Métodos Oficiales y Nuevas

Estrategias en el Análisis de
Esteroles.
Ventajas e Inconvenientes

Wenceslao Moreda
Instituto de la Grasa (CSIC)
 El Fraude por Mezclas de Aceites
• Circunstancias que lo hacen posible:
• Facilidad de mezcla.
• Económicas.
• Geográficas (producciones en diversas regiones o países)
• Escaso control administrativo.
• Normas analíticas:
• Numerosas y complejas.
• Falta de métodos analíticos.
• Tolerancia y niveles de detección de los métodos analíticos.
• Falta de parámetros analíticos y/o límites oficiales.
• Variabilidad de las composiciones de los aceites de oliva
para algunos parámetros.
 Tipos de Fraudes
• Con un gran porcentaje de mezcla:
• Aprovechando el escaso control.
• Falta de métodos analíticos.
• Con un pequeño porcentaje de mezcla:
• Aprovechando la variabilidad que presentan los
aceites.
• Aprovechando los niveles de detección de los
métodos.
• Aprovechando el intervalo entre el valor real de un
parámetro y entre el valor límite.
 Composición de Aceites y Grasas
Volátiles Ácidos Grasos
Libres
FAMEs

Ceras
Tocoferoles
Triacilgliceroles
Diacilgliceroles
Polifenoles
Aceite de Monoacilgliceroles
Oliva
Metales (Cu, Fe) TAG Oxidados
Polímeros

Residuos y Insaponificable Hidrocarburos

Contaminantes Alcoholes Isoprenoides
Alcoholes Triterpénicos
Alcanoles
Metilesteroles
Pigmentos
Esteroles
(Clorofilas y Dialcoholes Triterpénicos
Carotenoides) Aldehídos
Ácidos Triterpénicos
 Parámetros de Pureza de AO
• Parámetros oficiales:
• Ceras (detección ASC y AO).
• Esteres etílicos de ácidos grasos (sólo para AOVE).
• Composición esterólica (detección de AV).
• Eritrodiol + uvaol (detección de AOO).
• Isómeros t-ácidos grasos (detección AE y AH).
• Estigmastadienos (detección AR).
• Triglicéridos de ECN42.
• Alcoholes grasos (sólo para distinguir AOL de AOC).
• Monopalmitato de 2-glicerilo (detección AE y GA).
 Utilidad de la Composición Esterólica
• En AV, β-Sitosterol, campesterol y estigmasterol son los
mayoritarios.
• En grasas y aceites animales el esterol mayoritario es el
colesterol.
• La composición de los esteroles varía durante el desarrollo o
germinación del fruto o semilla y depende del origen botánico.
• La refinación afecta a su composición, esteroles más pesados
y el eritrodiol y uvaol.
• Los esteroles son biomarcadores para verificar de la identidad
de una grasa o aceite y detectar mezclas.
• Se determinan los esteroles totales (suma de libres y
esterificados).
• El estigmasterol y Δ5-avenasterol son indicadores de la
maduración de los frutos, aumentan con la maduración.
 Detección de Mezclas en AO y AOO
Adulterante Método Analítico

Grasas con esteroles característicos

Composición de esteroles
(cártamo, colza, girasol, grasa animal, maíz,
(1 - 2%)
pescado, sésamo, soja y té)
Aceite de semillas mutadas o
Composición de esteroles
transgénicas (girasol, cártamo y maíz alto
(1 - 2%)
oleico)
Isómeros trans ácidos grasos (15%)
Aceites desesterolizados (girasol, cártamo no oficiales: Esterenos (1 - 3%) y
y maíz alto oleico) Δ8(14)-estigmastenol (2%)
Método Global (1 - 5%)
Eritrodiol (1 - 10%)
Aceite de orujo de oliva Ceras (0 - 10%)
Alcoholes alifáticos (1 - 10%)
ΔECN42 (20 - 25%)
Aceite de avellana Composición ceras esterólicas
Método Global (2 - 12%)
 Composición Esterólica de AV
Total
Oil Cholesterol Brassicasterol Campesterol Stigmasterol β-Sitosterol Δ5-Avenasterol Δ7-Stigmastenol
mg/kg

