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En este grafico tenemos una fuente de luz con un prisma que divide la luz, vemos como las
longitudes de onda que estimula los conos y generan energía, sustancias químicas y en el color. El
monocromador es el filtro que permite pasar una longitud de onda específica.
Mientras más color más energía absorbida y color, y aquella que no se reabsorbe es la energía
transmitida que puede ser detectado para dar un numero a la intensidad de color, y transformamos
de datos cualitativos a datos cuantitativos.
TÉRMINOS EN ESPECTOFOTOMETRÍA
B = Blanco, que es el reactivo de trabajo que aún no desarrolla color
S = Suero, es la alícuota (cantidad pequeña) del paciente que vamos analizar
M = Muestra, es la alícuota (cantidad pequeña) del paciente que vamos analizar
P = Problema, es la alícuota (cantidad pequeña) del paciente que vamos analizar
D = Desconocido, es la alícuota (cantidad pequeña) del paciente que vamos analizar
P/S = Patrón o estándar, es una muestra que tiene una concentración conocida
El PRINCIPIO DE LA FOTOMETRÍA se basa en leyes físicas, principalmente en la LEY DE BEER,
nos indica que a más color habrá más concentración.
Si antes se quería diagnosticar DIABETES MELLITUS (ORINA DULCE) sin examen de laboratorio,
síntomas de ir al baño muy seguido, aumento de hambre y sed. Los pacientes diabéticos eliminan
por la orina tiene glucosa y se puede analizar la orina con azúcar dejándolo al aire y ver si se llena
de hormigas, o muchas veces en la antigüedad los médicos probaban los fluidos para comprobar
si tiene azúcar (glucosa).
Algunos investigadores se fijaron que algunas sustancias reaccionaban con la glucosa que se
estaba midiendo y estas sustancias podían desarrollar color SUSTANCIAS CROMOGENAS. Luego
se fijaron que había sustancias que se combinaban con la glucosa del suero y desarrollaban color
y estas sustancias se denominaron REACTIVO DE TRABAJO. La hemoglobina distorsiona las
lecturas. Cuando las sustancias se unían con la glucosa del suero desarrollaban color AZUL
(cualitativo). Un azul pálido casi transparente es un paciente con hipoglicemia y un azul intenso
es un paciente con hiperglicemia.
CUALITATIVO --- CUANTITATIVO aparece el concepto de patrón o estándar que tiene una
concentración conocida, es elaborado por el laboratorio. Entonces en el laboratorio se decide
realizar un patrón con 100 mg/dl de glucosa que lo ponemos con el reactivo de trabajo, dándonos
una tonalidad azul, se saca sangre y se alzan los tubos y si se asemeja al color del patrón es más
probable que tenga la misma concentración. Las tonalidades más oscuras que el patrón tienen más
100 mg/dl y si son azul pálido menos de 100mg/dl. Pasando de una cuantiativa a una
SEMICUANTITATIVA. Para dar el valor exacto en relación con la producción de color, utilizamos
ABSORBANCIA/DENSIDAD OPTIMA.
- Luz = 100 % energía lumínica
- Cubeta = tendrá tres momentos.
Momento BLANCO (transparente) tiene que producir la menor cantidad de color posible y
muchas veces es agua destilada y en otras ocasiones el reactivo de trabajo sin el suero. Si
ponemos aguas destilada la absorbancia es 0. También se lleva a 0 el espectrofotómetro y para
eso necesitamos poner en la cubeta colocar agua destilada que no desarrolle color.
El espectrofotómetro nos permite darle un valor a la producción de color.
1. Se lleva a 0 con AGUA DESTILADA
2. Leer el blanco, estándar y la muestra/desconocido
Blanco nos da un valor de energía
optima baja de 0,035 donde hay
energía reabsorbida (absorbancia) y
la energía que continua es la energía
transmitida (transmitancia).
La transmitancia es inversamente
proporcional a la concentración.
Los espectrofotómetros trabajan
con la absorbancia.
Estándar/Desconocido nos da un
valor más alto, ya que la glucosa que tiene el estándar ha reaccionado con el reactivo de trabajo
dándonos un valor de 0,358 y el desconocido un valor de 0,294. Sabemos que la concentración es
del estándar es 100 mg/dl.
Si el suero del paciente es 0,294 significa que la concentración será más BAJA de 100 mg/dl, por
que la absorbancia es directamente proporcional.
ECUACIÓN DE LA ESPECTOFOTOMETRÍA
Concentración del desconocido/absorbancia del desconocido = concentración del estándar/absorbancia del estándar.
Valores normales de la concentración de glucosa: 110-60 mg/dl. Si el blanco sale muy alto,
probablemente este contaminado
• Valores del estándar: Absorbancia (0,459) y concentración (100mg/dl)
• Valores de desconocido: Absorbancia (0,384) y concentración (100mg/dl)
• Valor blanco: Absorbancia (0,035) y concentración (100mg/dl)
1. A los valores de estándar y desconocido restar el blanco y obtener valores corregidos (estándar
corregido y desconocido corregido)
2. Obtener el factor (división de la concentración del estándar para el estándar corregido)
3. Obtengo la concentración del desconocido (multiplicamos el factor por la absorbancia del del
desconocido corregido) quedándonos con un decimal. = 82,31 mg/dl paciente normolglicemico.
El ultimo valor es una SEVERA HIPOGLICEMIA donde el paciente pierde el conocimiento y está a
punto de entrar en un choque hipoglicemico que normalmente ocurre en paciente DIABETICOS.
Normalmente por la insulina y tienen una mala alimentación o un esfuerzo físico demandante con
poca alimentación.
