DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LAS SEPSIS

Catéter intravenoso (IV)

- Los CVC son sondas que se introducen en los grandes vasos venosos para la administración de
medicación, nutrición, hemoderivados y extracción sanguíneas.
- Independiente de donde este el catéter, el riesgo es el mismo.
- Muchos cuadros sépticos nacen de un catéter venoso central.
- Las bacterias que producen slime se unen al catéter y comienzan a colonizar y circular por la sangre
- Hay catéter de una sola vía, de dos vías, de dos vías por separado, dependiendo lo que se va a
administrar.
- El riesgo de este dispositivo está en la punta de este catéter.

Evolución natural de la sepsis

1. Infección: Anidación de bacterias

2. Bacteremia: G(+), G(-)
3. SRIS/Sepsis: Infección, fiebre o hipotermia. Alteraciones metabólicas.
4. Sepsis severa: Disfunción órgano-sistemica; leucocitosis – leucopenia.
5. Shock séptico: Hipoperfusión tisular, >índice cardiaco elevado, <resistencia vascular.
6. MODS: Disfunción de uno o más órganos y sistemas
Falla de uno o mas órganos o sistemas
7.
8. Muerte

Fiebre + leucocitosis/ leucopenia = SRIS

SRIS + infección = SEPSIS
Sepsis + disfunción multiorgánica (sistémica ) = Sepsis severa

BACTEREMIA

INFECCIÓN SEPSIS
SRIS

Infección ´+ sepsis = Bacteremia

*La bacteremia puede o no cursar con sepsis por ejemplo bacterias transitorias en sangre.
377
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

Resumen etiopatogénico conceptos actuales

Resumen Lesión
Inflamación Vasodilatación
endotelial Shock
Es activada y fuga capilar
sistémica

CID,
Coagulación microtrombosis MODS
Perdida de la
Es activada en organos
homeostasis por
Muerte

Se afecta distintos Fibrinolisis Permanencia de FOM

niveles fisiológicos Es suprimida trombos = Isquemia
del paciente.

Resumen etiopatogenia, conceptos actuales

1. Infección: Proceso inflamatorio originado por la presencia o invasión de microorganismos en tejidos

normalmente estériles del hospedador, por ej. Válvulas cardiacas.
2. Bacteremia: Presencia de bacterias viables en la sangre y que se confirma por hemocultivo. Un
hemocultivo positivo no significa necesariamente que el paciente este con un cuadro séptico.
Tipos de bacteremia: De acuerdo a la duración.
1. Transitoria: Extracción dentaria, sondajes vesiculares, etc.
Sin sintomatología clínica: remoción de las bacterias por sistema fagocítico – monocuclear
en 20 – 30 min.
2. Continua: Infección intravascular, endocarditis, fiebre tifoidea, brucelosis, etc. Se liberan
bacterias a la sangre desde un foco.
3. Intermitente: Obstrucción biliar o urinaria, abscesos intraabdominales, pélvicos u otros no
drenados. Se liberan pulsos desde el foco.

3. Sindrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS): Respuesta inflamatoria descencadenada por

distintos agresiones clínicas graves (infecciones, pancreatitis, shock hemorrágico, politraumatismo,
etc.). Se manifiesta por dos o mas condiciones:
 Fiebre o hipotermia: T° >38°C ó <36°C
 Taquicardia: Frecuencia cardiaca >90 latidos/min.
 Taquipnea: frecuencia respiratoria >20/min o PaCO2 <32 torr (mmHg)
 Leucocitosis:
- Leucocitosis >12.000 cel/mm3
- Leucopenia <4.000 cel/mm3

378
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

- Baciliformes >10%
*No toda infección bacteriana cursa con leucocitosis, también lo puede hacer con leucopenia.
*En anemia megaloblastica hay desviación a la izquierda con aumento de baciliformes.

4. Sepsis (SRIS + infección): Es la respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) a una infección demostrada,
con hemocultivos positivos o infección clínicamente evidente.
“Es la presencia de SRIS ante un proceso infeccioso”
Puede limitarse a una región en particular del organismo, por ej. Un absceso dental, o puede
determinarse por la sangre.
Los parámetros que se encuentran alterados son consecuencia de un proceso infeccioso

Niveles de gravedad de la Sepsis; Según pronostico

I. Sepsis no complicadas: Es la que se presenta en casos de gripe u otras infecciones virales,
gastroenteritis, etc. En general no necesitan tratamiento hospitalario sino ambulatorio.
II. Sepsis grave o severa (complicada): Asociado a disfunción organica, hipoperfusion (alteración
en el suministro de sangre a algún) o hipotensión. Es altísima la mortalidad.

