INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERIA QUIMICA E INDUSTRIAS

EXTRACTIVAS

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA INDUSTRIAL

ACADEMIA DE QUÍMICA ANALITICA

LABORATORIO DE TÉCNICAS DE

SEPARACIÓN

GRUPO 3IV77

PRÁCTICA 5: Influencia de la cantidad del analito en la respuesta

del cromatógrafo de gases (Calibración del cromatógrafo de gases)

PROFESOR: CAMACHO CAMACHO LUIS ENRIQUE

ALUMNO: ALEJANDRO CARRASCO REYES

BOLETA:2018320311

CIUDAD DE MÉXICO 28 FEBRERO 2022

OBJETIVOS

• Inyectar diferentes cantidades de analito para observar cómo afecta las respuestas del
CG.
• Realizar una calibración con los datos obtenidos.
• Simular la cuantificación de un analito de una muestra problema
INTRODUCCIÓ BIBLIOGRAFICA

1.- Propiedades fisicoquímicas del metanol, sus usos industriales y alimenticios (o farmacéuticos)

Es un líquido incoloro, venenoso, con olor a etanol y cuando está puro puede tener un olor repulsivo.
Arde con flama no luminosa. Es utilizado industrialmente como disolvente y como materia prima en la
obtención de formaldehido, metil-ter-butil éter, ésteres metílicos de ácidos orgánicos e inorgánicos.
También es utilizado como anticongelante en radiadores automovilísticos; en gasolinas y diesel; en la
extracción de aceites de animales y vegetales y agua de combustibles de automóviles y aviones; en la
desnaturalización de etanol; como agente suavizante de plásticos de piroxilina y otros polímeros y como
disolvente en la síntesis de fármacos, pinturas y plásticos. Es un disolvente industrial y se emplea
como materia prima en la fabricación de formaldehído. El metanol también se emplea como
anticongelante en vehículos, combustible de bombonas de camping-gas, disolvente de tintas, tintes,
resinas y adhesivos. El metanol puede ser también añadido al etanol para hacer que éste no sea apto
para el consumo humano (el metanol es altamente tóxico).

Otra aplicación es como disolvente para la fabricación de ingredientes y productos farmacéuticos

importantes, como medicamentos para el colesterol, estreptomicina, vitaminas y hormonas.

Durante mucho tiempo se obtuvo por destilación destructiva de madera a altas temperaturas, en la
actualidad se produce por hidrogenación catalítica de monóxido de carbono a presiones y temperaturas
altas, con catalizadores de cobre-óxido de cinc; por oxidación de hidrocarburos y como subproducto en
la síntesis de Fischer-Tropsch.

Tabla1 “Propiedades físicas del metanol”

Apariencia Incoloro 791.8 kg/mˆ3

Densidad a 25°C 0.7866 g/cmˆ3
Masa molar 32 g/mol
Punto de fusión -97°C
Punto de ebullición 65°C
Presión critica 1 atm
Viscosidad 0.56 cps °15°C

Pictogramas
2.- ¿Cómo se modifica la respuesta de un cromatógrafo con respecto a la cantidad de analito
inyectado?

Con el fin de tener una alta eficiencia de la columna se requiere que la muestra sea de un tamaño
adecuado y que se introduzca como un “tapón” de vapor; la inyección lenta o muestras demasiado
grandes causan dispersión de las bandas y una mala resolución. Las micro jeringas calibradas, como
las que se ilustran en la figura 27.3, se utilizan para inyectar muestras líquidas, a través de un diafragma
de goma de silicón, en una cá- mara caliente especial para la muestra que se ubica en la cabeza de la
columna. La cámara de la muestra (fi- gura 27.4) está casi siempre a unos 50°C por encima del punto
de ebullición del componente menos volátil de la muestra. En el caso de las columnas analíticas relle-
nas ordinarias, el tamaño de la muestra varía desde unas pocas décimas de microlitro a 20 μL. Las
columnas ca- pilares requieren muestras menores por un factor de 100 o más. En estos casos se
emplea un sistema divisor de la muestra que permite entregar una pequeña fracción conocida (1 :50 a
1 :500) de la muestra inyectada y el resto se desecha. Los cromatógrafos de gases comerciales con
columnas capilares están equipados con dichos divisores; también permiten la inyección sin di- visión
para mejorar la sensibilidad o para usarse con columnas empacadas. En el caso de entradas sin divi-
sión, la válvula de purga cierra la inyección y permanece cerrada de 30 a 60 segundos. Durante este
tiempo, el vapor de la muestra sólo puede avanzar por la columna. Al abrirse la válvula de purga,
cualquier vapor remanente sale con rapidez. En la cromatografía de gases con capilares también hay
inyectores en la columna, con las cuales la muestra entera se inyecta en la columna como líquido que
luego se vaporiza al programar la temperatura de la columna o de la entrada. En este caso, el analito
se separa del solvente por efectos térmicos y del mismo solvente (Skoog et al., 2008).

