EXTRACCIÓN DE ADN

¡LA MOLÉCULA DE LA VIDA!

CIÊNCIA EM TRÊS

GUÍA DEL PROFESOR

El documento original “Extração de ADN: a molécula da vida! se encuentra accesible en

la plataforma Ciência em Três (http://ce3.igc.gulbenkian.pt) del Instituto Gulbenkian de
Ciência, Portugal.

Traducido con autorización de Instituto Gulbenkian de Ciência por: Ana

Fernández-Miñán (CABD, Sevilla)

Este manual pretende ayudar al profesor en la preparación previa de la actividad

Extracción de ADN de fresa y en su posterior ejecución en el aula/laboratorio. Se
encuentra organizado de forma que el profesor pueda:

1) RECORDAR algunos conceptos de Biología que son la base de esta actividad;

2) tomar nota del material que debe PREPARAR y los procedimientos que tiene que
tener en cuenta antes de ejecutar la actividad;
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3) CONOCER los procedimientos experimentales relacionados con la actividad.

Se pretende con esta actividad involucrar activa y autónomamente a los alumnos en el

aprendizaje. Así, sugerimos que el profesor utilice métodos análogos a los del proceso
científico, de modo que:

INVOLUCRAR
Involucre a sus alumnos, trabajando las cuestiones clave que están en el origen de esta
actividad experimental, y que reflejen los objetivos que se pretenden. Capte los
conocimientos previos del grupo, identifique los errores potenciales de concepto e incite
la curiosidad para descubrir las respuestas a las cuestiones clave.

EXPLORAR
Explore las cuestiones clave, experimentando con los alumnos la actividad que le
proponemos. Cree en el grupo un ambiente de aprendizaje por sí mismo, garantizando
que los alumnos hacen realmente algo y participan activamente en todo el proceso de
experimentación. El profesor no debe ser el que demuestra sino más bien el
mediador/orientador de las distintas etapas de cada actividad.

EXPLICAR
En un diálogo directo con el grupo, promueva discusiones sobre los resultados obtenidos
individualmente o en grupo. Elabore formas para la presentación general de los
resultados permitiendo que los alumnos observen y expliquen los resultados del grupo
y, de este modo, elaboren la conclusiones finales, y las comuniquen a la clase.

En esta actividad los alumnos aprenden uno de los procedimientos experimentales más
comunes en un laboratorio de Biología Molecular - la extracción de ADN de seres vivos.
La actividad consiste en la extracción de ADN de células de fresa siguiendo un protocolo
experimental análogo al que se utiliza en los laboratorios, pero usando simplemente
reactivos y materiales disponibles en casa.

Objetivos
1. Recordar y/o explorar conocimientos sobre el ADN como constituyente básico de las
células de todos los seres vivos (desde el hombre hasta la fresa);
2. Recordar y/o reforzar el concepto de ADN como la molécula responsable para la
transmisión de información genética de generación en generación;
3. Adquirir prácticas de laboratorio;

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4. Comprender y describir las transformaciones físicas y químicas que ocurren en cada

paso de la extracción de ADN.
5. Ordenar la secuencia de pasos que constituyen el proceso de extracción de ADN.
6. Relacionar la extracción de ADN con su utilización en algunas tecnologías de ADN
recombinante: clonaje (en bacterias), manipulación genética (de plantas, de
mamíferos), biotecnología, secuenciación.

AÑOS ESCOLARES
Enseñanza secundaria

RELACIÓN CON EL CURRÍCULO

Biología

ÁREA CIENTÍFICA
Biología Molecular

Palabras clave
Células; ADN; Extracción; Fresa; Biotecnología; ADN recombinante

Material necesario (para una extracción):

1 bolsa de plástico (de congelar);

1 fresa fresca o congelada;
10 ml de solución de extracción de ADN (previamente preparada);
1 embudo;
1 probeta / tubo de plástico limpio;
1 filtro de café o 1 ó 2 capas de gasa cortadas en cuadrados;
Alcohol etílico (por lo menos al 90%) helado;
1 varilla de vidrio o un palo de madera (palito);
Un pedazo de cartulina negra;

Duración
Preparación del material e introducción de la actividad a los alumnos: 10 minutos
Extracción de ADN:10 minutos (por cada grupo de 5 alumnos, como máximo) Tiempo
total necesario:20 a 60 minutos (dependiendo del número de grupos que se formen).