Almond tr-1.0 tr-0.4 1.8-4.0 tr-3.1 68-87 6.7-22 tr-5.6 1550-7797

Avocado pulp 0-0.2 2 6-8 0-2 89-92 3 - 3500-5600

Babasú 1.2-1.7 0-0.3 18-19 8-9 48-54 17-20 0.4-1.0 570-776

Coconut 0.6-3 0-0.9 3.1-11.2 5.4-15.6 19.7-50.7 13-40.7 0-3 470-1140

Corn 0.2-0.6 0-0.2 18.6-24.1 4.3-7.7 54.8-66.6 4.2-8.2 1-4.2 5870-22150

Cottonseed 0.7-2.3 0.1-0.9 6.4-14.5 2.1-6.8 76-87.1 1.8-7.3 0-1.4 2690-6430

Grapeseed tr-3 tr-0.2 7-15 7-17 43-76 1-5 tr-10 277-5830

Hazelnut tr-1 - 5-6 1 82-93 2-8 tr-3 1200-2000

Linseed 0-0.9 0.1-0.7 25-31 6-9 45-53 8-12 0-3 2330

Mustard seed tr 6-11 33-36 tr 52-58 tr-2 - 446-663

Olive oil 0-0.5 0-0.1 0-4.0 0-4.0 75-80 4-14 0-0.5 747-3057

Olive pomace 0.1-0.5 0-0.1 2.7-4.0 1.1-3.4 79.4-86.6 4-10.4 0.2-0.5 3158-4995

Palm Kernel 0.6-3.7 0-0.8 8.4-12.7 12-16.6 62.6-73.1 1.4-9 0-2.1 790-1400

Palm oil 2.6-7 tr-2 19-28 10-15 50-64 tr-5 tr-12 376-4000

Peanut tr-3.8 tr-1 10-20 5.4-13.2 47-76 tr-19 tr-5 901-2854

Rapeseed 0.5-1.3 5-16 18-39 tr-3 45-63 tr-7 tr-1 881-11276

Ricebran tr-2 - 16-28 8-18 49-62 2-11 1-5 10550

Safflower tr-1.1 tr-0.2 8-17 tr-15 40-58 tr-8 10-28 2095-4940

Sesame tr-1 tr-1 8-28 1-11 40-75 5-15 1.5-8 4500-29500

Soybean tr-1.4 tr-0.3 16-34 10-28 35-72 1-4 1-5.2 1840-4120

Sunflower tr-1 tr-1 6-13 7-12 50-77 tr-8 7-24 2098-4550

Walnut tr-1 tr-0.2 4-7 tr-4 81-91 4-8 tr-0.3 1760

Wheat germ tr-0.4 tr-0.4 18-29 0.3-4 51-67 2-7 1-4 5500
 Detección de Grasas y Aceites con
Esteroles Característicos
Esterol Grasa o aceite de En aceite de Nivel detección

Colesterol Grasas animales y En aceites vegetales 1%

pescado (excepto palma, palmiste,
cacao y coco)

Brasicasterol Colza, mostaza, canola En los restantes aceites y 1%

grasas

Campesterol Lino, maíz, palma, colza, En avellana, aguacate, coco, 2 - 5%

sésamo, soja, germen almendra, karité, oliva y té
trigo, pepita de uva,
cacahuete babasú,
canola, arroz
Estigmasterol Cacao, soja, pepita de En algodón, avellana, No legislado
uva, salvado de arroz aguacate, almendra, té,
germen de trigo, oliva

Δ7-Estigmastenol Cártamo, karité, girasol, En los restantes aceites y 0,5 -2%

té grasas

Eritrodiol Pepita de uva y oliva En los restantes aceites y

grasas

b-sitosterol Oliva, almendra, En los restantes aceites y 3 - 6%

aparente (1) avellana, aguacate grasas

(1) b-sitosterol aparente = D5,23-estigmastadieno+clerosterol+b-sitosterol+sitostanol+D5-avenasterol+D5,24-estimastadienol.