5. Shock séptico (Proceso infeccioso agravado): Sepsis grave donde persiste la hipotensión, a pesar
del aporte de fluidos y hay déficit de oxigenación (anoxia) de los tejidos, lo que puede provocar un
fallo multiorganico. Requiere manejo con vasopresores. Mortalidad 50%.

En el caso de las infecciones bacterianas, cuando pasan las bacterias a la sangre los receptores de los
linfocitos pueden tomar contacto con los LPS de las bacterias (Gram (-)) o con el peptidoglican a través del
acido lipoteicoico (gran (+)) esto envía señales de proliferación de los factores de necrosis tumoral (TNF)
por ej. IL-6 que activan a los macrófagos que eliminan nuevas citoquinas que producen inflamación del
endotelio y se produce una extravasación que termina en edema. Por otro lado, la Sepsis cuando ya está
declarada produce un aumento en la actividad de la oxido nitroso reductasa (INOS), lo cual aumenta el
oxido nítrico (NO) en tejido endotelial, y se produce una vasodilatación que termina con la extravasación y
edema. Ante la presencia bacteriana en la sangre, se va desencadenando el mismo cuadro clínico.

6. Síndrome de disfunción multiorgánica (SDMO): (Antes llamada falla multiorgánica sistémica ):

Alteraciones inexplicables de las funciones orgánicas en un paciente, de tal forma que no se puede
mantener la homeostasis.
- Ocurre en la 2ª a 3ª semana de iniciada la enfermedad: falla secuencial o simultanea de funciones
hepáticas, renal, pulmonar, alteración del SNC, CID u otros.
- Manejo enfocado a mantener hemostasia.

379
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

Signos y síntomas generales de la Sepsis

- Temperatura corporal alta o baja

- Respiración acelerada
- Frecuencia cardiaca aumentada
- Piel caliente o rash cutáneo
- Debilidad generalizada
Foco primario en la Sepsis

- Tracto genitourinario: 25%

- Tracto respiratorio: 20%
- Abscesos: 10%
- Heridas quirúrgicas: 5%
- Tracto biliar: 5%
- Otros sitios anatómicos: 10%
- De origen desconocido: 25%
*La mayor parte de las Sepsis de origen conocido provienen del sistema genitourinario, ya que las
infecciones urinarias son las más frecuentes en la población.

Epidemiologia

BACTEREMIA SECUNDARIA
OTRO FOCO 122 (7,82%)
BACTEREMIA
SECUANDARIA
INF. CATÉTER
201 (12,88%)

NEUMONIA
BACTEREMIA VENTILACION
PRIMARIA 188 MECANICA 656
(12,05%) (42,05%)

INFECCIÓN URINARIA
393 (25,20%)

Patogenia
La patogenia de la Sepsis en los pacientes hospitalizados tiene que ver con los catéteres. A las 48 horas
un catéter ya comienza a ser colonizados por bacterias, y estas aproximadamente por 15 días.

380
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

Sepsis: etiología

Microorganismo Porcentaje %
Gram (-) 70%
Gram (+) 15 – 20%
Hongos (candida) 5%
*En chile los porcentajes están mas equiparados entre Gram (-) y Gram (+). Hoy en dia se están elevando los Gram
(+).

Sepsis: etiología por origen

Bacteria Pulmón Digestivo Urinario Digestivo

E. coli 14% 30% 52% 4%
P. aeruginosa 5,9% 4% 4% 1%
S.aureus 22% 6% 10% 46%
S.N.C 3% <0,2% 2% 14%
S. pneumoniae 27% 1% <0,1% <0,1%
S.N.C : Staphylococcus coagulasa negativo

Sepsis: etiología

Gram (-) % Gram (+) %

E. coli 16,7 S.N.C. 21,5
K. pneumoniae 4,6 S. aureus 16,6
Enterobacter spp 3,1 Enterococcus spp. 5, 2
A. Baumanii 1,9 S. pneumoniae 3,7
Serratia spp 1,8
Proteus spp 1,7
P. aeruginosa 1,6

Cualquier microorganismo capaz de infectar al ser humano es capaz de producir Sepsis.

