada por dos o mas submuestras
❖ TIPOS DE MUESTREO
✓ Intuitivo: Basado en la experiencia en algún tipo particular de muestra
✓ Estadístico: Mediante un modelo estadístico previamente validado
✓ Sistemático: Siguiendo un protocolo en el que se especifica: tipo, tamaño, frecuencia, periodo del muestreo y lugar
 TECNICAS DE MUESTREO

❖ En la planificación del muestreo , han de considerarse los siguientes aspectos:

✓ Cuando, donde y como recoger la muestra
✓ Equipos de muestreo : mantenimiento y calibración
✓ Contenedores de la muestra : limpieza , adición de estabilizantes y conservación
✓ Transporte de la muestra
✓ Pretratamiento de la muestra : secado, homogeneización y manejo de la muestra
✓ Submuestreo
✓ Sistema informativo en el laboratorio
❖ Selección de los puntos y tiempos de muestreo :
✓ Se toman incrementos de muestra en puntos preseleccionados al azar, siguiendo un programa de muestreo, en el
que se incluyan estos puntos.
❖Representatividad de la muestra
✓ La concentración de los analitos en la muestra obtenida debe ser idéntica a la concentración en la muestra real en
la posición y tiempo en la que se ha realizado el muestreo y que esta no varíe hasta la ejecución de los análisis.
❖ Etiquetado de la muestra
✓ Las muestras se etiquetan en el momento en que son tomadas con la siguiente información:
▪ Persona que realiza el muestreo
▪ Día , hora y lugar
▪ Información sobre la metodología seguida
▪ Incidencias durante el muestreo.
❖ Subdivisión de la muestra
✓ La muestra bruta obtenida resulta de la mezcla de un cierto número de unidades de muestreo (incrementos).
✓ El número de unidades de muestreo depende mas de :
▪ Tamaño de las partículas
▪ Grado de heterogeneidad del material
▪ Exactitud requerida en los resultados
de la cantidad de muestra sometida al muestreo, ,por lo que esta se somete a un proceso de subdivisión.
 ESTADISTICA DE MUESTREO

❖ La estadística de muestreo se basa en el principio de que : “ Todas las partículas o porciones del
material , deben tener la misma probabilidad de ser tomadas ” y es vital para la obtención de una muestra
de la forma mas sencilla y representativa posible.

Ambas varianzas no son

significativas y son Medir una sola muestra
Analizando la conocidas
varianza de las
medidas en las Varianza de la medida Una medida de la
significativa y conocida muestra representativa
muestras
y la varianza del
Varianza de la muestra
método aplicado Un análisis por muestra
significativa y
en una serie de muestras
se pueden plantear desconocida
las siguientes
situaciones Múltiples muestras
Ambas varianzas
y varias medidas en
son significativas
cada muestra
 TRANSPORTE Y CONSERVACION DE LA MUESTRA

❖ PRECAUCIONES EN EL TRANSPORTE
✓ Evitar la exposición a humedades extremas y mantenerlas a 4 º C.
✓ Las muestras biológicas o de alimentos es necesario transportarlas congeladas
❖ PRECAUCIONES PARA LA CONSERVACION
✓ Reducir los riesgos de alteraciones por contacto con la atmósfera, absorción y oxidación
✓ Evitar su exposición al aire ya la luz y su manipulación
✓ Los sólidos se mantienen secos eliminando el agua en una estufa
✓ Las muestras biológicas se congelan en nitrógeno líquido o se liofilizan
✓ El tratamiento de los líquidos depende del tipo de análisis

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

❖ Las muestras se almacenan por dos motivos:

✓ Porque su análisis no va a ser inmediato
✓ Para guardar un duplicado con el fin de hacer un chequeo de los resultados obtenidos en los análisis iniciales

❖ Para conservar las muestras durante largos periodos de tiempo en sus recipientes es recomendable:
✓ Que el aire contenido en el espacio libre del recipiente sea mínimo
✓ Que el material sea hidrófobo
✓ Que su superficie sea lisa y no porosa

❖ Los materiales utilizados para almacenar las muestras son de tres tipos :
✓ Polimeros ( teflón, polietileno, polipropileno, plexiglás y goma de silicona )
✓ Vidrios (cuarzo sintético y borosilicato de vidrio)
✓ Metales (papel de aluminio, platino y titanio de elevada pureza)
 PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ANALISIS

❖ La preparación de la muestra es un proceso muy elaborado y en el se incluyen todos las etapas

que se muestran en la tabla.
❖ Esta preparación es muy diferente y depende del estado de agregación de la muestra

MUESTRA BRUTA
SÓLIDA LÍQUIDA GASEOSA

❖Tratamiento muestra bruta ❖Homogenización Obtención

✓Secado ✓ Presión muestra
❖Separación de fases
✓ División ✓ Sin cambio químico
✓ Pulverización ✓ Con cambio químico
▪ Fase sólida
❖Homogeneización
▪ Fase gaseosa
✓ Mezcla en centrífuga
Adsorción
✓ Pruebas de homogeneidad ❖Preconcentración ✓Adsorbentes líquidos
✓ Precipitación ✓Adsorbentes sólidos
❖Submuestreo
❖Submuestreo
✓ Por pesada
✓Por pesada o volumen
 PREPARACION DE UNA MUESTRA SÓLIDA: SECADO

