CÓDIGO:

GA-R-381
Gestión de la Agenda Corporativa

VERSIÓN: 000

Producción masiva de minitubérculos
Protocolo
de ñame espino en vivero

1. OBJETIVO

Producción masiva de minitubérculos a partir de plántulas de ñame espino bajo condiciones de vivero, como
alternativa para la producción de semilla seleccionada (primera generación en campo).

2. RESPONSABLE

Investigador principal.
Profesionales de apoyo a la investigación.
Auxiliares de investigación.
Operarios de campo.

3. ALCANCE

El presente protocolo describe el paso a paso a seguir para la producción masiva de minitubérculos de ñame bajo
condiciones de vivero, para que el productor lo use como material de siembra para la producción de semilla
seleccionada (primera generación en campo). Este protocolo sirve además para asegurar la calidad genética y
fitosanitaria de la semilla y realizar la trazabilidad al material de siembra del ñame.

4. DEFINICIONES

Aclimatación. Proceso a través del cual la repetida exposición de las plantas a cierto tipo de condiciones
ambientales, las va adaptando a condiciones cambiantes del clima.

Esquejes. Fragmentos de tallo obtenidos de una planta a partir de los cuales, bajo condiciones ambientales y
sustrato adecuados, se puede lograr el crecimiento de una nueva planta. Bajo este protocolo, se conservan las
características genéticas de la planta original, de la cual se obtuvo el esqueje.

Dormancia. Periodo de reposo durante el cual una semilla o tubérculo se mantiene viable pero incapaz de iniciar el
proceso de germinación o brotación hasta que no se desarrollen condiciones ambientales adecuadas para su
crecimiento.

Minitubérculos. Tubérculos de tamaño pequeño (1 y 5 gramos y 1 a 3.5 cm de diámetro, aproximadamente),

usualmente producidos bajo condiciones controladas, que poseen las mismas características de los tubérculos de
tamaño grande, con yemas viables, capaces de dar origen a nuevas plántulas.

Planta. Organismo vivo vegetal en estado avanzado de crecimiento y desarrollo, apta para trasplante y que posee
cuatro (4) o más hojas verdaderas.

Plántulas. Organismo vivo vegetal que se encuentra en sus primeros estadios de crecimiento y desarrollo y cuenta
con dos a cuatro (2-4) hojas verdaderas.

Prendimiento. Se refiere a la capacidad que tienen los esqueje o porciones de plantas para ser sembrados en un
sustrato adecuado, desarrollar y formar nuevas plantas. Suele medirse en porcentaje.

Reproducción asexual. Es un sistema de reproducción mediante el cual se obtienen una gran cantidad de plantas a
partir de órganos vegetativos como tubérculos, esquejes, bulbos o estolones.

Siembra. Proceso mediante el cual una semilla, esqueje o porción de una planta se deposita en el suelo o en un
sustrato para propiciar su germinación, crecimiento y desarrollo.

Sustrato. Es todo material sólido ya sea natural, de síntesis o residual, mineral u orgánico, usado como material de
anclaje en la producción y escalamiento de plantas usadas para la siembra.

Tubérculo. Órgano subterráneo de reserva formado por cierto tipo de plantas para la sobrevivencia y multiplicación
de la especie.

5. MATERIALES, EQUIPOS E INFRAESTRUCTURA

En la Tabla 1. Se relacionan los materiales, equipos e infraestructura que se requieren para la producción masiva de
minitubérculos.

Tabla 1. Materiales, equipos e infraestructura

Plántulas in vitro 0307-49SB de la especie D.

Material vegetal
rotundata

Bandejas plásticas de 24 alveolos

Contenedores para las soluciones de

desinfección

Cepillo

Balde

Regadera

Suministros
Cepillo

Polisombra 80%

Polisombra 65%

Cinta de enmascarar

Marcador permanente

Bolsas de Papel Kraft

Pala de mano

Maquinaria, Tijera de jardinería de mango

equipos y
herramientas Riego sistematizado

Sensor de humedad

Infraestructura Vivero

Fuente: elaboración propia.

6. REACTIVOS / INSUMOS

En la Tabla 2. Se relacionan los reactivos e insumos que se requieren para la producción masiva de minitubérculos.

