CURRENT BIOLOGY

Volume 26, Issue 2, 25 January 2016, Pages R54-R57

Primer
COP-coated vesicles (Vesículas recubiertas de COP)
Natalia Gomez-Navarro, Elizabeth A. Mille

(TRADUCCIÓN DE ARTÍCULO ORIGINAL: Natalia Gomez-Navarro, Elizabeth A. Miller. COP-

Coated vesicles. Current Biology. Volume 26, Issue 2. 2016. Cell Press.
https://doi.org/10.1016/j.cub.2015.12.017)

Resumen
Aproximadamente un tercio de las proteínas de una célula están destinadas a
funcionar fuera de los límites de la célula o mientras están incrustadas dentro de las
membranas celulares. Asegurar que estas proteínas alcancen sus diversos destinos
finales con precisión temporal y espacial es esencial para la fisiología celular. En
eucariotas, un conjunto de orgánulos interconectados forman la vía secretora, que
abarca el terreno por el que estas proteínas deben navegar en su viaje desde su sitio
de síntesis en el ribosoma hasta sus destinos finales. El tráfico de proteínas dentro de
la vía secretora está dirigido por vesículas portadoras de carga que transportan
proteínas de un compartimento a otro. Los pasos clave en el tráfico mediado por
vesículas incluyen el reclutamiento de proteínas de carga específicas, que deben
recolectarse localmente donde se forma una vesícula, y la liberación de un recipiente
apropiado que contenga carga del orgánulo donante (Figura 1). La vesícula recién
formada puede difundirse pasivamente a través del citoplasma o puede atrapar un
paseo en el citoesqueleto para viajar direccionalmente. Una vez que la vesícula llega a
su destino preciso, la membrana del transportador se fusiona con la membrana de
destino para entregar su carga

______________________________________________________________________

Texto principal
Las proteínas citoplásmicas, llamadas proteínas de la cubierta, son responsables tanto
de clasificar la carga como de esculpir la membrana donante para formar un portador
de vesículas. Los primeros pasos de transporte en la vía secretora están mediados por
vesículas generadas por dos complejos de capa distintos (Figura 1). El complejo de la
proteína de cubierta II (COPII) media el reclutamiento de carga y la gemación desde el
retículo endoplásmico (ER), produciendo vesículas destinadas al Golgi (transporte
anterógrado). El complejo de la proteína de la cubierta I (COPI) gestiona el tráfico desde
el Golgi de regreso al ER (transporte retrógrado), o entre diferentes compartimentos del
Golgi (transporte intra-Golgi). Centrándonos en estas dos capas canónicas, discutiremos
los principios de diseño básicos que gobiernan el tráfico de proteínas entre el RE y el
Golgi y la relevancia fisiológica de este proceso.
Figura 1. Las vesículas y los túbulos median el tráfico en la vía secretora temprana .
Representación esquemática de los compartimentos implicados en el transporte de proteínas
ER-Golgi. Las vesículas que brotan del RE para iniciar el transporte anterógrado son generadas
por las proteínas de la cubierta COPII (verde y naranja). Las vesículas COPII pueden fusionarse
directamente con el Golgi, como ocurre en la levadura o las plantas, o pueden fusionarse en su
camino hacia el Golgi para generar un compartimento pleiomórfico llamado compartimento
intermedio ER-Golgi o ERGIC. Las proteínas COPI (azul y violeta) generan vesículas
retrógradas del complejo de Golgi o del ERGIC, reciclando a los residentes de RE que se
escapan para asegurar la recuperación al ER. Las mismas proteínas responsables de la
formación de objetivos de vesículas esféricas probablemente también impulsan la formación
de estructuras tubulares del ER (COPII) y el Golgi (COPI).