Etiología. Microorganismos causantes de Sepsis.

Extrahospitalario Otros Intrahospitalario

BGN
E. coli Clostridium S. aureus
Resistente a meticilina
S. aureus N. meningitidis S. epidermidis
Sensible a meticilina
S. pneumoniae Chlamydias Enterococcus
K. pneumoniae Virus P. aeruginosa
P. mirabilis Hongos Enterobacterias
P. aeruginosa Protozoos Candida spp

381
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

La bacteremia no es condición indispensable para el desarrollo de una Sepsis.

Los 10 gérmenes mas frecuentes en sangre

Microorganismo Nosocomial Comunitario

S. epidermidis 17% 7,4%
S. coagulasa 11.9% 5,5%
E. coli 9,8% 27,4%
Otros Staphylococcus 7,2% 3,4%
S. aureus 6,6% 8,1%
P. aeruginosa 5,5% 4%
E. faecalis 4,5% 3,1%
K. pneumoniae 4,0% 3,3%
SARM 3,4% 3,1%
C. albicans 3,3% 0,5%

Sepsis bacteriana

Sepsis
 Factores predisponentes:
- Uso de catéter intravenoso: Staphylococcus coagulasa negativos, S. aureus, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Enterococcus, Candida y Corynebacterium jeikium.
- Terapia antimicrobiana previa (antibióticos de amplio espectro desplazan la microbiota y exponen
receptores celulares). Al desplazar la microbiota proliferan agentes que bajo circunstancias se
vuelven patógenos.
- Sondas urinarias
- Cirugía e instrumentación (aspiración nasotraquial, fibrobroncoscopia, cateterizacion cardiaca,
manipulaciones urologicas)
- Intubación. Paciente con intubación es paciente que hace neumonía.
- Drogas inmunosupresoras.
- Edades extremas
- Enfermedades crónicas y enfermedades que deprimen el sistema inmune (Ej. VIH,
oncohematologicos, diabetes, neutropenia).
- Factores genéticos.

382

[Microbiología Clínica]
Condiciones predisponentes
Condición Mecanismos
Sonda urinaria Colonización microbiana del
tracto urinario
Catéter intravenoso Acceso directo de la flora
piel al sistema circulatorio
Intubación endotraquial o Colonización microbiana
traqueotomia tracto respiratorio inferior
Quemaduras graves Perdida función barrera piel
con infección de herida
Granulocitopenia Perdida de función
fagocítica de PMN
hipogammaglobulinemia Perdida opsonización
Esplenectomía Perdida de macrófagos fijos
y producción de anticuerpos
linfociticos
Recién nacidos Mecanismos defensivos
inmaduros, colonización
organismos madre y hospital
SIDA Desajuste función linf TH
Infecciones IV Invasión directa por
contaminadas microorganismos
Aumento posibilidades
Válvula cardiaca anormal infección por
microorganismos de
bacteremias transitorias
Protesis valvular <2 meses Cuerpo esxtraño favorece
colonizacion tras cirugia
Prótesis valvular >2 meses Foco colonización
bacteremias transitorias
Infección intrahospitalaria: Paciente que entra por una causa, pero se termina enfermando con otra.
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
DE LA SEPSIS
Organismos
Enterobacterias, P.
aeruginosa, Enterococcus
S. aureus, S. epidermidis,
Enterobacterias, Candida spp
S. aureus, Enterobacterias, P.
aeruginosa
Streptococcus pyogenes, P.
aeruginosa, Enterobacterias,
Candida spp, S. aureus
P. aeruginosa, Klebsiella spp,
Candida spp, S. aureus.
Neumococos, Haemophilus
spp, Meningococcus
Neumococos, Haemophilus
spp, meningococos
Strep Gp B, E. coli, otras
Enterobacterias, S. aureus,
Listeria monocytogenes
Mycobacterium spp
Klebsiella spp, Enterobacter,
Candida spp
S. viridans, Enterococcus, S.
aureus, Haemophilus spp.
S. aureus, S. epidermidis,
Enterobacterias, Candida spp,
Enterococcus.
Streptococcus, Enterococcus,
S. aureus, S. Epidermidis,
Haemophilus sp.
383
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

