Cátedra de Microbiología

Unidad 1. Bioseguridad en el laboratorio microbiológico

Glosario
1-Bioseguridad: conjunto de métodos tendientes a minimizar el riesgo
asociado al manipuleo de microorganismos , mediante la protección de
operadores , personas del entorno , animales y medio ambiente (Norma IRAM
80059).

2-Riesgo biológico: en los laboratorios microbiológicos y biomédicos implica

la probabilidad que ocurra un daño, lesión o enfermedad, cuya evaluación se
concentra en la prevención de infecciones.

3-Contención primaria: Se refiere al cumplimiento de las buenas prácticas de

laboratorio y la correcta utilización de equipos de seguridad apropiados (uso de
ropa adecuada, guantes, antiparras, barbijos, cabinas o gabinetes de seguridad
biológica, centrífuga de seguridad).

4-Contención secundaria: Protege al ambiente externo de agentes

infecciosos; esto se logra a través de un correcto diseño de las instalaciones
(provisión de lavamanos, duchas, cabinas de bioseguridad, flujo de aire
direccional con filtro HEPA).

5-esiduo patogénico: aquellos desechos o elementos materiales en estado

sólido, semisólido, líquido o gaseoso que presumiblemente presenten o
puedan presentar características de infecciosidad, toxicidad o actividad
biológica que puedan afectar directa o indirectamente a los seres vivos, y
causar contaminación del suelo, del agua o de la atmósfera; que sean
generados en la atención de la salud humana o animal por el diagnóstico,
tratamiento, inmunización o provisión de servicio, así como también en la
investigación o producción general de elementos biológicos tóxicos.

6-Generador de residuos: todo individuo que a través de cualquier técnica o

procedimiento descarte un elemento

7-Contingencia: derrame o emanación accidental de residuos.

8-Cabina de seguridad biológica: equipo proyectado para ofrecer protección

al usuario y al ambiente de los riesgos asociados al manejo del material
infeccioso y otros materiales biológicos peligrosos.

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9-Almacenamiento final: espacio físico destinado al depósito diario de los

residuos generados hasta el momento en que son retirados para su tratamiento
final.

10-Segregación: separación adecuada de los residuos de acuerdo a su

clasificación.

Normas generales de trabajo en un laboratorio

El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estándares técnicos y de
seguridad propios de cada laboratorio de Microbiología. El estricto
cumplimiento de las normas que representan la buena práctica en el
laboratorio, es la mayor garantía de la bioseguridad y no puede ser
reemplazado por cualquier otra medida de orden colateral.
Los extinguidores de fuego deben estar en lugares de fácil acceso,
señalizados, y en condiciones de uso.

* El laboratorio debe mantenerse limpio y organizado, libre de materiales que

no tengan relación con el trabajo en el mismo.
* Todos los procedimientos y técnicas se deben realizar con el máximo cuidado
para minimizar la producción de aerosoles. Siempre se deberá caminar y
desplazarse sin realizar movimientos bruscos, evitando la formación de
corrientes de aire.
* Las superficies de las mesas de trabajo deberán ser decontaminadas antes y
después de cada una de las jornadas.
* El personal deberá higienizarse las manos con algún detergente, jabón o
desinfectante luego de cada jornada de trabajo.
* Es obligatorio el uso de batas o delantales, y en los casos necesarios,
guantes, barbijos o cofias.
* Circular solamente por las zonas permitidas y hacerlo lentamente a fin de
evitar las corrientes de aire.

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* Cualquier accidente que ocurra deberá se comunicado de inmediato al

encargado del laboratorio.
* Antes de retirarse, al concluir el trabajo, verificar que las llaves de gas, agua y
luz se encuentren cerradas.
* Las prácticas de higiene personal en el laboratorio clínico, están destinadas a
prevenir lesiones o enfermedades directamente relacionadas con esta labor, y
aunque muchas veces no se sigue con la formalidad que corresponde, están
destinadas a prevenir enfermedades laborales.
* Los alimentos, bebidas, goma de mascar, etc., se consumirán fuera del
laboratorio. Nunca usar los recipientes del laboratorio para beber líquidos. Los
refrigeradores, congeladores y freezer deben contener exclusivamente
materiales bien identificados. No se colocarán alimentos ni bebidas en los
mismos, si éstos contienen materiales de trabajo del laboratorio, evitando así la
contaminación.