3.- ¿Por qué el área y el altura de pico cromatográfico son buenas medidas para calibrar un
cromatógrafo?

Porque el área bajo un pico es proporcional a la cantidad de analito presente en el cromatograma.

Calculando el área del pico mediante la función matemática de integración, se puede determinar la
concentración de un analito en la muestra original. La concentración puede calcularse utilizando una
curva de calibración creada al encontrar la respuesta para una serie de concentraciones de analito, o
determinando el factor de respuesta relativa de un analito. El factor de respuesta relativa es la relación
esperada entre un analito y un estándar interno (o estándar externo) y se calcula encontrando la
respuesta de una cantidad conocida de analito y una cantidad constante de estándar interno una
sustancia química añadida a la muestra a una concentración constante, con un tiempo de retención
distinto al del analito(Quiminet, 2006).
4.- Calibración por estándar externo de un cromatógrafo (aplica igual para CG o HPLC).

Un estándar o patrón externo se prepara por separado de la muestra. En cambio, un estándar interno
se añade a la muestra. Los estándares externos se usan para calibrar instrumentos y procedimientos
cuando no hay efectos de interferencia de la matriz de componentes sobre la disolución del analito. Se
prepara una serie de tales estándares externos que contienen el analito en concentraciones conocidas.
Lo ideal es usar tres o más de las disoluciones en el proceso de calibración. No obstante, se puede
confiar en calibraciones de dos puntos en algunos análisis de rutina.

La calibración se consigue al obtener la señal de respuesta (absorbancia, altura del pico, área del pico)
en función de la concentración conocida del analito. Una curva de calibración se prepara con una gráfica
de los datos o ajustándoles una ecuación matemática aceptable, como la ecuación de la recta dada por
la pen- diente y la ordenada al origen que se usa en el método de los mínimos cuadrados lineales. El
paso siguiente es la etapa de predicción, en la que se obtiene la señal de respuesta para la muestra y
se usa para predecir la concentración desconocida del analito, a partir de la curva de calibración o de
la ecuación de mejor ajuste. La concentración del analito en la muestra original se calcula luego
mediante c, aplicando los factores de dilución convenientes tomados de los pasos que se siguieron
para preparar la muestra (Skoog et al., 2008).

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

A. Encendido del equipo Autosystem XL y limpieza de la columna (Carrasco, 2023)

B. Creación de un método de análisis usando el programa Total Chrom a partir de un método

existente.

Presionamos el botón Build y elegimos la Seleccionamos la pestaña de instrument

opción de cargar método guardado en el y seleccionamos opciones de control.
disco duro y presionamos OK
Modificamos los parámetros del horno y Mantenemos la presión de 15 psi del gas
del inyector y tiempo de equilibrio de 0.3 acarreador.
min, temperatura de análisis y tiempo de
análisis y damos clic la pestaña de gas
acarreador

Seleccionamos la pestaña de Detector y

Seleccionamos la pestaña de eventos
seleccionamos un temperatura de 210°C
programados en el tiempo y cambiamos
y un rango de 1 ya que hay un pico
el Split a ON
grande.

En la pestaña de descripción del método Para instalar el método seleccionamos el

detallamos las condiciones del método y botón setup y nos aparece otra ventana y
presionamos ok y cambiamos el nombre seleccionamos la casilla de método y lo
a el método a utilizar. abrimos desde la ruta ya guardada.
Le cambiamos el nombre base a el del
análisis y damos clic en OK y ya tenemos
el método instalado.

C.- Uso de la jeringa de cromatografía para ingresar la muestra en el equipo CG.

Funciona como una jeringa normal. Hacemos el lavado de la jeringa con la

muestra tomada del vial (5 veces).

La muestra la desechamos en papel

absorbente, sin que a aguja toque el
papel.
Se jala aire hasta el volumen deseado,
menos 10 microlitros. Y después de
añaden lo restante de muestra.
 Se procede a inyectar, tomando el Colocamos el dedo sobre el embolo 5
embolo con los dedos, para que este no segundos para evitar que el gas
se mueva. acarreador salga y presionamos run.

D). - Uso del programa Total Chrom para obtener los datos obtenidos en un cromatograma.

Vamos a Graphic Edit y abrimos el

archivó del cromatograma dando clic
en el botón de Graphic Edit.

Se abrirá una nueva ventana la cual

tiene el cromatograma con los datos
obtenidos.

3 Damos clic en la pestaña de display y

seleccionamos el reporte de los picos.
E). - Apagado del equipo Autosystem XL (Carrasco, 2023).