Factores que afectan el rendimiento diagnostico de los hemocultivos

1. Desinfección de la piel: Hay controversia ya que hay una indicación que señala que la desinfección
no debería ser con povidona yodada, ya que al momento de la puncion puede arrastrar yodo al
interior de la aguja e interferir con la determinación del agente a diagnosticar, y por esto se
recomienda alcohol al 70%.
2. Via de obtención de los hemocultivos: Da igual se aplica en una arteria o una vena.
3. Numero de hemocultivos: Minimo 2, ojala 3.
4. Momento de la toma: Recomendación; previo al peak febril (el sistema inmune está actuando por
fagocitos y por ende están muriendo las bacterias en el peak febril).
5. Volumen de sangre: Relacionado con la edad del paciente; un recién nacido 1 mL, pero a un adulto
10 mL esta bien, y tiene que mantenerse un relación 1:9 en relación al caldo que viene en el frasco
de hemocultivo (10 mL de sangre y 90 mL de caldo con los nutrientes).
6. Medio de cultivo: Dependiendo del agente. Por ej. Haemophilus colocar agar sangre con estria de
S. aureus o agar chocolate a 37°C en microaerofilia.
7. Atmosfera de incubación: Depende del cuadro clínico, por ej. Paciente con Neumonia por posible S.
pnumoniae donde se coloca ASC en microaerofilia.
8. Relacion volumen de sangre/medio.
9. Tiempo de incubación: Depende del agente. Por ej. Haemophilus 48 horas.
10. Sistema de detección de crecimiento
11. Presencia de microorganismos especiales.

Esquema de trabajo de un hemocultivo

Toma de muestra:
- Antisepsia con alcohol al 70% y solución yodada por 1´ (en controversia)
- No extraer de catéter intravenoso, riesgo de contaminación por las bacterias que puedan estar
colonizando el catéter y son arrastradas al hemocultivo.
- Sangre arterial o venosa
- Por cada hemocultivo debe hacerse una nueva extracción.
- Antes de iniciar la terapia antimicrobiana. La idea es que el ATB no pase al frasco porque podrá
seguir teniendo actividad.
- Momento óptimo: 2horas a 30 min antes del peak febril y calofríos.
- N° muestras: 2 o 3, los sistemas automatizados usan 2.

Hemocultivos: N° de extracciones

Numero de tomas Positivos

1 80%
2 89%
3 99%

384
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

Esquemas de trabajo de un hemocultivo: Sistemas automatizados

 Volumen de sangre: 10 mL en adultos (y adolescentes) y 1 a 5 mL en pacientes pediátricos.

 Las bacteremias son de baja magnitud (<1 a 10 ufc/mL) a mayor volumen de muestra
obtenida, mayor es la sensibilidad del hemocultivo.

Edad Volumen/toma
Neonatos a 1 mes 0,5 a 1,5 mL
1 mes a 2 años 2 – 3 mL
>2 años 3 – 5 mL
Adolescente 10 mL
Adulto 10 mL

1. Dilución de la muestra: 1:5 o 1:10  se reduce el poder bactericida del suero (efecto natural).
2. Frecuencia de extracción: Depende de la urgencia clínica, pueden ser espaciadas por minutos y de
sitios anatómicos diferentes de no ser grave puede ser cada 30 o 60 minutos. Si esta grave hacerlo
cada 5 minutos. Se recomienda por tiempos iguales pero separados.
3. Transporte y mantención: Mantener a temperatura ambiente y enviar de inmediato al laboratorio.
Nunca refrigerar, porque hay microorganismos sensibles a la refrigeración. Por ej. Neisseria
meningitidis.
4. Incubación: A 35°C +- 2°C
5. Tiempo de incubación: 7 días con hemocultivo manual. 14 días en pacientes con endocarditis 
válvulas colonizadas, donde la eliminación del microorganismo es a pulsos. 5 a 6 días en sistemas
automatizados.