* No tocarse el rostro ni tocar a otras personas u objetos, luego de haber

realizado alguna maniobra microbiológica sin antes lavarse las manos. El
cabello largo y la barba no son recomendables en el laboratorio; en caso
necesario se deberán utilizar cofias y barbijos.
* Los procedimientos de riesgo se realizarán en cabinas de bioseguridad. En
ellas se colocará todo el material necesario antes de comenzar el trabajo,
evitándose todo tipo de movimientos de entrada y salida durante el trabajo;
también se evitarán los movimientos bruscos pues estos podrían ocasionar
corrientes de aire. No se debe pipetear con la boca, sino con algún
intermediario. Al concluir el trabajo, se limpiará la superficie de las mesadas
con algún desinfectante adecuado, o dejando lámparas de UV que actúen por
un período de 1 hora.

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Lavado de manos
Las manos constituyen una de las rutas de diseminación de infecciones.
Pueden adquirir fácilmente microorganismos indeseables que luego se
transfieren a las personas, instrumental y alimentos. Su lavado o desinfección
debe ser cuidadoso a fin de evitar la diseminación de cualquier agente. En los
casos que se sospecha una contaminación de manos con material
microbiológico es necesaria la desinfección con soluciones alcohólicas.
Podemos distinguir dos tipos de microbiota en las manos
- microbiota residente: microorganismos que se multiplican en la piel, por lo
que las manos se convierten en fuentes de infección. Son gérmenes difíciles de
eliminar por lavado o con desinfectantes. Aproximadamente el 20% se
mantiene en zonas profundas de la piel cuando no se cuenta con buenas
medidas de erradicación
- microbiota transitoria: son microorganismos presentes en la piel pero que
no es allí donde se multiplican. Su hallazgo es debido a contaminaciones
recientes. Su transporte no suele superar las 48 h Se pueden eliminar por
lavado con jabón o por tratamiento con desinfectantes.
Si la carga bacteriana es alta (mayor a 10 6 UFC/ml) el lavado o desinfección
es incorrecto. Un cierto número de bacterias puede permanecer en piel
aumentando el riesgo de diseminación.
En caso de realizar maniobras riesgosas es aconsejable la utilización de
guantes.
-Lavado higiénico: es la remoción mecánica de microorganismos. Se
realiza mediante el lavado con jabón no medicamentoso y posterior arrastre
con agua. Remueve hasta el 99% de la flora transitoria entre 30 y 60 segundos,
pero no produce muerte de los microorganismos. El lavado debe realizarse
cubriendo las manos con jabón y poca cantidad de agua, seguida de un
cuidadoso enjuague y secado con toalla descartable que también es utilizada
para el cierre de la canilla. El jabón puede ser líquido o en barra.
-Lavado antiséptico: es un procedimiento de remoción química de bacterias
efectuado con soluciones antisépticas, que producen la muerte o inhibición de
las mismas. Es más efectivo que el lavado con jabón común. Se realiza
mediante cepillado, inmersión o aspersión. El tiempo de lavado oscila alrededor
de 60 segundos cubriendo toda la superficie de las manos. Los agentes
antisépticos recomendados son: etanol 70%, solución de clorhexidina o
iodopovidona.
-Uso de guantes: constituyen una barrera de protección para impedir la
contaminación de las manos. Sin embargo los mismos no siempre son
impermeables. Bacterias y virus pueden atravesarlos en un 5% de los casos.
Los guantes de látex son más eficaces que los de vinilo pero no reemplaza al
lavado de manos

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Residuos
Las personas que generan residuos infecciosos son responsables de
acondicionarlos para minimizar la posible contaminación ambiental y disminuir
el riesgo de exposición del trabajador de salud.
Se pueden diferenciar tres grupos de residuos:
-Residuos equivalentes a los domésticos: no requieren manejo especial
pues no representan un riesgo. Están compuestos de papel, cartón, plásticos,
maderas, alimentos, vidrios, latas, escombros, tierra.
-Residuos infecciosos: presentan un riesgo potencial para el medio
ambiente o la salud humana y/o animal. Son capaces de producir enfermedad.
Se generan en procesos de atención a pacientes, diagnósticos, tratamientos,
inmunizaciones, investigaciones o utilización como animales experimentales.
En el caso de residuos de la clínica, muestras, cultivos microbianos, residuos
patológicos deben esterilizarse previo a su destino final. En el caso de
elementos punzo-cortantes deben acondicionarse para evitar el riesgo
agregado por accidente traumático al preexistente por transporte mecánico de
un agente infeccioso.
-Residuos especiales: integrado por agentes químicos, antineoplásicos,
radioactivos, etc.