Tabla 2. Reactivos / Insumos

Insumos Unidad

Hipoclorito de sodio 13% mL

Arena kg

Aluvión kg

Lombriabono kg

West Terrasafe® mL
 Dithane™ M-45 g

Ridomil Gol®68 WG g

Nativo75 WG® mL

Oxicloruro de cobre 50PM g

Amistar Top SC® mL

Benomyl® g

Carbendazim® mL

Propiconazole® mL

Hormonagro® mg

Fuente: elaboración propia.

7. PRINCIPIO DEL MÉTODO

La producción de minitubérculos se inicia con la obtención de plantas madre, bajo condiciones in vitro, las cuáles
serán llevadas a vivero para su aclimatación, en donde una vez crecidas y desarrolladas se usarán para la obtención
de esquejes. Los esquejes a su vez se usarán para dar origen a plantas para la producción de minitubérculos.

8. CONSIDERACIONES PREVIAS

La producción in vitro de plantas madre se realiza en un laboratorio certificado por el ICA, en cumplimiento de la
Resolución ICA No. 3168 de 2015.

9. METODOLOGÍA

Para la producción de minitubérculos de ñame se recomienda la utilización del material genético código 0307-49SB
del banco de germoplasma de ñame de AGROSAVIA. En trabajos previos este material presentó una alta capacidad
para la manipulación en laboratorio, y características de adaptación aclimatación y capacidad para la producción de
minitubérculos bajo condición de vivero.

La producción de minitubérculos se realiza en cuatro etapas. En la primera etapa se garantiza la calidad genética y
sanitaria del material, mediante la producción in vitro de plántulas madre. En la segunda etapa se realiza la
aclimatación de las plántulas madre a las condiciones de vivero obteniéndose semilla vegetativa clasificada como
“super-élite”; en la tercera etapa se obtienen los esquejes a partir de las plantas madre, y se siembran en bandejas
plásticas con un sustrato adecuado, obteniendo después de un periodo de crecimiento de 30 días aproximadamente,
las plantas de ñame. En la última o cuarta etapa se obtienen los minitubérculos con destino a la producción de semilla
seleccionada (primera generación en campo).

A continuación, se detallan los procedimientos llevados a cabo en cada una de estas etapas.

Etapa 1. Producción de plantas madre

Condiciones de crecimiento. La producción de plántulas madre se realiza bajo las condiciones del Laboratorio
de Producción Vegetal del Centro Investigación Turipaná-AGROSAVIA, mediante la aplicación del Protocolo GA-O-
13. Este protocolo se encuentra disponible en AGROSAVIA para su utilización en laboratorio y con su aplicación se
obtienen las plantas madre de ñame como la que se observa en la Imagen 1.
 Imagen 1. Plantas madre in vitro del material vegetal 0307-49SB perteneciente a la especie D. rotundata.

Fuente: D. Sánchez, 2019.

Etapa 2. Aclimatación de plantas madre

Condiciones de crecimiento. La aclimatación de las plántulas madre se realiza bajo condiciones de vivero o
casa de malla, en donde las condiciones ambientales son semi-controladas, con una infraestructura que permita
proteger las plantas madre de la luz directa del sol y se mantienen condiciones ambientales adecuadas para el
crecimiento tales como malla antiáfidos, disponibilidad de agua para riego suplementario, sistema de
nebulización automático para controlar la humedad relativa, y sistemas de soporte para regular la luminosidad
con polisombra.
Lavado y desinfección de bandejas. En el exterior de la casa de malla se debe realizar el lavado y
desinfección de las bandejas plásticas que se van a usar para aclimatar las plantas madre. El lavado de las
bandejas se puede hacer usando agua potable, removiendo con un cepillo restos o residuos que hayan quedado
por usos previos de las bandejas. Posteriormente, se desinfectan las bandejas sumergiéndolas por 60 segundos
en una solución de hipoclorito de sodio al 5%. La solución de hipoclorito de sodio al 5% se prepara diluyendo 1.92
L de hipoclorito de sodio comercial al 13% en 3.077 L de agua potable (completando 5 L de solución). Por último,
se retiran las bandejas de la solución y se colocan a secar al sol.

Preparación del sustrato. Igualmente, en el exterior de la casa de malla, se debe preparar el sustrato para la
siembra de las plantas madre en las bandejas. Se recomienda la preparación del sustrato mediante la mezcla
homogénea de tres componentes: aluvión, arena y lombriabono en proporción 60:30:10. Este sustrato debe
prepararse para su uso o llenado inmediato de las bandejas, de lo contrario, si se desea almacenar, se debe
cubrir con un plástico para evitar contaminación.