Tabla N°2: Microorganismos asociados al aspecto macroscópico de hemocultivos

Aspectos macroscópicos Microorganismos asociados

Hemolisis Streptococcus, Staphylococcus, Listeria spp,
Clostridium, Bacillus spp.
Turbidez Bacilo Gramnegativo aerobio, Staphylococcus,
Bacteroides spp.
Formación de gas Bacilo gramnegativo aerobio, anaerobio
Formación de velo Pseudomonas spp, Bacillus spp, Levaduras.
Coagulo Staphylococcus aereus
Colonias visibles (puntiformes) Staphylococcus, Streptococcus.

385
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

Hemocultivo: Precauciones

- No extraer de catéteres colocados anteriormente

- No dejar en contacto con el aire los tapones de los frascos de cultivo
- Punción e introducción en los frascos se realizara con estricta asepsia
- La muestra obtenida por catéter venoso central es una muestra inadecuada, ya que estudios de
microscopia electrónica han revelado que el 100% de los catéteres se colonizan con
microorganismos de la piel a las 48 horas de la instalación.

Sistema manual de hemocultivo

El frasco de hemocultivo contiene:

 Medio liquido: (Medio nutritivo para que prolifere la bacteria) TSB, BHI, Caldo Brucelia, Caldo
Columbia, etc. En cantidad suficiente para proveer la dilución 1:5 o 1:10.
 Anticoagulante: El más usado es el SPS (polianetol sulfonato de sodio) al 0,025% (riesgo de
toxicidad con Neisseria, Gardnerella y Moraxella)  contribuye a la inhibición de la fagocitosis,
complemento y lisozima. Lleva la concentración de antibióticos a niveles subinhibitorios, inhibe
las concentraciones de aminoglicócidos.
 Aditivo: Pueden contener glucosa o sacarosa, penicilinasa, CO2, atmosfera de anaerobiosis, etc.
TSB: Trypticase Soy Broth (caldo soya tripticasa)
BHI: Brain Heart Infusion (infusión cerebro-corazon)

*La tripticasa es una peptona (fuente de proteinas), la soya aporta los carbohidratos necesarios.

Sistema Semiautomatizado: Lisis – centrifugación

- Tubo de lisis con SPS, saponina como agente lítico de eritrocitos, leucocitos y macrogafos,
polipropilenglicol como antiespumante y un fluoroquimico inerte de alta densidad.
- Se centrifugan a alta velocidad  concentración de MO  sedimento se siembra en medios de
cultivo específicos.
- Mejoran la detección de hongos. Ej. Histoplasma.
- Método de detección de bacteremias por Micobacterias (paciente VIH).
- Permite realizar hemocultivos cuantitativos que son útiles para diagnostico de bacteremias
relacionada a catéter venoso central (CVC).
- Se usa para Mycobacterium. Estas bacterias intracelulares se encuentran dentro del fagocito; son
destruidas por lisis, liberando la bacteria, se centrifuga y todo lo celular se va al fondo y la bacteria
queda en el sobrenadante.

386
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

Sistema automatizado:

- Botellas con diversos medios de cultivo (aerobicos, anaeróbicos, hongos, Micobacterias y con
resinas que captan antibioticos) que se incuban en equipos que agitan constantemente las
muestras.
- Se basan en la detección de CO2 mediante técnicas radiométricas, espectrofotométricas,
fluorometricas, y/o colorimétricas.
- El computador asociado al equipo relaciona las mediciones con índices y/o graficas de crecimiento
microbiano que dan un aviso cuando la detección sobrepasa un punto de corte.
- Las botellas se descargan, se hace una tinción de Gram y se informan precozmente.
 En los equipos cada espacio tiene una letra (donde van los frascos) donde se sabe la botella que
pertenece a cada paciente (registro). Si el frasco de hemocultivo estuviera positivo a la bacteria
esta producirá un metabolito (CO2) que será detectado por un sensor (diodo) y sonara una
alarma.

Figura N°1: Clasificación de los hemocultivos según tipo de paciente, toma de muestra, tipo de
microorganismo y metodología.

Clasificacion de los hemocultivos

Segun tipo de Segun toma de Segun la

paciente muestra Segun tipo de MO metodologia

Pediatrico Centrales Bacterias aerobias

Manuales

Adulto Bacterias anaerobias

Perifericos Semi automatizados

Bacterias fastidiosas
Inmunocompetente
Automatizados

Micobacterias
Inmunosuprimido

Hongos

387
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

Sistemas manuales

Inoculacion de la muestra 10 mL

Botella con medio de cultivo

(aerobico - anaerobico)

Deteccion visual del desarrollo microbiano

(1 vez al dia por 7 dias; turbidez, hemolisis, gas, velo)

Tincion de Gram Resiembra ciega

Resie mbra (todos los dias) a las 24 horas y 7 dias.