RECORDAR

En el siguiente texto hay una lista donde se describen brevemente los conceptos que serán necesarios
para realizar esta actividad.
I. El ADN

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Gracias a los avances científicos, hoy sabemos que el ADN está presente en
prácticamente todas las células de todos los organismos vivos: animales, plantas,
bacterias y hongos. Y también en muchos virus - organismos que necesitan infectar
células para mantenerse vivos. En todos, tiene la misma estructura química.
En los humanos, como en la mayoría de los vertebrados, los glóbulos rojos son las únicas
células que no tienen ADN. (Nota: los eritrocitos de la gallina tienen vestigios de ADN).
A excepción de las bacterias y de las arqueobacterias, es en el núcleo de las células
dónde el ADN se haya distribuido en forma de estructuras compactas, los cromosomas.
Cada cromosoma no es más que una única molécula de ADN unido y enrollado en
proteínas, las histonas.
Cada célula de los diferentes seres vivos puede contener varias copias de cada
cromosoma: en los humanos existen dos copias - las células son diploides (a excepción
de los gametos femeninos y masculinos - óvulos y espermatozoides - que contienen sólo
una copia de cada cromosoma - son haploides); existen organismos con 4 copias de cada
cromosoma por célula - tetraploides (como por ejemplo, el sapo africano y la patata
blanca), y otros con 8 copias - octaploides (como por ejemplo, la fresa).
De organismo a organismo, el número total de cromosomas por célula varía. Hay que
indicar, que un organismo más complejo, como el humano, no tiene necesariamente
más cromosomas que un organismo más simple, como una fresa. Como ejemplo
podemos ver que: a excepción de los gametos, las células humanan cuentan con 46
cromosomas (23 pares); mientras que una fresa tiene 56 cromosomas en cada una de
sus células.

Nota: Las células están organizadas en compartimentos, los orgánulos, separados unos de otros por
membranas y algunas micras de distancia y suspendidos en un fluido de agua, sal y moléculas orgánicas;
cada orgánulo está especializado en desempeñar una determinada función en la célula, siendo uno de
éstos, el núcleo, el almacenador de la información genética.
En cada célula humana existen cerca de 2 metros de ADN.
Recordar los conceptos de síntesis proteíca: transcripción y traducción.

En los cromosomas, más específicamente en el ADN, se encuentra almacenada la

información que codifica la “vida” de cada uno de nosotros, seres vivos. O, en el caso de
algunos virus, las instrucciones que permiten su replicación en el hospedador que
infectan.
A través de un proceso complejo y finamente regulado, el ADN es continuamente “leído”
y codificado bajo la forma de proteína, asegurando de esa forma las funciones vitales de
las células.

Nota: Químicamente, todas las células están constituidas por macromoléculas (además de otras
moléculas más pequeñas): proteínas, lípidos, hidratos de carbono y ácidos nucleícos. Cada uno de estos
tipos de macromoléculas tienen su función en la célula, pudiendo estar involucradas en distintos
mecanismos de señalización, comunicación, transporte, soporte, expresión y regulación.

Apenas una pequeña parte del ADN, la correspondiente a los genes, es codificada en
proteínas, variando el correspondiente porcentaje según la complejidad del organismo.
Por ejemplo en el humano - el 1.5% de su genoma (~ 25.000 genes) es expresado y
codificado en proteínas. El ADN restante no es transcrito ni traducido en proteínas; sin

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embargo, desempeña un importante papel en la regulación de la expresión de los genes,

conocida como transcripción. Actúa también en la condensación de la cromatina y
durante el proceso de replicación del ADN.

Nota: Todas las células de un organismo tienen la misma composición genética. En cada tipo celular, es la
activación (p.ej., la transcripción) de unos genes en detrimento de otros, el que va a determinar la
identidad de la célula. Por ejemplo, una célula de la piel es una célula de la piel y no una célula nerviosa
porque los genes que se expresan en la célula de la piel no se expresan en la célula nerviosa y viceversa.

II. Estructura química del ADN

Cuando Gregor Mendel, basado en sus experiencias con la planta del guisante,
estableció los 3 principios de la transmisión de los caracteres hereditarios (1865), aún
no se sabía nada sobre la existencia del ADN y mucho menos conocida era su
composición y estructura. Pasó casi un siglo (1953) hasta que James Watson y Francis
Crick descubrieron la estructura de la doble hélice de ADN, siendo descrita con la
siguientes características (que aún hoy en día prevalecen):

 La molécula de ADN tiene una estructura tridimensional enrollada en forma de
doble hélice. Las dos cadenas que la constituyen están unidas a través de uniones de
puentes de hidrógeno entre nucleótidos complementarios, éstos a su vez unidos por
grupos fosfato.