Transporte de material infeccioso

Toda muestra debe ser acondicionada para su envío, por las vías de
comunicación habituales, para llegar al laboratorio de destino en condiciones
de contención biológica adecuada. Para este fin se consideran envases de
contención con tres barreras. Estas barreras deben asegurar la
impermeabilidad del contenido, resistencia a pinchaduras, rígidos a prueba de
pérdidas. Los recipientes deben ser acondicionados para soportar golpes sin
pérdida de contenido. Su identificación debe ser clara y fácilmente identificable.
Durante el transporte debe existir un teléfono y nombre de referencia para
comunicarse con el responsable que determine las medidas a seguir en caso
de accidente.
La normativa para el transporte seguro de sustancias infecciosas y muestras
para diagnóstico de la OMS se basa en las recomendaciones de la UNCE
(Comité de expertos en transportes de Mercancías peligrosas de Naciones
Unidas), que integra 23 países incluyendo la Argentina

Aerosoles
Los aerosoles se producen en toda actividad que se desarrolle en el
laboratorio, y su importancia radica fundamentalmente en que no pueden ser
detectados y se desplazan por el ambiente, sometiendo a riesgo de
contaminación al personal que trabaja o transita allí. Se producen dos tipos de
aerosoles:

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1) los que se desprenden como partículas de más de 5 micrones, que se

depositan rápidamente y contaminan las superficies de trabajo y la piel del
operador y 2) los que se desprenden como partículas menores de 5 micrones,
que se secan en forma instantánea, permaneciendo en suspensión, razón por
la que son fácilmente arrastrados por las corrientes de aire.
Las operaciones con mayor riesgo de infección son las que pueden producir
aerosoles al trabajar con fluidos contaminados, como el destapar con muestras
para diagnóstico, flamear el ansa metálica cuando ésta se encuentra
contaminada con una gran cantidad de medio, transvasar líquidos infectantes,
agitar un envase con suspensión de microorganismos, desintegrar en un
mortero tejidos para su posterior análisis, abrir ampollas de cultivo, destapar
tubos luego de haberlos sometido a centrifugación o agitación, pipetear líquidos
contaminados, manipular jeringas y agujas con muestras de sangre.
Medidas para disminuir sus riesgos:
-Evitar la agitación de frascos o tubos destapados
-No descargar la última gota del contenido de una pipeta
-No usar anillos, relojes o colgantes que puedan contribuir a transportar a
los aerosoles.

Clasificación de los agentes biológicos por grupos de riesgo

* Agente biológico del grupo 1. Aquél que resulta poco probable que cause
una enfermedad en el hombre.
*Agente biológico del grupo 2. Aquél que puede causar una enfermedad en
el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco
probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis
o tratamiento eficaz.
*Agente biológico del grupo 3. Aquél que puede causar una enfermedad
grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con
riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a él
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.

*Agente biológico del grupo 4. Aquél que causando una enfermedad grave
en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas

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probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista

generalmente frente a él profilaxis o tratamiento eficaz.

Niveles de contención
El término "contención" se emplea para describir los métodos que hacen
seguro el manejo de materiales infecciosos en el laboratorio. El propósito de la
contención es reducir al mínimo la exposición del personal de los laboratorios,
otras personas y el entorno a agentes potencialmente peligrosos.
La Seguridad Biológica se fundamenta en tres elementos:
 Técnicas de laboratorio. El elemento más importante para contener los
riesgos biológicos es el seguimiento estricto de las prácticas y técnicas
estándar microbiológicas. Como parte de estas prácticas está el desarrollo o
adopción por parte de cada laboratorio de un manual de operaciones
(Manual de Seguridad Biológica) en el que se identifiquen los riesgos que
pueda sufrir el personal y que especifique los procedimientos que puedan
minimizar esos riesgos.
 Equipo de seguridad (barreras primarias). Se incluyen en este apartado
tanto dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad (ej. las cabinas de
seguridad biológica), como las prendas de protección personal (guantes,
mascarillas, batas,...).
 Diseño y construcción de la instalación (barreras secundarias). La
magnitud de las barreras secundarias dependerá del tipo de agente
infeccioso que se manipule en el laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la
separación de las zonas donde tiene acceso el público, la disponibilidad de
sistemas de descontaminación (autoclaves), el filtrado del aire de salida al
exterior, el flujo de aire direccional, etc.