Hemocultivo automatizados

Inoculacion de la muestra (10 mL)

Botella con medio de cultivo

(aerobio-anaerobio-micobacterias-resinas)

Deteccion del desaroollo microbiano (CO2) continuo

(Radiometrico-Espectrofotometrico-Colorimetrico-fluorimetrico)

Computador: Indice de crecimiento

grafico de crecimiento

Descarga de botellas Eliminacion de botellas

Tincion Gram-resiembra (sin subcultivo)

 BECTEC serie 9000 (Belton Dickinson): Sistema de medición fluorescente, basado en la

detección de CO2 producido por el crecimiento microbiano dentro del frasco de hemocultivo.
- Contiene resina
- Lisa los Glóbulos rojos y neutraliza los ATBs.
- Posee frascos para aerobios.

388
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

Esquema de trabajo de un hemocultivo automatizado: Ventajas

- Monitoreo continuo no invasivo día y noche (invasivo es el método manual porque el frasco se
interviene todos los días)
- Liberación de profesionales del chequeo diario.
- Baja manipulación de los frascos
- Acortamiento en el esquema de trabajo de 7 a 5 días.
- Aumento del rendimiento del hemocultivo en pacientes con antibioterapia.
- El equipo sirve de cámara de incubación agitada y al detectar un hemocultivo positivo avisa
mediante su computador cual frasco es.

Sistema Bact Alert (ver manual)

- Muestras: 2
- Incubación: hasta 5 dias a 36°C +- 1°C
- Realizar Gram directo al inicio.
- Se puede informar en preinformes.

Situaciones especiales:

1. Endocarditis infecciosa (Ei):

 El espectro clínico de la Ei ha cambiado en el ultimo tiempo.
 El diagnostico microbiológico a través del hemocultivo no siempre de resultados positivos. Se
recomienda usar:
- Sistema automatizado para aumentar sensibilidad.
- Medios con piridoxal (vitamina B6)  Abiotrophia
- Tres hemocultivos dentro de las 24 horas, ya que la bacteremia en la Ei es continua.
- Se debe incubar por 14 dias porque los agentes son mas lentos en su crecimiento.
 Agentes más frecuentes según estudios en Chile:
- Streptococcus grupo viridans (30,8%)
- S. aureus (17,8%)
- Enterococcus (10,3%)
- Streptococcus grupo D (10,3%)
- SCN (9,7%)
- Bacilos Gram negativos (8,6%)
- Otros Streptococcus (5,4%)
- Grupo HACEK (3,2%)
- Anaerobios (1,6%)
- Hongos (0,6%)

2. Micobacterium: Se recomienda la lisis- centrifugación y luego se siembra en medios especiales.

389
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

3. Brucella: (sospecha)
- Para aumentar sensibilidad se puede utilizar un medio bifásico como el Castañeda con incubación
prolongada de 30 dias. Si no se utiliza medio bifásico la incubación en método tradicional de
hemocultivo es de 14 dias (lisis-centrifugación).
4. Leptospira:
- Incubación en oscuridad por 6 semanas a 30°C
- La observación debe hacerse sacando una gota del medio y observando un microscopio de campo
oscuro, ya que no crece en ningún agar. Se observa girando como sacacorcho.
5. Anaerobios:
- Usar hemocultivo para anaerobio
- Sepsis por infecciones intraabdominales, pelvianas y necrotizantes de partes blandas. Por lo tanto
no se justifica sembrar hemocultivos corrientes en anaerobiosis.
6. Grupo HACEK:
- Haemophilus spp, Actinobacillus actinomycetecomitans, Cardiobacterium hominis, Eikenella
corrodens, Kingella spp.
- Incubar por 21 días por método convencional.
- No descartar las placas de subcultivo hasta el 3° o 4° días de incubación.
7. Hongos:
- El método de elección es el de lisis-centrifugación que recupera levaduras y hongos. En
histoplasmosis.

Informe definitivo
Indicar el periodo de incubación durante el cual no se observó desarrollo cuando se emite un informe
negativo.