 Cada nucleótido del ADN está compuesto por una base nitrogenada (adenina,
timina, citosina o guanina), un azúcar (desoxi-ribosa) y un grupo fosfato, todos unidos
por uniones covalentes. Las adeninas (A) de una cadena se unen siempre con las timinas
(T) de la cadena complementaria y las citosinas (C) se emparejan siempre con las
guaninas (G) y viceversa. Las dos cadenas se unen a través de las uniones de hidrógeno
entre las bases nitrogenadas, 2 o 3 uniones dependiendo del par de bases emparejado.

 Cada cadena de ADN tiene un extremo 5´ y otro 3´. Cada grupo fosfato une el
carbono en posición 3´de un azúcar con el carbono 5´del azúcar siguiente. La
información contenida en la secuencia de ADN (los genes y las secuencias reguladores)
se lee del extremo 5´ al 3´.

 Las dos cadenas de ADN están dispuestas paralelamente y “corren” en sentidos
opuestos – llamadas antiparalelas: el nucleótido del extremo 5´ de una cadena se una al
nucleótido de la extremidad 3´ de la cadena complementaria.
 La composición química de las bases nitrogenadas permite, a través de las
uniones de hidrógeno, que otras moléculas se unan al ADN, son proteínas importantes
para la replicación y la expresión de los genes.

III. Regulación de la expresión génica

Los procesos de regulación de la expresión de los genes determinan la identidad y el

funcionamiento de la células.

5
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
 Secuencias de nucleótidos no-codificantes (por ej. promotores y reguladores
situados antes de los promotores) funcionan como lugares de unión de proteínas (RNA
polimerasa, inductores y represores) cuya interacción con el ADN determina la
transcripción de los genes (aguas abajo de los promotores).

 En los eucariotas existen otros mecanismos celulares que también regulan la
expresión génica. Son los siguientes: 1) el estado de la condensación de la cromatina -
una mayor o menor condensación de la cromatina aumenta o disminuye el acceso de la
RNA polimerasa al promotor y, consecuentemente, activa o inhibe la transcripción de
un determinado gen; 2) el proceso de excisión alternativa - la eliminación de diferentes
intrones de una misma molécula de premRNA, permite que un mismo gen transcrito
origine dos proteínas distintas.

IV. Mutaciones

 Cualquier daño, a la estructura química del ADN, si no fuese reparado, resulta en

una pérdida de la integridad y, potencialmente, de la estabilidad de la molécula. Las
alteraciones en la identidad de los nucleótidos resulta en mutaciones, con efectos
benéficos o perjudiciales para el individuo (o ser vivo). Entre las mutaciones benéficas
se incluyen aquellas que confieren ventajas en la adaptación al medio ambiente (por ej.
mutaciones que confieren a las bacterias resistencia frentes a los antibióticos). Varias
enfermedades, por otro lado, son el resultado directo de una mutación (por ej. la
anemia falciforme).

 Una mutación no siempre resulta en un efecto en el organismo. Las células

(eucarióticas y procarióticas) a lo largo de la evolución han desarrollado mecanismos
capaces de detectar y reparar los distintos errores que puedan ocurrir en el ADN, sean
provocados por condiciones externas, como una radiación UV o el humo de tabaco, o
factores internos, como errores en la replicación del ADN durante la división celular.

Nota: La membrana celular, que separa cada célula del exterior, consiste en una doble barrera para la
célula: por un lado, mantiene la integridad de sus constituyentes y, por otro, impide que los compuestos
pasen libremente hacia la célula.

V. Extracción de ADN y la Biotecnología

El descubrimiento del ADN permitió comprender como las células regulan su

metabolismo pero también como las características hereditarias son transmitidas entre
generaciones. Más allá de las implicaciones directas en el conocimiento de la biología
de las células, las conclusiones de estudios del ADN han permitido grandes avances en

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la comprensión genética de las enfermedades. Paralelamente, han posibilitado la

aparición de prácticas biotecnológicas innovadoras con un impacto relevante, ya sea en
procedimientos de investigación básica o en la aplicada - la Biotecnología.

Recordar: Organismos genéticamente modificados; clonaje; secuenciación.