Llenado de bandejas. El proceso de llenado de las bandejas debe hacerse con una pala de mano o jardinera,
depositado una cantidad suficiente del sustrato en cada uno de los alveolos de las bandejas. Para logar un
llenado completo de los alveolos. Para lograr esto se recomienda dar golpes suaves y sucesivos a la bandeja
plástica para que el sustrato se mueva al interior de los alveolos.

Desinfección del sustrato. La desinfección del sustrato puede hacerse al momento de la preparación y mezcla
homogénea de sus componentes o posteriormente, una vez llenas las bandejas con el sustrato. Se recomienda
realizar esta desinfección asperjando con una bomba de espalda el sustrato o las bandejas llenas con un
producto como West Terrasafe® en dosis de 5.0 mL L-1. Este producto se aplica 12 horas antes de realizar las
siembras de las plantas.

Siembra. Previo a la siembra de las plantas madre, es necesario humedecer con la ayuda de una regadera el
sustrato contenido en las bandejas. Posteriormente, se debe realizar con la ayuda de un espeque o estaca de
madera, un orificio proporcional al tamaño y volumen de las raíces de las plantas madre que provienen del
laboratorio (Imagen 1). Las plantas madre se retiran de los recipientes de cultivo de tejidos, procurando no
dañar el sistema radicular que se encuentre formado. Se deben retirar cuidadosamente los residuos del medio de
cultivo Murashige y Skoog (MS)®, que se encuentren adheridos a las raíces. Inmediatamente después se
introducen las raíces de las plántulas en el orificio abierto y se cubren presionando con las manos el sustrato
contenido en las bandejas. Esto asegura un buen anclaje y contacto de las raíces de las plantas madre con el
sustrato. Las bandejas se rotulan indicando el número de serie de las plantas madre y la fecha de siembra, con
el fin de mantener una estricta trazabilidad de las plantas madre que van a dar origen más adelante a los
minitubérculos (Imagen 2).
Imagen 2. Plántulas madre sembradas en las bandejas con sustrato. El material vegetal corresponde a 0307-49SB de
la especie D. rotundata.

Fuente: D. Sánchez, 2019.

Sombreamiento. Para obtener un óptimo prendimiento y aclimatación de las plantas madre durante el proceso
es necesario regular estrictamente el nivel de luz, la temperatura y humedad relativa durante su desarrollo. Es
muy importante iniciar el proceso de aclimatación con un alto nivel de sombreamiento, pues las plantas madre
provienen de condiciones artificiales de crecimiento en laboratorio y son muy susceptibles a la desecación. El
proceso de aclimatación se realiza así:

Primeras tres (3) semanas: se inicia con una condición de luminosidad del 20% (Polisombra del 80%), una
temperatura de 28-34 °C y 80-95% de humedad relativa. La humedad relativa dentro del vivero se puede
mantener operando el sistema de nebulización con agua para que encienda por espacio de 3 a 12 segundos,
cada 3 a 12 minutos.
Cuarta semana: se retira o cambia la polisombra y se mantienen las plantas de allí en adelante, a una
luminosidad del 35% (Polisombra 65%), una temperatura de 28°C, y humedad relativa de 76%.

Riegos. Posterior a la cuarta semana de crecimiento, se deben realizar riegos manuales o automatizados, a
mañana y tarde, con frecuencia diaria.

Fertilización. Después del trasplante, se deben realizar aplicaciones cada ocho días del fertilizante foliar
Cerostress® (2 mL L-1), hasta los 90 ddt. Posteriormente, para el mantenimiento de las plantas madre, una vez al
mes, se debe realizar fertilización foliar con Cerostress® (Imagen 3).

Imagen 3. Fertilización foliar de las plantas madre en la casa de malla. En la imagen se muestran plantas madre del
material vegetal 0307-49SB especie D. rotundata.

Fuente: A. Díaz, 2019.

Manejo sanitario. Durante el proceso de aclimatación de las plantas madre se deben realizar aplicaciones
preventivas de fungicidas como Dithane™ M-45 (2.0 g L-1), Ridomil Gold® 68 WG (1.0 g L-1), Nativo 75WG® (1.0
mL L-1) y Oxicloruro de cobre 50PM (4.0 g L-1), cada ocho (8) días, durante los 30 días posteriores al trasplante.
Los anteriores productos deben rotarse, con el fin de no generar resistencia de los patógenos a los fungicidas.