Organelos donantes y aceptores en la vía secretora temprana: ER, ERGIC y Golgi

Las proteínas secretoras son traducidas por ribosomas citoplásmicos que se acoplan a la
membrana del RE a través de un canal de translocación incrustado en la membrana, a
través del cual el polipéptido naciente obtiene acceso a la luz y / o membrana del RE. La
función principal del RE es proporcionar un entorno optimizado para el plegamiento y
la maduración de proteínas. Una vez plegadas correctamente, las proteínas secretoras
nacientes se acumulan en sitios de salida específicos del ER (ERES), que son dominios de
membrana discretos recubiertos con COPII proteínas de la cubierta. Estos sitios de salida
son relativamente estables y actúan como parte del sistema de control de calidad de ER
porque las proteínas mal plegadas y los residentes de ER están en gran parte excluidos
de estas regiones. Es en estos sitios donde se forman las vesículas COPII destinadas al
aparato de Golgi.
En plantas y levaduras, es probable que las vesículas COPII se fusionen directamente con
el Golgi, que se encuentra muy cerca de ERES. Sin embargo, en las células de los
mamíferos, el transporte desde el ER al Golgi también incluye una estación de paso: una
serie de membranas conocidas como agrupaciones tubulares vesiculares (VTC) o el
compartimento intermedio ER-Golgi (ERGIC; Figura 1 ). Estos orgánulos están formados
por la fusión homotípica de vesículas COPII para generar una estructura que tiene una
composición bioquímica distinta a la del RE o Golgi y que puede alterar su forma y
tamaño en respuesta a cambios ambientales. Los grupos de membranas formados
durante los eventos de fusión reclutan rápidamente la cubierta COPI, que también
marca este compartimento. En última instancia, las membranas ERGIC se trasladan
al Golgi propiamente dicho, donde liberan su contenido para su transporte posterior.
Además de funcionar como un portador en la vía anterógrada, el ERGIC también
desempeña un papel en el control de la calidad de las proteínas al servir como un
compartimento de punto de control desde el cual las proteínas se pueden recuperar
al ER. Las proteínas residentes en el RE que contienen señales de recuperación se
envían de regreso al RE, y las proteínas que se han escapado mal plegadas también
pueden acceder a esta ruta para regresar al RE en busca de más oportunidades de
plegado. La clasificación en la vía de recuperación (retrógrada) está mediada por
vesículas COPI, que capturan a los residentes de ER a través de sus señales de
recuperación: K (X) KXX para proteínas de membrana y K / HDEL para los residentes
de ER lumenales. Para las proteínas secretoras y de membrana nacientes, la entrega
al Golgi inicia una serie controlada de modificaciones covalentes a medida que las
proteínas viajan desde el lado que mira hacia adentro (cis -) al lado extracelular
(trans -) del Golgi, y de allí a otros compartimentos de la vía secretora.
Las capas se autoensamblan para generar vesículas.

El proceso de construcción de vesículas de transporte requiere la acción concertada de

las proteínas de la cubierta citoplásmica. Para las vesículas recubiertas de COP,
este proceso se ha reconstituido in vitro, lo que permite la disección precisa de
distintos eventos en el nacimiento de una vesícula. Las proteínas de la cubierta
en general cumplen dos funciones: captura selectiva de proteínas de carga
dentro del compartimento donante, incluida la maquinaria de fusión adecuada que
garantizará la liberación de vesículas; y generación de curvatura de la membrana
para producir pequeños transportadores esféricos de transporte. Las proteínas COP
que impulsan la formación de vesículas en la vía secretora temprana tienen
algunas características comunes, pero siguen siendo fundamentalmente distintas en
la mayoría de sus detalles moleculares.