Más sobre ratones knock-out en http://learn.genetics.uta h.edu/content/tech/trans genic/

El sector de la industria farmacéutica, por ejemplo, se ha beneficiado de todo el

conocimiento desde que se descubrió el ADN y el código genético: hoy en día es posible,
a partir de ADN, producir grandes cantidades de proteínas importantes para el
tratamiento de enfermedades, accesibles para todos en forma de vacunas y/o
medicamentos. Repercusiones semejantes se han producidos en las áreas de medio
ambiente y agricultura.

Aislar y purificar ADN de células animales o plantas, de hongos o bacterias es la tarea

diaria de investigadores en Biología Molecular, tanto para aquellos que intentan
comprender el origen de ciertas enfermedades humanas, como para los que por
ejemplo intentan mejorar la productividad de una determinada planta. A través de su
aislamiento, los científicos consiguen obtener y estudiar genes que de otro modo serían
difíciles de acceder, debido a las restricciones impuestas por la propia constitución
química y biológica de las células.

1. Una vez aislado el ADN los científicos consiguen por deleción de un determinado
gen inactivar la función de ese gen en las células. La inserción de un gen mutado en las
células se hace con la producción de organismos llamados knock-out (normalmente se
usa el ratón, la mosca de la fruta, bacterias y plantas). Es así como los científicos
consiguen estudiar el efecto de ese gen mutado en el funcionamiento de las células.

2. Una vez aislado el ADN es posible aumentar la función de un determinado gen,

ya sea por inserción de copias extra del gen o por el aumento de la síntesis de la proteína
en cuestión. De esta forma, los científicos consiguen analizar en mayor detalle la función
del gen.

La técnica comúnmente usada para extraer ADN es la prueba viva de que, en algún
momento de la historia reciente de la ciencia, se traspasaron las barreras impuestas por
la células que nos separaban del ADN. Desde que surgió esta posibilidad, las técnicas de
biología molecular han sido mejoradas y se han introducido nuevas formas -
Biotecnología -, siendo hoy posible manipular, modificar, clonar y/o multiplicar genes -
Ingeniería Genética.

Otro tipo de técnicas usadas en Biotecnología son:

• Técnica del ADN recombinante
• Producción de bacterias genéticamente modificadas
• Síntesis de ADN complementario
• Electroforesis
• PCR

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Nota: Prepárese para explicar lo que va a suceder y lo que significa cada paso durante la extracción del
ADN de fresa. A continuación están las respuestas a las preguntas más importantes.

1. ¿Por qué utilizar fresas?

Es posible extraer ADN de cualquier celular, animal o vegetal, pero no con la misma
facilidad. Las plantas son excelentes fuentes de ADN: existen, generalmente, en
numerosos lugares y en grandes cantidades. Además, la mayoría de las plantas poseen
8 copias de cada cromosoma por célula (octaploides), lo que significa que poseen mucho
ADN - más que en la mayoría de las células animales que tienen nada más que 2 copias
(diploides) o de las células germinales (óvulos o espermatozoides) que tienen sólo 1
copia (haploides). Las fresas maduras, además de poseer mucho ADN, producen
pectinasas y celulasas, enzimas que ayudan a degradar la pared celular.

2. ¿Cuál es la función del detergente?

La solución de extracción del ADN contiene detergente: champú o lavavajillas. Las
membranas de las células están formadas por lípidos, que son grasas. Al igual que ocurre
cuando se lavan los platos, el detergente actúa en la membrana de las células y en la
cubierta del núcleo emulsionando las grasas y destruyendo las membranas. Este es un
paso importante de la actividad, no sólo porque revienta las células y hace que los
orgánulos circulen suspendidos en la solución (de agua, sal y detergente) sino porque
principalmente permiten que el ADN se libere del núcleo, haciéndolo así más accesible
para el siguiente paso.

3. ¿Cuál es la función de la sal?

El ADN es muy soluble en agua debido a sus iones fosfato (molécula hidrofílica). Para
impedir que el ADN liberado del núcleo de la célula se disuelva totalmente en la solución
y se vuelva invisible, se usa la sal. La sal, cuya fórmula química es NaCl, cuando está en
solución se disocia en los iones de Na+ y Cl-. Los iones Na+, con carga positiva, van a
interaccionar con los fosfatos, con carga negativa de las moléculas de ADN,
neutralizándolas y estabilizándolas, y permitiendo que se agreguen. De este modo, las
numerosas moléculas de ADN de las numerosas células de una única fresa triturada se
aglomeran para que más tarde se puedan visualizar a simple vista.

4. ¿Por qué se filtra el extracto?