✓ Teniendo en cuenta el elevado número de matrices posibles a analizar, es imposible dar un esquema
detallado de los procedimientos operativos y riesgos de error para cada una de las muestras.
✓ Los pasos mas significativos son :
Secado de las muestras sólidas y puesta en disolución de la muestra

Tabla 4.- Perdida de elementos en el secado en

✓ Secado de la muestra
horno
▪ Se lleva a cabo antes de la homogeneiza
Tiempo Pérdida -ción de la muestra sólida o de la medida
Elemento Matriz Temp.
(horas) (%) instrumental
Cd Higado 110 16 1 Secado en horno :
Co Ostras 110 24 14 • Se introduce la muestra en el horno
controlando adecuadamente la tempe-
Cr Sangre 120 16 3 ratura y el tiempo.
Ostras 110 16 5 • Temperaturas altas descomponen
Fe Sangre 110 16 3 la muestra y producen perdidas de
elementos.
Plankton 60 50 60 • Temperaturas bajas exponen la mues-
Higado 80 72 5 tra a posibles contaminaciones
Hg Liofilización
Musculo 120 24 21
• Consiste en secar la muestra a vacío a
bajas temperatura
Pb Ostras 120 48 20
Mn Ostras 110 48 14
Zn Ostras 110 24 9
 Desecación
Evaporación y desecación es distinto.
Evaporación separamos gran cantidad de líquido del producto a evaporar y lo que nos queda es el
residuo seco.
En la desecación separamos poca cantidad de liquido del sólido, “quitamos la humedad”, y lo que
queda es el sólido sin agua.
Los sólidos se clasifican según su comportamiento frente a la humedad del ambiente en:
1. Sólidos húmedos, no modifican su humedad sea cual fuere la del ambiente.

2. Sólidos higroscópicos, son aquellos que captan la humedad del ambiente si tienen ellos
menos presión de vapor. Estos pueden ser:

 Solubles ,captan agua hasta disolverse, por ejemplo la sosa.

 Insolubles, como la mayor parte de los productos de farmacia.

Los productos de farmacia es necesario desecarlos hasta quitarles el agua libre.

Secado por convección: Una corriente de gas transmite por convección el calor necesario para secar el material. Además de aportar
calor, el gas sirve también para arrastrar y eliminar la humedad perdida por el material.
Secado por contacto directo: El material a secar se deposita o se hace pasar sobre superficies muy calientes. El calor se transmite al
material preferentemente por conducción.
Secado por radiación: El material a secar absorbe radiación electromagnética emitida por fuentes de radiación (p. ej. Radiadores de
infrarrojos). El calentamiento y la evaporación se producen en este caso no sólo en la superficie del material, sino también en su interior.
Liofilización: La humedad del material húmedo congelado se transfiere, bajo vacío y por debajo del punto triple, directamente del
estado sólido al de vapor.
Secado por alta frecuencia: El material a secar se dispone entre los electrodos de un condensador de placas y se expone a campos
eléctricos de alta frecuencia. Una parte de la energía suministrada es absorbida por el material. Como consecuencia, se calienta el
material y la humedad se elimina.
 Liofilización
Consiste en la desecación de un sólido que contiene un líquido (generalmente agua), mediante primero una congelación y
luego una sublimación, mediante un sistema de vacío.
El sólido por ello no pierde sus características, y se reconstituye en el momento de su utilización.
Mediante la liofilización conseguimos más estabilidad en los productos ya que disminuye la contaminación microbiana así
como la degradación químicas, ya que las dos necesitan agua.
Es una operación muy utilizada para: medicamentos de administración parenteral, como antibióticos, factores de
coagulación, etc.

Las fases de la liofilización son:

1. Congelación. Se somete el producto a temperaturas muy bajas (-20ºC), con la
mayor rapidez posible para no modificar su estructura)
2. Desecación primaria. Se realiza un sistema de vacío, que permite que el agua
pase a gas por sublimación a bajas temperaturas.
3. Desecación secundaria. Consiste en eliminar el agua fuertemente ligada por
evaporación.

Factores a tener en cuenta en la liofilización:

1. Temperatura. T .eutéctica, t. mínima a la que hay que congelar el producto.
2. Volumen. Según el aparato que utilicemos.
3. Porosidad. Suficiente para la resuspensión, hum.‹1%.
4. Esterilidad. Asegurada ya que se liofilizan muchas preparaciones por vía
parenteral.
 Liofilización

Los liofilizadores constan de:

1. Cámara de liofilización o cámara
de desecación. Donde se refrigera o
calienta el producto.
2. Cámara de condensación. Donde se
congela el vapor de agua procedente
del producto para que no vaya a la
bomba de vacío.
3. Bomba de vacío.
 PREPARACION DE UNA MUESTRA SÓLIDA: DISOLUCIÓN