Niveles de bioseguridad
En relación al grado de riesgo de los agentes biológicos infecciosos en el
material que se maneja, se han establecido cuatro niveles de bioseguridad:

- NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1: laboratorios destinados al diagnóstico y a la

enseñanza, con equipos de seguridad y reglamentaciones de índole general.
Las normas de seguridad están destinadas sobre todo a la protección de los
cultivos (evitar que los cultivos puros o las muestras recibidas se contaminen
con microorganismos ambientales) y no tanto del operador. Esto es debido a
que se trabaja con microorganismos no patógenos o con un potencial
mínimo de riesgo o riesgo individual y comunitario escaso o nulo.
Podemos citar como ejemplo al laboratorio de entrenamiento en el cual
trabajaremos a lo largo del curso de la presente asignatura.

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-NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2: Se rigen con la normativa a dicho nivel los

laboratorios que trabajan con agentes que pueden producir enfermedad en
el hombre como en los animales en forma accidental, pero que pueden ser
contenidos por las normas de laboratorio. Por lo tanto el riesgo individual es
moderado y el riesgo comunitario bajo. Requiere las consideraciones del
anterior, más los elementos fundamentales que se detallan a continuación:
-Prácticas cuidadosas para evitar producir aerosoles infecciosos (no generar
presión positiva en las pipetas ni quemar el ansa directamente en la llama
cuando tiene adherido mucho contenido microbiano)
- Acceso reglamentado al laboratorio
- Puertas cerradas con la señalización: “RIESGO BIOLOGICO”
- Cualquier mínimo accidente debe ser notificado
- Algunos materiales pueden requerir gabinetes de bioseguridad.
- Agentes biológicos que se manejan en laboratorios de Nivel 2: Salmonella,
Virus de Hepatitis B.
-Ejemplos de laboratorios de este tipo: Laboratorios de Hospitales, Centros
Diagnósticos, etc.

- NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3: En estos laboratorios se realiza diagnóstico o

investigación con agentes biológicos que requieren especiales condiciones
de manejo. Cuando se manipulan agentes biológicos del grupo 3,
microorganismos que causan patología grave, de difícil y largo tratamiento, que
pueden curar con secuelas y a veces producir la muerte. El mayor y más
frecuente peligro que entrañan éstos es la infección adquirida a través de
aerosoles y por fluidos biológicos. El nivel de riesgo individual es elevado y
el riesgo comunitario moderado. Además de lo ya mencionado para los
niveles 1 y 2, requieren:

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-Personal entrenado en el manejo de estos microorganismos patógenos

específicos
- Acceso controlado y restringido solo al personal del laboratorio
- El laboratorio debe estar separado de las áreas de tráfico habitual del
edificio, con una doble puerta (vestíbulo) , duchas y vestuarios en el vestíbulo.
- Ventanas y puertas cerradas.
- Sistema de ventilación y circulación de aire independiente del resto del
edificio.
- Lavamanos con llave accionada con el pié; toallas descartables.
- Uso obligatorio de guantes y barbijo en los gabinetes de trabajo.
-Agentes biológicos que se manejan en estos laboratorios: virus rábico,
Histoplasma capsulatum, Coxiella burnetti, Mycobacterium tuberculosis.
- Ejemplo de laboratorio: laboratorios especializados.

- NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4: Se trabaja con agentes que requieren las más

estrictas normas de contención por ser extremadamente patógenos para el
personal de laboratorio, y/o porque son exóticos en ese país. En este caso el
riesgo individual y comunitario es elevado. Normalmente son
microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel
también puede utilizarse para trabajar con animales de experimentación
infectados por microorganismos del grupo 4. En este grupo está virus Ebola,
etc. Además, deben incluirse en este nivel de contención los microorganismos
del grupo 3 que adquieran propiedades patógenas que los eleven al grupo 4
(Mycobacterium spp. multirresistente). Es obligatorio el cumplimiento de las
normas anteriores, además de:
- El acceso estará bajo la supervisión directa del jefe responsable.
-Todas las actividades que se realicen en este tipo de laboratorio requieren
de un edificio totalmente independiente, con todos los servicios de apoyo
separados y exclusivos.
-Ventanas de vidrio irrompible y puertas a prueba de filtraciones de aire.
- El agua de las duchas y deshechos debe ser tratada previo a su
eliminación.
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- En caso de accidente se requiere de una metodología especial con

controles médicos y una investigación permanente seguida por la institución
-Agentes microbiológicos: por ejemplo el virus de la Peste Porcina Africana
en la Argentina.
-Ejemplos: laboratorios de alta seguridad.