 Detección de Aceites o Grasas con
Esteroles Característicos
• Esteroles totales (mg/kg),composición esterólica (%) y
eritrodiol + uvaol (%):
• Oficial solo para aceites de oliva.
• Colesterol ≤ 0,5%.
• Brasicasterol ≤ 0,1%, AOC, AOR y AO ≤ 0,2%.
• Campesterol ≤ 4,0%.
• Estigmasterol < Campesterol.
• b-Sitosterol aparente ≥ 93%.
• D7-Estigmastenol ≤ 0,5%.
• Esteroles totales ≥ 1000 mg/kg, AOC ≥ 2000 mg/kg,
AOR ≥ 1800 mg/kg y AO ≥ 1600 mg/kg.
• Eritrodiol+Uvaol ≤ 4,5%, AOC, AOR y AO > 4,5%.
 Metodología Oficial de determinación de
Esteroles
• Método:
• Obtención del
1 Hidrocarburos
insaponificable.
• Fraccionamiento por 2 α-Tocoferol
TLC de gel de sílice.
• Raspado de la banda de 3 Prenoles

esteroles+eritrodiol+uva 4 Alcoholes triterpénicos

5 Alcoholes alifáticos
ol. 6 Metilesteroles

• Obtención de los 7 Esteroles

8 Dialcoholes triterpénicos
derivados silanizados.
• Análisis por CG en
columna capilar con
fase apolar (5%-
Placa TLC del insaponificable de un aceite de orujo eluída dos veces con
fenilmetilsilicona). hexano:éter etílico (65:35), revelada en caliente con SO H (50%).
4 2
Cromatograma Gases Esteroles AOR

(1) Colesterol;
(2) α-Colestanol (I.S.);
(3) 24-Metilencolesterol;
(4) Campesterol;
(5) Campestanol;
(6) Estigmasterol;
(7) Δ5,23-Estigmastadienol;
(8) Clerosterol;
(9) β-Sitosterol;
(10) Sitostanol;
(11) Δ5-Avenasterol;
(12) Δ5,24-Estigmastadienol;
(13) Δ7-Estigmastenol;
(14) Δ7-Avenasterol;
(15) Eritrodiol;
(16) Uvaol.
 Alcoholes Grasos en Aceites de Oliva
• Detección de aceite de orujo en aceite de oliva
lampante cuando el contenido en ceras está entre
300 y 350 mg/kg:
• Se determina la suma de C22, C24, C26 y C28.
• Método:
• La preparación y análisis de la muestra es la misma que en
el análisis de esteroles.
Cromatograma GC de Alcoholes

(1) Fitol;
(2) Geranilgeraniol;
(3) C21-ol (I.S.);
(4) C22-ol;
(5) C23-ol;
(6) C24-ol;
(7) C25-ol;
(8) C26-ol;
(9) C27-ol;
(10) C28-ol;
(11) Dammaradienol;
(12) Taraxterol;
(13) b-Amirina;
(14) Butiroespermol;
(15) Cicloartenol;
(16) 24-Metilencicloartanol.
 Variedades Fuera de Norma
Zona Productora (Variedad) Parámetro

Huelva (Verdial)
Málaga (Verdial) Eritrodiol + Uvaol > 4,5%
Portugal (Varias)
Castilla-La Mancha (Cornicabra)
Castellón, Tarragona, Alicante, Valencia
Campesterol > 4%
(varias)
Argentina (Varias)
Zaragoza, Teruel, Baleares (Empeltre)
Grecia (Egeo), Francia (Varias)
Ac. Linolenico > 1%
Australia (Barnea)
Argentina (Varias)
Italia (Varias)
β-Sitosterol < 93%
Argentina (Varias)

Jaén (picual) Ac. Oleico > 83% y Ac. Linoleico < 3,5 %

Siria (varias) Δ7-estigmastenol > 0,5 %

Argentina (Arbequina) Ac. Palmítico > 20% y Ac. Linoleico > 21%
Problemas en el Análisis de Esteroles
 Ventajas e Inconvenientes
• Método estandarizado.
• No requiere equipos sofisticados.
• Método largo y con gasto de material y disolventes
elevado.
• Hay que tener cuidado en la derivatización.
• La identificación de picos necesita ser cuidadosa.
• Los valores de precisión para ciertos esteroles son
elevados.
• El COI tiene un método para esteroles y otro para
alcoholes alifáticos.
 Y Ahora Que?