RESULTADOS EXPERIMENTALES

Volumen de tR (min) Área (uV. S) Altura(uV) Área/Altura

Metanol
(microlitros)
0.2 1.464 742176 95961 7.7341
0.3 1.471 241012 29661 8.1255
0.4 1.463 1472431 155607 9.4624
0.5 1.419 1702055 228096 7.4620
0.6 1.412 1958648 252906 7.7446

La densidad del metanol a 25 °C es de: 0.7866 g/cmˆ3

ANÁLISIS DE RESULTADOS.

Graficas:

1.- Grafica de tiempo de retención vs volumen de metanol inyectado.

Volumen vs Tiempo de retención

1.475
1.47
1.465
1.46
1.455
1.45
1.445
tR (min)

1.44
1.435
1.43
1.425
1.42
1.415
1.41
1.405
1.4
0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.55 0.6
Volumen de metanol en microlitros

Se puede apreciar que conforme aumentamos la cantidad de analito inyectado el tiempo de retención
va disminuyendo esto debido a que hay una mayor cantidad de moléculas en la columna y hay una
lucha de moléculas por ser absorbidas en la columna ya que las que van pegadas a la columna tienen
una menor velocidad y se ven más absorbidas que las que van en medio de la columna y que llevan
más velocidad, recordando un poco de fenómenos de transporte sabemos que la velocidad máxima o
el vector de velocidad máxima en una tubería, haciendo una analogía como si fuese la columna una
tubería sabemos que el vector velocidad de la velocidad máxima es la que va por en medio de la
columna por lo tanto estas moléculas tendrán mayor velocidad y por lo tanto saldrán con menor tiempo
de retención, es decir que la columna se encuentra saturándose cada vez más conforme alimentamos
más cantidad de analito.

Por otra parte, se puede apreciar que en los resultados experimentales obtuvimos un dato que no es
sucesivo a los datos obtenidos, pudo ser ocasionado por una mala inyección o una pequeña impureza,
si graficamos nuevamente pero omitiendo este punto (el de 0.3 microlitros de metanol) obtenemos la
siguiente gráfica.

Volumen vs Tiempo de retención

1.475
1.47
1.465
1.46
1.455
1.45
1.445
tR (min)

1.44
1.435
1.43
1.425
1.42
1.415
1.41
1.405
1.4
0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.55 0.6
Volumen de metanol en microlitros

Se observa la tendencia de aumentar el volumen inyectado y la disminución del tiempo de retención, lo

que nos indica que son inversamente proporcionales.

2.- Grafica de área de pico vs volumen de metanol inyectado.

Volumen vs Área de pico

2500000

2000000
área del pico

1500000

1000000

500000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol en microlitros
De acuerdo a la tendencia de la gráfica se puede deducir que la cantidad de animalito el área de pico
son directamente proporcionales ya que a mayor cantidad de analito inyectada el área del pico va
aumentando ya que la señal que produce el analito es más y por lo tanto el detector la directa con
mayor facilidad generando esta área bajo la curva lo cual es un dato muy fiable para poder hacer curvas
de calibración, nuevamente se aprecia que el punto 03 de volumen de metanol no coincide con la
tendencia de los datos por lo que se procede a graficarlo omitiendo este punto para poder apreciar
mejor la tendencia de la curva.

Volumen vs Área de pico

2500000

R² = 0.9879
2000000
área del pico

1500000

1000000

500000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol en microlitros

3.- Grafica de altura de pico vs volumen de metanol inyectado.

Volumen vs Altura de pico

300000

250000

200000
Altura de pico

150000

100000

50000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol inyectado
De la misma manera se observa que conforme aumentamos la cantidad de analito la altura de pico se
aumenta también son totalmente proporcionales esto quiere decir que la columna se encuentra con
mayor cantidad de moléculas y por lo tanto en la señal que llega el detector es mayor generando una
altura de pico más alta, si omitimos el punto que no coincide podremos observar de una manera mejor
cómo es que aumenta la altura de pico conforme mentamos la cantidad de analito la siguiente gráfica
muestra esa tendencia.

Volumen vs Altura de pico

300000

250000 R² = 0.9652

200000
Altura de pico

150000

100000

50000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol inyectado

4.- Grafica de área de pico/altura de pico vs volumen de metanol inyectado.

Área/Altura vs Volumen
10

9.5

9
área/altura

8.5

7.5

7
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol en mililitros
Esta gráfica nos permite visualizar cómo es que va cambiando la relación de área del pico entre la
altura del pico contra el volumen de analito inyectado se puede ver que conforme aumentamos analito
se va obteniendo un resultado mayor en la relación de área y altura Lo que nos dice que tenemos
cambios proporcionales es decir que si aumenta la altura el área de pico también debe de aumentar,
así como vayamos aumentando la cantidad de analito inyectado.

CALCULOS.