Actualmente no solo debe observarse el nivel de bioseguridad necesario

sino también los tipos de actividades u operaciones que se pueden realizar con
los microorganismos.
Se pueden considerar tres diferentes posibilidades dentro de cada nivel de
bioseguridad
-Actividad que no multiplica ni disemina el microorganismo
-Actividad que multiplica y/o disemina el microorganismo
-Trabajo con animales potencialmente infectados.
De la relación entre las dos clasificaciones (nivel de bioseguridad y actividad)
para un listado de microorganismos se establece el nivel real de bioseguridad
necesario sobre los cuatro posibles.
Esta última normativa establece el riesgo real que enfrenta el operador para
fijar los procedimientos y dispositivos de protección necesarios con el que se
debe trabajar.
En los trabajos anteriores se establecía a menudo una relación directa entre
el nivel de bioseguridad y el grupo de riesgo al que pertenece cada
microorganismo, sin tener en cuenta la operación desarrollada.
Se consigue así definir normas de trabajo seguro en el laboratorio orientada
a los dispositivos y procedimientos adecuados para brindar protección al
operador y su entorno.
Excepto en casos excepcionales, el procesamiento inicial de las
muestras clínicas y las pruebas serológicas pueden realizarse de forma
segura en un nivel 2.

Preparación del material de uso en el laboratorio

El material, una vez lavado y secado, debe ser preparado para la
esterilización. Los elementos con bocas como tubos, frascos, botellas, se
deben obturar con tapones de algodón y se deben recubrir con papel madera o
aluminio. Si se trata de un grupo de tubos de igual tamaño, una vez tapados
con algodón cada uno de ellos, se reúnen en cajas o cestos y se cubren todos
juntos con un papel. En las pipetas se coloca una boquilla de algodón que
actúa como filtro. Se reúnen y se envuelven formando paquetes de 5 a 10
unidades. Todos los materiales deben estar debidamente identificados. Como

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consecuencia del trabajo el material se ensucia y se contamina con

microorganismos, por lo que debe ser esterilizado y luego lavado para su
reutilización. El material descartable no se reutiliza, pero debe ser esterilizado
luego de su uso antes de su eliminación, como mecanismo de contención para
evitar la diseminación de los microorganismos con los que se ha trabajado.

El siguiente gráfico muestra el Ciclo del material dentro del laboratorio

Material limpio Preparación Esterilización

(Colocación de tapones,
envoltorio y otros)

USO

Lavado y secado.

Material sucio
(Contaminado)

Esterilización

En nuestro laboratorio de microbiología debemos cumplir estrictamente con

todas las normas de bioseguridad para poder trabajar de forma ordenada y
segura. El educando tendrá un lugar (y un mechero) asignado, donde trabajará
sentado, siempre con un guardapolvo abrochado, y si su cabello es largo
deberá estar recogido. Todos los elementos personales se dejarán fuera de la
sala de trabajos. No se podrá beber, fumar, comer o mascar dentro de la sala.
Todo alumno que no cumpla con los requisitos de bioseguridad establecidos
deberá retirarse de la sala de trabajos.
En caso de asignársele un microscopio, la responsabilidad del alumno
consiste en mantenerlo en buen estado y entregarlo en óptimas condiciones.
No se permite retirar materiales, medios o cultivos microbianos del
laboratorio.

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Si ocurre algún accidente dentro del laboratorio como un incendio, una

herida personal o una quemadura, deberá ser comunicado de inmediato al
docente que le ayudará a tomar las medidas necesarias. En el caso en que se
derrame un cultivo, conserve la calma y aplique el siguiente procedimiento:
1) Informe inmediatamente al docente
2) Coloque torundas de algodón, toallas de papel u otro elemento
descartable absorbente sobre el material derramado.
3) Cubra todo con un desinfectante
4) Una vez transcurrido el tiempo necesario, retire las torundas y
colóquelas en la olla o recipiente para esterilización.
Al concluir cada clase, debe dejar todas las instalaciones y equipo de
laboratorio ordenados. Los papeles de deshecho y el material contaminado se
deben colocar en receptáculos apropiados. Comunique al docente sobre
cualquier aparato defectuoso que vea. La mesa de trabajo debe quedar
ordenada y antes de retirarse de la sala de trabajo, todos deberán lavarse las
manos con agua y jabón.

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