Capitulo II: “Aspectos clínicos y diagnóstico del Sarampión”

Tema 2: Tipos de muestra para el diagnóstico

de sarampión y rubéola: pre análisis

Blgo. Néstor Edwin Cabezudo Pillpe

Laboratorio de Sarampión y Rubéola
Instituto Nacional de Salud

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 Sarampión

Agente: El virus del Sarampión.

Familia: Paramyxoviridae.
Género: Morbillivirus.
Reservorio: El ser humano.
Estructura: - Es un virus ARN.
- Tamaño: 100 - 200 nm.
- Presenta antígenos de envoltura con propiedades
hemaglutinantes y hemolíticas.
15984 nucletidos.
8 clados (A – H).
23 genotipo o variantes genéticas.

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 Virus del sarampión

Su material genético es ARN de

cadena sencilla. Tiene 6
proteínas estructurales de las
cuales tres forman un complejo
con el ARN y tres están asociados
con la membrana viral (el virus
adquiere la envoltura de la célula
que la infecta).

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 Genotipos del virus sarampión

El genoma de los virus salvajes del sarampión

es una molécula de RNA de 15.984
nucleótidos, codifica por las proteínas
estructurales: N (nucleocápsida), P
(fosfoproteína), L (polimerasa), M (matriz), H
(hemaglutinina) y F (de fusión) que se
incorporan a las partículas víricas, y otras no
estructurales V y C que se encuentran
solamente en las células infectadas.

EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR DEL VIRUS DEL SARAMPION

Rafael Fernández-Muñoz, Juan Carabaña, Montserrat Caballero, Paloma B.
Liton, Beatriz M Duque, Dolores García-Villalón y María Luisa Celma.
Virología, Hospital "Ramón y Cajal"

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 Fase Pre-Analítica
Obtención de muestra

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 Aspectos importantes en el diagnóstico de
sarampión y rubéola en el laboratorio

1. Ficha clínica
2. Tipo de muestra
3. Obtención de muestra
4. Preparación para el embalaje y
envío de la muestra
5. Transporte de muestra

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 Ficha clínica-epidemiológica para la vigilancia
de sarampión y rubéola
Datos importantes:
• Nombre, apellido, edad,
dirección, teléfono del caso o
contacto (menor de edad ,
procedencia
• Fecha de inicio de fiebre
• Fecha de inicio de erupción
• Fecha de toma de muestra
• Descripción de las erupciones
• Fecha de vacunación

Importante:
Se registraran los datos de caso sospechoso en forma completa y legible.
http://www.dge.gob.pe/portal/docs/vigilancia/herramientas/fichas/f_srubeola.pdf

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 Tipo de muestra: Obtención de suero sanguíneo

La muestra validada para el diagnostico

serológico de Sarampión es SUERO
SANGUINEO.
Para la obtención de suero se utilizarán
tubos de extracción al vacío sin
anticoagulantes

Suero
Sanguíneo

Paquete
Globular

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 Obtención de muestra de suero sanguíneo
Es necesario fortalecer los conocimientos de bioseguridad y biocustodia de las
personas involucradas en los procesos de toma, manejo y envío de muestras,
minimizando el impacto de estas actividades en el medio ambiente.

• Identificar correctamente al paciente.

Rotulación inmediata frente al paciente.
• Selección del sitio de venopunción.
Preferida vena mediana cubital
• Limpiar antes de la venopunción con
alcohol al 70%.
El uso de guantes es obligatorio
• Aplicar el torniquete aproximadamente de
8-10 cm por encima del sitio de la
venopunción.
• Se colectará sangre en un tubo de
extracción al vacío sin anticoagulante de 5
cm3 (para extraer 2 cm3 de suero).
Extracción de sangre
con vacutainer
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 Obtención de muestra de suero sanguíneo

• Centrifugar la muestra a 2500 rpm por 10

minutos posterior a la coagulación de la
muestra (30-60 minutos). No pasar de dos
horas.

• Separar el suero, el cual es estable hasta 48

horas de 2-4ºC, después de 48 horas en Centrífuga de tubos
congelación a -20ºC.

• Trasvasar el suero en crio viales estériles y

envío inmediato.

Tubos al vacío con separación

del suero y paquete globular

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Evaluar la pertinencia de obtener una segunda muestra:

–1ra. muestra obtenida ≤ 3 días de la erupción.

–1ra. muestra Ig M positivos o valores indeterminados.
–Casos con 1ra. muestra y sin muestras para aislamiento viral.
–Casos Altamente sospechosos “HOT”.

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 Tipo de muestra: Hisopado Nasal y faríngeo

Materiales

• Criovial con medio de transporte

viral (MTV).
• Dos hisopos de dacrón o
poliéster estéril.
• Cooler con refrigerante.
• Gradilla.
• Plumón indeleble.

