DILUCION SERIADA
Que son:
• Solución: Mezcla homogénea de dos o mas
sustancias
Componentes:
Soluto: Sustancia que se disuelve
Solvente: Matriz en la que se disuelve
el soluto
• Dilución: Es el acto de volver mas débil una
solución, a partir de una solución concentrada
para que quede a una menor concentración
•¿Como se expresan?
Una parte de una solución original con respecto a
las partes totales del volumen final
1:10 (una parte del soluto + 9 partes del solvente)
5% (v/v) [5 ml del soluto + 95 ml del solvente]
5% (w/v) [5 gr del soluto + 95 ml del solvente]
Tipos de diluciones
• Seriadas
• No seriadas
• Independientes
• Químicas
• Diluciones seriadas: Sucesión de diluciones con
incrementos progresivos y regulares, en los cuales el
factor de dilución siempre es igual.
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128….
1:10 1:100 1:1000 1:10000……..
10-1 10-2 10-3 10-4………
2.2.Métodos indirectos • Recuento de viables en placa
Método de extensión. La
muestra se siembra sobre la
superficie del medio sólido
Método de vertido El medio
sólido en sobrefusión se
añade a la muestra
Diluir y anotar la dilución
Sembrar sobre la placa (0.1ml)
Muestra:
Incubar
1 célula = 1 colonia ~ 106 células Placa Petri medio sólido
Útil para la técnica de
vertido en placa o extensión
en placa.
Se siembran volúmenes
conocidos de cada dilución
Luego se incuba a 35 – 37 0C
durante 24 – 48 horas.
Muestra
(E. coli)
Para el recuento hay que tener
en cuenta la dilución y le
volumen de muestra sembrado
Recuento de viables en placa
Cuentacolonias tradicional
Cuentacolonias automático
Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento.
Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan
entre 30 y 300 colonias.
Este número de colonias es estadísticamente representativo.
Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como
“INCONTABLES”.
Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.
Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes.
Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con
carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja.
Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio.
Finalmente el promedio se multiplica por 65
No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65
CA = 32
CM = 19
CB = 10
Sumatoria
Σ = 61
Promedio
61/3 = 20.33
Factor
= 20.33*65
= 1322
Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la
siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.
UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución *
ml de la muestra sembrada
*Factor de dilución: inversa de la dilución.
EJEMPLO 1 EJEMPLO 2
No. de colonias: 280 No. de colonias: 56
Dilución: 10 -3 Dilución: 10 -4
Volumen de siembra: 1 ml Volumen de siembra: 0.2 ml
UFC/ ml = 280 X 1000 /1 UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2
UFC/ ml= 280.000 UFC/ ml= 2 800.000
Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros
se garantiza los resultados obtenidos.
Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las
pruebas.
Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula:
UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B
