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Jawetz, Melnick & Adelberg Microbiología Médica, 28e

CAPÍTULO 2: Estructura celular

TINCIÓN
Los colorantes sufren combinación química con el protoplasma de la bacteria; si la célula no está muerta, el proceso de tinción la destruye, por tanto,
tal proceso es drástico y puede producir artefactos.

Los colorantes utilizados a menudo son sales. Los colorantes básicos consisten de cationes teñidos con un anión incoloro (p. ej., cloruro− de azul
de metileno+); ocurre lo contrario con los colorantes ácidos (p. ej., eosinato− de sodio+). Las células bacterianas son ricas en ácidos nucleicos y
portan cargas negativas en los grupos fosfato. Estas cargas negativas se combinan con las cargas positivas de los colorantes básicos. Los colorantes
ácidos no tiñen a las células bacterianas, y por tanto, pueden ser utilizados para teñir el material de fondo a fin de proporcionar un contraste de color
(véase la sección “Tinción negativa”, más adelante).

Los colorantes básicos tiñen a las células bacterianas de manera uniforme a menos que en primer lugar se destruya el ARN citoplásmico. Sin embargo,
pueden utilizarse técnicas de tinción especial para diferenciar los flagelos, las cápsulas, las paredes celulares, las membranas celulares, los gránulos,
los nucleoides y las esporas.

Tinción de Gram

Una característica taxonómica importante de las bacterias es su respuesta a la tinción de Gram. Las propiedades de la tinción de Gram parecen ser
fundamentales; la reacción de Gram se correlaciona con muchas otras propiedades morfológicas de forma tal que se manifiesta una relación
filogenética (véase capítulo 3). Un microorganismo que en potencia es positivo para la tinción de Gram puede ser sólo bajo condiciones ambientales
particulares y si el cultivo es joven.

El procedimiento de tinción de Gram (véase en este mismo capítulo el acápite “Pared celular” y el capítulo 47) comienza con la aplicación de un tinte
básico violeta de genciana. Luego se aplica una solución de yodo, que forma un complejo de violeta de genciana. Todas las bacterias se tiñen de color
azul en este punto del procedimiento. Luego la célula se trata con alcohol. Las células grampositivas retienen el complejo cristal violeta-yodo y quedan
azules; las células gramnegativas quedan completamente decoloradas por el alcohol. Como último paso se aplica otro colorante (como rojo de
safranina) de forma que las células gramnegativas decoloradas adquieren un color contrastante; las células grampositivas se mantienen de un color
violáceo (cuadro 2–1).

La base de la reacción diferencial a la tinción de Gram es la estructura de la pared celular, como se explicó anteriormente en este capítulo.

Tinción ácido-rápida

Las bacterias ácido-rápidas son aquellas que retienen carbolfucsina (fucsina básica disuelta en una mezcla de fenol-alcohol-agua) incluso cuando se
decoloran con ácido clorhídrico en alcohol. Un frotis de las células sobre un portaobjetos se inunda con carbolfucsina y se calienta con un baño de
vapor. Después de esto, la decolorización con ácido-alcohol se lleva a cabo, y se aplica finalmente un contraste para contratinción (azul o verde) (véase
el capítulo 47). Las bacterias ácido-rápidas (micobacterias y algunos de los actinomicetos relacionados) aparecen de color rojo; otras adquieren el
color de la contratinción.

Tinción negativa

Este procedimiento consiste en la aplicación al entorno de un colorante ácido para dejar a las células incoloras. El tinte negro nigrosina es
comúnmente usado. Este método se utiliza para células o estructuras que son difíciles de teñir directamente (consúltese la fig. 2–23B).