Envió al ISP
Cuando se aisle: Salmonella spp., Brucellla., Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae
provenientes de cuadros invasores, Haemophilus influenzae., Leptospira (solo muestras de suero), para
confirmación y vigilancia epidemiológica de acuerdo a lo indicado en el reglamento N° 712 sobre
notificación de enfermedades trasmisibles.

Sepsis relacionada a Catéter:

 Cuando el numero de microorganismos obtenidos a través del catéter es varias veces superior al
obtenido a través de una vena periférica.
 Aislamiento de un microorganismo en el segmento IV en un numero > o = 15 UFC, en presencia
de sintomatología clínica, con:
- Hemocultivo y Positivos al mismo MO, con
- Cultivo de conexión y/o piel igual antibiótipo o serotipo

390
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
[Microbiología Clínica] DE LA SEPSIS

Etiologia de bacteremias asociadas a catéteres intravasculares

Microorganismo Porcentaje
S. epidermidis 45%
S. aureus 16,5%
Otros SCN 16,2%
Enterobacterias 10,6%
Candida spp 7,2%
BGNNF 3,3%
Enterococcus spp 3,3%
Corinebacterias 2,3%

Sepsis relacionada a catéter:

Catéter de corta duración: Se utiliza técnica de cultivo semicuantitativo de Maki (método no conservador).
Cateter de larga duración: Se utiliza método de hemocultivo cuantitativo (método conservador)  en
pacientes neutropenico en diálisis, etc. o cuando por razones técnicas no se indica el retiro del catéter. Se
utiliza para administrar todo tipo de fluidos y que están instalados por mucho tiempo en esa posición.

Técnica de cultivo semiauntitativo de Maki

Catéter corte 3 cm
sobre la punta Toma de 3 hemocultivos
de sangre periferica

Frasco esteril Laboratorio

1) Colocar el trozo de catéter en la superficie de una placa de agar sangre.

2) Con pinza esteril hacerlo rodar adelante y atrás en la superficie del agar unas 4 veces.
3) Incubar la placa 18 a 24 horas a 36 +- 1°C
4) Contar el numero de colonias desarrolladas.
*Se recibirá un frasco donde viene la punta del catéter y además una muestra de sangre obtenida de
otra parte (vaso periférico del otro bazo).

391
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
DE LA SEPSIS [Microbiología Clínica]

Cultivo semicuantitativo (Maki, 1977)

Interpretación
<15 UFC = contaminación del catéter al momento de retirarlo.
> 15 UFC con mismo MO en catéter y hemocultivos = “infección” (cuadro séptico asociado a catéter venoso
central) del catéter.
Hacer identificación y antibiograma.
*Es semi cuantitativo por que considera solo las bacterias de encima, pero no considera las bacterias que
están dentro del catéter.

Catéter de larga duración: Técnica de cultivo cuantitativo

 El catéter se pone dentro de un volumen conocido de caldo nutritivo. El catéter se sumerge y por ende
crecen las bacterias que están dentro y fuera del catéter.
1) Extraer de vena periférica 2 hemocultivos. Enviar al laboratorio.
2) Junto con el primer hemocultivo, extraer 1 mL de sangre periférica en una jeringa heparinizada y
tapar asépticamente. Enviar al laboratorio.
3) Extraer 1 mL de sangre de CVC y descartar. Con una jeringa heparinizada extraer otro mL de sangre
del CVC, tapar asépticamente y enviar al laboratorio.

Procedimiento:
1) Rotar las jeringas para homogeneizar
2) Depositar el mL de sangre de cada jeringa en placa de agar sangre de 12 mm de diámetro y esparcir
con rastrillo (cada jeringa en una placa por separado)
3) Tapar las placas y dejar en estufa de cultivo por 1 hora SIN INVERTIR
4) Invertir las placas e incubar 24 a 48 horas.

Catéter de larga duración: Técnica de cultivo cuantitativo

Interpretación:
1) Contar colonias. Expresar como UFC/mL de sangre periférica y CVC
2) Cuando se aisla el mismo MO en ambas muestras, pero con un recuento 4 a 10 veces superior en la
sangre del CVC que en el periférico = Sepsis por catéter central.
3) Identificar y realizar antibiograma.

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