• La industria requiere métodos más rápidos.

• La acreditación de los laboratorios requiere
métodos con campos de aplicación más amplios.
• El COI está estudiando la fusión de los métodos
existentes y su mejora.
 Proyectos del COI

• Preparación de árboles decisionales para aceites con

composiciones superiores al límite.
• Contenido de E+U en aceites refinados y contenido
en ciertas variedades.
• Unificación de los métodos de alcoholes y esteroles.
• Incluir la separación de la fracción del insaponificable
mediante HPLC.
Determinación de E+U en Valor Absoluto
• En aceites con valores cercanos al límite (%).
• Durante la refinación se pierden esteroles.
• Valores de E+U sobrepasan el límite.
• Se propone determinar E+U en valor absoluto
(mg/kg).
• Se ha realizado un colaborativo.
• Los valores de precisión son buenos.
• Habrá que determinar los valores límite entre
categorías.
 Determinación de Compuestos
Alcohólicos por GC
• Se unificarán los métodos existentes en uno.
• Se añadirá también la separación de la fracción del
insaponificable por HPLC.
DETERMINATION OF THE COMPOSITION AND CONTENT OF ALCOHOLIC COMPOUNDS BY CAPILLARY COLUMN GAS
CHROMATOGRAPHY

1. SCOPE
The method describes a procedure for determining the individual and total alcoholic compounds content of olive oils and olive
pomace oils as well as of blends of these two oils.
The alcoholic compounds in olive and olive pomace oils comprise aliphatic and triterpenic alcohols, sterols and triterpenic
dialcohols.

2. PRINCIPLE
The oils, with added a-cholestanol as an internal standard, are saponified with potassium hydroxide in ethanolic solution and
the unsaponifiable matter is then extracted with ethyl ether.
The different alcoholic compounds fractions are separated from the unsaponifiable matter either by thin-layer chromatography
on a basic silica gel plate or by HPLC with a silica gel column. The fraction recovered from the silica gel separation is
transformed into trimethylsilyl ethers and then analysed by capillary column gas chromatography.
Aislamiento de la Fracción del
Insaponificable por HPLC
 Método
• Equipo:
• Bomba HPLC.
• Inyector con 200 µl loop.
• Desgasificador en línea.
• Detector UV-VIS o IR. .

• Condiciones:
• Fase móvil: n-hexano:eter dietílico (50:50).
• Flujo: 0.8 ml/min.
• Longitud de onda UV: 210 nm.

• Procedimiento:
• Insaponificable de la extracción L-L se disuelve en 3 ml
de la fase móvil.
• Filtrar la solución a través de un filtro de nailon.
• Inyectar 200 µl de la solución filtrada en el HPLC.
Separación de la Fracción

IR

Alcoholes UV

Esteroles + E +U
 Valores de Precisión
Diferencias entre los métodos(%)
Esterol TLC HPLC
b-Sitosterol -1.01 -0.43
D7-stigmastenol +0.34 +0.13