✓ Es la etapa previa a la mayoría de los análisis y consiste en convertir los analitos en una forma química
para que permanezcan estables en disolución.
✓ En la mayoría de los casos el proceso implica la eliminación de la materia orgánica por conversión en
compuestos volátiles.
✓Se lleva a cabo por vía seca o por vía húmeda

Mineralización a elevada
temperatura (horno)

Mineralización en plasmas de
oxigeno a bajas temperaturas

VIA SECA
Combustión en frasco de
Oxigeno (Frasco Schöniger)

DISOLUCION Técnicas de fusión

DE LA MUESTRA (Disgregación)

VIA HUMEDA
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA SECA
❖ MINERALIZACIÓN A ELEVADAS TEMPERATURAS
✓ Se basa en someter la muestra a la acción de temperaturas elevadas durante cierto tiempo
✓ La temperatura debe seleccionarse de manera que permita una mineralización eficaz sin perdidas de
analitos por volatilización
✓ Ciertas muestras requieren la adición de agentes estabilizantes para evitar la perdida por volatilidad de
analitos volátiles
✓Se pueden perder elementos como: Ag, As, Cr, Hg, I, K, Na, Pb, Sb, Se, Sn y Te
❖ COMBUSTIÓN EN FRASCO DE SCHÖNIGER
✓ Se basa en la volatilización cuantitativa de los elementos de interés de la muestra y posterior recuperación
de sus productos gaseosos por adsorción
✓Se recuperan elementos como: F, Cl, Br, I, S, Se, P, As, Hg, Cu, Cd, Zn, Al, Ba,

❖ MINERALIZACIÓN EN PLASMA DE O2 A BAJAS TEMPERATURAS

✓ Se basa en la capacidad del oxigeno excitado , obtenido al pasar una corriente de oxigeno a bajas
presiones a través de un campo de radiofrecuencia, de oxidar a la muestra al incidir sobre ella a
temperaturas inferiores a 200 ºC
✓ Presenta el inconveniente de poca capacidad de muestras y largos periodos de tiempo no se volatilizan
elementos como : As, Cd, Sb, Pb, B y Ge
❖ TECNICAS DE FUSIÓN O DISGREGACIÓN
✓ Se usan para transformación de sales insolubles en ácidos como silicatos, ciertos óxidos minerales y
algunas aleaciones de hierro, en otras solubles en ácidos mediante mezclado con una cantidad elevada de
una sal de metal alcalino (fundente) y fusión de la mezcla a elevada temperatura (de 300 a 1200ºC).
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA SECA : FUSIÓN

❖ Tipos de fundentes
Carbonato sódico (carbonato potásico):
▪ Descompone silicatos y muestras que contienen sílice, alúmina, sulfatos, óxidos refractarios, sulfuros
y fosfatos poco solubles al calentar a 1000-1200ºC
▪ Los cationes se transforman en carbonatos u óxidos solubles en ácidos.
▪ Los no metales se transforman en sales sódicas solubles.
▪ Normalmente se emplean crisoles de Pt
Carbonato sódico más un agente oxidante (KNO3, KClO3 o Na2O2 )
▪ Muestras que contienen S, As, Sb, Cr, etc, y que requieren un medio oxidante.
▪ Temperatura de fusión de 600-700ºC, Crisoles de Ni o Pt (no con Na2O2).
Hidróxido sódico o potásico:
▪ Fundente básico enérgico para silicatos, carburo de silicio y ciertos minerales.
▪ Temperatura de fusión más baja que con carbonatos, Crisoles de Au, Ag o Ni.
Peróxido de sodio:
▪ Fundente oxidante básico enérgico para sulfuros, silicatos que no se disuelven en Na2CO3, aleaciones
insolubles en ácidos de Fe, Ni, Cr, Mo, W, y Pt y minerales de Cr, Sn y Zr.
▪ Crisoles de Fe o Ni previamente recubiertos de Na2CO3 fundido.
Pirosulfato potásico (K2S2O7):
▪ Fundente ácido para óxidos y muestras que contienen óxidos poco solubles.
▪ Temperatura de fusión de 400ºC, Crisol de Pt o porcelana.
Ácido bórico (B2O3):
▪ Fundente ácido para silicatos y óxidos en los que se determinan metales alcalinos.
▪ Temperatura de fusión de 800-850ºC.
▪ Evaporando a sequedad con alcohol metílico la disolución del fundido, se elimina el óxido bórico, que
destila en forma de borato de metilo B(OCH3)3, Crisoles de Pt.
Carbonato cálcico (8) + cloruro amónico (1):
▪ Calentando el fundente se produce una mezcla de CaO y CaCl2 que se usa para descomponer
silicatos para la determinación de metales alcalinos.
▪ Crisoles de Ni.
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
❖ Ácidos y bases más frecuentes (1)
Ácido clorhídrico (37%): Útil en la disolución de carbonatos, fluoruros, sulfuros, fosfatos, sulfatos
insolubles, óxidos metálicos y metales más fácilmente oxidables que el hidrógeno (Eo<0).
▪ El HCl concentrado es 12 M pero en ebullición se diluye hasta 6 M (p.e. 110ºC).
▪ Forma algunos cloruros volátiles.
Ácido nítrico (70%): Fuerte agente oxidante.
▪ Disolución de metales excepto Al y Cr que se pasivan y con Sn, W o Sb forma óxidos
hidratados poco solubles.
▪ Descompone las muestras orgánicas y biológicas.
Ácido sulfúrico (98%): Disuelve muchos materiales, incluyendo metales y muchas aleaciones, debido a su
punto de ebullición tan elevado (p.e. 340ºC).
▪Los compuestos orgánicos se deshidratan y oxidan a CO2 y H2O en ácido sulfúrico caliente.
Ácido perclórico (70%): En caliente es un potente oxidante capaz de disolver aleaciones de hierro y
aceros inoxidables.
▪ Peligro de explosión violenta cuando el ácido perclórico caliente entra en contacto con materia
orgánica o sustancias inorgánicas fácilmente oxidables.
Ácido fluorhídrico (50%): Descomposición de rocas y minerales de silicato cuando no se va a determinar
silicio ya que éste se pierde en forma de SiF4 que es volátil.
▪ Normalmente es necesario eliminar el exceso de HF ya que disuelve el vidrio.
▪ Se evapora en presencia de H2SO4 o HClO4 o bien se inactiva complejándolo con ácido bórico.
▪ Forma algunos fluoruros volátiles y algunos fluoruros insolubles como LaF3, CaF2 y YF3.
▪ El HF es extremadamente tóxico, ocasiona serias quemaduras y heridas muy dolorosas en
contacto con la piel mostrándose los efectos horas después de la exposición.
Ácido bromhídrico (48%): Semejante al HCl en cuanto a sus propiedades.
Ácido Fosfórico (85%): En caliente disuelve a los óxidos refractarios que son insolubles en otros ácidos.
Hidróxido sódico: Disuelve Al y los óxidos anfóteros de Sn, Pb, Zn y Cr.
Mezclas oxidantes: El agua regia (3 partes de HCl + 1 parte de HNO3) se emplea en digestiones difíciles.
La adición de agua de bromo o peróxido de hidrógeno a ácidos minerales aumenta la acción disolvente y
acelera la oxidación de materia orgánica.
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA

✓ Una muestra se puede disolver con la ayuda de un ácido cuya naturaleza depende del tipo de
muestra, sin embargo se suele recurrir a:
✓ MEZCLAS DE ACIDOS
▪ Aprovechando sus diferentes propiedades: carácter complejante de uno y carácter
oxidante del otro (HF+HNO3; HF+H2SO4)
▪ Un ácido modera una propiedad no deseable del otro: (HNO3 + HClO4)
▪ Los ácidos pueden reaccionar entre si dando productos mas reactivos que los ácidos
solos ( 3 HCl + HNO3)
▪ Un ácido permite eliminar otro no deseado después de haber realizado su efecto
(HF+ HCl; HNO3+ H2SO4; HNO3+ H3PO4 )
✓ MEZCLAS DE ACIDOS CON OTROS REACTIVOS
Entre los reactivos mas usados junto a ácidos cabe destacar:
▪ Oxidantes (H2 O2 ; Br2 ; KClO3 )
▪ Electrolitos inertes que aumentan el punto de ebullición permitiendo temperaturas
mayores (Na2SO4 , (NH4)2SO4 )
▪ Agentes complejantes (citrato o tartrato)
▪ Catalizadores que aumentan la velocidad de disolución de las muestras (Cu(II), Hg(II)
, V2O5 , ect.)
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
Descomposición y disolución Digestión con ácidos a P.A.

Método Sistema Ventajas Inconvenientes

* Lentitud
Radiación de calor a Digestión por ácidos
presión atmosférica Fusiones * Sistema abierto
* Bien conocida (pérdidas de volátiles,
Digestión por ácidos en * No hay límite de espumas y humos
Radiación de calor a bombas de teflón en corrosivos, etc.)
presión elevada cantidad de muestra
recipientes de acero * Sencillez * Elevado riesgo de
Radiación de Digestión por ácidos en * Facilidad de adición de contaminación *
microondas bombas de teflón reactivos y muestras Peligrosidad de reactivos
* Material barato

Digestión con ácidos Digestión con ácidos en

en bombas a presión equipos de microondas
Ventajas Inconvenientes Ventajas Inconvenientes
* Limitación en la
cantidad de muestra
* Sistema cerrado (se * Lentitud (horas) * Rapidez (minutos) * Limitación en la
evita pérdidas de * Peligrosidad de * Sistema cerrado cantidad de muestra
volátiles, evolución de reactivos * Menor riesgo de * Peligrosidad de
humos y espumas, * Material más caro contaminación reactivos
etc.) * Dificultad de adición (aislamiento de * Material más caro
* Menor riesgo de de reactivos atmósfera del laboratorio, * Dificultad de adición
contaminación material de teflón, etc.) de reactivos
 DISOLUCIÓN DE UNA MUESTRA SÓLIDA POR VIA HÚMEDA
Calentamiento Convencional Tipos de equipos de microondas para
digestión
de convección
Corrientes