La filtración permite eliminar de la solución los componentes celulares restantes y que
se quedan “atrapados”: los restos de membranas, los orgánulos que no han estallado,
etc... De esta forma, la solución filtrada se queda tan pura como sea posible,
conteniendo el ADN y otras moléculas, como proteínas, que no interfieren con el éxito
de la extracción.
5. ¿Cuál es la función del alcohol etílico?
Para que finalmente se pueda ver el ADN, se usa alcohol. Éste deshidrata las moléculas
de ADN, o sea, aparta el agua de su alrededor retirándola de la solución. Ocurre la
precipitación del ADN. El precipitado final se ve como un conjunto de filamentos

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blancuzcos. Éstos corresponden a los millares de moléculas de ADN, con otras muchas
moléculas asociadas.

Nota: La preparación del ADN que se obtiene tiene un elevado grado de impureza: además del ADN de las
células de fresa, también contiene proteínas y otras macromoléculas.
La visualización de la estructura en doble-hélice de la molécula de ADN no es posible con el ojo humano
ni tampoco con el microscopio más potente. Sólo a través de una técnica de cristralografía por difracción
de rayos X es posible obtener imágenes que revelen su estructura. Esta fue la misma técnica que Rosalind
Franklin (conocida biofísica británica) usó cuando presentó a la comunidad científica, un poco antes de la
publicación del modelo propuesto por J. Watson y F. Crick, una fotografía de un cristal de ADN. Fue en
esta fotografía en la que se basaron en gran medida Watson y Crick para construir el modelo teórico de
la doble hélice.

Nota: La actividad propuesta fue planeada para ser realizada con pequeños grupos de alumnos (máximo
5), de forma rotativa pero secuencial.

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PROTOCOLO

1. Preparar la solución de extracción de ADN (1 litro):

100 mL de champú (sin acondicionador) o 50 mL de lavavajillas. 15 g de sal de cocina (2
cucharadas de té). Agua para completar hasta un litro.

2. Lavar las fresas y quitar los sépalos (hojas verdes).

3. Colocar las fresas en la bolsa y aplastarlas con el puño durante 2 minutos.

4. Añadir 10 mL de solución de extracción de ADN al contenido de la bolsa.

5. Mezclar todo, apretando con las manos, durante un minuto.

6. Colocar el extracto en el embudo (con el papel de filtro o gasa) y recuperar el líquido

filtrado en un tubo hasta 1/8 de su volumen.

7. Añadir alcohol, previamente congelado, al tubo hasta llegar a la mitad del volumen
del tubo.

Nota: Mantener el tubo al nivel de los ojos para ver lo que sucede; el resultado es visible en pocos
segundos pero aconsejamos esperar entre 3 y 10 minutos e ir observando la formación del precipitado de
ADN. Verá que a medida que pasa el tiempo se forma más precipitado.

8. Introducir una varilla de vidrio o un palito de madera en el tubo, donde el alcohol está
en contacto con el extracto (ADN precipitado).

9. Retirar una muestra del ADN precipitado, o de todo el ADN, y observar su textura
viscosa y pegajosa.

10. Colocar la muestra en un pedazo de cartulina negra y dejarla secar al aire

(durante el tiempo necesario para que el alcohol se evapore).

11. Observar la estructura del ADN: una red blancuzca que representa el ADN de
millones de células digeridas de una única fresa.

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- HOJA DE REGISTRO (GRUPO O INDIVIDUAL) -

¿Qué sabemos sobre ¿Qué es lo que sabemos y ¿Cómo lo podemos ¿Qué es lo que ¿Qué es lo que
este tema? queremos descubrir? descubrir? observamos? aprendemos?
Para ello hemos
machacado las
fresas durante dos
minutos y con un
Sabemos que la Observamos
papel de filtro y un
extracción de ADN es un que, con unos Hemos
embudo la hemos
proceso en el cual Sabemos lo que es la extracción pocos de aprendido a
pasado a un tubo
extraemos el material de ADN, explicado en la pregunta minutos, sube como extraer el
de ensayo, que,
genético a través del cual anterior, y queremos descubrir hacia arriba el ADN de los
mezclarlo con
se transmite la como podemos extraer el ADN de ADN, en este productos, con
alcohol
información contenida en algún producto, en este caso de caso de la fresa, alcohol
previamente
los genes del producto una fresa. puesto que se previamente
congelado y
que vayamos a utilizar trata de ello, de congelado,
moverlo con una
para ello. extraerlo.
varilla de vidrio,
obtenemos el
resultado de la
extracción.