Tinción de flagelos
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Los flagelos son demasiado finos (aproximadamente 20 nm de diámetro) para ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo, su presencia Page
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disposición pueden ser demostradas tratando las células con una suspensión coloidal inestable de sales de ácido tánico las cuales provocan que se
forme un precipitado denso en las paredes celulares y los flagelos. De esta manera, el diámetro aparente de los flagelos se incrementa hasta tal punto
que la tinción posterior con fucsina básica hace que los flagelos se vuelvan visibles en el microscopio óptico. La figura 2–30 muestra las células teñidas
Tinción negativa Universidad Industrial de Santander
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Este procedimiento consiste en la aplicación al entorno de un colorante ácido para dejar a las células incoloras. El tinte negro nigrosina es
comúnmente usado. Este método se utiliza para células o estructuras que son difíciles de teñir directamente (consúltese la fig. 2–23B).

Tinción de flagelos

Los flagelos son demasiado finos (aproximadamente 20 nm de diámetro) para ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo, su presencia y
disposición pueden ser demostradas tratando las células con una suspensión coloidal inestable de sales de ácido tánico las cuales provocan que se
forme un precipitado denso en las paredes celulares y los flagelos. De esta manera, el diámetro aparente de los flagelos se incrementa hasta tal punto
que la tinción posterior con fucsina básica hace que los flagelos se vuelvan visibles en el microscopio óptico. La figura 2–30 muestra las células teñidas
por este método.

FIGURA 2–30

Tinción de los flagelos del género Pseudomonas. (Reproducido con autorización de Leifson E. Tinción, forma y disposición de los flagelos bacterianos.
J Bacteriol. 1951;62:377.)

En las bacterias perítricas, los flagelos se forman en haces durante el movimiento; dichos haces pueden ser lo suficientemente gruesos como para ser
observados en células vivas mediante microscopia de campo oscuro o de contraste de fase.

Tinción de la cápsula

La presencia de las cápsulas por lo general es demostrada mediante el procedimiento de tinción negativa o de una modificación del mismo
(consúltese fig. 2–23). Una de estas “manchas de cápsulas” (método de Welch) implica el tratamiento con una solución de violeta de genciana, caliente,
seguida de un enjuague con una solución de sulfato de cobre. Este último se usa para eliminar el exceso de mancha porque el lavado convencional con
agua disolvería la cápsula. La sal de cobre también le da color al fondo y da como el resultado que la celda y el fondo aparezcan en azul oscuro y la
cápsula en un azul mucho más pálido.

Tinción de nucleoides

Los nucleoides se tiñen con tinción de Feulgen, que es específica para el ADN. Las tinciones de ADN intercaladas con DAPI y bromuro de etidio son
ampliamente usadas en la microscopia de fluorescencia de los nucleósidos.

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Tinción de esporas
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Las esporas pueden ser observadas, en su forma más simple, como cuerpos refractarios intracelulares (véase fig. 2–28) en suspensiones de células sin
teñir o como áreas incoloras en las células teñidas por métodos convencionales. La pared de la espora es relativamente impermeable, pero se puede
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Los nucleoides se tiñen con tinción de Feulgen, que es específica para el ADN. Las tinciones de ADN intercaladas con DAPI y bromuro de etidio son
ampliamente usadas en la microscopia de fluorescencia de los nucleósidos.

Tinción de esporas

Las esporas pueden ser observadas, en su forma más simple, como cuerpos refractarios intracelulares (véase fig. 2–28) en suspensiones de células sin
teñir o como áreas incoloras en las células teñidas por métodos convencionales. La pared de la espora es relativamente impermeable, pero se puede
hacer que los tintes penetren en ella al calentar la preparación. La misma impermeabilidad sirve para prevenir la decoloración de la espora por un
periodo de tratamiento con alcohol suficiente para decolorar las células vegetativas. Finalmente el alcohol puede ser contrarrestado. Las esporas se
tiñen comúnmente con verde malaquita o carbolfucsina (fig. 2–31).

FIGURA 2–31

Tinción de endosporas. Las endosporas retienen la mancha primaria verde, verde malaquita. La contratinción con safranina imparte un color rojo a
otras células. (Cortesía de Larry Stauffer, Laboratorio de Salud Pública del Estado de Oregon. Fuente: Centros para el Control y la Prevención de
Enfermedades, Biblioteca de Imágenes de Salud Pública, ID# 1895; 2002.)

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