La cubierta de COPII comprende cinco proteínas, Sar1, Sec23, Sec24, Sec13 y Sec31,
que se ensamblan de manera secuencial (Figura 2). El ensamblaje de la capa se inicia
mediante la activación de la pequeña GTPasa Sar1, un miembro de la superfamilia Ras.
Sar1 tiene una baja actividad intrínseca de intercambio de GDP a GTP, por lo que
requiere una proteína de membrana residente en ER, Sec12, para facilitar la carga de
GTP y la activación local. Cuando se une a GTP, Sar1 expone una hélice α anfipática
amino-terminal, que se incrusta en la bicapa lipídica. Sar1-GTP en la membrana ER
recluta un heterodímero de Sec23 y Sec24 a través de una interacción con Sec23.
Sec24 selecciona proteínas de carga al unirse directamente a las señales de
exportación de ER. Las proteínas secretoras solubles contenidas en la luz del RE no
pueden interactuar directamente con Sec24 y, en cambio, dependen de las proteínas
receptoras para forjar una conexión con la capa. Los heterotetrámeros de Sec13 y
Sec31 se reclutan posteriormente mediante una interacción entre Sar1-Sec23 y Sec31.
Sec13-Sec31 tiene la capacidad intrínseca de formar una estructura esférica similar a
una jaula en solución y, por lo tanto, se cree que impulsa la curvatura de la membrana
 al imponer esta geometría en la membrana subyacente.

Figura 2. Estructura y montaje de capas COPI y COPII .

Representaciones del ensamblaje jerárquico de las proteínas de la cubierta en la membrana y
de las unidades estructurales que forman los complejos de la cubierta. Panel superior: la capa
COPII se puede dividir en dos capas. La GTPasa Sar junto con Sec23-Sec24 formar la capa interior.
Su estructura en forma de pajarita descansa sobre la membrana donde interactúa con las
proteínas de carga y desencadena la formación de vesículas. Sec13 – Sec31 forma la capa
exterior. Su forma de varilla unidad estructural consiste en un heterotetrámero compuesto de
dos Sec13 y dos Sec31 polipéptidosque se autoensamblan en una jaula poliédrica. Panel inferior:
las proteínas de la cubierta de COPI interactúan con la membrana predominantemente a través
de la GTPasa Arf1 y a través de regiones de β'- y α-COP que interactúan con la carga. Las regiones
distales de ambos subcomplejos, β'– α-CO P y γ – ζ – β – δ-COP, forman estructuras en forma de
arco. Tres unidades estructurales parecen formar una estructura triangular llamada 'tríada', que
es el bloque de construcción de la capa de vesícula que cubre la membrana.