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Un medio de transporte viral (MTV) adecuado requiere:
• Mantener la viabilidad de virus.
• Ofrecer flexibilidad en la temperatura de transporte a
temperatura ambiente o refrigeración.
• Evitar contaminación bacteriana y fúngica mediante la
incorporación antibióticos y antifúngicos en el medio.
• Capacidad de conserva virus en almacenamiento en
congelación a largo plazo.
• Utiliza un indicador de pH rojo fenol para garantizar la
integridad del medio en el momento de la recogida de
muestras.
• El hisopo que acompaña a este MTV.
• Emplear hisopos de material sintético. (Dacrón, rayón o
poliester).
• NO utilizar: Hisopos de alginato cálcico, escobillones con
vástago de madera o tubos con gel.
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1.- Preparar el hisopo
• Embeber el hisopo en el medio de transporte
viral, y escurrir el exceso, antes de obtener la
primera muestra.

2.- Hisopado nasal

• Incline la cabeza del paciente.
• Introduzca un hisopo en la fosa nasal y llévelo
hacia atrás hasta los cornetes nasales
• Deténgase allí por unos segundos
• Despacio, retire el hisopo mientras lo hace girar
ligeramente
• Introduzca el hisopo en el MTV correspondiente,
rompa el extremo plástico sobrante del hisopo

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 Tipo de muestra: Hisopado nasal y faríngeo
Para diagnóstico viral
Hasta 7 días después del inicio de la erupción 4.- Colocar el hisopo en el criovial

• Con la boca abierta.

• Baje la lengua con el bajalengua.
• Con un hisopo, tome una muestra de la
faringe posterior. Medio de transporte viral
Con los dos hisopos
• Evite el contacto con las amígdalas
Introducir ambos hisopos en el
criovial que contiene el medio de
transporte viral, y romper el mango
excedente de los hisopos un poco
menos de la altura de la boca del
tubo para que pueda cerrarse
herméticamente.
NOTA: No congelar, enviar urgente al INS
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 Preparación para el embalaje y envío de la muestra

Rotular el criovial
Rotular con plumón indeleble en la
parte externa del criovial la siguiente
información:
• Apellidos y nombres
• Fecha de obtención
• Procedencia

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 Triple empaque

Recipiente Envase Embalaje

primario hermético secundario hermético exterior

Vacutainer Criovial Refrigerantes

Cajas de Bioseguridad

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 Transporte de muestra

Los crioviales deben ser colocados

en una gradilla, soporte o
portaviales para asegurar su
transporte en posición vertical con
la finalidad de evitar derrames.
Asegurar que la muestra se
mantenga en cadena de frío
durante su transporte ( 2⁰ – 8⁰ C).

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 Conservación y envío de las muestras

Suero
En refrigeración (2 - 8 ºC) hasta por 24 h.
En caso se requiera mayor tiempo debe congelarse El envío de muestras refrigeración (2 - 8 ºC).
No congelar la muestra. Durante el
a -20°C. ttransporte de la muestra mantenimiento de
la cadena de frío.
Enviar rápidamente al Instituto Nacional de
Hisopado nasal y faríngeo Salud

Las muestras deben mantenerse en refrigeración

(2 – 8 ºC)

Transporte de la muestra
Mantenimiento de la cadena de frío según
corresponda
Enviar rápidamente al Instituto Nacional de Salud