Valores de precisión de los métodos

RSDr (%) RSDR (%)
Esterol
TLC HPLC TLC HPLC
Colesterol 13,5 13,2 27,2 25,2
Campesterol 2,9 2,3 2,6 2,2
Estigmasterol 4,1 4,0 6,3 5,9
b-Sitosterol
0,2 0,2 0,8 0,5
aparente
D7-Estigmastenol 5,2 4,8 11,9 10,2
Totales 2,0 2,0 6,8 6,5
E+U 6,7 6,0 14,7 11,8
 Ventajas e Inconvenientes
• Mismos valores de precisión.
• Se ahorra tiempo.
• Mayor número de muestras que se pueden analizar,
contando con un inyector automático.
• Se pueden separar la fracción de alcoholes y
esteroles.
• Las empresas lo usan con asiduidad.
• Necesita equipamiento específico, HPLC y colector
de fracciones.
Determinación de Glucósidos de
Esteroles en AO
 Presencia de Glucósidos de
Esteroles en AO
• Esteroles se encuentran libres o esterificados.
• El 3β-hidroxil puede esterificarse con ácido graso o estar
glicosilado con hexosa, glucosa (SG) o 6-AG acil hexosa
(ESG).
• Excepto para el AO, donde la determinación de esteroles
esta regulada, no hay métodos oficiales para determinar
esteroles en alimentos grasos, ni para poder
diferenciarlos.
• Los métodos existentes, no tienen en cuenta los SG/ESG,
o no los determinan porque se hidrolizan.
• No existían métodos para determinar estos compuestos
en AO.
Aislamiento de la Fracción de SG/ESG

Si

SPE standard procedure

 Determinación de SG/ESG
(1) Spiked refined pomace oil

GC-FID chromatograms for

free and esterified steryl
glucosides: I.S. (internal
standard) cholesteryl
glucoside, 1. campesteryl
glucoside, 2. stigmasteryl
! glucoside, 3. β-sitosteryl
glucoside, and 4. (tentative)
Δ5-avenasteryl glucoside;
(2)
peaks 5. to 8. correspond to
Extra virgin olive oil the esterified counterparts.

!
 Contenido de SG/ESG en AO
Oil SG, mg/Kg 3SD ESG, mg/Kg 3SD ESG:SG
EVOO cv arbequina 2.15 0.02 9.20 0.36 4.28
EVOO cv hojiblanca 1.88 0.01 3.79 0.01 2.02

EVOO cv picual 1.97 0.01 2.78 0.01 1.41

EVOO cv cornicabra 2.95 0.14 2.67 0.19 0.91

EVOO cv arauco 1.68 0.08 4.90 0.33 2.92
EVOO cv coratina 1.73 0.04 2.54 0.04 1.47
EVOO cv karolla 2.14 0.10 3.14 0.06 1.47
EVOO cv uovo di pichone 1.96 0.04 11.29 2.75 5.76
EVOO cv frantoio 1.47 0.01 4.32 0.07 2.94
EVOO cv blanqueta 1.34 0.01 9.63 0.71 7.19
EVOO cv verdial 1.05 0.01 4.34 0.13 4.13
VOO (blend 1) 2.60 0.03 4.17 0.30 1.60
VOO (blend 2) 2.37 0.04 3.09 0.01 1.30
LOO (brine) 3.66 0.06 1.61 0.19 0.44
LOO (rancid) 2.08 0.03 2.36 0.05 1.13

LOO (burnt) 1.95 0.01 1.19 0.05 0.61

LOO (muddy sediment) 1.52 0.04 2.05 0.02 1.35

LOO (winey) 2.76 0.02 5.40 0.01 1.96

 Nuevas Estrategias

• Los LOQ y LOD de los métodos actuales no permiten

detectar ciertas adiciones.
• No se utilizan los metil, ni dimetilesteroles.
• Disponemos de equipos muy sensibles.
• Determinación de esteroles en otras matrices.

LIPIDÓMICA
 Distribución de Desmetilesteroles

Eestigmastenol
Δ5-Avenasterol

Δ7-Avenasterol
Bbrasicasterol

Estigmasterol
Campesterol

b-Sitosterol
Ccolesterol
Esteroles
GRASA o ACEITE

Δ7-
Otros totales
(mg/kg)