Las vesículas recubiertas de COPI se forman en las membranas de Golgi o ERGIC a través de la
acción de Arf1, una pequeña GTPasa relacionada con Sar1, y un complejo proteico heptamérico
llamado coatómero (para el protómero de la capa; Figura 2). El coatómero es un complejo
relativamente estable que se puede descomponer bioquímicamente en dos subcomplejos: un
ensamblaje trimérico de Ret1 (α-COP), Sec27 (β'-CO
P), Sec28 (ε-COP) y un complejo tetramérico
compuesto de Sec26 (β-CO P), Sec21 (γ-CO
P), Ret2 (δ-COP) y Ret3 (ζ-COP). El reclutamiento de
COPI a las membranas ocurre en solo dos pasos: unión de Arf1 a las membranas (nuevamente a
través de una hélice anfipática amino-terminal corta), y el posterior reclutamiento de
coatómero, que a su vez interactúa con las proteínas de carga. Una vez más, las proteínas
lumenales solubles requieren un receptor de carga, el receptor KDEL, para tender un puente
sobre una interacción con la capa. Aunque las vesículas COPI y COPII tienen algunas
características en común, como el requisito de una pequeña GTPasa que desencadena la
formación de vesículas y algunos elementos estructurales que se comparten entre diferentes
componentes, su arquitectura global y aspectos de su organización funcional son distintos.
Conocimientos estructurales sobre la arquitectura de vesículas recubiertas de COP
En la última década, la cristalografía de rayos X y la microscopía crioelectrónica (cryo-EM) han
revelado información detallada sobre la base molecular de la formación de vesículas recubiertas
de COP. La capa COPII se puede dividir en dos capas: la capa 'interna' Sar1 – Sec23 – Sec24 y la
capa 'externa' Sec13 – Sec31 (Figura 2). Sar1 – Sec23 – Sec24 forma una estructura en forma de
pajarita que probablemente se encuentra plana sobre la membrana e interactúa íntimamente
tanto con la bicapa lipídica como con las proteínas de carga. Los datos estructurales, genéticos
y bioquímicos establecieron que Sec24 contiene múltiples dominios de unión de carga
independientes para el reconocimiento de una variedad de señales de clasificación. En los
mamíferos, este repertorio de enlace de carga se amplía aún más con isoformas Sec24
adicionales con una selectividad de carga distinta. Sec13 – Sec31 se encuentra distal a la
membrana y forma estructuras en forma de varilla que pueden autoensamblarse en una jaula
mediante interacciones de extremo a extremo, donde cuatro varillas se unen para formar un
'vértice'. Se cree que esta organización estructural concentra la capa interna y la curvatura de la
membrana del andamio. Los componentes de la capa externa de COPII interactúan con la capa
interna a través de un péptido corto de Sec31 que se encuentra a través de la superficie distal
de la membrana de Sar1-Sec23. Una función de esta interacción es estimular la actividad GTPasa
de Sar1: Sec23 es la Proteína activadora de GTPasa para Sar1, y su actividad aumenta 10 veces
por el péptido Sec31.
A diferencia de COPII, COPI no parece ser estructuralmente separable en capas "internas" y
"externas". En cambio, ambos subcomplejos de la capa de COPI contienen regiones que
interactúan estrechamente con la membrana y juntas forman una estructura de "tríada" que
parece ser el bloque de construcción de la capa propiamente dicha (Figura 2). Las subunidades
de unión de carga, β'- y α-COP, forman un dímero en forma de arco que probablemente contacta
con la membrana a través de los sitios de unión de carga en la hélice β amino-terminal dominios
que reconocen la señ al retrógrada más utilizada, K (X) KXX. El subcomplejo γ – ζ – β – δ-COP
también forma una estructura en forma de arco cuando se ensambla en la membrana y parece
unir subcomplejos α – β'-CO P adyacentes. Las subunidades γ- y β-COP interactúan con la
membrana a través de su unión a Arf1. La curvatura de la membrana en las vesículas COPI
probablemente sea impulsada por la penetración de las hélices amino-terminales de Arf1 en la
membrana y por la estructura curva de toda la tríada. Cuando se ensambla en membranas, la
disposición de las tríadas COPI da como resultado una envoltura de proteína casi contínua
cubriendo la membrana. Las tríadas parecen estar unidas entre sí mediante dominios flexibles
en las subunidades δ, α o ε-COP. Estos contactos pueden adoptar diferentes interfaces, quizás
dando flexibilidad conformacional al pelaje y determinando la forma y el tamaño de la vesícula.
A pesar de muchas diferencias arquitectónicas intrínsecas, las proteínas de andamio de
recubrimiento COPI y COPII comparten algunos aspectos de su organización estructural. Los
módulos estructurales comunes se encuentran en α-β'-COP y Sec13-Sec31: cada subcomplejo
comprende dos dominios de hélice β seguidos de un dominio de solenoide α. Curiosamente,
esta organización característica también se puede encontrar en la cubierta de clatrina y en las
proteínas de los poros nucleares, lo que refleja el origen evolutivo común de estas proteínas,
que participan en la formación de las membranas celulares.

Las cubiertas se adaptan a las necesidades de la célula

Las membranas biológicas son estructuras fluidas que se pueden moldear en varias formas,
incluidos tubos estrechos, cisternas aplanadas y esferas pequeñas. Los portadores de vesículas
son típicamente pequeñas estructuras esféricas, pero, en algunos pasos de transporte, deben
existir diferentes morfologías de portadores. Por ejemplo, pro-colágeno y partículas lipídicas
son demasiado grandes para caber en vesículas COPII canónicas, sin embargo todavía están
claramente realizados por mecanismos COPII-dependientes. De manera similar, los túbulos
de la membrana conectan distintas cisternas de Golgi, y la capa de COPI también parece
ser capaz de generar estas estructuras. Aún no se comprende bien cómo se regulan las
proteínas de la cubierta para alterar su ensamblaje en diferentes condiciones fisiológicas
para generar transportadores con diferentes características físicas.