Mezcla ácido-muestra Guí

Guía de microondas

Paredes del
recipiente
Calor por Dispersor

conducción Magnetró
Magnetrón

La temperatura en la superficie inferior es Cavidad de

microondas
mayor que la del punto de ebullición del
ácido
Calentamiento por Microondas Microondas Difusas

Mezcla
ácido-
muestra
(absorbe Guía de microondas
Magnetrón
energía de
microonda
Paredes del recipiente s)
Microondas Focalizádas
(transparente a la energía de Microondas)
 Consideraciones importantes durante la etapa de
preparación de muestra
1) La preparación de la muestra no puede implicar pérdidas de analito, ni
tampoco contaminaciones.
2) Se debe transformar el analito en la mejor forma química para el
método analítico seleccionado.
3) Si es necesario, se eliminarán las interferencias de la matriz, mejorando así la
selectividad del método.
4) No se deben introducir nuevas interferencias.

5) Debe considerarse la dilución o preconcentración del analito, de manera que

se halle en el intervalo de linealidad del método seleccionado.

26
 Obtención y preparación de muestras para el análisis.

Trituración y/o molienda,

Muestra Muestra de
homogenización y Alícuotas
bruta laboratorio
reducción del tamaño

Alteraciones de la trituración y molienda

1) Se genera calor ➔ Perdida de los volátiles

2) Aumento de la superficie ➔ Reacciones con atmósfera
3) Pérdidas de polvo. Solución: Tamizados intermitentes
4) Desgaste y abrasión del molino ➔ Contaminación de muestra

Tamizado: Agitación de la muestra sólida en un tamiz metálico o de tela, que deja pasar partículas
de tamaño igual o menor a un tamaño deseado
 Obtención y preparación de muestras para el análisis.

Molienda

Mortero de cerámica se puede limpiar pasando un tejido húmedo, y lavando con

agua destilada.

Mortero de acero (También llamado mortero de percusión o Mortero diamante)

Mortero de ágata (o los semejantes de porcelana o alúmina), están diseñados

para triturar pequeñas partículas, convirtiéndolas en un polvo fino.

Morteros de carburo de boro son cinco veces mas duros que los de ágata, y
menos propensos a contaminar la muestra.
 Procesos de Separación
Clasificación de las operaciones de separación

MECÁNICAS DIFUSIONALES
Centrífuga
Ciclón HETEROGÉNEAS HOMOGÉNEAS
Decantador Espectrómetro de masas
Separador electrostático Difusión gaseosa
Separador de emulsiones No Equilibrio Equilibrio Difusión térmica
Filtración Ultracentrifugación
Flotación Electroforésis
Magnéticas Membranas No Membranas
Sedimentación Ultrafiltración Adsorción cinética
Electrodiálisis
Pervaporación
Ósmosis inversa
Permeación de
gases

Cromatografía Gas-Sólido Líquido-Sólido Gas-Líquido Líquido-Líquido Tres Fases

Afinidad Adsorción Adsorción Absorción Extracción
Capilaridad Sublimación Cristalización Destilación
LLC Fusión zonal Azeotrópica
GSC Intercambio iónico Extractiva
CGS Extracción S-L Flash
HPLC Lavado Reactiva
Secado de sólidos Vapor
Vacío
 PRINCIPALES OPERACIONES DE SEPARACIÓN

Operación Objetivo Ejemplo de aplicación

Absorción Separación de uno o varios componentes de una mezcla gaseosa Absorción de amoniaco del aire en agua
mediante su disolución selectiva en un líquido

Adsorción Separación de uno o varios componentes de una mezcla líquida o Adsorción de compuestos fenólicos en
gaseosa mediante un sólido adsorbente disolución acuosa con carbón activo

Centrifugación Separación de sólidos o líquidos de emulsiones o suspensiones por Separación del agua mezclada con aceites
actuación de la fuerza centrífuga vegetales en su proceso de extracción

Destilación Separación de una mezcla líquida por vaporización parcial de la misma y Obtención de etanol a partir de mezclas
condensación del vapor generado hidroalcohólicas

Evaporación Separación de los componentes volátiles de una disolución en la que el Concentración de zumos de frutas por
soluto es no volátil por generación de su vapor mediante calefacción eliminación de agua

Extracción Separación de los componentes de una mezcla líquida mediante un Extracción de aromáticos de los aceites
disolvente inmiscible con ella. lubricantes con furfural
Filtración Separación de las partículas suspendidas en un fluido mediante su Tratamiento de aguas residuales mediante
retención sobre un material poroso lechos de arena

Rectificación Separación, a través de sucesivas vaporizaciones parciales, de uno o Separación del crudo petrolífero en fracciones
varios componentes de una mezcla fluida mediante calefacción o de distinta volatilidad
enfriamiento
Secado Separación de un líquido que impregna un sólido, mediante su Secado de materiales cerámicos porosos en
vaporización en un gas, normalmente aire corriente de aire caliente

Sedimentación Separación de partículas sólidas o gotas de un fluido por acción de la Separación de lodos producidos en el
gravedad tratamiento de aguas residuales
Adsorción Absorción
Centrifugación