Aguacate (pulpa) 0-2 0-2 5-12 0-10 60-92 2-10 0.3 0-0,3 3500-5600
Almendra 0-1,0 0-0,4 1,8-4,0 0-3,1 68-87 6,7-22 0-5,6 0,3-4,0 Δ5,24-estigmastadienol (0-8,8) 1550-7797
Anacardo 0-1 nd 6-9 0-3 75-88 6-10 0-0,3 0-0,4 1840-1924
Argán nd nd 0,1-0,4 nd nd nd 42-48 0,3-6,5 espinasterol (34-44) 1300-2160
Δ8,22-estigmastadienol (1-8,5)
Arroz (salvado) 0-0,5 nd 23-32 9-17 55-67 0-4 0-2 0-2 10550-
25000
Avellana 0-1 nd 5-6 1-3,4 80,8-93 2-8 0-3 0-3 1200-2000
Bellota 1.1-1,7 0-0,4 2.3-10 2-11,5 75,9-89 0,9-4,2 0-0,4 0 8500-11500
Borraja 0-2,4 0-0,5 25-49 0-2,5 20-42 15-28 3,9-15,6 0,5-1 24-metilencolesterol (0-20) 491-793
Cacahuete (aceite) 0-3,8 0-0,2 12,0-19,8 5,4-13,2 47,4-70 5,0-18,8 0-5,1 0-5,5 900-2900
Calabaza (semilla) 0-1 nd 10-20 5-13 0-5 nd 4 10-14 espinasterol (21-27) 3650
Δ7-campesterol (3,0)
Δ7,22,25-estigmasta0ienol (29)
Δ7,25-estigmastadienol (20-22)
Cártamo 0-0,7 0-0,4 9,2-13,3 4,5-9,6 40,2-50,6 0.8-4,8 13,7-24,6 2,.2-6,3 Δ7-campesterol (0-5,0) 2100-4600
Coco (aceite) 0-0,3 0-0,3 6,0-11,2 11,4-15,6 32,6-50,7 20,0-40,7 0-3 0-0,6 400-1200
Colza (canola) 0-1,3 5,0-13,0 24,7-38,6 0,2-1,0 45,1-57,9 2,5-6,6 0-1,3 0-0,8 4500-11300
Girasol 0-0,7 0-0,2 6,5-13,0 6,0-13,0 50-70 0-6,9 6,5-24,0 3,0-7,5 Δ7-campesterol (0-3,0) 2400-5000
Girasol (HO) 0-0,5 0-0,3 5,0-13,0 4,5-13,0 42,0-70 1,5-6.9 6,5-24,0 0-9,0 Δ7-campesterol (0-3,0) 1700-5200
Illipé, Tenkawang 0,7-1,5 0-0,3 14,5-16,0 7,5-7,8 70,7-72,7 2,4-2,8 0-1,0 0-0,1 4000
Jojoba 0,6 nd 18,8 7,3 66,4 5,0 0,6 0,3 4590
Karanja 0,2 nd 6,5 29,8 41,7 11,9 0,2 0,5 Δ7-campesterol (7,9) 2400
Karité, shea 0-0,2 0-0,1 0-2 0-5 3 9 35-38 3 espinasterol (40-45) 1610-2470
(manteca) 24-metilencolesterol (6)
Δ7,22-estigmastadienol (45)
24-metil-Δ7-colestanol (6)
 Distribución de Desmetilesteroles

Eestigmastenol
Δ5-Avenasterol

Δ7-Avenasterol
Estigmasterol
Brasicasterol

Campesterol

b-Sitosterol
Colesterol
Esteroles

Δ7-
GRASA o ACEITE Otros totales
(mg/kg)

