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Bioqumica clnica

Curva de calibracin para cuantificacin de protenas por


mtodo de Exton Rose.

Eduardo Godoy Cid.

Profesoras: Claudia Abarca.

Carmen Molina.
Introduccin.- La determinacin de proteinuria es un importante parmetro para saber
el comienzo y avance de ciertas patologas. Dado que la determinacin de proteinuria con
la tira reactiva no es lo bastante sensible para detectar microalbuminuria, para eso es
necesario ocupar un mtodo ms exacto. El mtodo de Exton Rose se utiliza para la
determinacin de proteinuria mediante cido sulfosaliclico, el cual desnaturaliza y
precipita las protenas para poder medir su absorbancia con un fotmetro, la que es
inversamente proporcional con su concentracin. Para poder medir las concentraciones y
controlar la veracidad de los resultados se construye una curva de calibracin la cual
explicaremos en este informe.

Materiales.- Tubos khan, pipeta volumtrica de 5ml, propipeta, piseta de agua destilada,
gradilla, reloj, Micropipeta p20 y p1000, puntas de micropipetas p20 y p1000, papel
parafilm Equipos.- Fotmetro marca dialab, vortex. Reactivos.- Reactivo Exton Rose,
Solucin estndar de Albmina 2g/L.

Mtodos.- Realizamos 6 disoluciones a distintas concentraciones de la solucin estndar


de albumina 2g/L, el tubo 0 correspondiente al blanco de reactivo se le agrego 1000L de
agua destilada, al tubo 1 se le agrego 900L de agua destilada y 100L de la solucin de
albumina 2g/L, al tubo 2 se le agrego 800L de agua destilada y 200L de la solucin de
albumina, al tubo 3 se le agrego 600L de agua destilada y 400L de la solucin de
albumina, al tubo 4 se le agrego 500L de agua destilada y 500L de solucin de albumina,
al tubo 5 se le agrego 400L de agua destilada y 600L de solucin de albumina y al tubo 6
se le agrego 200L de agua destilada y 800L de solucin de albumina. Luego de preparar
las diluciones se tom 200L de cada tubo y en un tubo khan se le agregaron 4 mL del
reactivo de Exton Rose. Se dejaron incubando durante 10 minutos a temperatura ambiente para
posteriormente leer las absorbancias a 420 nm en el fotmetro. Adicionalmente para controlar la
tcnica se le agrego un control patolgico, el cual en un tubo khan se le agrego 990L de agua
destilada y 10L de control patolgico, se tomaron 200L de esta dilucin y se le
agregaron 4 ml del reactivo de Exton Rose, se dej incubar 10 minutos a temperatura
ambiente y se ley a 420nm en el fotmetro. Se construy la curva de calibracin y se
calcul el factor.
Curva de calibracin.-

Curva de calibracion de ptroteinas por metodo


Exton Rose
1.2

1 y = 0.0064x
R = 0.9689
0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 50 100 150 200
Concentracion mg/dL

Factor: 156,25

Control patolgico: 0,68 x 156,25= 106,25 mg/dL

Conclusin.- La cuantificacin de protenas en orina de una forma precisa es crucial para un


diagnostico y/o tratamiento de alguna patologa.

Calibrar y controlar una tcnica es indispensable para poder validar los resultados obtenidos por
ella, para eso se construye la curva de calibracin, el factor que calculamos al construir la curva
nos permite multiplicndolo por las absorbancias de las muestras problemas poder calcular su
concentracin. El valor de R2 nos dio cercano a 1, lo que nos dice que la linealidad de la curva es
correcta. El resultado del control Patolgico dio fuera del rango, esto nos obliga a repetirlo antes
de poder realizar determinaciones de concentraciones de muestras problemas, en caso de no
coincidir se tendr que realizar la curva nuevamente.