Separación de sustancias de diferente densidad mediante movimiento

giratorio
 Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Solid Phase Extraction (SPE)

• SPE retiene el analitos desde una fase en flujo

líquida sobre un sorbente sólido, para luego
recuperar el analitos vía elusión desde el
sorbenteom the sorbent
• Fase reversa (Reverse phase C18
(octadecyl bonded silica) and C8 (octyl
bonded silica)

• Fase normal (cyanopropyl bonded, diol

bonded, or amino propyl bonded silica
(used for polar analytes such as cationic
compounds and organic acids))

• Intercambio iónico (quaternary amine,

sulfonic acid, or carboxylic acid bonded
silica)

• Adsorción (materials such as alumina,

Florosil, resins)
 Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Solid Phase Extraction (SPE)

• SPE usa un cartucho o disco

• Jeringas simples o cartuchos
mútiple
 Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

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 Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Solid Phase Microextraction (SPME)

• 5 pasos
• Volumen de solvente pequeño, sin emusiones,
fácil automatización (cosot y tiempo)
• Basado sobre un solvente libre de proceso de
sorción-desorción
• Uso de fibra con silica
• Extracción-concentración-inyección.
 Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Soxhlet Extraction

• Dry solid sample is placed in a permeable

cellulose ‘thimble’
• Extraction solvent in the flask is heated to boiling
• Vapors rise through the outer chamber and into
the condensor
• Condense and drip down onto the extracting
sample
• Extraction chamber with sample fills until it
empties through the siphon arm into the flask
below
• Continues until solution in Soxhlet chamber is
same color as solvent
• Time consuming (6-48 hr)
• Large solvent usage requires concentration step
to evaporate solvent (using K-D concentrator)
Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Automatic Soxhlet Extraction

• EPA uses approved Soxtec device

(automated)
• Faster due to contact between boiling
solvent and sample, solvent drips
through sample (1 hr)
• Second stage sample is lifted above
solvent (1 hr)
• Third stage concentrates to 1-2 mL via
evaporation (20 min)
Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Ultrasonic Extraction

• A solid sample is mixed with anhydrous sodium sulfate (to absorb water)
• Extracted 3 times with a solvent mixture (1:1 acetone: CH2Cl2; 1:1 acetone hexane)
• Uses 300 W ultrasonic disruptor horn
• Fast procedure but extraction efficiency is low
Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Pressured Fluid Extraction (PFE)

• Also known as accelerated solvent extraction (ASE)

• Uses elevated temperatures and pressures
• Uses less solvent and takes less time than Soxhlet

Supercritical Fluid Extraction (SFE)

• Extracting solvent is CO2 in

supercritical fluid state (SCF)
• SCF is defined as a substance above
its critical temperature and pressure
(highest temp. and pressure at which
substance is a vapor and liquid in
equilibrium)
 Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Pressured Fluid Extraction (PFE)

• Also known as accelerated solvent extraction (ASE)

• Uses elevated temperatures and pressures
• Uses less solvent and takes less time than Soxhlet

To controller Extraction cell

(HPLC Column)

preheater
22 cm
Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Supercritical Fluid Extraction (SFE)

• CO2 in SCF state has physical and

thermal properties in-between pure
liquid and gas forms
• Gas-like high mass transfer coefficient,
liquid-like high solvent property
• High diffusivity of SCF allows it to
penetrate porous solids
• SCF extractor
Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para SVOC y Non-VOC

Post-Extraction Clean-Up of Organic Compounds

• “Cleanup” removes interfering chemicals from smaples

• Critical for analysis of trace analytes
• Analytes are masked by high background organics
 Fundamentos de preparación de muestras
Clean up para SVOC y Non-VOC

Theories and Operation Principles of Clean-up Methods

• Several methods available:

• Alumina Column: porous granular aluminum oxide, packed into a
column with water absorbing substance
Used to separate analytes from interfering compounds of a
different chemical polarity
• Florisil Column: activated form of magnesium silicate with basic
properties, used for clean-up of pesticide residues and other
chlorinated hydrocarbons, for separation of nitrogen compounds
from hydrocarbons, and separation of aromatics from aliphatic-
aromatic mixtures
• Silica Gel Column: silica with weak acidic amorphous silicon
oxide, forms strong H-bonds to polar materials leading to analyte
decomposition
• Gel Permeation Chromatography (GPC): size-based separation
using hydrophobic gel, selectively passes large macromolecules
(e.g. proteins, phospholipids, resins, lignins, fulvic, humic acids)
whilst retaining smaller molecules, methylene chloride is then
used to displace the analytes
• Acid-Base Partition Clean-up: liquid-liquid clean-up to separate
acid analytes from base/neutral analytes, uses pH adjustment in
a liquid-liquid extraction
• Sulfur Clean-Up: removed by agitation with powedered Cu,
mercury, or tetrabutyl ammonium sulfite
• Sulfuric Acid/Permanganate Clean-up: removes most
interferences except PCBs, chlorinated benzenes, and
chlorinated napthalenes, cannot be used for other analytes as it
will destroy them
Fundamentos de preparación de muestras
Derivatización para SVOC y Non-VOC

• Common methods:

• Silylation: replaces active hydrogens with trimethylsilyl (TMS) group [-Si(CH3)3].

