FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ASIGANTURA BIOLOGÍA

INFORME DE SALIDA DE CAMPO

1. DATOS GENERALES:

Nombre profesor responsable: Blg. Ricardo Castillo

Título de la práctica: _____________________________________________________________________
Lugar: Online
Fecha y hora de salida: _____________________________________________________
Fecha y hora de llegada: ______________________________________________________
Fecha de realización del informe: 15 de junio de 2023
2. PLAN DE TRABAJO:

2.1. PARTICIPANTES:

Michelle Calderón Morales

2.2. OBJETIVOS:

General:
Extracción y analítica de ADN mediante electroforesis.
Específicos:
Evidenciar el material genético en el tejido epitelial bucal.
Medir el largo de las hebras de ADN mediante electroforesis.

2.3. METODOLOGÍA: Describa todas y cada una de las acciones que se cumplieron.

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Área o ambiente que visitar:

Materiales, Reactivos y Equipos: Indicar los materiales, reactivos y equipos que requiere para la salida.

Se utilizó agua tibia, centrifugadora, un hisopo bucal, tubo de muestra, solución lisis, solución concentrada de
sal, buffer de resuspensión, etanol y alcohol isopropil para la extracción de ADN del epitelio bucal.

Se utilizó un molde de gel, agarosa, frasco, peine de gel, buffer, plástico, microondas, loading buffer, estándar
de tamaño de ADN, micropipetas, caja de electroforesis, puntas de pipetas y bromuro de etidio para la
electroforesis.

Técnicas utilizadas:
Evaluación rápida mediante recorrido (transecto al paso) y observación directa.
Se inició la extracción de células del epitelio bucal mediante un hisopo, frotándola con el interior de la mejilla,
se ubicó dentro de un tubo de ensayo y se retiró el resto del hisopo para poder cerrar el tubo. Mediante una
micropipeta, se añade la solución lisis, que, gracias a sus 2 ingredientes: detergente que rompe la membrana y
el recubrimiento nuclear, y la enzima proteinasa K que corta las histonas para liberar el ADN. Se retiró el tubo
de ensayo del agua y se agregó solución concentrada de sal para que los trozos de células se agrupen. Se
centrifugó con otro tubo de ensayo con agua. Al sacarlo, el material celular y proteínas se encuentran en el
fondo del tubo, mientras que el ADN se encuentra en el líquido, el cual se retira con una micropipeta y se ubica
en un tubo de ensayo limpio. Se añade alcohol isopropil y se mezcla hasta visualizar las hebras de ADN. Ya que
el ADN no se disuelve con el alcohol isopropil, se separa del líquido previo y se puede visualizar a simple vista.
Se centrifuga y se retira el líquido hasta dejar el ADN en el fondo del tubo para continuar a la electroforesis.

Para preparar el gel, se ubica un poco de agarosa en polvo en el frasco y buffer, y se tapa con un poco de
plástico para meterlo en el microondas. Esa mezcla se ubica en el molde con el peine para formar los agujeros y
se deja secar por media hora. En una caja de electroforesis, se añade buffer y el molde con el gel dentro. Se
añade loading buffer a la muestra de ADN que lo teñirá un poco y esta mezcla se lo ubica en un agujero, en el
siguiente, se ubicará el estándar de tamaño de ADN con una punta de pipeta limpia. Se añade corriente
eléctrica que hará que las hebras de ADN se muevan y se clasifiquen según su tamaño. El buffer, siendo
solución salina, conduce electricidad por todo el gel. Las hebras más pequeñas se mueven con mayor rapidez
que las largas, por lo que se irán más lejos de los agujeros del gel, y las hebras largas se agruparán más cerca de
los agujeros donde fueron colocadas en un principio. De esta manera, se clasifica a sí mismo por longitud. Se
ubica el gel en bromuro de etidio por 30 minutos y se ubica sobre una caja de rayos UV, en la que se compara
la longitud de las hebras.

3. RESULTADOS

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Las medidas estimadas de cada banda de ADN de la muestra es de 6000 par de bases, 3500 par de bases y 1500
par de bases cada una.

4. CONCLUSIONES

Describir si se cumplieron con los objetivos planteados.

Se extrajo correctamente la muestra de ADN dentro del núcleo de las células del tejido epitelial bucal desde la
mejilla interna de la misma cavidad, hasta así poder observarlo a simple vista del ojo humano. Y, mediante
electroforesis se logró medir el largo de los pares de las bases nitrogenadas de cada grupo.

5. RECOMENDACIONES:

Añadir la muestra de ADN a los agujeros del gel lleva práctica, así que no es tan sencillo.

6. ANEXOS:

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