Los análisis Cryo-EM han permitido una vista detallada de las interacciones que impulsan el
ensamblaje de la jaula COPII, e insinúan cierta flexibilidad conformacional que probablemente
sea clave para permitir que la capa forme portadores de diferentes geometrías. Un concepto
emergente es que las barras Sec13-Sec31 tienen múltiples puntos en los que pueden someterse
a flexión. Cuando las varillas se ensamblan en una jaula, los ángulos específicos en estos puntos
determinan el radio del portador debajo. La versatilidad adicional puede derivarse de la
disposición de la capa de revestimiento interior, que se ha observado como una celosía muy
compacta en los liposomas tubulares. Juntos, estos puntos de variabilidad crean un pelaje que
es intrínsecamente lo suficientemente versátil como para formar una variedad de estructuras
que van desde morfologías esféricas hasta tubulares. Es importante no perder de vista el hecho
de que las propias proteínas de carga también pueden participar en la biogénesis de vesículas.
Es probable que la abundancia de carga, la orientación en la membrana y el tamaño influyan en
las propiedades biofísicas de la membrana del RE para promover u oponerse a la formación de
vesículas. Por último, es casi seguro que las proteínas accesorias también sirven para regular
la adaptación de la cobertura. Por ejemplo, una proteína de membrana del ER, TANGO1,
participa en el transporte de pro-colágeno a través de mecanismos que aún no se han
definido por completo. Además, una proteína ER periférica, Sec16, parece regular el
momento de la escisión de la vesícula, un evento crítico para permitir que una vesícula
naciente crezca a un tamaño mayor.

Al igual que la capa de COPII, la gemación de COPI de las membranas de Golgi también puede
producir portadores tanto vesiculares como tubulares. En este caso, la formación de una
frente a la otra depende de la actividad de dos enzimas modificadoras de lípidos: ácido
lisofosfatídico aciltransferasa-γ (LPAATγ) promueve la formación de vesículasCOPI por mejora
de la escisión, mientras que la fosfolipasa citosólica A2-α (cPLA2α) impulsa la tubulación por
inhibición en este evento de fisión. Queda por ver cómo podría cambiar la morfología y la
disposición de la capa de COPI en estas condiciones.

Un último tema emergente en el estudio de la función de la cubierta COP es cómo se regulan

estas capas en el entorno más complejo de las células. Múltiples estudios muestran que las
propias proteínas de la cubierta están sujetas a modificaciones postraduccionales. Por
ejemplo, Sec23-Sec24 es fosforilado por una quinasa asociada a Golgi, Hrr25, y este ciclo de
fosforilación-desfosforilación asegura la direccionalidad del tráfico ER-Golgi. Otro ejemplo es
la ubiquitinación: tanto Sec23 como Sec31 están ubiquitinadas y esta modificación parece
regular la renovación de la cubierta y la función de la jaula, respectivamente. Se ha
observado un fenómeno similar para COPI donde β'-COP es un sustrato de la ubiquitina
proteasa Complejo Ubp3-Bre5, lo que sugiere que la modificación por ubiquitina regula el
transporte anterógrado y retrógrado entre los compartimentos ER y Golgi.