Prendimiento. El porcentaje de prendimiento de las plántulas madre de ñame durante la aclimatación, bajo
condiciones de vivero es normalmente del 90% (Imagen 4).
 Imagen 4. Prendimiento de plántulas madre in vitro, material vegetal 0307-49SB especie D. rotundata.

Fuente: D. Sánchez, 2019.

Etapa 3. Obtención de esquejes y siembra

Condiciones de crecimiento. El corte y siembra de esquejes se realiza bajo condiciones de vivero o casa de
malla.

Corte de esquejes. El corte de esquejes se puede realizar a partir de la sexta o séptima semana de crecimiento
de las plantas madre con la ayuda de una tijera de jardinería. Se deben obtener esquejes apicales de 7-10 cm de
longitud, que tengan al menos dos nudos bien desarrollados y con presencia de al menos un foliolo u hoja
(Imagen 5).

Imagen 5. Corte de esquejes de plantas madre del material vegetal 0307-49SB especie D. rotundata.

Fuente: Fuente: A. Díaz, 2019.

Siembra de esquejes. A los esquejes obtenidos se les aplica en su parte distal un producto que favorezca el
enraizamiento. Comercialmente, se recomienda el Hormonagro®, introduciendo la parte distal del esqueje en el
producto puro. Una vez realizado esto, se siembran los esquejes en bandejas de germinación de 40 alveolos,
previamente llenas con un sustrato conformado por una mezcla de aluvión, arena y lombriabono en proporción
85:10:5. Para la siembra de los esquejes, previamente se ha desinfectado y humedecido el sustrato con el
producto West Terrasafe® (5.0 mL L-1). Las bandejas sembradas con los esquejes se rotulan con un marcador
permanente, indicando el número de la planta madre que dio origen a los esquejes y la fecha de siembra
(Imagen 6).
 Imagen 6. Siembra de esquejes de plantas madre del material vegetal 0307-49SB.

Fuente: A. Díaz, 2019.

No. De cortes de esquejes: Se recomienda la realización de máximo tres (3) cortes de esquejes de las plantas
madre debido a que los cortes sucesivos generan un lignificado en el tejido del tallo principal, lo que dificulta
obtener esquejes de buena calidad. Se debe llevar un registro de los cortes realizados a cada planta madre.
Además, la obtención de esquejes de plantas madre muy viejas, puede retrasar posteriormente el proceso de
tuberización.

Sombreamiento. El nivel de sombreamiento recomendado para el crecimiento de los esquejes es del 65%,
manteniendo una temperatura de 28 °C y humedad relativa del 76% por espacio de 7,1 meses (213 días).

Riego. Una vez sembrados los esquejes apicales es necesario mantener adecuadas condiciones de humedad
para su prendimiento, realizando durante los primeros 8 días, riegos diarios dirigidos con intensidad de tres (3)
veces al día. Posteriormente, se mantienen los riegos diarios, pero se disminuye la intensidad a una sola vez por
día (preferiblemente en la mañana).

Prendimiento. El prendimiento de los esquejes apicales bajo condiciones de vivero es normalmente del 70%.

Etapa 4. Producción de los minitubérculos

Crecimiento de esquejes. Las plantas resultantes se dejan crecer durante 213 días (7,1 meses), manteniendo
el sombreamiento del 65% durante todo el periodo de crecimiento y las condiciones de humedad, mediante
riegos diarios.
Fertilización. Se recomienda realizar una vez al mes fertilizaciones foliares con el producto Cerostress® en
dosis de 2 mL L-1.

Manejo sanitario. Se debe mantener un manejo estricto sanitario debido a que el follaje desarrollado por las
plantas es débil y sensible al ataque de plagas y enfermedades. Para lo anterior se recomienda realizar las
aplicaciones de los productos comerciales con bomba de espalda como los fungicidas Amistar Top SC® (3.0 mL
L-1), Benomyl® (3.0 g L-1) y Nativo 75 WG® (0.3 mL L-1) asperjados con una periodicidad quincenal y aplicados
desde los 31 hasta los 180 dds. Posteriormente, hasta los 190 dds se realiza aplicaciones quincenales de
Carbendazim® (1.0 mL L-1) y Propiconazole® (2.0 mL L-1).