A) Utilizar el método de estándar externo para realizar la calibración del equipo usando área y
altura

Ajustes por mínimos cuadrados de los datos de altura de pico y área de pico vs volumen de metanol:

Volumen vs Área de pico

2500000
y = 3E+06x + 173830
R² = 0.9879
2000000
área del pico

1500000

1000000

500000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol en microlitros

Volumen vs Altura de pico

300000

y = 410107x + 8847.1
250000
R² = 0.9652

200000
Altura de pico

150000

100000

50000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Volumen de metanol inyectado
Las ecuaciones que más se ajustaron obtenidas fueron:

𝑃𝑎𝑟𝑎 𝑙𝑎 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑐𝑜𝑛 á𝑟𝑒𝑎 𝑑𝑒 𝑝𝑖𝑐𝑜 𝑣𝑠 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛

𝑦 = 3 ∗ 106 ∗ 𝑋 + 173830 𝑐𝑜𝑛 𝑢𝑛 𝑅 2 = 0.9879

𝑃𝑎𝑟𝑎 𝑙𝑎 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑐𝑜𝑛 𝑎𝑙𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑑𝑒 𝑝𝑖𝑐𝑜 𝑣𝑠 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛

𝑦 = 410107 ∗ 𝑋 + 8847.1 𝑐𝑜𝑛 𝑢𝑛 𝑅 2 = 0.9652

B) Calcular el contenido de etanol en una muestra ficticia usando la calibración anterior.

A=600,000 μVs

𝑦 = 3 ∗ 106 ∗ 𝑋 + 173830

𝑑𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑦 = 𝐴𝑟𝑒𝑎 ; 𝑋 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑒𝑛 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠

Sustituyendo:

600,000 = 3 ∗ 106 ∗ 𝑋 + 173830

600,000 − 173830
𝑅𝑒𝑠𝑜𝑙𝑣𝑖𝑒𝑛𝑑𝑜 𝑋 = ( )
3 ∗ 106

𝑋 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 = 0.142 𝜇𝐿

𝑚
𝜌= ∴ 𝑚 = 𝜌 ∗ 𝑣;
𝑣

g 1 𝑐𝑚ˆ3
𝑚 = 0.7866 ( ) ∗ 0.142 𝜇𝐿 = 0.000112𝑔 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙
cmˆ3 1000 𝜇𝐿

H=30000 μV

𝑦 = 410107 ∗ 𝑋 + 8847.1 ;

𝑑𝑜𝑛𝑑𝑒 𝑦 = 𝐻 , 𝑋 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛
Sustituyendo:

30000 = 410107 ∗ 𝑋 + 8847.1

30,000 − 8847.1
𝑅𝑒𝑠𝑜𝑙𝑣𝑖𝑒𝑛𝑑𝑜 𝑋 = ( )
410107

𝑋 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 = 0.051579𝜇𝐿

𝑚
𝜌= ∴ 𝑚 = 𝜌 ∗ 𝑣;
𝑣

g 1 𝑐𝑚ˆ3
𝑚 = 0.7866 ( ) ∗ 0.051579 𝜇𝐿 = 0.000041𝑔 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙
cmˆ3 1000 𝜇𝐿

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.

De acuerdo a los resultados obtenidos se puede observar que los mejores parámetros para realizar la
calibración del cromatógrafos es utilizando los datos de área y altura del pico ya que nos dan valores
muy precisos respecto a la cantidad de analito alimentado o inyectado debido a que son directamente
proporcionales por otra parte se puede apreciar que experimentalmente hubo alguna contaminación en
una de las inyecciones por lo que no se podía apreciar de una manera muy eficaz en la parte de la
tendencia de crecimiento de las curvas por lo que se procedió a aplicar el método de mínimos
cuadrados para así poder ajustar estos datos y obtener las ecuaciones respectivas de las gráficas de
área de pico contra volumen y altura de pico contra volumen se realizaron algunos cálculos utilizando
estas ecuaciones para determinar la cantidad de metanol contenida en las muestras inyectadas con
soluciones ficticias dando como resultado valores coherentes respecto a los volúmenes inyectados por
lo que se puede decir que se realizó una correcta calibración del cromatógrafo.

Las recomendaciones serían un poco más de ejemplos para realizar los cálculos de muestras
analizadas y ejemplificarlos un poco más a detalle.
REFERENCIAS.

Calibración de Cromatógrafo de Gases. (2020, junio 14). Youtube.

https://www.youtube.com/watch?v=cr13LrsnB9M

Practica Influencia de la Temp del horno y Presión del gas portador en la respuesta del cromatógrafo.
(2020, octubre 20). Youtube. https://www.youtube.com/watch?v=J0j7J5R2JAM

Valdez, S. [@sergiovaldez6497]. (2018, noviembre 6). Tutorial: Uso básico de cromatógrafo de gases.
Youtube. https://www.youtube.com/watch?v=gv34BXHKOVc