Cromatografía HPLC

Cromatografía Líquida de Alta Eficacia

 Historia
A partir del año 1952 en que Martin y James impulsaron el desarrollo de la
cromatografía de gases (CG), que acaparó los esfuerzos teóricos
encaminados al conocimiento profundo de la cromatografía. No obstante, las
limitaciones de la CG en cuanto al tipo de muestras analizables (volátiles o
derivados volátiles de las mismas), originó, en a segunda década de los 70’s,
volver a considerar la Cromatografia Liquida (CL), cuyas limitaciones se
reducen a la posibilidad de disolver la muestra.
Esta experiencia permitió también aplicar nuevos puntos de vista a la CL para
que pronto se diseñaron sistemas de inyección, circulación del eluyente y
detección de eficacia comarable a la de los utilizados en CG, dando lugar a la
moderna técnica de Cromatografia Liquida de Alta eficacia.
Proceso
• EL (HPLC) se encuadra dentro de la cromatografía de elución. En ésta,
un liquido (fase móvil) circula en intimo contacto con un sólido u otro
líquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de
substancias (analitos) en la corriente de fase móvil, cada analito
avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que
dependerá de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que
después de terminado el recorrido de la muestra por la columna,
cada una de las substancias introducidas en el sistema eluirá con un
tiempo diferente, es decir, estarán separadas.
Clasificacion de la cromatografía liquida
Clasificación de la Cromatografía de Líquidos
• Cromatografía Líquido-Sólido.(adsorción)
• Cromatografía Líquido-Líquido.(partición)
• Cromatografía de Fase (normal y reversa)
• Cromatografía de Intercambio iónico.
• Cromatografía de Exclusión por Tamaño (cromatografía en gel)
Clasificación por Afinidad
• Cromatografía en fase normal.

• Cromatografía en fase ligada.

• Cromatografía de intercambio iónico.

Características
Respuesta específica a analitos de interés
No afectado por cambios en temperatura o composición de la fase
móvil (ej. gradientes)
Alta sensibilidad (análisis de trazas)
No contribuir al ensanchamiento de bandas, volumen de celda
pequeño
Respuesta rápida
Precisión