Lino 0,5-1,1 0,5-0,9 26,5-28,5 4,9-6,6 41,8-48,8 11,4-14,0 0-0,4 0,4-1,0 24-metilencolesterol (5,6) 3970-4140
Maíz 0,2-0,6 0-0,2 16,0-24,1 4,3-8,0 54,8-66,6 1,5-8,2 0,2-4,2 0,3-2,7 7000-22100
Maíz (germen) 0,2 nd 19,9 6,5 65,6 5,7 0,5 0,7 10740
Mostaza 0-3,1 5,8-6,0 33 0-0,2 58-60 0-2 nd nd
Nuez 0-1 0-0,2 4-7 0-0,1 81-91 4-8 0-0,3 0-0,4 1760-2050
Oliva 0,1-0,5 0-0,1 1,0-4,3 0,5-3,0 75-80 4-14 0,1-0,7 0,2-1,0 1000-2500
Orujo Oliva 0,1-0,5 0-0,2 1,0-4,3 0,5-4,0 72-80 2-10 0,1-0,7 0,2-1,0 2500-3900
Onagra (evening 0-1 0-1 6-14 0-2 71-90 0-19 1-3 0-1,4 1378-4520
primrose)
Palma (aceite) 2,6-6,7 nd 18,7-27,5 8,5-13,9 50,2-62,1 0-2,8 0,2-2,4 0-5,1 300-700
Palma (estearina) 2,5-5,0 nd 15,0-26-0 9,0-15,0 50,0-60,0 0-3,0 0-3,0 0-3,0 250-500
Palma (oleína) 2,6-7,0 nd 12,5-39,0 7,0-18,9 45,0-71,0 0-3,0 0-3,0 0-6,0 270-800
Superoleína de 2,0-2,5 nd 22,0-26,0 18,2-20,0 55,0-70,0 0-1,0 0-0,3 0-0,3 100
palma
Palmiste 0,6-3,7 0-0,8 8,4-12,7 12,0-16,6 62,6-73,1 1,4-9,0 0-2,1 0-1,4 700-1400
Pepita de Uva 0-0,3 0-0,2 7,5-14,0 7,5-12,3 64,0-75 0,3-4,5 0,4-3,5 0,5-1,6 Sitostanol (2,4-4,8) 2000-9600
Ricino 0-0,6 nd 10-10,6 17,3-22 44-56 11-21 0-2 0,3-1
Sésamo 0,1-0,5 0,1-0,2 10,1-20,0 3,4-12,0 57,7-63,6 6,2-7,8 0,5-10 0,6-5,6 4500-19000
Soja 0,2-1,4 0-0,3 15,8-24,2 14,9-19,1 47,0-60,0 1,5-3,7 1,4-5,2 1,0-4,6 1800-4500
Té (semilla) 0,5-0,6 nd 0,7-1,0 nd nd 1,2-2,0 10,0- 2,3-2,6 Espinasterol (55,2-76,3) 690-870
31,7 Δ7-campesterol (0,6-2,7)
 Distribución de 4,4′-Dimetilesteroles
24-Metilen Total
Aceite β-Amirina Cicloartenol Otros
cicloartanol (mg/kg)
Algodón tr-7 54,7 21,5-32 15-480
Avellana 3,3-13,8 18,3-54,7 11,1-32,6 Lupeol: 7,9-21,7 88-175
Bellota 15,0-39,6 3,1-10,3 5,6-9,4 Dammaradienol: 17,6-23,0 1500-3000
Cacahuete 5,8-14,6 23,1-28,6 16,3-46 133-360
Cacao 3,8-7,1 55,8-61,9 7,0-7,6 91
(manteca)
Cártamo 9,4-16 12,3-21,4 3,7-9,8 102-840
Coco 1,7-5 65,4-70,2 20,0-27,5 5-680
Colza 2-7,4 26,3-34,8 18-43,3 120-540
Girasol 3,5-19,8 26,7-34,9 29,6-32,1 390
Maíz tr-1,4 47,9 33-46,5 82-1150
Oliva virgen 1,2-7,1 5,5-65,2 9,7-71,6 Butirospermol: 2,2-6,2 823-2040
Orujo de oliva 7,6-16,7 19,0-49,1 9,0-30,6 Butirospermol: 4,8-9,8 1830-3050
Palma tr-2,5 40,2-42,4 9,0-34 59-320
Palmiste 2,0-4,0 63,5 13,1-19,5 8-720
Sésamo 2,3-8,1 32,5-61,6 9,3-27,2 726
Soja 8,1-20,3 10,5-25 6,3-14,4 272-840
Trigo 6,1-30,2 19,4-22,9 21,3-27,5 556
(germen)
 Distribución de Metilesteroles
Distribución en % de la fracción Total
Aceites o grasas metilesteroles
Cicloeucalenol Obtusifoliol Gramisterol Citrostadienol
(mg/kg)
Algodón tr-6 27 18-20 41-64 69-368
Avellana tr-7,1 6,9-15,2 2,7-5,8 38.8-55,9 48-125
Cacahuete tr-6,0 12,3-35,8 5,2-28 14,4-29,3 69-124
Cacao (manteca) 2,6 6,9 7,1 35,9-37,7 40
Cártamo tr-1,8 23,8-43 15,9-34 10-14,9 273
Coco 40,8 4,8-16 1,5-12 29-33,7 12-480
Colza 12,8 14,2-29 18,4-22 7-17,4 17-316
Girasol 4,3 23,2-30 16,8-20 31-41,6 629
Maíz 5,1-7,6 15,2-16,3 20,2-34 22,9-36,5 305-1200
Oliva 6,4-16,6 3,9-10,2 2,6-7,3 27,3-57,2 89-283
Palma 4,3 13,6-54,3 6,1-38 5,7-7,5 19-360
Palmiste 14,7 41,0 5,5 14,4 16-122
Sésamo 4,2 11,5 21,8 25,4-31,7 461
Soja 8,6-14,7 3,7-5,5 5,4-11,1 35,1-40,7 187-291
Trigo (germen) 5,3 6-7,6 32,0-41 33,5-46 867
 Determinación de Esteroles en
Aceite de Oliva por UHPLC-DAD-QTOF
• Configuración UPLC: Columna: ACQUITY BEH C18
Configuaración MS: SYNAPT G2 HDMS, Modo de
barrido: MSE
Análisis HDMSE de Esteroles
 Determinación de Dimetilesteroles en
Aceite de Oliva por UHPLC-HRMS
• UHPLC ULTIMATE 3000:
• Columna YMC30.
• Eluyentes MeOH, Acetonitrilo.
• Flujo isocrático.
• Espectrómetro de masas QEXACTIVE:
• Ionización APCI en modo positivo.
• Se detecta el lupeol.
Determinación Lupeol por UHPLC-HRMS
160613_lupeol_100ppb_FS_PRM_1 06/13/16 19:38:38 lupeol 100 ppb ISOCRATICO C30

