DILUCION SERIADA

Que son:

• Solución: Mezcla homogénea de dos o mas

sustancias
Componentes:
Soluto: Sustancia que se disuelve
Solvente: Matriz en la que se disuelve
el soluto
• Dilución: Es el acto de volver mas débil una
solución, a partir de una solución concentrada
para que quede a una menor concentración
 •¿Como se expresan?

Una parte de una solución original con respecto a

las partes totales del volumen final
1:10 (una parte del soluto + 9 partes del solvente)

5% (v/v) [5 ml del soluto + 95 ml del solvente]

5% (w/v) [5 gr del soluto + 95 ml del solvente]

 Tipos de diluciones
• Seriadas
• No seriadas
• Independientes
• Químicas

• Diluciones seriadas: Sucesión de diluciones con

incrementos progresivos y regulares, en los cuales el
factor de dilución siempre es igual.
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128….
1:10 1:100 1:1000 1:10000……..
10-1 10-2 10-3 10-4………
 2.2.Métodos indirectos • Recuento de viables en placa

Método de extensión. La
muestra se siembra sobre la
superficie del medio sólido

Método de vertido El medio

sólido en sobrefusión se
añade a la muestra

Diluir y anotar la dilución

Sembrar sobre la placa (0.1ml)
Muestra:
Incubar
1 célula = 1 colonia ~ 106 células Placa Petri medio sólido
 Útil para la técnica de

vertido en placa o extensión

en placa.

 Se siembran volúmenes

conocidos de cada dilución

 Luego se incuba a 35 – 37 0C

durante 24 – 48 horas.
 Muestra
(E. coli)

Para el recuento hay que tener

en cuenta la dilución y le
volumen de muestra sembrado
Recuento de viables en placa

Cuentacolonias tradicional

Cuentacolonias automático
 Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento.

 Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan

entre 30 y 300 colonias.

 Este número de colonias es estadísticamente representativo.

 Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como

“INCONTABLES”.
 Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.
 Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes.

 Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con

carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja.

 Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio.

 Finalmente el promedio se multiplica por 65

No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65

 CA = 32
 CM = 19
 CB = 10
 Sumatoria
Σ = 61
 Promedio
61/3 = 20.33
 Factor
= 20.33*65
= 1322
 Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la
siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.

UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución *

ml de la muestra sembrada

*Factor de dilución: inversa de la dilución.

 EJEMPLO 1  EJEMPLO 2

No. de colonias: 280 No. de colonias: 56

Dilución: 10 -3 Dilución: 10 -4

Volumen de siembra: 1 ml Volumen de siembra: 0.2 ml

UFC/ ml = 280 X 1000 /1 UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2

UFC/ ml= 280.000 UFC/ ml= 2 800.000

 Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros

se garantiza los resultados obtenidos.

 Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las

pruebas.

 Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula:

UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B