Silyl derivatives are more volatile and thermally stable

• Acylation: adds an acyl group (RCO-), converts compounds with active

hydrogens into esters, thioesters and amides. Reduces polarity of amino,
hydroxyl, and thio groups

• Alkylation: reduces polarity by replacing active hydrogens with an alkyl group

(e.g. CH3, C2H5). Acidic hydrogens in carboxylic acids and phenols form esters,
ethers, and amide

• Esterification: acid reacts with alcohol to form an ester with a lower bpt.
Fundamentos de preparación de muestras
Extracción para VOC y gases

• Previous extraction methods do not apply to VOCs

Extracción Supercrítica
Se entiende por Fluido Supercrítico (FSC) a una sustancia llevada a condiciones operativas de P, T
cercanas al punto crítico.
En esta condición la sustancia no es ni líquido ni gas, pero posee las propiedades de ambas y
representa un estado de la materia en el cual ésta es compresible pero posee una densidad similar a
la de un líquido.
Entre los FSC más comunes se encuentran: Dióxido de P (atm)
carbono(CO2), Oxido nitroso (NO), Pentano (C5H12), Hexano
(C6H14), Amoníaco (NH3), Agua (H2O), Etano (C2H6), Propano Líquido Punto Crítico

(C3H8), Xenón (Xe). 73

A pesar de que el CO2 no es el que ofrece mayor rendimiento, Sólido
es el más ampliamente usado debido a su bajo costo, inerte,
no tóxico, no corrosivo, no inflamable. Punto Triple
5.1
Gas
1
1

-78.2 -56.6 31.1

T (ºC)
 Obtención y preparación de muestras para el análisis.
METODOS FISICO-QUÍMICOS O INSTRUMENTALES

✓ Se basan en la medida de una propiedad analítica relacionada con la masa o la

concentración de la especie a analizar. Se clasifican :
❖ ESPECTROSCOPICOS
✓ Espectrometría óptica
✓ Espectrometría de masas
✓ Espectrometría electrónica
❖ ELECTROANALITICOS
✓ Electródicos
✓ Iónicos
❖ OTROS MÉTODOS
✓ TERMICOS
▪ Termogravimétricos
▪ De barrido diferencial
▪ Térmico diferencial
▪ Valoraciones termométricas
✓ CINETICOS
▪Catalíticos
▪No catalíticos
✓ DE SEPARACIÓN
▪ Cromatográficos
▪ No cromatográficos
Fundamentos de preparación de muestras
Determinación y cuantificación (GC)
Fundamentos de preparación de muestras
Determinación y cuantificación (LC)
Ejemplos. Procedimientos Analíticos
La mayoría de las técnicas analíticas: MUESTRA EN ESTADO LÍQUIDO

Si la muestra es sólida
Si el análisis no Almacenamiento:
Molienda: Disminución tamaño va a ser inmediato luz, T, tipo de recipientes…
de partícula
Maza

Mortero
F4

F1 F5
F2

“Liofilización previa” F3

Si la muestra es líquida

Evaporación del Si el analito es un gas disuelto en un líquido

disolvente
Doble recipiente sellado
para su almacenamiento

57
 MUESTRA EN ESTADO LÍQUIDO

Obtención de la Preparación de la
Elección del método
muestra muestra

Extracción del analito a ¿Se encuentra el analito

una fase líquida
No disuelto?
Sí

¿Es mensurable la propiedad

analítica?

Agitación Centrifugación Decantación Recogemos el líquido

el sobrenadante
Disolvente
(H2O, EtOH, Líquido
MeOH… sobrenadante

Suspensión Residuo
del sólido en Residuo sólido
Muestra sólido
el disolvente
sólida

F1
58
 Para la determinación de AAS en producto farmacéutico mediante
volumetría ácido-base

Trituración del fármaco

y disolución en etanol

F1
F3
F2

- En ocasiones, se requieren condiciones más enérgicas para la

extracción del analito a la fase líquida:

Disoluciones acuosas de:

- ácidos fuertes
- bases fuertes
- agentes oxidantes
- agentes reductores
F4
- combinaciones de reactivos

Aplicación de energía externa:

- microondas
- ultrasonidos…
F5

59
 Obtención de la Preparación de la
Elección del método
muestra muestra

Extracción del analito a ¿Se encuentra el analito

la fase líquida
No disuelto?
Sí

¿Es mensurable la propiedad

Cambio de la forma analítica?
química del analito
No
Especie fluorescente Sí

Eliminar interferencias si las

hubiere

Ej. Sulfonamida

MÉTODOS DE SEPARACIÓN
Adicionamos reactivos (para la determinación
mediante fluorimetría)

60
 Ejemplo de un análisis químico:
Cuantificación de cafeína y teobromina en chocolate

Paso 1: extracción de la materia grasa

Paso 2: extracción de los analitos
Paso 3: separación de los analitos
Detección por absorción
Ultravioleta a 254 nm Paso 4: Calibrado del método
y análisis de datos