RT: 0.00 - 30.00

8.75 NL: 8.50E5
100 8.78
TIC F: FTMS + p APCI
corona Full ms2
90 409.38@hcd35.00
[50.00-435.00] MS
160613_lupeol_100ppb_
80
FS_PRM_1

70
Relative Abundance

60

50

40

30

20

9.18
10 8.49
0.42 1.20 9.43 10.32
2.53 3.31 4.40 5.39 6.74 11.00 12.28 13.79 14.84 15.57 15.98 17.13 18.31 19.45 20.27 21.05 22.12 23.05 24.67 25.38 26.30 27.72 28.40 29.69
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Time (min)

160613_lupeol_100ppb_FS_PRM_1 #2564 RT: 8.74 AV: 1 NL: 1.31E5

F: FTMS + p APCI corona Full ms2 409.38@hcd35.00 [50.00-435.00]

95.08561
100
137.13260
90

80

70
Relative Abundance

60 81.06996

50

40
109.10132
30
123.11694
149.13260
20
163.14822
10 69.07003 189.16394 215.17937
229.19566 257.22678 271.24182 409.38275
285.25806 325.18457
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420
m/z

A. Cromatograma de lupeol a m/z 409.38288, pico identificado a tr= 8.75 min

B. Espectro de MSMS de lupeol
Determinación de Lupeol

Lupeol 500 ppb en Isopropanol ISOCRATICO C30

Avellana fracción de alcoholes dil 1:100 ISOCRATICO C30

Arbequina fracción de alcoholes dil 1:100 ISOCRATICO C30

Avellana Aceite dil 1:100 ISOCRATICO C30

Changlot Aceite dil 1:100 ISOCRATICO C30

 Ventajas e Inconvenientes
• Método muy sensible.
• Se puede utilizar el oliva como modelo para su
determinación en otras matrices.
• Se puede validar con valores de precisión usuales.
• Método multiparamétrico.
• Método para detectar avellana.
• Se puede automatizar la interpretación del
resultado.
• Necesita un equipo sofisticado.
• Necesita personal cualificado.
GRACIAS POR LA ATENCIÓN