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 Catalogo de servicios, criterios para obtención de muestra,
transporte y envío para el diagnóstico Sarampión y Rubéola
CONSERVACIO CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
TRANSP. DE
N Y TIEMPO DE Y RECHAZO DE LA MUESTRA
MUESTRA
ALMACENAMI
ANÁLISI CARACTERISTICAS DE (Tipo de
VOLUMEN ENTO DE LA
TIPOS DE S DE DESCRIPCIÓN TIPO DE LA MUESTRA Y embalaje,
ENFERMEDAD PATÓGENO MUESTRA MUESTRA EN
SERVICIOS LABORA DEL ANÁLISIS MUESTRA PRECAUCIONES temperatura y
PRIMARIA EL AREA DE RECEPCION DE
TORIO ESPECIALES tiempo LAB.
LABORATORIO MUESTRAS
máximo de
TOMADOR DE
transporte)
LA MUESTRA
sangre total obtenida
El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
Determinación sin EDTA, no
Virus de la suero mínimo Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
RUBEOLA Serología ELISA de anticuerpos hemolizada,
Rubéola sanguíneo 0.5 ml de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
anti rubeola IgG refrigerada, de 48 horas
LA MUESTRA operacional de la vigilancia
desde la obtención
sangre total obtenida
El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
Determinación sin EDTA, no
Virus de la suero mínimo Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
RUBEOLA Serología ELISA de anticuerpos hemolizada,
Rubéola sanguíeno 0.5 ml de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
anti rubéola IgM refrigerada, de 48 horas
LA MUESTRA operacional de la vigilancia
desde la obtención
Hisopado nasal y El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
Hisopado
Virus de la Aislamiento del orofaringe sumergido Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
RUBEOLA Aislamiento Cultivo nasal y 3 ml
Rubéola virus en medio de transporte de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
faringeo
viral LA MUESTRA operacional de la vigilancia
Hisopado nasal y El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
Hisopado
Virus de la Biología Biología orofaringe sumergido Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
RUBEOLA PCR nasal y 3ml
Rubéola Molecular Molecular en emedio de de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
faringeo
transporte viral LA MUESTRA operacional de la vigilancia
sangre total obtenida
Determinación El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
sin EDTA, no
Virus deL de anticuerpos suero minimo Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
SARAMPION Serología ELISA hemolizada,
Sarampión anti sarampión sanguíeno 0.5 ml de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
refrigerada, de 48 horas
IgG LA MUESTRA operacional de la vigilancia
desde la obtención
sangre total obtenida
Determinación El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
sin EDTA, no
Virus deL de anticuerpos suero minimo Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
SARAMPION Serología ELISA hemolizada,
Sarampión anti sarampión sanguíeno 0.5 ml de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
refrigerada, de 48 horas
IgG LA MUESTRA operacional de la vigilancia
desde la obtención
Hisopado nasal y El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
Hisopado
Virus deL Aislamiento del orofaringe sumergido Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
SARAMPION Aislamiento Cultivo nasal y 3 ml
Sarampión virus en emedio de de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
faringeo
transporte viral LA MUESTRA operacional de la vigilancia
Hisopado nasal y El incumplimiento CON LAS Cumplimiento de las
Hisopado
Virus deL Biología Biología orofaringe sumergido Cadena de frio Cadena de frio ESPECIFICACIONES características clínicas
SARAMPION PCR nasal y 3ml
Sarampión Molecular Molecular en emedio de de 2 a 8 °C de 2 a 8 °C MENCIONADAS, SE RECHAZA compatible con la definición
faríngeo
transporte viral LA MUESTRA operacional de la vigilancia

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En el Perú, el Instituto Nacional de Salud dirige la Red Nacional de
Laboratorios de Salud Pública a través del Centro Nacional de Salud Pública
(CNSP) y se oficializa el Sistema de la Red Nacional de Laboratorios de
Referencia de Salud Pública en el año 1996 a través de la Resolución
Ministerial Nº 236-96-SA/DM definiéndose los niveles de acuerdo a su
complejidad en: Laboratorios de Referencia Nacional (LRN) y Laboratorios de
Referencia Regional (LRR).
La Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública está conformada por 01
Laboratorio de Referencia Nacional (LRN), 25 Laboratorios de Referencia
Regional (LRR) y 04 Laboratorios Referencial (LR) El LRN es cabeza de Red y es
el encargado de recepcionar identificar y priorizar el desarrollo de la
Transferencia Tecnológica de métodos de ensayo a los LRR considerando las
prioridades de salud definidas por el Ministerio de Salud.

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 Red Nacional de Laboratorios en Salud Pública

INS

El Instituto Nacional de Salud (INS), es la cabecera de la Red Nacional de

Laboratorios de Salud Pública, actúa como centro de referencia nacional y
promueve el fortalecimiento de las capacidades de respuesta del sistema
nacional de red de laboratorios en salud pública.

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La RLSP, está organizado
funcionalmente por:
1. Laboratorios de Referencia LRN

Nacional (INS) - LRN

LRRSP
2. Laboratorios de Referencia de
Salud Publica Regiones (LRSP) Laboratorio.
Intermedio Hospital
3. Laboratorios intermedios (LI) - Nacional y Regional

Hospitales Nacionales y - Laboratorio Local, Centros

y Puestos de Salud
Hospitales Regionales
4. Laboratorios locales , (LL); Unidades tomadoras de
Muestras
Hospitales de apoyo, CS o PS)
5. Unidades Tomadoras de
Muestras (UTM) – No Lab.

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 Ministerio de Salud

DIRECTIVA SANITARIA N°.049 -

MINSA/DG E-V-01 DIRECTIVA
SANITARIA PARA LA VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA DE SARAMPIÓN,
RUBÉOLA Y OTRAS ENFERMEDADES
FEBRILES ERUPTIVAS

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 Directiva Sanitaria para la Vigilancia Epidemiológica de
Sarampión, Rubéola y otras enfermedades febriles eruptivas
FINALIDAD Contribuir a la prevención, control y eliminación de la circulación
rubeola en el País, y a la detección oportuna de casos importados. del virus
sarampión

OBJETIVO Brindar las pautas, procedimientos e instrumentos para la

investigación epidemiológica, obtención de muestras de laboratorio y
clasificación de los casos de sarampión, rubéola y otras enfermedades
febriles eruptivas.

ÁMBITO DE APLICACIÓN La presente directiva sanitaria es de aplicación

obligatoria en todos los establecimientos del sector salud, públicos y
privados del ámbito nacional (del Ministerio de Salud, de gobiernos
regionales y gobiernos locales, EsSalud, Sanidad de las Fuerzas Armadas y
de la Policía Nacional del Perú, y establecimientos de salud privados).

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 Gracias

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