DIAGNOSTICO VIROLOGICO
VIROLOGIA MEDICA | GUEDILLA DONATO
Los primeros indicios para establecer el diagnóstico de una
infección vírica se obtienen de la historia y los síntomas del
paciente, y mediante de la exclusión de otros tipos de
infección (hongos, bacterias, etc).
¿Para qué sirve un diagnóstico virológico?
El diagnóstico de certeza es fundamental para decidir una
intervención terapéutica, establecer el pronóstico en la
evolución de un paciente, monitorear la respuesta a los
tratamientos antivirales específicos, indicar la necesidad de
una vacunación, y desde un punto de vista epidemiológico,
adoptar medidas de salud pública en una comunidad.
Thomas Milton Rivers, 1937 - Modifica los postulados de Koch
(válidos en infecciones bacterianas)
1) Aislamiento del virus desde el hospedador enfermo.
2) Aislamiento de virus en cultivo en células.
3) Prueba de tamaño por filtrado.
4) Producción de enfermedad comparable cuando el virus
cultivado es inoculado para infectar animales de
experimentación.
5) Re-aislamiento del mismo virus desde el animal de
experimentación.
6) Detección de una respuesta inmune específica contra el
virus.
¿Qué información nos dará?
La elección de la muestra y el momento de su obtención
dependerán de la patogenia de cada infección viral y de la
cinética de la producción de anticuerpos. Por ejemplo, los virus
respiratorios se eliminan en altos títulos en secreciones
respiratorias por lo que se pueden detectar en muestras
respiratorias obtenidas durante los primeros días de
enfermedad, ya que subsiguientemente, el título de los virus en
dichas secreciones disminuye, dificultando así su diagnóstico.
Por el contrario, en la hepatitis B crónica el antígeno de
superficie será detectable en el suero por más de seis meses y
aun durante años.
METODOS DIRECTOS
Se denominan métodos directos de diagnóstico virológico a
aquellos que detectan la presencia del virus (o algunos de sus
componentes) en muestras clínicas, lo que puede realizarse a
través de diversas técnicas que investigan la presencia de:
Agentes infecciosos (mediante la
observación de su replicación en
cultivos celulares)
AISLAMIENTO Y CULTIVO DE LOS VIRUS
El aislamiento viral es el “gold standard” del diagnóstico, ya
que permite la obtención de la cepa viral, lo que presenta gran
importancia no solo para el diagnóstico un caso individual sino
para estudios epidemiológicos. Sus desventajas son: el tiempo
de espera de resultados (días o semanas), su alto costo y
realización compleja, ya que requiere personal entrenado,
infraestructura costosa para trabajo en condiciones de
esterilidad y bioseguridad en cultivos celulares y para
mantenimiento de animales. Además, no todos los virus que
causan patología en humanos son cultivables.
• Cultivo celular: Aislamiento del agente viral a través de
cultivos celulares (líneas celulares) en los cuales se
emplean diferentes tipos de células en cultivos de tejidos.
• Huevos embrionados
• Animales de experimentación
Partículas virales (microscopia
electrónica)
Microscopia Electrónica
• Visualización directa de los virus
• La morfología y el tamaño se utilizan como guía para
llegar al diagnóstico presuntivo.
• La identificación de los viriones se logra incubando el
material en el estudio con anticuerpos específicos
(inmunomicroscopia). El complejo virus-anticuerpo
permite su identificación.
Antígenos virales por técnica de
inmunomarcación
• ELISA
• IF
• RIA
Genomas virales por técnicas
moleculares (PCR)
PCR ( Reacción en Cadena de la Polimerasa)
• Técnica que me permite obtener en gran cantidad copias
de un fragmento de ADN de interés, desde una pequeña
muestra.
• Con la amplificación es más fácil identificar el agente
causante de enfermada.
• Es necesario disponer de: Termociclador (realiza ciclos de
T°) | ADN, gen de interés | Cebadores o primes,
complementarios | Nucleótidos | Polimerasa
• La desnaturalización del ADN separa las bases y los
cebadores se unen por complementariedad y en
presencia de la polimerasa y nucleótidos libres se inicia
síntesis de la nueva hebra viral. La reacción se repite y se
logra sintetizar grandes cantidades de segmentos de ADN
amplificados, los cuales se ponen en evidencia en un gel
de agarosa para electroforesis.
• En los virus ARN primero se realiza una reacción mediada
por la transcriptasa inversa para obtener ADN.
ELECTROFORESIS
• Segmentos de ácidos nucleicos son puesto en geles de
agarosa o poliacrilamida.
• Con corriente se puede mostrar el patrón de migración
electroforética.
• El patrón de migración es puesto en evidencia por algún
método de tinción (sales de plata, bromuro de etidio)
METODOS INDIRECTOS
• Se denominan métodos indirectos o serológicos a aquellos
que investigan la respuesta inmune humoral mediada por
anticuerpos específicos antivirales en el suero o plasma del
paciente.
• Por ende, no detectan la presencia del agente etiológico.
• Para realizar un diagnóstico virológico sustentado en la
serología es necesario determinar la seroconversión o bien
la presencia de IgM específica antiviral.

INMUNOGLOBULINA M INMUNOGLOBULINA G

Técnicas serológicas para identificar y cuantificar la

respuesta inmune humoral inducida por una infección
viral. Deteccion de IgM, IgG, IgA

• ELISA (enzima inmuno ensayo)

· El anticuerpo presente en el suero problema se
une a un antígeno formando un complejo
antígeno – anticuerpo.
· Un 2° anticuerpo marcado con enzima actúa
sobre un sustrato.
· La reacción entre sustrato y enzima genera un
color y la intensidad del mismo refleja la
cantidad de antígeno.
· Se mide con un espectrofotómetro y se evalúa
con una curva patrón estándar.
• RIA (radio inmuno ensayo)
• INMUNOFLUORESCENCIA

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