La muestra tiene la sangre del paciente y el estándar tiene una alícuota de dicho estándar. Y los
tres tiene el reactivo de trabajo
Blanco
Estándar Paciente
Preparamos el reactivo, luego pipeteamos el reactivo. Normalmente se usan los 2,5 ml que
acabamos de leer.
Se pasan los 2,5 ml en las cubetas, y luego los 10 microlitros de sangre en una cubeta y los 10
microlitros del estándar en otra cubeta.
Los colores se desarrollan, en el blanco no hay color, el estándar y el paciente. Nos llama la atención
del paciente a diferencia del color del estándar que esta muchísimo más claro y decimos que el
paciente es ANÉMICO (estamos midiendo hemoglobina). Esperamos 3 minutos y luego leemos.
Si llevamos hacerlo con el blanco que dio 0 pero en otras ocasiones se hace con agua destilada
dando un valor muy bajo. Leemos el estándar y luego la muestra.
Llevamos a cero con el blanco, no hay restas
ESTÁNDAR: 0,158 (absorbancia) y concentración (15 mg/dl)
DESCONOCIDO: 0,151 (absorbancia) y concentración (14,3 mg/dl = factor X 0,151)
BLANCO: 0
Si la concentración del estándar son 15mg/dl ¿Cuál es la cantidad de hemoglobina?
Calculamos el FACTOR = 15 mg/dl / 0,158 = 94,93
CODOCITOS/DIANOCITOSIS: eritrocitos en
forma de "objetivo de tiro" (diana)/sombrero
mexicano/en blanco debido a la distribución
de la hemoglobina. Presente en pacientes con
talasemias, hemoglobinopatías ECS,
hepatopatías crónicas.
• ANEMIA NORMOCÍTICA. Sucede cuando hay una baja cantidad de glóbulos rojos, pese a
que su tamaño sea normal. Es uno de los tipos de anemia y suele ocurrir en hombres y
mujeres mayores de 85 años. Producción disminuida de glóbulos rojos, producción
aumentada de HbS y deficiencia de B2 o B6.
CAUSAS DE LA ANEMIA
1. Defecto en la producción (eritropoyesis)
• Insuficiencia medular (déficit de hematíes y leucocitos)
• Mieloptisis (no tiene espacio para actuar, neoplasias, mielofibrosis o tuberculosis)
• Anemia por enfermedad crónica/ anemias inflamatorias (aumento de TNF-alfa y IL-1)
• Defectos de la célula madre o célula progenitora (anemia deseritropoyetica congénita)
• Defectos proliferativos en las células precursoras de eritrocitos (ácido fólico y vitamina
B12) anemia megaloblástica
• Defectos de diferenciación de células precursoras de eritrocitos (déficit de hierro,
protoporfirina IX y globinas) anemia ferropénica y sideroblásticas y talasemias.
¿Cómo diferenciar entre anemias por falta de producción o por exceso de pérdidas?
Mecanismos de compensación
Reticulocitos > 3% EXCESO DE PÉRDIDA.
Reticulocitos < 3% FALTA DE PRODUCCIÓN
Anemias por problemas de síntesis: Hay problemas congénitos que provocan que la
hemoglobina se sintetice de manera inadecuada provocando HEMOGLOBINOPATIA. Un
paciente no tiene problemas en la costa, pero cuando baja la presión parcial de oxígeno provoca
lisis osmótica descompensándose. Problemas en la morfología de los eritrocitos se les dificulta
pasar por el sistema y quedan atrapados en el hígado y bazo y los órganos aumentan de tamaño
(esplenomegalia y hepatomegalia). Las leucemias provocan que el proceso de replicación celular
se altera y hay una reproducción incontrolada y la célula no se madura.
PRUEBAS DE LABORATORIO.
Para hemoglobinopatía y morfología se realiza un TEST PRESIÓN PARCIAL DE O2 O FROTIS
DE SANGRE PERIFERICO
Cuando es leucemia se hace una PUNCION DE MÉDULA, ASPIRACIÓN, BIOPSIA Y
MEDULOGRAMA (hematólogo)
POLICITEMIAS/POLIGLOBULIA
Aumenta de contaje eritrocitario, eritrocitos y hemoglobina. Siempre se debe preguntar si esta
DESHIDRATADO especialmente en edades extrema (niños y adultos mayores).
CAUSAS
• Problemas patológicos (EPO o proliferación monoclonal célula madre - policitemia vera)
• Problemas fisiológicos
El estimulo que gatilla la eritropoyesis es la HIPOXIA cuando se oxigena se libera la
eritropoyetina activando la eritropoyesis aumentando los eritrocitos (retroalimentación negativa).
Si una persona vive en lugares altos (ALTITUD – por encima de los 2000 metros sobre el nivel
del mar) tendrá una POLICITEMIA
FISIOLÓGICA (poliglobulia
fisiológica en personas de Tulcán o
Quito).
Enfermedad como EPOC son
pacientes que viven en HIPOXIA
CRÓNICA, con hematocritos altos.
Formas principales de EPOC:
• BRONQUITIS CRÓNICA, la cual
implica una tos prolongada con moco.
• ENFISEMA, el cual implica un daño
a los pulmones con el tiempo
HEMATOPOYESIS
1- Célula madre
2- Célula progenitora pluripotencial (CFU mixta)
3- Células precursoras
4- Células maduras sanguíneos: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
Factores de crecimiento hematopoyético: eritropoyetina (células peritubulares del riñón),
tropopoyetina o factor steel.
ERITROPOYESIS
1- Célula madre
2- Célula progenitora eritropoyética
3- Proeritroblasto
4- Eritroblasto (basófilo, policromatófilo y acidófilo)
5- Reticulocito
10% DE ERITROPOYESIS INEFICAZ