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Optativa III
Laboratorio de Técnicas de Separación
Práctica No.2
Influencia de la cantidad de analito en la respuesta del cromatógrafo de gases
(Calibración del cromatógrafo de gases)
Grupo. 3IM7A
- Inyectar diferentes cantidades de analito para observar como afecta las respuestas del
cromatógrafo de gases.
- Realizar una calibración con los datos obtenidos.
- Simular la cuantificación de un analito de una muestra problema.
INTRODUCCIÓN
Propiedades fisicoquímicas
El Metanol es un líquido incoloro, volátil e inflamable con un ligero olor alcohólico en estado
puro; altamente venenoso y nocivo para la salud. Es miscible en agua, alcoholes, esteres,
cetonas y muchos otros solventes; poco soluble en grasas y aceites.
PROPIEDAD VALOR
92; 20 ºC
Presión de vapor (mmHg) 126; 25ºC
160; 30 ºC
0.7915; 20/4 °C
Gravedad Específica
0.7866; 25 °C
pH No reportado
Respecto a sus propiedades químicas del metanol presentan reacciones típicas para los
alcoholes de su clase. Las reacciones de importancia en la industria son la deshidrogenación
y deshidrogenación oxidativa sobre óxido de Plata o Molibdeno-Hierro para la producción
de Formaldehído; esterificación con ácidos orgánicos y derivados ácidos; adición a enlaces
no saturados y remplazo de grupo hidroxilo.
Usos industriales
El volumen inyectado debe ser proporcionado con el tipo de columna a utilizar para evitar
mezclas incompletas o bandas de muestra excesivamente anchas. La inyección de una
cantidad excesiva de muestra puede llevar a una sobrecarga de la columna y en consecuencia
existe una pérdida en la capacidad de separación y se origina una deformación en las bandas
del cromatograma. Las bandas también se deforman si la cantidad inyectada no es suficiente
para cargar la columna.
c) ¿Por qué el área y altura de un pico cromatográfico se usan para calibrar un
cromatógrafo de gases? ¿Cómo se realiza una calibración por estándar externo a un
cromatógrafo?
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
4. Dar click en Create new method (Crear un nuevo método desde cero) o en load
method store on disk (Cargar un método que ya existe) para poder crear un método
a partir de uno ya existente.
5. Se abrira una ventana para colocar la descripción del método.
6. Se abrirá una ventana en donde se colocaran datos del cromatografo.
17. Dar click en “Ok” para instalar el método. Esperar a que el cromatógrafo
reconozca el método y empiece a correr.
18. Posteriormente nos arrojara el reporte y el cromatogramá, los cuales deberemos
guardar.
19. Una ves que terminamos de realizar nuestra experimentación procederemos a
liberar el equipo, para poder colocar los datos de apagado.
c. Procedimiento para usar una jeringa de cromatografía antes y después de inyectar la
muestra.
Después introducir
Para hacerlo se
la jeringa al vial y
succiona hasta
bombear 6 veces,
llenar la jeringa y
con el objetivo de Bombeo
se expulsa todo el
eliminar burbujas
contenido al vial.
de aire.
La forma correcta
de agarrar la
jeringa es con las Hacerlo de manera
dos manos para un rápida y
mejor control y uniformemente.
manejo.
Tomar con las dos manos la
jeringa y tomar dos Es decir, si se Después introducir la
microlitros mas de la necesitan 0.3 jeringa en el puerto
muestra que se tomara y microlitros, se debe de inyección.
expulsar esos dos tomar 0.5 microlitros Mantener la jeringa lo
microlitos hasta llegar a la y expulsar la muestra más derecha posible.
cantidad de muestra que se hasta llegar a 0.3.
necesita.
Después de inyectar
toda la muestra Después de introducir Tener cuidado,
presionar el botón la aguja de la jeringa porque el material del
Run que esta en el por completo, se puerto de inyección
tablero del equipo. inyecta rápida y se calienta por las
Para comenzar el uniformemente. altas temperatura de
análisis. inyección.
Mantener el dedo
presionando el
embolo de la aguja
por 5 segundos y
después retirar la
aguja con cuidado y
de forma derecha.
d. Procedimiento para usar el programa Total Chrom para obtener datos
cromatográficos.
En la sección de
“display”, presionar Abrir el archivo
“pick report” para deseado y visualizar
obtener el reporte el cromatograma.
con todos los datos
del cromatograma.
e. Apagar el equipo.
Para apagar el equipo se deben regresar a las condiciones de prendido y seguir las
indicaciones de apagado que se encuentran en el manual de la practica 1.
RESULTADOS EXPERIMENTALES
•
Volumen vs Tiempo
Grafica 1
de retención
1.55
1.54
1.53
1.52
Tiempo
1.51
1.5
1.49
1.48
1.47
1.46
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen
Análisis:
2000000
Area de pico
1500000
1000000
500000
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de alicuota
Análisis:
Al graficar el volumen de la alícuota contra el área de pico, se analiza una tendencia de crecimiento.
A mayor volumen de alícuota, mayor será el área de pico, el pico incrementa en altura y en ancho
Esto debido a que mayor volumen de alícuota mayor cantidad de analito habrá y recordemos que el
detector permite medir a la salida de la columna y registra un aumento de la señal cada que detecta a
un analito. Mientras mayor sea la cantidad de volumen mayor será la cantidad o concentración de
analito en la alícuota, esto registrara picos más altos y anchos. También se observa que la grafica no
tiene tendencia lineal.
250000
200000
150000
100000
50000
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
8.4
8.3
8.2
8.1
7.9
7.8
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Análisis:
Aunque en la gráfica se observa un comportamiento , los valores de área/altura son casi
constantes, aunque se ve que aumenta y disminuye, se puede decir que son constantes. Esto
significa que tanto como la altura y el ancho del pico, crecen de forma proporcional a lo largo
de las 5 inyecciones.
CÁLCULOS EXPERIMENTALES
• Método de estándar externo para realizar la calibración del equipo
El método del estándar externo consiste en inyectar en el equipo volúmenes
constantes de disoluciones de concentraciones conocidas y crecientes del compuesto
que se pretende cuantificar; tras este proceso, se representa la cantidad del compuesto
frente al tamaño del pico (área o altura), debiéndose obtener una línea recta. A partir
de esta recta de calibrado, es posible realizar la cuantificación en una muestra
desconocida, por interpolación grafica o matemática del pico obtenido en la recta
calibrada.
Calibración con Área
• Calculo de masas
1500000
1000000
500000
0
0 100 200 300 400 500
• Cálculo de masas
Tabla 5. Tabla de resultados
200000
Altura de pico
150000
100000
50000
0
0 100 200 300 400 500
Masa
𝑦 = 551.6𝑥
Grafica 6. Se presenta una recta de calibración a partir de la masa de la muestra contra la del pico
obtenido de cada inyección. Se observa una 𝑅1 = 0.9937
𝐴𝑙𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 551.6 ∗ 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙
• Despejar la masa del metanol
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0 100 200 300 400 500
FUENTES DE REFERENCIA