Producción de minitubérculos. Bajo estas condiciones de crecimiento las plantas inician un proceso de
senescencia a partir de los 213 días, observándose signos visibles de amarillamiento del follaje y secamiento de
hojas y tallos, proceso que indica la maduración de los minitubérculos. En este estado se suspenden los riegos, lo
que acelera la senescencia y secamiento del follaje de las plantas.

Cosecha. Los minitubérculos formados presentan una cutícula fuerte y rugosa, cumpliendo la función de reducir
la perdida de humedad. Los minitubérculos se obtienen arrancando completamente las plantas de las bandejas y
desprendiendo manualmente los minitubérculos de las raíces. Los minitubérculos formados presentan tamaños y
pesos variables, fluctuando entre 1 a 5 gramos cada uno. Normalmente se obtienen entre uno (1) y dos (2)
minitubérculos por cada planta (Imagen 7).

 Imagen 7. Minitubérculos a partir esquejes de plantas madre, material vegetal 0307-49SB.

Fuente: D. Sanchez, 2020.

Empaque. Los minitubérculos cosechados se dejan secar a la sombra por espacio de 1-2 días y posteriormente
se empacan en bolsas de papel Kraft y se almacenan por un mes a temperatura ambiente 28±2°C y humedad
relativa 50%, preferiblemente en la oscuridad.
Dormancia. Los minitubérculos formados presentan una dormancia aproximada de 1,0 a 1,5 meses.
Posteriormente, los minitubérculos estarán aptos y listos para la producción de semilla seleccionada (primera
generación en campo). El rompimiento de la dormancia a simple vista se observa por la formación de cayos o
pequeñas yemas en la superficie del minitubérculo.

10. DESCRIPCIÓN

La Tabla 3 se presenta los diferentes procesos para la producción de minitubérculos a partir de plantas madre
(descritos en la metodología) a través de un diagrama de flujo.

Tabla 3. Diagrama de flujo de los procesos operacionales en la producción de minitubérculos a partir de plantas
madre y esquejes.

Fuente: elaboración propia.

11. RIESGOS

Bajo prendimientos de plántulas.

Presencia de plagas y enfermedades en las plántulas.
Bajo porcentaje de prendimiento de esquejes.
Falla en condiciones para la producción de plántulas (temperatura y humedad relativa requerida).
Falla en las condiciones de almacenamiento de los minitubérculos (temperatura y humedad relativa requerida).

12. DISPOSICIONES GENERALES EN SEGURIDAD Y SALUD EN EL TRABAJO

Para el desarrollo de las etapas puntualizadas en el presente protocolo, se requiere la utilización de elementos de
protección personal como overol, guantes de carnaza, tapabocas y gafas de seguridad, además, se seguirán las
disposiciones que desde la Coordinación de Seguridad y Salud en el Trabajo determine para el riesgo específico
asociado a cada actividad.
13. BIBLIOGRAFÍA Y/O REFERENCIAS

Abad, M., Noguera, P., & Carrión, C. (2004). Los sustratos en los cultivos sin suelo. Tratado de cultivo sin suelo, 3,
113-158.
Colombo, A. (2019). La reproducción por esquejes. Parkstone International.
Frank, S., Salisbury, F. B., Ross, C. W., & Ross, C. W. (1992). Plant physiology. Ancestry Publishing.
ICONTEC (Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación). 2001. NTC 1269. Ñame. COL.
ICA, 2015. Resolución 3168. Producción, acondicionamiento, importación, exportación, almacenamiento,
comercialización y uso de semillas para siembra en el país.

14. CONTROL DE CAMBIOS

DESCRIPCIÓN
VERSIÓN REALIZADO POR
DEL CAMBIO

Diana Beatriz Sánchez López

Investigador Máster Asociado

Jorge Cadena Torres

2022-11-01. Investigador PhD. Senior

0 Elaboración Amaury Aroldo Espitia Montes
del documento
Investigador Máster

Abelardo Tulio Díaz Cabadiaz

Profesional de Apoyo a la
Investigación

Revisó: Aprobó:

JORGE CADENA TORRES SERGIO LUIS MEJIA KERGUELEN

Investigador PhD Asociado Investigador PhD