Genética de levaduras, biogénesis de vesículas y trastornos humanos

El proceso de formación, transporte y fusión de vesículas se ha estudiado durante mucho tiempo
utilizando las técnicas clásicas de la bioquímica y la genética de organismos modelo. Más
recientemente, dado que la secuenciación del genoma asequible ha proporcionado una visión
molecular de los estados patológicos humanos, esta información se puede extrapolar
rápidamente a la condición humana, ya que todos los componentes centrales de la COP son
antiguos y están conservados. De hecho, una visión fisiológica del tráfico ER-Golgi está ganando
importancia en el campo a medida que se identifican nuevas mutaciones en varias proteínas de
la cubierta en asociación con diversos trastornos humanos. Las mutaciones en SAR1B, una de
las dos isoformas en humanos, causan defectos en la biogénesis de las partículas de
lipoproteínas llamadas quilomicrones, lo que resulta en niveles alterados de colesterol
plasmático en lo que se llama enfermedad de retención de quilomicrones (CMRD) o enfermedad
de Anderson. Las mutaciones tanto en Sec23 como en Sec24 se han relacionado con trastornos
del desarrollo craneofacial caracterizados por un retraso en la osificación de los huesos faciales,
probablemente como resultado de defectos de tráfico de colágeno. Las mutaciones en α-COP
están asociadas con un trastorno autoinmune hereditario que afecta la función pulmonar y
articular, aunque se desconoce el vínculo preciso entre la disfunción de COPI y la enfermedad.
Los investigadores de enfermedades pueden sacar provecho de la sólida base de la comprensión
mecanicista de los detalles de la función de la proteína de la cubierta, pero también
proporcionar una nueva información importante a los investigadores básicos que aún
desconciertan las cuestiones mecánicas.

Conclusiones
Nuestra comprensión de la biogénesis de vesículas recubiertas de COP ha aumentado
enormemente durante la última década, con una importante contribución nueva a través del
análisis a nivel atómico de las cubiertas. Las nuevas y emocionantes asociaciones con un
número creciente de enfermedades humanas abren otras cuestiones importantes que
quedan por abordar. Los desafíos actuales incluyen lograr una comprensión más
profunda de cómo la regulación fisiológica del tráfico celular modula directamente la
función de la cubierta y definir la base molecular de la flexibilidad morfológica en las
vesículas. Con nuevos modelos de enfermedades y modelos estructurales de mayor
resolución, los próximos años prometen un futuro emocionante.

Lecturas recomendadas
D’Arcangelo et al., 20
15

J.G. D’Arcangelo, J. Crissman, S. Pagant, A. Copic, C.F. Latham, E.L. Snapp, E.A. Miller

Traffic of p24 proteins and COPII coat composition mutually influence membrane scaffolding

Curr. Biol., 25 (2015), pp. 1296-1305

Dodonova et al., 2015

S.O. Dodonova, P. Diestelkoetter-Bachert, A. Appen

von, W.J.H. Hagen, R. Beck, M. Beck, F. Wieland, J.A.G. Briggs

Vesicular transport. A structure of the COPI coat and the role of coat proteins in membrane
vesicle assembly
Science, 349 (2015), pp. 195-198
Fath et al., 2007

S. Fath, J.D. Mancias, X. Bi, J. Goldberg

Structure and organization of coat proteins in the COPII cage

Cell, 129 (2007), pp. 1325-1336

Lee and Goldberg, 2010

C. Lee, J. Goldberg
Structure of coatomer cage proteins and the relationship among COPI, COPII, and clathrin
vesicle coats

Cell, 142 (2010), pp. 123-132

Malhotra and Erlmann, 2011

V. Malhotra, P. Erlmann

Protein export at the ER: loading big collagens into COPII carriers
EMBO J., 30 (2011), pp. 3475-3480

Noble et al., 2013

A.J. Noble, Q. Zhang, J. O’Donnell, H. Hariri, N. Bhattacharya, A.G. Marshall, S.M. Stagg

A pseudoatomic model of the COPII cage obtained from cryo-electron microscopy and mass
spectrometry

Nat. Struct. Mol. Biol., 20 (2013), pp. 167-173

Stagg et al., 2007

S.M. Stagg, P. LaPointe, W.E. Balch

Structural design of cage and coat scaffolds that direct membrane traffic
Curr. Opin. Struct. Biol., 17 (2007), pp. 221-228

Stagg et al., 2008

S.M. Stagg, P. LaPointe, A. Razvi, C. Gürkan, C.S. Potter, B. Carragher, W.E. Balch

Structural basis for cargo regulation of COPII coat assembly

Cell, 134 (2008), pp. 474-484

Zanetti et al., 2013

G. Zanetti, S. Prinz, S. Daum, A. Meister, R. Schekman, K. Bacia, J.A.G. Briggs

The structure of the COPII transport-vesicle coat assembled on membranes

eLife, 2 (2013), p. e00951