Recta de calibrado para cada analito

 Sedimento húmedo

Ejemplo 1 Extracción
MeOH

Análisis de PAHs y
Extracción
PCBs en sedimento DCM:MeOH
(2:1)

PCB30,PCB209,an-d10, pi-d10, b[ghi]per-d12

Saponificación
KOH/MeOH
6%

Extracción
n-hexano
Fase metanólica Fase hexánica
Fracción Fracción
ÁCIDA NEUTRA

Cromatografía de
adsorción alúmina
FRACCIÓN I FRACCIÓN II

OCs PAHs
TCN, OCN, naf-d8, per-d12
Tratamiento CG-EM
Cu SIM
TCN, OCN, naf-d8, per-d12.
CG-EM
SIM
PAHs. Análisis por GC-MS (SIM)
TIC (SIM) +

tR (min)
Rango lineal :250-10.000 ng/ml (ppb)
LDD (S/N =3) : 2,5 - 10,5 pg
 Ejemplo 2. Análisis de OCs y PAHs en muestras de aire

Fase gas: Fase particulada:

Filtro
Espumas
naf-d8, pi-d10 PCB30, PCB209
Extracción por sonicación
Extracción Soxhlet 3 x 30 ml DCM:MeOH
400 ml hexano, 24 h (2:1)
Evaporación a
presión reducida
10 ml de extracto
1 ml
PCB30, PCB209 an-d10, pi-d10,
TCN, OCN, per-d12 Vial tarado Na2SO4 per-d12, b[ghi]per-d12
OCs y PAHs, GC-MS/SIM 1 ml
TCN, OCN, naf-d8

OCs y PAHs, GC-MS/SIM

 Ejemplo 3. Análisis de OCs y PAHs en agua
Elución fase disuelta: Fase particulada:

1º 2ª Filtro
MeOH
Liofilización
200 ml MeOH 200 ml DCM Extracción
DCM:MeOH (2:1)
PCB 30, PCB 209
50 ml de azeótropo an-d10, pi-d10, per-d12, PCB30,PCB209,an-d10,
b[ghi]per-d12 pi-d10, b[ghi]per-d12
Saponificación
Extracción líquido-líquido 50 ml de extracto KOH/MeOH 6%
3 x 30 ml hexano

Na2SO4 Extracción
n-hexano
10 ml de extracto
Fase metanólica Fase hexánica
TCN, OCN, naf-d8
Fracción Fracción
ÁCIDA NEUTRA
OCs y PAHs, CG-EM /SIM

Cromatografía de
adsorción alúmina
FRACCIÓN I FRACCIÓN II

OCs PAHs
TCN, OCN, naf-d8, per-d12
CG-EM
SIM
Ejemplo 4. Análisis de PAHs y OCs en muestras de deposición total
Fase particulada: Fase disuelta:

Filtro MeOH
congelado
Liofilización Elución 5 mL MeOH Elución 5 mL ciclohexano

Extracción
DCM:MeOH
(2:1)
Extracción L-L Elución 5 mL DCM
PCB30,PCB209,an-d10,
2 ml hexano
pi-d10, b[ghi]per-d12

10 ml de extracto PCB30,PCB209,an-d10,
pi-d10, b[ghi]per-d12
Na2SO4
Extractos
Fase metanólica Fase hexánica
Na2SO4
Fracción Fracción Fase metanólica Fase hexánica
ÁCIDA NEUTRA
Fracción Fracción
ÁCIDA NEUTRA
Cromatografía de
adsorción alúmina
Cromatografía de
adsorción alúmina
OCs y PAHs
TCN, OCN, naf-d8, per-d12
OCs y PAHs
CG-EM TCN, OCN, naf-d8, per-d12
SIM
CG-EM
SIM
Carrera et al., J. Chromatogr .1998
 Ejemplo 5. Análisis de OCs en muestras de peces

4,5 g de músculo dorsolateral

se trituran y secan con Na2SO4

Extracción Soxhlet
Hex:DCM (4:1), 18 h

20 mL 80 mL

TBB y PCB 209

Lípidos 2 ml, clean-up H2SO4

o GPC
se desecha la fase ácida

OCs, CG-ECD
 Ejemplo 6. Análisis multiresiduos

Sedimentomarino

Liofilización

Tamizado(250µm)

Extracción TratamientoHCl
Soxhlet
DCM :MeOH
(2:1)

Cromatografíaadsorción Análisiselemental
Silica:Alúmina %Corgánico
(5%agua)

H exano Hexano:DCM(90:10) Hexano:D CM(80:20) H exano:D CM(50:50) DCM DCM :M eO H(80:20) E terdietílico
Alcanos PCBs, LABs HAP, esterescéridos Alquilnitrilos, aldehidos Cetonaesteroidales Fosfatosalquilo Trialquilam inas
Esteroles, alcoholes

CG/FID TratamientoCu GPC CG/NPD CG/FID Derivatización CG/NPD

CG/FID trim etilsilil

CG/ECD CG/EM CG/FID

CG/FID CG/NPD